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脑胶质瘤组织中R132H突变型hIDH1基因双顺反子真核表达载体的构建及鉴定: 1; 作者朱剑许期年 +5 位作者王秀云左剑玲周岱王中伏林山陈旭仁《山东医药》 CAS 2012年第26期10-13,共4页; 目的以pcDNA3.1(+)为骨架,构建并鉴定人脑胶质瘤组织中含R132H突变的人源异柠檬酸脱氢酶1基因(hIDH1R132H)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列的双顺反子真核表达载体。方法以内部核糖体进入位点(IRES)/EGFP片段为模板,扩增出IRES/EGFP片段... 展开更多; 关键词颅内肿瘤胶质瘤异柠檬酸脱氢酶1 双顺反子质粒基因突变; 在线阅读下载PDF 职称材料

甘薯AGPase双顺反子表达载体的构建及其在E.coli中的表达: 2; 作者王章英房伯平 +2 位作者陈景益张雄坚陈新亮《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第S1期88-90,6,共4页; 提取甘薯块根总RNA,利用RT-PCR法克隆淀粉合成关键酶——腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose Pyrophosphorylase,AGPase)大小亚基基因的cDNA序列,通过引入SD序列,成功构建了甘薯AGPase大小亚基双顺反子表达载体,并实现了甘薯AGPase... 展开更多; 关键词甘薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶双顺反子; 在线阅读下载PDF 职称材料

组织因子途径抑制因子/绿色荧光蛋白双顺反子真核表达载体构建及其在NIH 3T3细胞中表达: 3; 作者宋丽萍楼莎 +5 位作者朱敦皖刘兰霞张海玲董霞董庭婷冷希岗《生物医学工程与临床》 CAS 2011年第2期178-182,88,共5页; 目的构建含人组织因子途径抑制因子(TFPI)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子真核表达载体,并验证其在NIH 3T3细胞中的表达,为血管再狭窄的防治提供一个具有示踪和治疗双重作用的有效载体。方法以含有全长cDNA的pIRES-TFPI为模板,多聚... 展开更多; 关键词组织因子途径抑制因子绿色荧光蛋白双顺反子表达载体血管再狭窄; 在线阅读下载PDF 职称材料

人白介素-10和EGFP双顺反子结构载体的构建及其在原代培养的豚鼠肝细胞中的表达: 4; 作者刘辰吴孟超 +3 位作者张柏和王星华崔贞福钱其军《肝胆外科杂志》 2005年第6期469-470,共2页; 关键词人白介素-10 双顺反子载体原代培养肝细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

青蟹双顺反子病毒-1原位杂交检测方法的建立与应用被引量：1: 5; 作者崔亚婷倪军 +4 位作者马红玲许海东冯娟申亚阳郭志勋《广东农业科学》 CAS 2015年第11期130-134,F0003,共6页; 根据青蟹双顺反子病毒-1(mud crab dicistrovirus-1,MCDV-1)基因的保守序列设计1对引物,从感染MCDV-1的青蟹鳃组织中提取RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到1 314 bp的c DNA片段。纯化后的PCR产物用地高辛(DIG)标记制备核酸探针,此探针与青... 展开更多; 关键词拟穴青蟹青蟹双顺反子病毒-1 地高辛核酸探针原位杂交; 在线阅读下载PDF 职称材料

FMDV 2A介导的乳腺上皮细胞双基因表达载体构建及表达: 6; 作者陈秋菊王韵斐 +4 位作者崔易虹朱广琴杨明明宋宇轩曹斌云《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1396-1401,共6页; 构建FMDV 2A介导的人白细胞介素2基因(hIL-2)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子乳腺特异性表达载体,并验证其在乳腺上皮细胞中的表达。克隆奶山羊β-酪蛋白启动子序列,将hIL-2基因序列置于启动子之后,然后利用口蹄疫病毒2A(FMDV ... 展开更多; 关键词人白细胞介素2 EGFP FMDV2A 双顺反子; 在线阅读下载PDF 职称材料

IRES连接双基因在溶瘤腺病毒中的抗肝癌作用被引量：3: 7; 作者刘金刘必胜刘新垣《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2007年第4期466-470,493,共6页; 单基因治疗癌症可能杀伤力还嫌不够,故使用两个基因在癌症治疗中具有重要价值。利用IRES将双基因连接起来在溶瘤腺病毒中表达,构成ZD55-IL-24-IRES-TRAIL。研究发现,该病毒在多种肝癌细胞中能有效地介导外源双基因表达,并在很大程度上... 展开更多; 关键词双顺反子溶瘤腺病毒内部核糖体进入住点(IRES) 基因治疗; 在线阅读下载PDF 职称材料

广东省阳江地区野生拟穴青蟹2种病毒感染情况调查被引量：5: 8; 作者张迪苏友禄 +3 位作者冯娟马红玲付腾郭志勋《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期137-141,共5页; 青蟹双顺反子病毒-1（mudcrabdicistrovirus-1，MCDV-1）和青蟹呼肠孤病毒（mudcrabreovirus，MCRV）是对养殖拟穴青蟹有较强致病性的2种病原，可导致高死亡率。文章采用双重巢式PCR检测法对2012年阳江地区5月-10月捕捞的野生拟穴青蟹（... 展开更多; 关键词拟穴青蟹青蟹双顺反子病毒-1 青蟹呼肠孤病毒调查; 在线阅读下载PDF 职称材料

谷胱甘肽合成酶系基因协调表达体系的构建被引量：1: 9; 作者尧辉魏东芝 +2 位作者周宇荀沈立新刘寿春《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期144-148,共5页; 通过 PCR获得 E.coli B谷胱甘肽合成酶系基因 ( gsh I,gsh II)片段 ,结合定点突变稀有起始密码子 ,设定 gsh I与 gsh II位置与距离 ,构建双顺反子重组表达载体 p Trc99A/gsh I- gsh II,建立GSHI、GSH- II蛋白表达体系。结果表明 :以 0 .... 展开更多; 关键词谷胱甘肽合成酶系蛋白表达体系双顺反子重组表达载体协调表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名脑胶质瘤组织中R132H突变型hIDH1基因双顺反子真核表达载体的构建及鉴定: 1; 作者朱剑许期年王秀云左剑玲周岱王中伏林山陈旭仁; 机构苏州大学附属第一医院盐城市第一人民医院; 出处《山东医药》 CAS 2012年第26期10-13,共4页; 基金江苏省重点人才专项基金资助项目(RC2007081); 文摘目的以pcDNA3.1(+)为骨架,构建并鉴定人脑胶质瘤组织中含R132H突变的人源异柠檬酸脱氢酶1基因(hIDH1R132H)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列的双顺反子真核表达载体。方法以内部核糖体进入位点(IRES)/EGFP片段为模板,扩增出IRES/EGFP片段,并在5'末端引入3×Flag标签;通过PCR介导的定点突变法,以pCMV-sports6-hIDH1为模板,扩增hIDH1R132H基因片段,并在3'末端引入3×Flag标签;通过PCR连接两种产物后经双酶切定向克隆入pcDNA3.1(+)骨架;转化大肠杆菌后挑取阳性克隆,提取质粒进行PCR检测及基因序列测定。结果 PCR检测7个菌落中有6个阳性克隆,DNA测序发现引入了hIDH1基因。结论成功构建了双顺反子真核表达载体pcDNA3.1(+)-hIDH1R132H/3×Flag/IRES/EGFP,为研究人胶质瘤组织中R132H突变的作用机制奠定了基础。; 关键词颅内肿瘤胶质瘤异柠檬酸脱氢酶1 双顺反子质粒基因突变; Keywords intracraniat tumor gliomas isocitrate dehydrogenase 1 bicistron plasmid gene mutation; 分类号 R739.41 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名甘薯AGPase双顺反子表达载体的构建及其在E.coli中的表达: 2; 作者王章英房伯平陈景益张雄坚陈新亮; 机构广东省农科院作物研究所; 出处《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第S1期88-90,6,共4页; 基金国家自然科学基金(31000737) 广东省自然科学基金(10151064001000018) +1 种基金广东省农科院院长基金(201009) 国家现代农业产业技术体系建设专项资金(nycytx-16-B-5); 文摘提取甘薯块根总RNA,利用RT-PCR法克隆淀粉合成关键酶——腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose Pyrophosphorylase,AGPase)大小亚基基因的cDNA序列,通过引入SD序列,成功构建了甘薯AGPase大小亚基双顺反子表达载体,并实现了甘薯AGPase在E.coli中的高效表达,为进一步研究甘薯AGPase功能奠定了基础。; 关键词甘薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶双顺反子; Keywords sweetpotato ADP-glucose Pyrophosphorylase dicistronic expression vector; 分类号 S531 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名组织因子途径抑制因子/绿色荧光蛋白双顺反子真核表达载体构建及其在NIH 3T3细胞中表达: 3; 作者宋丽萍楼莎朱敦皖刘兰霞张海玲董霞董庭婷冷希岗; 机构中国医学科学院北京协和医学院生物医学工程研究所天津市生物医学材料重点实验室中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院; 出处《生物医学工程与临床》 CAS 2011年第2期178-182,88,共5页; 基金天津市自然科学基金面上项目(10JCYBJC10600) 教育部新教师基金(20091106120048) +1 种基金协和青年科研基金中央级公益性科研院所基本科研业务专项资助; 文摘目的构建含人组织因子途径抑制因子(TFPI)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子真核表达载体,并验证其在NIH 3T3细胞中的表达,为血管再狭窄的防治提供一个具有示踪和治疗双重作用的有效载体。方法以含有全长cDNA的pIRES-TFPI为模板,多聚酶链反应(PCR)扩增TFPI全长cDNA,经酶切后插入到pIRES2-AcGFP1-Nuc载体中,构建成双顺反子真核表达载体,重组质粒经酶切图谱分析、PCR扩增及测序鉴定后命名为pIRES2-AcGFP1-Nuc-TFPI。将其转染NIH3T3细胞,采用荧光显微镜观察GFP在细胞中的表达,以RT-PCR检测TFPI在细胞内的表达。结果经酶切图谱分析、PCR扩增及DNA测序证实双顺反子真核表达载体构建正确;荧光显微镜可观察到细胞内GFP的表达;RT-PCR证实经TFPI基因转染的细胞内TFPI mRNA表达增高。结论成功构建了包括TFPI和GFP的真核双表达载体,并使其在NIH3T3细胞中顺利表达。; 关键词组织因子途径抑制因子绿色荧光蛋白双顺反子表达载体血管再狭窄; Keywords tissue factor pathway inhibitor green fluorescent protein bicistronic expression vector restenosis; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人白介素-10和EGFP双顺反子结构载体的构建及其在原代培养的豚鼠肝细胞中的表达: 4; 作者刘辰吴孟超张柏和王星华崔贞福钱其军; 机构第二军医大学东方肝胆外科医院; 出处《肝胆外科杂志》 2005年第6期469-470,共2页; 关键词人白介素-10 双顺反子载体原代培养肝细胞; 分类号 R657.3 [医药卫生—外科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名青蟹双顺反子病毒-1原位杂交检测方法的建立与应用被引量：1: 5; 作者崔亚婷倪军马红玲许海东冯娟申亚阳郭志勋; 机构中国水产科学研究院南海水产研究所/农业部水产品加工重点实验室上海海洋大学水产与生命学院广东省水生动物疫病预防控制中心; 出处《广东农业科学》 CAS 2015年第11期130-134,F0003,共6页; 基金广东省省级财政鱼病防治专项资金(2013) 广东省科技计划项目(2011A020102002) 中国水产科学研究院基本科研业务费专项(2012TS06); 文摘根据青蟹双顺反子病毒-1(mud crab dicistrovirus-1,MCDV-1)基因的保守序列设计1对引物,从感染MCDV-1的青蟹鳃组织中提取RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到1 314 bp的c DNA片段。纯化后的PCR产物用地高辛(DIG)标记制备核酸探针,此探针与青蟹呼肠孤病毒(MCRV)、鲍肌肉萎缩症病毒(Ab SV)、类疱疹病毒(Ab HV)、白斑综合症病毒(WSSV)、虎纹蛙病毒(TFV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)等水生动物常见病毒均无交叉反应,可以特异性的检测出MCDV-1,检出MCDV-1的灵敏度为8.58×107 copies/μL。采用原位杂交检测方法检测拟穴青蟹组织中MCDV-1的组织分布,结果表明,拟穴青蟹中MCDV-1 RNA的阳性信号主要分布于肝胰腺、神经节、肠道和食管。; 关键词拟穴青蟹青蟹双顺反子病毒-1 地高辛核酸探针原位杂交; Keywords Scylla paramamosain mud crab dicistrovirus-1 dig-labeled probe in situ hybridization; 分类号 S945.6 [农业科学—水产养殖] Q819 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名FMDV 2A介导的乳腺上皮细胞双基因表达载体构建及表达: 6; 作者陈秋菊王韵斐崔易虹朱广琴杨明明宋宇轩曹斌云; 机构西北农林科技大学动物科技学院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1396-1401,共6页; 基金国家"863"项目资助(2007AA10Z167) 陕西省13115重大科技创新专项(2009ZDKG-1a); 文摘构建FMDV 2A介导的人白细胞介素2基因(hIL-2)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子乳腺特异性表达载体,并验证其在乳腺上皮细胞中的表达。克隆奶山羊β-酪蛋白启动子序列,将hIL-2基因序列置于启动子之后,然后利用口蹄疫病毒2A(FMDV 2A)自剪切序列连接EGFP基因,构建出乳腺特异性的双顺反子表达载体pFIENβ,并利用脂质体转染山羊乳腺上皮细胞,然后用RT-PCR技术和Western blot检测hIL-2基因与EG-FP基因的表达。重组质粒pFIENβ经酶切鉴定后表明构建成功,转染质粒PFIENβ和pEGFP-C1的细胞均观察到绿色荧光;从转染pFIENβ的乳腺上皮细胞中扩增出hIL-2基因和EGFP基因,而转染pEGFP-C1的细胞中只扩增出EGFP基因;经Western blot检测,转染pFIENβ的细胞中均表达了hIL-2和EGFP蛋白。结果表明山羊β-酪蛋白启动子能同时启动hIL-2基因和EGFP基因在山羊乳腺上皮细胞中的表达,并且利用FMDV 2A元件实现了hIL-2基因和EGFP基因的非融合型表达。; 关键词人白细胞介素2 EGFP FMDV2A 双顺反子; Keywords hIL-2 EGFP FMDV 2A bicistronic expression vector; 分类号 S852.659.6 [农业科学—基础兽医学] Q784 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名IRES连接双基因在溶瘤腺病毒中的抗肝癌作用被引量：3: 7; 作者刘金刘必胜刘新垣; 机构浙江理工大学生命科学院; 出处《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2007年第4期466-470,493,共6页; 基金 "973"项目(2004CB518804) 浙江省科技厅重点项目(2006C23006); 文摘单基因治疗癌症可能杀伤力还嫌不够,故使用两个基因在癌症治疗中具有重要价值。利用IRES将双基因连接起来在溶瘤腺病毒中表达,构成ZD55-IL-24-IRES-TRAIL。研究发现,该病毒在多种肝癌细胞中能有效地介导外源双基因表达,并在很大程度上杀死肿瘤细胞,而对正常细胞WI38无明显杀伤力。并且,该病毒可以有效地抑制体内肿瘤生长,有的肿瘤甚至完全消失。; 关键词双顺反子溶瘤腺病毒内部核糖体进入住点(IRES) 基因治疗; Keywords Bicistronic adenovirus Internal ribosome entry site （IRES） Gene therapy; 分类号 R730.54 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名广东省阳江地区野生拟穴青蟹2种病毒感染情况调查被引量：5: 8; 作者张迪苏友禄冯娟马红玲付腾郭志勋; 机构中国水产科学研究院南海水产研究所上海海洋大学水产与生命学院; 出处《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期137-141,共5页; 基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(中国水产科学研究院南海水产研究所)资助项目(2012TS06) 广东省科技计划项目(2011A020102002) 广东省教育部产学研结合项目(2010B090400519); 文摘青蟹双顺反子病毒-1（mudcrabdicistrovirus-1，MCDV-1）和青蟹呼肠孤病毒（mudcrabreovirus，MCRV）是对养殖拟穴青蟹有较强致病性的2种病原，可导致高死亡率。文章采用双重巢式PCR检测法对2012年阳江地区5月-10月捕捞的野生拟穴青蟹（Scyllaparamamosain）病毒感染情况进行调查。结果显示，阳江地区2012年5月～10月的野生青蟹群体一直保持较高的病毒携带率（44．83％-100％），其中MCDV-1检出率最高的月份为6月、8月和9月，MCRV检出率最高的月份为5月-6月和8月～9月；以单独感染类型为主的月份为5月、7月和10月（〉44．83％），以双阳性感染类型为主的月份为6月、8月和9月（〉82．76％）。由此可见，2种病毒的流行月份为5月～6月和8月～9月；在流行月份期间2种病毒常常协同感染野生拟穴青蟹。; 关键词拟穴青蟹青蟹双顺反子病毒-1 青蟹呼肠孤病毒调查; Keywords Scylla paramamosain MCDV-1 MCRV survey; 分类号 S945 [农业科学—水产养殖]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名谷胱甘肽合成酶系基因协调表达体系的构建被引量：1: 9; 作者尧辉魏东芝周宇荀沈立新刘寿春; 机构华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室生物化学研究所 DepartmentofVascularBiology; 出处《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期144-148,共5页; 基金教育部高等学校重点实验室访问学者基金资助上海市重点学科资助项目上海市生物工程重点学科建设资助项目; 文摘通过 PCR获得 E.coli B谷胱甘肽合成酶系基因 ( gsh I,gsh II)片段 ,结合定点突变稀有起始密码子 ,设定 gsh I与 gsh II位置与距离 ,构建双顺反子重组表达载体 p Trc99A/gsh I- gsh II,建立GSHI、GSH- II蛋白表达体系。结果表明 :以 0 .0 8mmol/L IPTG于 2 8℃诱导工程菌 E.coli BL2 1( DE3) ( p Trc99A/gsh I- gsh II) ,GSH- I、GSH- II蛋白比为 4.5∶ 1 ( m∶ m)时谷胱甘肽合成能力最高 ,达到每克湿菌体 8.5 mg。通过构建单顺反子重组表达载体 p Trc99A/gsh I、p Trc99A/gsh II测定GSH- I与 GSH- II蛋白的最适配比 ,结果表明 :在 GSH- I、GSH- II蛋白总量恒定的情况下 ,要提高谷胱甘肽产率 ,两者比例以 3∶ 1～ 6∶; 关键词谷胱甘肽合成酶系蛋白表达体系双顺反子重组表达载体协调表达; Keywords glutathione synthetase protein expression system two cistrons recombinant expression vector coordinated expression; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	脑胶质瘤组织中R132H突变型hIDH1基因双顺反子真核表达载体的构建及鉴定	朱剑许期年王秀云左剑玲周岱王中伏林山陈旭仁	《山东医药》 CAS	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	甘薯AGPase双顺反子表达载体的构建及其在E.coli中的表达	王章英房伯平陈景益张雄坚陈新亮	《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	组织因子途径抑制因子/绿色荧光蛋白双顺反子真核表达载体构建及其在NIH 3T3细胞中表达	宋丽萍楼莎朱敦皖刘兰霞张海玲董霞董庭婷冷希岗	《生物医学工程与临床》 CAS	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	人白介素-10和EGFP双顺反子结构载体的构建及其在原代培养的豚鼠肝细胞中的表达	刘辰吴孟超张柏和王星华崔贞福钱其军	《肝胆外科杂志》	2005	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	青蟹双顺反子病毒-1原位杂交检测方法的建立与应用	崔亚婷倪军马红玲许海东冯娟申亚阳郭志勋	《广东农业科学》 CAS	2015	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	FMDV 2A介导的乳腺上皮细胞双基因表达载体构建及表达	陈秋菊王韵斐崔易虹朱广琴杨明明宋宇轩曹斌云	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料
7	IRES连接双基因在溶瘤腺病毒中的抗肝癌作用	刘金刘必胜刘新垣	《浙江理工大学学报（自然科学版）》	2007	3	在线阅读下载PDF 职称材料
8	广东省阳江地区野生拟穴青蟹2种病毒感染情况调查	张迪苏友禄冯娟马红玲付腾郭志勋	《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心	2013	5	在线阅读下载PDF 职称材料
9	谷胱甘肽合成酶系基因协调表达体系的构建	尧辉魏东芝周宇荀沈立新刘寿春	《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2002	1	在线阅读下载PDF 职称材料