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细菌性条斑病菌JH01诱导水稻抗病均一化差减文库的构建
被引量：
1
1
作者
凌丹燕
路梅
《安徽农业科学》
CAS
2016年第2期188-191,共4页
[目的]构建细菌性条班病菌诱导下的水稻抗病均一化差减eDNA文库，对获得的差异表达ESTs进行生物信息学及抗病相关基因的表达分析。[方法]以水稻IR26（Tester）和两优培九（Driver）幼苗5～6叶期叶片为材料，采用双链特异性核酸酶（DSN...
[目的]构建细菌性条班病菌诱导下的水稻抗病均一化差减eDNA文库，对获得的差异表达ESTs进行生物信息学及抗病相关基因的表达分析。[方法]以水稻IR26（Tester）和两优培九（Driver）幼苗5～6叶期叶片为材料，采用双链特异性核酸酶（DSN）介导的均一化消减杂交技术，构建细菌性条斑病菌JH01诱导的水稻抗病相关基因差减eDNA文库，以pLB-F和pLB-R为引物，通过菌液PCR扩增对差减文库的质量进行检测。【结果】eDNA文库的插入片段分布在0．5～2．0kb，平均大小约为1．0kb．重组率达95％。序列测定分析发现，随机挑取的504个克隆中有98条差异表达基因；经BLAST比对和GO注释发现，59条序列具有同源基因，分别参与信号转导、能量代谢、过敏性坏死反应、防卫反应等；另外39条序列无相似基因，有待进一步研究。通过实时荧光定量PCR发现，从该文库中分离得到的OsNDPK4参与细菌性条斑病菌JH01诱导的水稻防卫反应。[结论]水稻受细菌性条斑病菌侵染的eDNA文库质量较好，为研究条斑病菌致病性因子与水稻互作机制奠定基础.
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关键词
细菌性条斑病
水稻
双链
特
异性
核酸酶
(
dsn
)
均一化差减杂交
荧光定量PCR
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职称材料
基于酶剪切量子点荧光放大技术的双元miRNA定量检测
被引量：
1
2
作者
佟丽莹
洑颢
+4 位作者
贾志舰
梁照恒
祝远锋
甘棕松
周骏
《光子学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020年第5期137-146,共10页
将量子点荧光特性与双链特异性核酸酶的DNA剪切特性相结合,提出一种高灵敏度、高特异性的双元miRNA定量检测方案.首先,将量子点和四氧化三铁磁性纳米粒子分别与捕获DNA链接形成捕获探针,再与待测miRNA互补配对形成异源双链杂合结构,随...
将量子点荧光特性与双链特异性核酸酶的DNA剪切特性相结合,提出一种高灵敏度、高特异性的双元miRNA定量检测方案.首先,将量子点和四氧化三铁磁性纳米粒子分别与捕获DNA链接形成捕获探针,再与待测miRNA互补配对形成异源双链杂合结构,随后双链特异性核酸酶对杂合结构中的捕获DNA进行特异性剪切,实现量子点和待测miRNA从捕获探针分离,且分离的待测miRNA与捕获探针上未配对的DNA开始新一轮杂交和再剪切.经过上述循环过程,量子点从捕获探针大量释放,荧光信号不断增强,实现肿瘤标志物miRNA的高灵敏检测.实验结果表明,基于酶剪切量子点荧光放大技术,在1fmol/L至100pmol/L的浓度范围内,同时实现了肿瘤标志物miRNA-141及循环miRNA内参miRNA-1228的特异性定量检测,其检出限分别达到0.69fmol/L和0.21fmol/L.与实时荧光定量多聚核苷酸链式反应方法相比,该方案获得了相同的检测结果,且具有更高灵敏度.
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关键词
量子点
双链
特
异性
核酸酶
MIRNA
荧光检测
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职称材料
题名
细菌性条斑病菌JH01诱导水稻抗病均一化差减文库的构建
被引量：
1
1
作者
凌丹燕
路梅
机构
浙江师范大学化学与生命科学学院
出处
《安徽农业科学》
CAS
2016年第2期188-191,共4页
基金
浙江省自然科学基金项目(Y3110194)
文摘
[目的]构建细菌性条班病菌诱导下的水稻抗病均一化差减eDNA文库，对获得的差异表达ESTs进行生物信息学及抗病相关基因的表达分析。[方法]以水稻IR26（Tester）和两优培九（Driver）幼苗5～6叶期叶片为材料，采用双链特异性核酸酶（DSN）介导的均一化消减杂交技术，构建细菌性条斑病菌JH01诱导的水稻抗病相关基因差减eDNA文库，以pLB-F和pLB-R为引物，通过菌液PCR扩增对差减文库的质量进行检测。【结果】eDNA文库的插入片段分布在0．5～2．0kb，平均大小约为1．0kb．重组率达95％。序列测定分析发现，随机挑取的504个克隆中有98条差异表达基因；经BLAST比对和GO注释发现，59条序列具有同源基因，分别参与信号转导、能量代谢、过敏性坏死反应、防卫反应等；另外39条序列无相似基因，有待进一步研究。通过实时荧光定量PCR发现，从该文库中分离得到的OsNDPK4参与细菌性条斑病菌JH01诱导的水稻防卫反应。[结论]水稻受细菌性条斑病菌侵染的eDNA文库质量较好，为研究条斑病菌致病性因子与水稻互作机制奠定基础.
关键词
细菌性条斑病
水稻
双链
特
异性
核酸酶
(
dsn
)
均一化差减杂交
荧光定量PCR
Keywords
Bacterial leaf streak
Rice
Duplex-specific nnclease （
dsn
）
Normalized subtractive hybridization
Real-tine fluorescence quantitative PCR
分类号
S432.1 [农业科学—植物病理学]
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职称材料
题名
基于酶剪切量子点荧光放大技术的双元miRNA定量检测
被引量：
1
2
作者
佟丽莹
洑颢
贾志舰
梁照恒
祝远锋
甘棕松
周骏
机构
宁波大学物理科学与技术学院
宁波工程学院材料与化学工程学院
江西师范大学物理与通信电子学院
华中科技大学武汉光电国家研究中心
出处
《光子学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020年第5期137-146,共10页
基金
国家自然科学基金(No.61675104)
浙江省自然科学基金(No.LY17B050005)。
文摘
将量子点荧光特性与双链特异性核酸酶的DNA剪切特性相结合,提出一种高灵敏度、高特异性的双元miRNA定量检测方案.首先,将量子点和四氧化三铁磁性纳米粒子分别与捕获DNA链接形成捕获探针,再与待测miRNA互补配对形成异源双链杂合结构,随后双链特异性核酸酶对杂合结构中的捕获DNA进行特异性剪切,实现量子点和待测miRNA从捕获探针分离,且分离的待测miRNA与捕获探针上未配对的DNA开始新一轮杂交和再剪切.经过上述循环过程,量子点从捕获探针大量释放,荧光信号不断增强,实现肿瘤标志物miRNA的高灵敏检测.实验结果表明,基于酶剪切量子点荧光放大技术,在1fmol/L至100pmol/L的浓度范围内,同时实现了肿瘤标志物miRNA-141及循环miRNA内参miRNA-1228的特异性定量检测,其检出限分别达到0.69fmol/L和0.21fmol/L.与实时荧光定量多聚核苷酸链式反应方法相比,该方案获得了相同的检测结果,且具有更高灵敏度.
关键词
量子点
双链
特
异性
核酸酶
MIRNA
荧光检测
Keywords
Quantum dot
Double-strand specific nuclease
miRNA
Fluorescence detection
分类号
O433.1 [机械工程—光学工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
细菌性条斑病菌JH01诱导水稻抗病均一化差减文库的构建
凌丹燕
路梅
《安徽农业科学》
CAS
2016
1
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职称材料
2
基于酶剪切量子点荧光放大技术的双元miRNA定量检测
佟丽莹
洑颢
贾志舰
梁照恒
祝远锋
甘棕松
周骏
《光子学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
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已选择
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