细菌毒力基因体内表达检测技术研究进展 被引量：7

1

作者 陈师勇 莫照兰 +3 位作者 张振冬 邹玉霞 徐永立 张培军 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期505-511,共7页

病原菌入侵宿主是一个及其复杂的过程。为了深入了解病原菌的致病机理,人们需要鉴定那些在感染过程中特异表达的细菌毒力基因。为此,多种体内实验模型被建立起来分析细菌在宿主体内的基因表达,它们包括了体内表达技术、信号标签突变技... 病原菌入侵宿主是一个及其复杂的过程。为了深入了解病原菌的致病机理,人们需要鉴定那些在感染过程中特异表达的细菌毒力基因。为此,多种体内实验模型被建立起来分析细菌在宿主体内的基因表达,它们包括了体内表达技术、信号标签突变技术、差异荧光诱导、体外转座进行基因组分析和作图技术以及体内诱导抗原技术等。文章对目前运用的这些研究方法进展进行综述,并讨论了它们的优点与不足。 展开更多

关键词 细菌 毒力基因 体内表达 检测技术

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高密度cDNA微阵列技术检测乳腺癌差异表达基因 被引量：1

2

作者 张林杰 王曦 罗畅民 《安徽医科大学学报》 CAS 2003年第1期9-11,共3页

目的　描绘乳腺癌的基因差异表达谱 ,以寻找乳腺癌新的肿瘤相关候选基因和分子标志。方法　用含 1 4 0 0 0个cDNA克隆的表达微阵列检测乳腺癌组织、乳腺癌旁组织及乳腺非癌组织的mRNA表达 ,并分析其表达的差异。结果　乳腺癌组织与乳腺... 目的　描绘乳腺癌的基因差异表达谱 ,以寻找乳腺癌新的肿瘤相关候选基因和分子标志。方法　用含 1 4 0 0 0个cDNA克隆的表达微阵列检测乳腺癌组织、乳腺癌旁组织及乳腺非癌组织的mRNA表达 ,并分析其表达的差异。结果　乳腺癌组织与乳腺非癌组织比较有 80个差异表达基因 ,乳腺癌组织与乳腺癌旁组织比较有 57个差异表达基因 ,乳腺癌旁组织与乳腺非癌组织比较有 2 9个差异表达基因 ,在乳腺癌组织与乳腺非癌组织和乳腺癌旁组织比较中有 1 4个差异表达基因是一致的。结论　用微阵列技术对乳腺癌的肿瘤相关基因和分子标志作初步探索 ,为了解中国女性乳腺癌发生发展的分子机制。 展开更多

关键词 高密度cDNA微阵列技术 检测 乳腺癌 差异表达基因 基因表达 诊断 治疗

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免疫组化和原位杂交技术联合检测sFLK-1片段基因转染后的表达

3

作者 寇伯君 张丽红 +2 位作者 李玉林 李一雷 石英爱 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2003年第6期660-661,共2页

关键词 免疫组化 原位杂交技术 联合检测 sFLK-1 基因转染 表达 肿瘤细胞系

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猴D型逆转录病毒p27基因的原核表达及流式免疫荧光微球检测技术的建立

4

作者 刘助红 王静 +4 位作者 李秀珍 尹雪琴 张钰 郭鹏举 黄韧 《中国比较医学杂志》 北大核心 2017年第9期17-23,共7页

目的构建猴D型逆转录病毒的p27蛋白,并建立流式免疫荧光微球检测技术用于猴D型逆转录病毒的检测。方法通过PCR扩增p27基因片段,与p GEX-4T-1表达载体进行连接,转化至BL21(DE3)进行表达。通过SDS-PAGE分析蛋白表达的形式及最佳诱导时间... 目的构建猴D型逆转录病毒的p27蛋白,并建立流式免疫荧光微球检测技术用于猴D型逆转录病毒的检测。方法通过PCR扩增p27基因片段,与p GEX-4T-1表达载体进行连接,转化至BL21(DE3)进行表达。通过SDS-PAGE分析蛋白表达的形式及最佳诱导时间。采取GST树脂纯化目标蛋白,包被磁珠,建立流式免疫荧光微球检测技术,用于临床样本的检测。结果重组蛋白以可溶的上清液进行表达,诱导的最佳时间为4 h。包被磁珠后,成功建立流式免疫荧光微球检测技术,对阳性血清稀释81倍仍可检测为阳性,对猴类其他病原的阳性血清无交叉反应,特异性强,与ELISA法同时对24份临床样本进行检测,其中3份样品的流式免疫荧光微球检测结果为阳性,ELISA检测结果为2份阳性,1份阴性,两种方法的检测结果符合率为96%。结论成功表达猴D型逆转录病毒p27蛋白,并运用该蛋白建立了灵敏度高,特异性强,样本需求少的流式免疫荧光微球检测技术,为后续推广应用多重流式免疫荧光微球检测技术奠定了基础。 展开更多

关键词 猴D型逆转录病毒 P27基因 原核表达 流式免疫荧光微球检测技术

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应用体内诱导抗原技术检测细菌体内表达基因的研究进展 被引量：3

5

作者 郑冲 胡东建 余旭平 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第10期46-48,共3页

关键词 基因产物 体内表达 细菌 技术检测 毒力因子 抗原 诱导 应用

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利用高通量测序技术分析IHHNV感染凡纳滨对虾的基因差异表达 被引量：7

6

作者 曾地刚 陈秀荔 +3 位作者 谢达祥 赵永贞 黎铭 陈晓汉 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1899-1903,共5页

【目的】研究传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal andhematopoietic necrosis virus,IHHNV)感染凡纳滨对虾的基因差异表达,为进一步了解IHHNV与凡纳滨对虾的相互作用分子机制提供参考。【方法】采用454高通量测序技术... 【目的】研究传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal andhematopoietic necrosis virus,IHHNV)感染凡纳滨对虾的基因差异表达,为进一步了解IHHNV与凡纳滨对虾的相互作用分子机制提供参考。【方法】采用454高通量测序技术对IHHNV感染和对照凡纳滨对虾进行转录组测序,测序获得的序列除去接头后用iAssembler软件进行拼接得到unigene(单一基因序列),通过计算各unigene的转录本数目(RPKM)确定差异表达基因,并以实时荧光定量PCR验证基因的差异表达。【结果】采用454高通量测序技术对IHHNV感染和对照凡纳滨对虾进行转录组测序,共获得208690条短序列,序列拼接共得到21912条unigenes;通过对IHHNV感染和对照凡纳滨对虾的测序数据比较分析,结果发现221个差异表达基因,包括81个上调表达基因和140个下调表达基因。经实时荧光定量PCR验证,454高通量测序数据统计的基因表达差异结果可靠。【结论】IHHNV感染显著影响凡纳滨对虾免疫相关基因的表达,而利用高通量测序技术可有效检测出这些差异表达基因。 展开更多

关键词 凡纳滨对虾 IHHNV 差异表达基因 转录本数目(RPKM) 高通量测序技术

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组织芯片检测乳腺癌相关癌基因产物表达 被引量：10

7

作者 石群立 孟奎 +8 位作者 周晓军 陈琴 吴波 马恒辉 陆珍凤 盛春宁 李军 陈鑫 刘镭 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2003年第3期242-246,共5页

目的　检测乳腺癌相关癌基因产物的表达情况 ,为临床制定治疗方案和判断预后提供依据。方法　运用组织芯片技术、免疫组化S P法检测 48例乳腺癌ER、PR、p5 3、c erbB 2、Ki 6 7、TopoⅡ和E cadherin(E cad)的表达情况 ,并与常规病理学... 目的　检测乳腺癌相关癌基因产物的表达情况 ,为临床制定治疗方案和判断预后提供依据。方法　运用组织芯片技术、免疫组化S P法检测 48例乳腺癌ER、PR、p5 3、c erbB 2、Ki 6 7、TopoⅡ和E cadherin(E cad)的表达情况 ,并与常规病理学方法进行比较。结果　 48例乳腺癌中ER阳性 32例、PR阳性 36例、p5 3阳性 42例、c erbB 2阳性 31例、Ki 6 7阳性 45例、TopoⅡ阳性 41例 ;44例浸润性导管癌中 ,E cad阳性 37例 ;而 4例浸润性小叶癌E cad均阴性。对照组的 13例乳腺组织均E cad呈阳性表达。随访 :44例浸润性导管癌中 3例死亡 (6 8%) ;4例浸润性小叶癌中 2例死亡 (5 0 0 %)。结论　组织芯片技术具有高信息量、简捷、快速、高效、成本低、重复性好等优点 ,在病理学领域中具有重要的实际意义和广阔的应用前景。 展开更多

关键词 组织芯片 检测技术 乳腺癌 癌基因 基因产物 基因表达

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基于悬浮芯片技术的56种病原微生物的高通量检测 被引量：13

8

作者 朱海红 蒋汉梁 +8 位作者 陈智 曹清毅 孙箴 侯晓丽 周林福 陈峰 羊正纲 贾红宇 许晓燕 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2007年第6期524-530,共7页

目的:建立高通量、快速、可靠、经济的病原微生物诊断技术平台。方法:设计和合成针对56种常见病原微生物的探针和阳性对照,采用悬浮芯片技术,对56种病原微生物的阳性标准品进行检测。结果:56种标准品的检测值显著高于阴性对照,各病原微... 目的:建立高通量、快速、可靠、经济的病原微生物诊断技术平台。方法:设计和合成针对56种常见病原微生物的探针和阳性对照,采用悬浮芯片技术,对56种病原微生物的阳性标准品进行检测。结果:56种标准品的检测值显著高于阴性对照,各病原微生物的阳性标准品和各探针之间无交叉反应。结论:建立了高通量、快速、可靠、经济的病原微生物诊断技术平台,为突发传染病的病原体诊断提供技术储备。 展开更多

关键词 微生物学技术 基因表达 悬浮芯片技术 高通量诊断 病原微生物

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表达谱基因芯片技术及其在兽医学上的应用 被引量：4

9

作者 邹丰才 吴绍强 +1 位作者 李明伟 朱兴全 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期346-349,共4页

关键词 基因芯片技术 表达谱 20世纪90年代 功能基因组学研究 人类基因组计划 医学 后基因时代 1989年 基因组测序 基因表达及 研究重点 平行检测 国际专利 功能分析 高通量

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生理状态下外周血白细胞IL-2基因表达的荧光定量PCR检测 被引量：3

10

作者 王茹 陈佩杰 董强刚 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期457-459,475,共4页

目的:建立白细胞介素2(IL-2)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术。方法:应用实时定量PCR方法检测25名健康运动员中IL-2mRNA的表达。主要结果和结论:应用实时定量PCR方法能够对健康受试者外周血白细胞自发性IL-2mRNA表达进行定量分析,相... 目的:建立白细胞介素2(IL-2)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术。方法:应用实时定量PCR方法检测25名健康运动员中IL-2mRNA的表达。主要结果和结论:应用实时定量PCR方法能够对健康受试者外周血白细胞自发性IL-2mRNA表达进行定量分析,相关系数r>0.99。 展开更多

关键词 外周血白细胞 荧光定量PCR检测 基因表达 生理状态 实时定量PCR方法 IL-2MRNA PCR检测技术 mRNA表达 白细胞介素 健康受试者 绝对定量 定量分析 相关系数 运动员 自发性

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动物病原高通量检测技术 被引量：2

11

作者 朱丽萍 颜世敢 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第10期103-106,共4页

当前规模化养殖业迫切需要动物病原检测技术高通量化。高通量检测技术具有高通量、自动化、微量化等特点。病原高通量检测技术可分为高通量免疫学检测(检测抗原)和高通量分子生物学检测(检测核酸)两大类。论文对近年来报道的用于动物病... 当前规模化养殖业迫切需要动物病原检测技术高通量化。高通量检测技术具有高通量、自动化、微量化等特点。病原高通量检测技术可分为高通量免疫学检测(检测抗原)和高通量分子生物学检测(检测核酸)两大类。论文对近年来报道的用于动物病原高通量检测的基因芯片技术、抗体芯片技术、液相芯片技术、流式细胞术多色荧光分析技术、变性高效液相色谱技术等新技术从原理、特点及应用等进行了综述。 展开更多

关键词 高通量检测 液相芯片 抗体芯片 流式细胞术 基因芯片 变性高效液相色谱技术 病原微生物

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原核表达技术在动物传染病疫苗生产中的应用 被引量：2

12

作者 朱梦涵 李桂萍 +2 位作者 霍彩云 孙英健 孙惠玲 《动物医学进展》 北大核心 2024年第10期96-100,共5页

原核表达技术是基因表达中开发最早、使用最广泛的蛋白表达技术。因具有成本低廉,遗传背景清晰,培养周期短,可大量收获等特点,而在动物传染病疫苗的生产中广泛应用。论文主要总结了利用原核表达技术生产动物传染病疫苗时目的基因的选择... 原核表达技术是基因表达中开发最早、使用最广泛的蛋白表达技术。因具有成本低廉,遗传背景清晰,培养周期短,可大量收获等特点,而在动物传染病疫苗的生产中广泛应用。论文主要总结了利用原核表达技术生产动物传染病疫苗时目的基因的选择,宿主菌的选择、以及疫苗的安全性和免疫效力的检测方法,并对原核表达技术在动物传染病疫苗生产中的安全性与制备成本的优势进行了讨论,以期为今后利用原核表达技术研发和生产疫苗提供参考和借鉴。 展开更多

关键词 原核表达技术 目的基因 宿主菌 疫苗安全性检测 疫苗免疫效力检测

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淹水胁迫下中国南瓜转录组及差异表达基因分析 被引量：1

13

作者 刘珍宇 王鹏伟 +4 位作者 郭林鑫 陈碧华 孙丽 李新峥 刘振威 《中国蔬菜》 北大核心 2024年第5期105-114,共10页

近年来,受全球气候变化的影响,洪涝灾害频繁发生,已严重影响我国南瓜生产。为研究南瓜耐涝机理,以耐涝性强和淹水敏感的2份中国南瓜为试材,采用双套盆法进行淹水胁迫,利用转录组测序及实时荧光定量PCR进行差异表达基因分析。结果表明:... 近年来,受全球气候变化的影响,洪涝灾害频繁发生,已严重影响我国南瓜生产。为研究南瓜耐涝机理,以耐涝性强和淹水敏感的2份中国南瓜为试材,采用双套盆法进行淹水胁迫,利用转录组测序及实时荧光定量PCR进行差异表达基因分析。结果表明:淹水胁迫后,耐涝型南瓜材料013-2叶片氧化酶基因相对表达量整体上调,均高于淹水敏感型南瓜材料367-2;013-2和367-2叶片鉴定出3231个差异表达基因,其中上调表达基因1778个,下调表达基因1453个。GO富集发现差异表达基因显著富集在光合作用、乙烯反应、磷酸信号转导系统、细胞对乙烯刺激的反应、乙烯激活信号通路等生物过程中;KEGG注释发现有947个差异表达基因被注释到121条代谢通路中,包括光合作用-天线蛋白、植物激素信号转导、MAPK信号通路、植物-病原体相互作用、苯丙烷类生物合成等。KEGG GSEA发现植物激素信号转导、昼夜节律、MAPK信号通路、植物-病原互作等基因集得最高分。研究结果可为进一步探索与南瓜耐涝相关的基因奠定基础。 展开更多

关键词 南瓜 淹水胁迫 实时荧光定量PCR RNA高通量测序技术 差异表达基因

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转基因食品中外源基因非预期效应的分子检测技术 被引量：5

14

作者 徐茂军 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期78-82,共5页

转基因食品中外源基因的非预期效应可以引起转基因食品的营养成分含量发生变化 ,甚至产生一些新的毒性物质 ,是转基因植物食品安全性评价的重要内容之一。由于外源基因非预期效应的不可预见性 ,因此用常规的分析技术难以准确测定。利用... 转基因食品中外源基因的非预期效应可以引起转基因食品的营养成分含量发生变化 ,甚至产生一些新的毒性物质 ,是转基因植物食品安全性评价的重要内容之一。由于外源基因非预期效应的不可预见性 ,因此用常规的分析技术难以准确测定。利用蛋白质组定量分析技术和基因芯片技术从蛋白质组和mRNA水平上比较转基因植物食品和非转基因植物食品的基因表达差异 ,是检测外源基因非预期效应的有效手段。文中对利用蛋白质组分析技术和基因芯片技术检测转基因食品中外源基因非预期效应的应用进展进行了综述分析。 展开更多

关键词 基因芯片技术 中外 外源基因 转基因食品 含量 MRNA水平 基因表达差异 预期效应 非转基因 分子检测技术

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BSP技术在萝卜-芥蓝异源四倍体及其亲本BZIP17同源基因甲基化检测中的应用

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作者 黄笑君 吕昱树 王建波 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期119-127,共9页

为探讨异源多倍体基因组中直系同源基因的表达调控机制，对重亚硫酸盐测序PCR（BSP）技术进行了改进优化。结果表明，改进的BSP技术检测到萝卜-芥蓝四倍体及其亲本BZIPl7同源基因启动子的甲基化水平为3．8％～18．8％，采用实时荧光定量... 为探讨异源多倍体基因组中直系同源基因的表达调控机制，对重亚硫酸盐测序PCR（BSP）技术进行了改进优化。结果表明，改进的BSP技术检测到萝卜-芥蓝四倍体及其亲本BZIPl7同源基因启动子的甲基化水平为3．8％～18．8％，采用实时荧光定量PCR检测BZIPl7基因的相对表达量，且BZIPl7同源基因的表达调控与启动子甲基化等作用相关。因此，改进的BSP技术可应用到更多同源基因的甲基化检测中，以分析异源多倍体中同源基因的分子进化方式。 展开更多

关键词 植物异源多倍体 DNA甲基化 同源基因 甲基化检测技术 基因表达

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增强子对基因表达的调控:从新技术到新机制

16

作者 武成一 陈斐 +3 位作者 洪丹妮 朱明 童梦莎 黄佳良 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期496-505,共10页

全基因组研究已经鉴定了人类基因组中数以百万计的增强子调控元件,然而它们的生物学功能和潜在作用机制在很大程度上仍然未知.本文回顾了应用于鉴定、描述和验证增强子的新兴高通量技术,并进一步讨论对增强子潜在调控机制的生物学理解,... 全基因组研究已经鉴定了人类基因组中数以百万计的增强子调控元件,然而它们的生物学功能和潜在作用机制在很大程度上仍然未知.本文回顾了应用于鉴定、描述和验证增强子的新兴高通量技术,并进一步讨论对增强子潜在调控机制的生物学理解,特别是关于增强子簇如何控制基因表达的研究,如超级增强子的功能层次结构等.最后总结了增强子在发育、进化和疾病发生过程中调控基因时空表达的重要作用,并对该领域一些未解决的关键问题和未来的研究方向进行探讨和展望. 展开更多

关键词 增强子 基因表达调控 高通量技术 功能层次结构

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报告基因技术的理论基础及其应用 被引量：18

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作者 刘志锋 姜勇 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期361-363,共3页

报告基因技术广泛地应用于监测细胞的信号转导和基因表达,通过把转录控制元件剪接到报告基因,可以直观地“报道”细胞内与基因表达有关的信号级联。这种检测具有敏感性高、方便、可靠而且适用于大规模检测等优点。随着报告基因技术及其... 报告基因技术广泛地应用于监测细胞的信号转导和基因表达,通过把转录控制元件剪接到报告基因,可以直观地“报道”细胞内与基因表达有关的信号级联。这种检测具有敏感性高、方便、可靠而且适用于大规模检测等优点。随着报告基因技术及其检测方法的不断改进,荧光素酶、绿色荧光蛋白以及新近克隆出的红色荧光蛋白作为无害性的检测工具,将在检测活体组织和细胞基因表达方面得到越来越广泛的应用。此外,在研究疾病发生的分子机制,基因治疗和药物开发方面,报告基因技术也将发挥出重要作用。本文对报告基因技术的基础理论、常用报告基因的种类和特点,以及其目前的主要应用作了概括性介绍。 展开更多

关键词 报告基因技术 理论基础 应用 荧光蛋白 信号检测 基因表达

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转录组测序深度对表达基因检出及表达量估计的影响 被引量：7

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作者 高原 王翌霞 +2 位作者 张亮 窦同海 周雁 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期642-647,共6页

基于第二代测序技术的转录组测序(RNA-seq)是目前基因表达分析的重要手段,其测序深度与检出的表达基因数量及基因表达量准确程度直接相关。为探索转录组测序深度对基因表达分析的影响,进而为不同实验需求选择合适的测序深度提供参考,本... 基于第二代测序技术的转录组测序(RNA-seq)是目前基因表达分析的重要手段,其测序深度与检出的表达基因数量及基因表达量准确程度直接相关。为探索转录组测序深度对基因表达分析的影响,进而为不同实验需求选择合适的测序深度提供参考,本研究采用Hiseq2000高通量测序平台完成小鼠大脑转录组的深度测序,共产出38 M有效reads。从中随机抽取总量的25%,50%,75%和全部数据模拟建成4个不同测序深度的文库,并以相对表达量RPKM值的高低将表达基因划分为5组,比较分析不同测序深度下不同组别检出表达基因个数以及基因相对表达量(RPKM)的变化。结果表明,9.5 M reads的测序深度中可检出81.55%的总编码基因,而随测序深度增加新检出表达基因的数量逐步减少。基因表达量的分析中,中高表达量基因RPKM[30,+∞)、偏低表达基因RPKM[3,30)和低表达基因RPKM[1,3)的相对表达量分别在9.5 M,19 M和28.5 M有效reads的测序深度以上的文库中趋于稳定。由此可知,研究中高表达基因时,可参考的转录组测序量为9.5 M有效reads以上,而研究低表达基因时,测序量需为19 M有效reads或更高。 展开更多

关键词 高通量测序技术 测序深度 基因检出个数 基因表达量

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CCoAOMT基因反义表达载体的构建及转化苎麻的研究 被引量：10

19

作者 陈建荣 张学文 +2 位作者 郭清泉 唐香山 杨友才 《湖南师范大学自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2005年第1期75-78,共4页

　采用RT PCR的方法,克隆烟草木质素合成关键酶咖啡酰甲基转移酶(CCoAOMT)基因并测序.构建CCoAOMT基因反义表达载体,通过农杆菌介导法对苎麻进行遗传转化,得到转基因植株.采用PCR方法对其进行分子检测.为利用基因工程技术,创造适合我国... 　采用RT PCR的方法,克隆烟草木质素合成关键酶咖啡酰甲基转移酶(CCoAOMT)基因并测序.构建CCoAOMT基因反义表达载体,通过农杆菌介导法对苎麻进行遗传转化,得到转基因植株.采用PCR方法对其进行分子检测.为利用基因工程技术,创造适合我国国情的环保型低木质素苎麻转基因新品种奠定了基础. 展开更多

关键词 CCOAOMT 反义表达载体 苎麻 构建 RT-PCR 农杆菌介导法 基因工程技术 甲基转移酶 木质素合成 PCR方法 转基因植株 遗传转化 分子检测 关键酶 新品种 环保型 烟草

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广义似然比检验应用于基因芯片表达数据的分析 被引量：2

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作者 单连峰 张惠丹 周宝森 《中国卫生统计》 CSCD 北大核心 2009年第3期328-330,共3页

关键词 基因芯片技术 似然比检验 广义 基因表达数据 基因组水平 检测灵敏度 同时监测 相互关系

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