反义基因治疗技术研究进展 被引量：2

1

作者 王宝琴 魏战勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期74-76,共3页

关键词 基因治疗 反义基因药物 作用机理 输送系统 肿瘤 病毒性传染病 反义基因治疗

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人端粒酶蛋白催化亚单位反义基因转染对胃癌细胞恶性表型的逆转作用 被引量：21

2

作者 杨仕明 房殿春 +4 位作者 杨金亮 罗元辉 鲁荣 陈兵 刘为纹 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第8期934-937,共4页

目的 探讨人端粒酶蛋白催化亚单位（ｈＴＲＴ）反义基因治疗对胃癌细胞恶性表型的逆转作用。方法 采用基因重组技术，构建ｈＴＲＴ正、反义真核表达载体，采用脂质体法导入ＳＧＣ－７９０１细胞，检测细胞生长曲线、端粒酶活性凋亡、细... 目的 探讨人端粒酶蛋白催化亚单位（ｈＴＲＴ）反义基因治疗对胃癌细胞恶性表型的逆转作用。方法 采用基因重组技术，构建ｈＴＲＴ正、反义真核表达载体，采用脂质体法导入ＳＧＣ－７９０１细胞，检测细胞生长曲线、端粒酶活性凋亡、细胞周期、软琼脂中克隆形成率及裸鼠体内成瘤性的变化。结果 成功构建ｈＴＲＴ正、反义真核表达载体，并导入ＳＧＣ－７９０１胃癌细胞株中，获得稳定表达正、反义基因的细胞系７９０１－Ｓ、７９０１－ＡＳ１和７９０１－ＡＳ２。７９０１－ＡＳ１和７９０１－ＡＳ２出现显著生长抑制现象，端粒酶活性明显下降，细胞凋亡增加，异型性减小，Ｇ０／Ｇ１期细胞增加，Ｓ和Ｇ２Ｍ期细胞减少，增殖指数减小，软琼脂中无克隆形成，裸鼠体内成瘤消失。结论ｈＴＲＴ反义基因治疗可以明显抑制ＳＧＣ－７９０１细胞的增殖，部分逆转肿瘤细胞的恶性表型，其机制可能主要是通过诱导细胞分化而非诱导细胞凋亡途径实现的，提示ｈＴＲＴ基因可以作为肿瘤治疗的靶基因。 展开更多

关键词 人端粒酶蛋白催化亚单位 反义基因治疗 胃癌 端粒酶 恶性表型

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hTRT反义基因转染对肝癌细胞端粒酶亚单位及细胞周期的影响 被引量：6

3

作者 杨仕明 房殿春 +3 位作者 杨金亮 罗元辉 鲁荣 刘为纹 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第24期2193-2195,共3页

目的　探讨人端粒酶蛋白催化活性亚单位 (Humantelomerasereversetranscriptase ,hTRT)反义基因转染对HepG2 肝癌细胞株端粒酶亚单位及细胞周期的影响。方法　采用流式细胞仪检测hTRT正义基因转染的HepG2 细胞(HepG2 S)以及hTRT反义基... 目的　探讨人端粒酶蛋白催化活性亚单位 (Humantelomerasereversetranscriptase ,hTRT)反义基因转染对HepG2 肝癌细胞株端粒酶亚单位及细胞周期的影响。方法　采用流式细胞仪检测hTRT正义基因转染的HepG2 细胞(HepG2 S)以及hTRT反义基因转染的HepG2 细胞 (HepG2 AS)的细胞周期 ,采用RT PCR法检测上述细胞hTRT、端粒酶RNA(hTR)、端粒酶相关蛋白 1(TP1)以及c myc和bcl 2基因的变化 ,同时采用Westernblot检测hTRT蛋白质的变化。结果　HepG2 AS出现G0 G1 期阻滞 ,增殖指数增加 ,凋亡率亦明显增加 ,进一步研究发现 ,HepG2 AS端粒酶亚单位hTRT在蛋白质和mRNA水平均表达减少 ,而TP1、hTR无明显变化 ,bcl 2和c mycmRNA的表达亦明显下调。结论　hTRT反义基因不仅可以下调HepG2 细胞hTRTmRNA和蛋白质的表达 ,而且可以下调c myc、bcl 2mRNA的表达 ,从而一方面降低端粒酶活性 ,另一方面一定程度增加凋亡细胞的比率 。 展开更多

关键词 人端粒酶蛋白催化活性亚单位 反义基因治疗 肝癌

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骨桥蛋白反义基因在食管癌浸润与转移中的作用 被引量：3

4

作者 徐沛然 杨志广 +1 位作者 姚宪章 邵国光 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期295-298,共4页

目的:探讨骨桥蛋白(OPN)反义基因对食管癌细胞增殖和转移的影响,为食管癌基因治疗提供理论依据。方法:PCR扩增获得人OPN基因,连接pcDNA3.1(+)载体,酶切、测序。脂质体介导将pcDNA3.1-ANOPN基因转入ECA109,G418筛选获得稳定表达ANOPN基... 目的:探讨骨桥蛋白(OPN)反义基因对食管癌细胞增殖和转移的影响,为食管癌基因治疗提供理论依据。方法:PCR扩增获得人OPN基因,连接pcDNA3.1(+)载体,酶切、测序。脂质体介导将pcDNA3.1-ANOPN基因转入ECA109,G418筛选获得稳定表达ANOPN基因的转染细胞ECA-ANOPN、表达空载体的ECA-vect细胞及空白对照ECA。RT-PCR检测ANOPN mRNA、免疫组织化学检测ANOPN基因蛋白表达。体外观察各组细胞生长速度、倍增时间,Transwell小室法检测细胞黏附、侵袭迁移能力的差异。结果:载体构建正确,测序结果与GenBank中公布的序列同源性为100%。与ECA-vect、ECA组比较,ECA-ANOPN细胞OPN的表达率明显降低(P<0.05),生长速度明显减慢(P<0.05),倍增时间增加(P<0.05),透膜细胞数明显降低(P<0.01)。结论:ANOPN基因的稳定表达明显抑制ECA109细胞的恶性表型。 展开更多

关键词 骨桥蛋白 食管肿瘤 反义基因治疗

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NHE-1反义基因对胃癌细胞的酸化作用及其意义 被引量：2

5

作者 滕小春 刘海峰 +3 位作者 房殿春 杨仕明 王国安 陈刚 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期240-242,共3页

目的探讨Na+-H+交换泵-1(Na+-H+exchanger1,NHE-1)反义基因转染对人胃癌细胞内pH值(intracellu-larpH,pHi)的调节作用及其在肿瘤基因治疗中的价值。方法构建人NHE-1基因反义真核表达载体,采用脂质体法将其转染至SGC-7901胃癌细胞中,采... 目的探讨Na+-H+交换泵-1(Na+-H+exchanger1,NHE-1)反义基因转染对人胃癌细胞内pH值(intracellu-larpH,pHi)的调节作用及其在肿瘤基因治疗中的价值。方法构建人NHE-1基因反义真核表达载体,采用脂质体法将其转染至SGC-7901胃癌细胞中,采用荧光探针检测转染前后细胞内pH值的变化以及对细胞增殖和凋亡的影响。结果转染反义基因的细胞pHi明显降低,增殖能力降低,细胞凋亡率增加。结论NHE-1基因的表达在肿瘤细胞pHi及增殖和凋亡调节中起重要作用。 展开更多

关键词 NHE1基因 真核表达载体 反义基因治疗 胃癌

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人U6基因POI Ⅲ启动子表达反义VEGF cDNA抑制SMMC-7721肝癌细胞VEGF表达的观察 被引量：3

6

作者 汤宇澄 钱关祥 陈诗书 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第3期388-393,共6页

由 RNA聚合酶启动子在细胞内转录高浓度反义 RNA是抑制靶蛋白的一种有效手段 ,有报道 POI 启动子转录小分子 RNA存在效率不高 ,带有较多的非特异性序列等缺点 ,为了克服这些问题 ,表达反义 VEGF RNA的人 U6基因表达盒对人肝癌细胞株 SMM... 由 RNA聚合酶启动子在细胞内转录高浓度反义 RNA是抑制靶蛋白的一种有效手段 ,有报道 POI 启动子转录小分子 RNA存在效率不高 ,带有较多的非特异性序列等缺点 ,为了克服这些问题 ,表达反义 VEGF RNA的人 U6基因表达盒对人肝癌细胞株 SMMC- 772 1 VEGF表达的抑制作用进行了研究 .首先 PCR扩增 2 0 0 bp VEGF c DNA以正、反向插入人 U6 sn RNA.通过测序证实反向插入的正确性 .采用细胞原位杂交 ,RNA酶保护分析 ,Northern印迹来证实反义 RNA表达的情况 ,利用 RT- PCR方法研究了其对人肝癌细胞株 SMMC- 772 1 VEGF表达的抑制效果 .细胞原位杂交结果显示 U6启动子转录产物主要分布于细胞核内 ,细胞浆内亦有表达 ,RNA酶保护分析显示 U6基因 POI 启动子能高表达所需大小反义 RNA,Northern印迹结果显示脂质体 lipo-fectamine介导含 U6基因 POI 启动子的质粒转染人肝癌细胞株 SMMC- 772 1后 1 2 h即有表达且可持续表达 6 d. RT- PCR证实 U6基因 POI 启动子转录的反义 VEGF RNA能有效抑制SMMC- 772 1细胞 VEGF的 m RNA表达 .已有的研究结果揭示 POI 展开更多

关键词 VEGF U6POIⅢ启动子 肿瘤 反义基因治疗

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肝癌基因治疗的发展趋势及其思考

7

作者 覃汉荣 杨冬华 《医学与哲学》 2002年第4期38-39,共2页

关键词 肝癌 基因治疗 发展趋势 反义基因治疗 免疫基因治疗 药物基因治疗

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肝癌基因治疗研究进展与介入医学

8

作者 李家开 张金山 《放射学实践》 2001年第6期374-377,共4页

关键词 肝癌 基因治疗 免疫性基因治疗 反义基因治疗 基因芯片技术 介入医学

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TGF-β_2反义寡核苷酸抑制抗青光眼术后滤过泡瘢痕的实验研究 被引量：12

9

作者 李金瑛 傅培 黎晓新 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2006年第3期277-280,共4页

目的观察TGF-β2反义寡核苷酸对青光眼滤过术后结膜囊成纤维细胞的转化、增生的影响。方法制备兔青光眼滤过手术模型。右眼结膜下注射TGF-β2反义寡核苷酸(A组);左眼分别注射TGF-β2错义寡核苷酸(B组)、PBS(C组),于造模后第4、7、14、2... 目的观察TGF-β2反义寡核苷酸对青光眼滤过术后结膜囊成纤维细胞的转化、增生的影响。方法制备兔青光眼滤过手术模型。右眼结膜下注射TGF-β2反义寡核苷酸(A组);左眼分别注射TGF-β2错义寡核苷酸(B组)、PBS(C组),于造模后第4、7、14、28 d取术区结膜囊标本进行免疫组织化学染色和电镜观察。结果A组眼压术后第14 d和第21 d比B组(P<0.01)和C组(P<0.05)显著降低;滤泡平均生存时间A组(17.2 d)较B组(14.5 d)、C组(13.5 d)明显延长(P<0.05);A组α-SMA和PCNA阳性成纤维细胞数明显少于B、C组;成纤维细胞的超微结构A组和B、C组比较无明显区别。结论TGF-β2反义寡核苷酸可降低兔青光眼滤过术后眼压,延长滤泡生存时间,抑制兔青光眼滤过术后结膜囊成纤维细胞的转化、增生。 展开更多

关键词 TGF-Β2 反义基因治疗 青光眼 瘢痕

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反义VEGF对视网膜新生血管的干预研究 被引量：6

10

作者 曹晖 许迅 +2 位作者 樊莹 王方 张皙 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2004年第3期256-259,共4页

目的　将反义VEGF质粒用脂质体包裹注入视网膜新生血管模型小鼠眼中 ,观察其对新生血管的抑制作用。方法　将出生 7d的C5 7BL/6J小鼠 44只放入高氧环境中饲养 ,另外 8只于空气环境中饲养。 5d后出高氧环境 ,随机取3 6只分成 3组。将质... 目的　将反义VEGF质粒用脂质体包裹注入视网膜新生血管模型小鼠眼中 ,观察其对新生血管的抑制作用。方法　将出生 7d的C5 7BL/6J小鼠 44只放入高氧环境中饲养 ,另外 8只于空气环境中饲养。 5d后出高氧环境 ,随机取3 6只分成 3组。将质粒与脂质体以 1∶5 (W/V)的比例混合 ,室温下静置 3 0min。大剂量组玻璃体腔内注入质粒PCR3 .1/Anti VEGF12 10 0 85 μg;小剂量组玻璃体腔内注入质粒PCR3 .1/Anti VEGF12 10 0 3 8μg;PCR3 .1组玻璃体腔内注入质粒PCR3 .10 0 5 3 μg,之后空气环境饲养 5d。解剖镜下视网膜铺片观察视网膜血管的分布情况 ;组织切片任意选取不包括视乳头的 2 0张切片 ,计数突出内界膜位于视网膜表面的细胞核数 ;VEGF免疫组化染色阳性细胞。结果　视网膜铺片原中周部血管紊乱分布部位 ,血管分布均匀。而对照组 (注射PCR3 .1)则无变化。内皮细胞计数小剂量组、大剂量组较高氧组、对照组显著减少 ,在P17的VEGF在毛细血管的血管内皮细胞的表达均有显著降低 ,但程度上有差异。结论　反义VEGF质粒对于视网膜新生血管的产生有抑制作用 ,在一定程度上减少了视网膜新生血管的产生 ,对血管内皮细胞表达VEGF有抑制作用。 展开更多

关键词 视网膜 新生血管 血管内皮生长因子 反义基因治疗

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人反义VEGF_(121) cDNA表达质粒的构建及其对膀胱癌细胞增殖的影响 被引量：1

11

作者 金建军 王跃祥 +4 位作者 丁强 李纲 瞿连喜 宋后燕 张元芳 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期317-320,共4页

目的 构建人反义VEGF121 cDNA真核表达质粒,研究反义基因治疗对膀胱癌细胞增殖的影响。方法将VEGF121反向克隆入真核表达载体pcDNA3中,酶切鉴定。用此真核表达重组质粒转染人膀胱癌细胞株T24,G418筛选获得阳性克隆,RT-PCR法测定转染前后... 目的 构建人反义VEGF121 cDNA真核表达质粒,研究反义基因治疗对膀胱癌细胞增殖的影响。方法将VEGF121反向克隆入真核表达载体pcDNA3中,酶切鉴定。用此真核表达重组质粒转染人膀胱癌细胞株T24,G418筛选获得阳性克隆,RT-PCR法测定转染前后T24细胞中VEGF mRNA表达,ELISA法检测转染前后T24细胞中VEGF蛋白表达。利用MTT法、软琼脂克隆形成试验、流式细胞仪和电镜等检测转染前后T24细胞的生物学性状。结果 获得反义VEGF121 cDNA质粒表达重组质粒。VEGF121反义RNA部分阻断了T24细胞中VEGF表达,转染后肿瘤细胞VEGF mRNA和VEGF蛋白表达都明显减少;转染后单个细胞的克隆形成能力明显减弱;形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀,核染色质边集,凝集成块,可见明显的凋亡改变。结论成功构建了反义VEGF121 cDNA真核表达质粒,转染该质粒可明显抑制膀胱癌细胞增殖,为膀胱癌的基因治疗提供了一定的实验依据。 展开更多

关键词 膀胱癌 人反义VEGFl21cDNA 质粒 构建 反义基因治疗 血管内皮生长因子 细胞增殖

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血管内皮生长因子反义cDNA对人肺癌抑瘤作用的体外实验研究 被引量：1

12

作者 彭民 高中玉 张鹏 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期385-388,共4页

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)反义cDNA对肿瘤细胞VEGFmRNA和蛋白表达的影响,并探讨其对肿瘤细胞生长、增殖过程的作用。方法:以脂质体介导VEGF反义cDNA转染肺癌细胞,通过原位杂交法检测细胞VEGFmRNA,免疫组化法检测细胞VEGF蛋白和P... 目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)反义cDNA对肿瘤细胞VEGFmRNA和蛋白表达的影响,并探讨其对肿瘤细胞生长、增殖过程的作用。方法:以脂质体介导VEGF反义cDNA转染肺癌细胞,通过原位杂交法检测细胞VEGFmRNA,免疫组化法检测细胞VEGF蛋白和PCNA增殖活性,ELISA法检测分泌型VEGF蛋白,MTT法测定细胞生长率,研究VEGF反义cDNA对肿瘤细胞的作用。结果:转染后肺癌细胞内源性VEGFmRNA和蛋白的表达受抑,细胞生长及增殖受抑。结论:VEGF反义cDNA转染可降调节肿瘤细胞的VEGF生成并抑制其生长与增殖。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子 肺癌 反义基因治疗 体外试验

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