检测和鉴别犬瘟热病毒强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的建立及初步应用 被引量：5

1

作者 司微 崔尚金 +1 位作者 张洪英 刘立奎 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期222-226,共5页

根据GenBank上登录的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)基因组全序列,选择CDV强、弱毒株间有区别保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了CDV强毒株特异性引物P2及弱毒株特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT... 根据GenBank上登录的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)基因组全序列,选择CDV强、弱毒株间有区别保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了CDV强毒株特异性引物P2及弱毒株特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT-PCR,然后用引物P2/P3/P4进行复合套式PCR,建立了一种能区分CDV强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的鉴别诊断方法。应用该方法从CDV强、弱毒株的基因组中分别扩增出了大小为247bp和177bp的特异性片段,从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为247bp和177bp的两条特异性片段,与犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒、新城疫病毒的细胞培养物以及正常细胞对照组进行复合RT-nPCR扩增时均为阴性。对从黑龙江省和吉林省采集的20份疑似CDV病料进行的检测结果表明,有15份类似CDV强毒,5份类似CDV弱毒。本研究建立的复合RT-nPCR可以有效检测CDV感染,能够将强、弱毒株区分开,可用于临床快速检测、流行病学监测以及追踪疫苗免疫效果等。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 复合反转录-套式聚合酶链式反应 鉴别诊断

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直接法提取血清DNA后套式聚合酶链反应扩增乙肝病毒DNA 被引量：2

2

作者 卢红艳 谢兴镛 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 1998年第2期42-45,共4页

为进一步提高ＨＢＶＤＮＡ检测水平，改良了直接法提取血清ＤＮＡ技术，并用套式聚合酶链反应扩增ＨＢＶＤＮＡ。即以裂解液直接提取血清ＨＢＶＤＮＡ，用内外两对引物分别进行连续两次扩增，使检测极限由一次ＰＣＲ的１０－２ｐｇ提高... 为进一步提高ＨＢＶＤＮＡ检测水平，改良了直接法提取血清ＤＮＡ技术，并用套式聚合酶链反应扩增ＨＢＶＤＮＡ。即以裂解液直接提取血清ＨＢＶＤＮＡ，用内外两对引物分别进行连续两次扩增，使检测极限由一次ＰＣＲ的１０－２ｐｇ提高到１０－６ｐｇ，整个过程３ｈ内完成。经ＢｇｌⅡ酶切分析证实两次扩增均为特异性扩增。 展开更多

关键词 直接法 DNA 套式 聚酶链反应 乙型肝炎病毒

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应用套式聚合酶链反应技术分析细菌与胆固醇结石形成关系的初步研究 被引量：1

3

作者 伍晓汀 肖路加 黎介寿 《医学研究生学报》 CAS 1997年第3期193-197,共5页

目的 :旨在从分子水平研究细菌感染与胆固醇结石形成之间的关系 ,以期阐明胆固醇结石发病的分子机理和探讨可能防治的新途径。　 方法 :从 36例胆汁细菌培养阴性的胆囊胆固醇结石中提取 DNA,应用套式聚合酶链反应 ( NP- PCR)技术 ,从中... 目的 :旨在从分子水平研究细菌感染与胆固醇结石形成之间的关系 ,以期阐明胆固醇结石发病的分子机理和探讨可能防治的新途径。　 方法 :从 36例胆汁细菌培养阴性的胆囊胆固醇结石中提取 DNA,应用套式聚合酶链反应 ( NP- PCR)技术 ,从中特异性地扩增细菌 DNA片段。　 结果 :发现 30例 ( 83.33% )胆固醇结石中有细菌 DNA存在。其中胆固醇含量在 30 %～ 69%之间 6例 ( 6/ 6) ;70 %～ 90 %之间 14例 ( 14/ 17) ;>90 % 10例 ( 10 / 13) ,尚未发现结石中胆固醇和水分含量多少与细菌 DNA存在与否有关。采用 16S r RNA基因序列对照分析鉴定细菌种类 ,在 10例( 2 7.78% )胆石中发现与大肠杆菌相似的 DNA片段 ;从 8例 ( 2 2 .2 2 % )胆石中得到痤疮丙酸杆菌型 DNA序列 ;2例 ( 5.56% )胆石中残留的细菌 DNA片段与化脓性链球菌相关 ;8例 ( 2 2 .2 2 % )胆石内细菌的 DNA片段具有多样性 ,类似于大肠杆菌、痤疮丙酸杆菌、化脓性链球菌、艰难梭状芽胞杆菌或其它未鉴定细菌 ,可能有多种细菌混合感染。另有 2例胆石的细菌 DNA分子量较低 ,不同于大肠菌、痤疮丙酸杆菌、化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌和铜绿色假单胞菌 ,归类于其它未鉴定细菌。　 结论 :证实多数胆固醇结石内有细菌 DNA存在。至于这些微生物在胆固醇结石形? 展开更多

关键词 胆固醇结石 细菌 DNA 16SRRNA基因 套式聚合酶链反应

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应用双重式聚合酶链反应技术检测鼠疫菌的探讨

4

作者 梁江明 黄德蕙 +5 位作者 林新勤 秦石英 周树武 韦锦平 鲁翠芳 陈达宗 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第2期99-99,139,共2页

关键词 双重式聚合酶链反应技术 检测 鼠疫菌 分子生物学技术

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培养-增强套式聚合酶链反应检测肺炎支原体感染

5

作者 王佳贺 李萍 王桂珍 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第5期440-440,432,共2页

关键词 肺炎支原体感染 聚合酶链反应检测 聚合酶链反应(PCR) 呼吸道感染 套式 培养 非典型肺炎 实验室诊断 流行季节 临床表现 雷诺现象 病原体 国内外 青年人 并发症

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发酵支原体、穿通支原体双重套式PCR检测研究 被引量：6

6

作者 糜祖煌 秦玲 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第4期50-52,共3页

目的　应用双重套式 PCR技术同时检测发酵支原体 (Mf)和穿通支原体 (Mpe)。方法　以支原体 16 Sv RNA基因为靶基因 ,外套引物为 Mf 与 Mpe共用、内套引物则分别为 Mf 种特异和 Mpe种特异 ,建立双重套式扩增体系。结果　本双重套式 PCR... 目的　应用双重套式 PCR技术同时检测发酵支原体 (Mf)和穿通支原体 (Mpe)。方法　以支原体 16 Sv RNA基因为靶基因 ,外套引物为 Mf 与 Mpe共用、内套引物则分别为 Mf 种特异和 Mpe种特异 ,建立双重套式扩增体系。结果　本双重套式 PCR不仅能分别扩增 Mf 和 Mpe的特异性 DNA,并能同时扩增 Mf 和 Mpe出现二条特征性条带 ,产物经测序证实。结论　双重套式 PCR是一种灵敏、特异和快速的 Mf 和 展开更多

关键词 发酵支原体 穿通支原体 双重套式聚合酶链反应

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乙脑病毒嵌套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：12

7

作者 高正琴 贺争鸣 +2 位作者 邢瑞昌 卫礼 王吉 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第4期279-282,共4页

目的　建立适用于检测人用猪源性生物制品中外源性乙脑病毒(JEV)的嵌套式RT- PCR方法。方法　根据已公布的JEV序列(GenBank登录号为M5 5 5 0 6 ) ,设计合成两对引物,对JEV感染的乳鼠脑组织和培养JEV的BHK 2 1细胞抽提RNA进行RT PCR和RT ... 目的　建立适用于检测人用猪源性生物制品中外源性乙脑病毒(JEV)的嵌套式RT- PCR方法。方法　根据已公布的JEV序列(GenBank登录号为M5 5 5 0 6 ) ,设计合成两对引物,对JEV感染的乳鼠脑组织和培养JEV的BHK 2 1细胞抽提RNA进行RT PCR和RT nestedPCR ,将PCR产物进行了克隆测序;同时对猪细小病毒(PPV)、猴空泡病毒4 0 (SV4 0 )及正常乳鼠脑组织、正常BHK 2 1细胞、PK15细胞、BSC 1细胞提取核酸进行PCR ,并对2 10份临床样品进行了检测。结果　PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测,JEV感染的乳鼠脑组织和培养JEV的BHK 2 1细胞均扩增出10 15bp和6 2 2bp目的基因片段,而PPV、SV4 0及未感染JEV的乳鼠脑组织、正常BHK 2 1细胞、PK15细胞、BSC 1细胞均未见特异性扩增条带,2 10份猪组织样品中未检出阳性样品。RT nestedPCR检测的最低限度为10PFU病毒。从样品核酸的提取到PCR扩增及检测结果的报告可在8小时内完成。结论　本研究建立的RT NestedPCR方法具有快速、特异、敏感、可靠的特点,可用于人用猪源性生物制品中外源性JEV的污染检测。 展开更多

关键词 乙脑病毒 反转录-嵌套式聚合酶链反应 检测

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套式PCR及测序方法用于痰标本中结核分枝杆菌rpoB耐药基因突变检测 被引量：6

8

作者 熊国亮 张慧慧 刘珍琼 《中国防痨杂志》 CAS 2006年第1期11-13,共3页

目的应用套式PCR-DNA测序方法直接检测痰标本中结核分枝杆菌相关的rpoB基因突变,以期建立一种直接检测分枝杆菌耐利福平的快速方法,并评价其临床应用价值。方法采用套式PCR-DNA测序方法直接检测112例活动性肺结核患者和20例非结核性肺... 目的应用套式PCR-DNA测序方法直接检测痰标本中结核分枝杆菌相关的rpoB基因突变,以期建立一种直接检测分枝杆菌耐利福平的快速方法,并评价其临床应用价值。方法采用套式PCR-DNA测序方法直接检测112例活动性肺结核患者和20例非结核性肺部疾病患者痰标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变情况。同份痰标本同时做涂片抗酸染色,罗氏培养及菌型鉴定。结果112例活动性肺结核患者痰标本套式PCR扩增87例呈阳性,产物DNA测序31例有rpoB基因突变,其中分离出耐利福平株的32例痰中29例发生了基因突变,耐药突变率90.6%(29/32),39例菌阴(涂阴培阴)痰中有2例发生突变。分离出对利福平敏感株的37例痰中未发生突变,20例非结核性肺部疾病患者痰标本套式PCR扩增均为阴性,特异性100%。结论套式PCR-DNA测序可望为直接检测临床痰标本中结核分枝杆菌耐利福平的准确、特异、快速的方法。 展开更多

关键词 套式聚合酶链反应 DNA测序 分枝杆菌 结核 利福平 抗药性 微生物

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用多重及套式PCR同时检测血清中的HBV和HCV方法的建立 被引量：2

9

作者 任少堂 秦一中 汪伟业 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第5期358-361,共4页

首次应用多重及套式ＰＣＲ技术同时检测人血清中的ＨＢＶ和ＨＣＶ。将抽提的ＨＢＶＤＮＡ和（或）ＨＣＶＲＮＡ在含ＡＭＶ逆转录酶、ＴａｑＤＮＡ多聚酶以及ＨＢＶ和ＨＣＶ外套引物的ＰＣＲ缓冲液中进行逆转录后连续进行ＰＣＲ扩增，以... 首次应用多重及套式ＰＣＲ技术同时检测人血清中的ＨＢＶ和ＨＣＶ。将抽提的ＨＢＶＤＮＡ和（或）ＨＣＶＲＮＡ在含ＡＭＶ逆转录酶、ＴａｑＤＮＡ多聚酶以及ＨＢＶ和ＨＣＶ外套引物的ＰＣＲ缓冲液中进行逆转录后连续进行ＰＣＲ扩增，以第一轮扩增产物为模板，在含ＨＢＶ和ＨＣＶ内套引物的ＰＣＲ反应体系中进行第二轮扩增，产物经电泳后，以ＤＮＡ分子量标志物或巳知片段做参考，出现５２３ｂｐ和（或）２６０ｂｐ产物条带分别为ＨＢＶ和（或）ＨＣＶ单项或重叠感染。因选择高度保守的ＨＢＶ和ＨＣＶ引物，并进行了包括将逆转录与第一轮ＰＣＲ结合进行等多项改进，故本方法具有特异、敏感、通用、简便、快速和经济等优点，减少了交叉污染的机会，有很高的临床实用价值，亦为献血员筛选提供一种可靠的方法。 展开更多

关键词 多重 聚合酶链反应 套式 肝炎病毒

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培养-增强套式PCR检测肺炎支原体感染

10

作者 董占双 刘忠顺 +1 位作者 王佳贺 王桂珍 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2002年第3期51-54,共2页

应用培养 增强套式多聚酶链反应 (C ENPCR)检测 44例肺炎支原体感染住院患儿咽拭子标本。在检测的 44份咽拭子标本中 ,肺炎支原体的检测阳性率为 38.6 3%。结果显示 ,C ENPCR检测MP感染敏感性较高 。

关键词 肺炎支原体 培养-增强套式聚合酶链反应

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miR-888和miR-891a的双重微滴式数字PCR检测在精液鉴定中的应用

11

作者 魏孙祥 陈惠香 +6 位作者 胡胜 赵一霞 石慧霞 王哲 李文 季安全 孙启凡 《法医学杂志》 CAS CSCD 2022年第6期719-725,共7页

目的 利用微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)技术建立可同时检测miR-888和miR-891a的体系,并评估其在精液鉴定中的应用价值。方法 通过设计不同荧光修饰的报告基团的水解探针实现对miR-888和miR-891a的双重ddPCR检测,对5种体液... 目的 利用微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)技术建立可同时检测miR-888和miR-891a的体系,并评估其在精液鉴定中的应用价值。方法 通过设计不同荧光修饰的报告基团的水解探针实现对miR-888和miR-891a的双重ddPCR检测,对5种体液(外周血、月经血、精液、唾液、阴道分泌液)共75份样本进行检测,采用Mann-Whitney U检验进行差异性分析,通过ROC曲线分析评估miR-888和miR-891a区分精液的能力并获得鉴别的最佳截断值。结果 该体系双重检测与单独检测结果差异无统计学意义,检测灵敏度可达到0.1 ng总RNA,批内与批间变异系数均小于15%。经双重ddPCR检测,精液中miR-888和miR-891a的表达量均高于其他体液。经ROC曲线分析,miR-888的AUC为0.976,最佳截断值为2.250 copies/μL,判别正确率为97.33%;miR-891a的AUC为1.000,最佳截断值为1.100copies/μL,判别正确率为100%。结论 本研究成功建立了双重ddPCR检测miR-888和miR-891a的方法,体系的稳定性和重复性良好,可用于精液鉴定,miR-888和miR-891a均具有较高的精液鉴别能力,且miR-891a的判别正确率更高。 展开更多

关键词 法医遗传学 微滴式数字聚合酶链反应 微小核糖核酸 精液 miR-888 miR-891a

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套式PCR和核苷酸序列分析鉴定ARV

12

作者 李秉鸿 《畜牧兽医科技信息》 1998年第10期5-6,共2页

美国学者对禽呼肠孤病毒（ARV）的鉴定采用了套式聚合酶链反应（PCR）和核苷酸排序。扩增的ARV美国株S₁基因段分别是738和342bp,PCR产物作Souttem和dot印迹杂交。扩增的cDNA片段经克隆成pUC18载体并排序,对美国... 美国学者对禽呼肠孤病毒（ARV）的鉴定采用了套式聚合酶链反应（PCR）和核苷酸排序。扩增的ARV美国株S₁基因段分别是738和342bp,PCR产物作Souttem和dot印迹杂交。扩增的cDNA片段经克隆成pUC18载体并排序,对美国株S1133、1733、2408和CO₈及澳大利亚株RAM₁。 展开更多

关键词 核苷酸序列 套式PCR 分析鉴定 美国株 套式聚合酶链反应 澳大利亚 氨基酸序列 禽呼肠孤病毒 印迹杂交 分离株

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用套式PCR检测蓝舌病病毒

13

作者 邱昌庆 《畜牧兽医科技信息》 1998年第19期6-6,共1页

美国I.E.Aradaib等从BTV17型（BTV—17）的非结构蛋白1基因中选择了2对寡核苷酸引物对（BTV₁、BTV₄和BTV₂、BTV₃）,用于套式多聚酶链反... 美国I.E.Aradaib等从BTV17型（BTV—17）的非结构蛋白1基因中选择了2对寡核苷酸引物对（BTV₁、BTV₄和BTV₂、BTV₃）,用于套式多聚酶链反应（PCR）试验中的两步扩增。第一步,使用外引物对BTV₁和BTV₄进行扩增,获得一个有826个碱基对（bp）的产品;第二步,用套式或内引物对BTV₂和BTV₃进行扩增,产生一种有517bp的PCR产品。应用这种套式PCR测定法,可以检测出在细胞培养物中繁殖的北美原型血清型2、10、11、13和17BTV的RNA。使用套式引物对BTV₂ 展开更多

关键词 套式PCR检测 蓝舌病病毒 套式多聚酶链反应 非结构蛋白1 流行性出血热病毒 血清型 细胞培养物 两步扩增 家畜流行病学 病毒分离

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微滴式数字PCR技术用于生物样品种属鉴定和绝对定量 被引量：23

14

作者 胡伟 陈荣华 +3 位作者 张晨 安志远 王斌 平原 《法医学杂志》 CAS CSCD 2014年第5期342-345,共4页

目的运用微滴式数字PCR技术进行生物样品的种属鉴定和绝对定量。方法选择人mtDNA两个编码基因ND4和16S rRNA,设计特异性引物与探针,用人来源及常见动物样本验证种属特异性,再用重组质粒和2组共16份人来源生物检材,倍比稀释。使用微滴式... 目的运用微滴式数字PCR技术进行生物样品的种属鉴定和绝对定量。方法选择人mtDNA两个编码基因ND4和16S rRNA,设计特异性引物与探针,用人来源及常见动物样本验证种属特异性,再用重组质粒和2组共16份人来源生物检材,倍比稀释。使用微滴式数字PCR技术进行种属检验和绝对定量,验证其灵敏度和稳定性。结果人重组质粒FAM(ND4)可进行人来源样品的检测,其检测结果与各级稀释梯度基本吻合,微滴式数字PCR技术可以检测出反应体系中低至单拷贝的DNA。结论微滴式数字PCR技术可以进行生物样品的种属鉴定和绝对定量,并具有很高的灵敏度和特异性,可应用于日常法医物证检验。 展开更多

关键词 法医遗传学 聚合酶链反应 种属鉴定 绝对定量 微滴式数字PCR

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基于双重PCR技术的鹿茸及其伪品DNA指纹特征和鉴定 被引量：12

15

作者 高丽君 何程远 +7 位作者 李盈诺 巴宏宇 李梓僮 夏薇 李明成 苑广信 张丽华 艾金霞 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期839-844,共6页

目的:分析鹿茸线粒体细胞色素b(Cytb)和细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因特异性,建立双重PCR技术鉴别鹿茸真伪的分子指纹特征。方法:利用碱变性法提取梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸和新西兰鹿茸的基因组DNA,应用引物设计软件Premier 5.0针对... 目的:分析鹿茸线粒体细胞色素b(Cytb)和细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因特异性,建立双重PCR技术鉴别鹿茸真伪的分子指纹特征。方法:利用碱变性法提取梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸和新西兰鹿茸的基因组DNA,应用引物设计软件Premier 5.0针对Cytb和COⅠ分别设计特异性引物(分别为Cytb 1、2和COⅠ1、2、3),采用单一及双重引物分别进行PCR扩增,筛选特异性强的引物,确定最佳PCR反应条件。结果:采用碱变性法提取的鹿茸基因组DNA片段长度为23 000bp,DNA纯度即A(260)/A(280)为1.80±0.02;应用单一引物进行PCR扩增无法鉴定鹿茸的真伪,而引物Cytb 1和COⅠ1组合后,解链温度为58℃时,梅花鹿茸(吉林、安徽)、马鹿茸均能扩增出395和525bp大小的2个片段,而驯鹿茸和新西兰鹿茸均未能扩增出相应片段;采用该提取方法及最优化的PCR反应条件,对市售样品进行检测,检测结果与实际情况完全一致。结论:双重PCR技术可从分子水平鉴别鹿茸的真伪,该方法特异性高、实用性强,且简便快捷,在鹿茸真伪鉴别方面具有较高的应用价值。 展开更多

关键词 鹿茸 细胞色素B 细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ 双重聚合酶链反应 DNA指纹

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牛病毒性腹泻病毒内标双重RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：3

16

作者 季新成 段琛 +3 位作者 王克栋 史茜 于学辉 冉多良 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第1期17-21,共5页

为了对BVDV-1和BVDV-2进行同步检测,针对不同基因型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)基因组高度保守的5′-UTR核苷酸序列设计特异性引物(扩增长度为288bp)。为了指示假阴性结果,以牛GAPDH基因为内标基因,设计特异性引物(扩增序列长度为152bp)。... 为了对BVDV-1和BVDV-2进行同步检测,针对不同基因型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)基因组高度保守的5′-UTR核苷酸序列设计特异性引物(扩增长度为288bp)。为了指示假阴性结果,以牛GAPDH基因为内标基因,设计特异性引物(扩增序列长度为152bp)。通过反应条件的优化,建立了BVDV通用型内标双重RT-PCR检测方法,该方法可以监测RNA提取与RT-PCR反应过程,指示假阴性结果的发生。该方法的检测灵敏度约为100TCID50/mL,且具有较好的特异性和可重复性。通过对566份临床样品检验,检测到阳性样品19份,阳性率3.36%。该方法可用于临床样品中BVDV检测,并可对检测结果进行质量控制。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 内标 双重反转录-聚合酶链反应 共扩增

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牛病毒性腹泻病毒两种基因型双重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：5

17

作者 王勤 何博 +4 位作者 欧云文 刘俐君 杨磊 潘琴 张杰 《动物医学进展》 北大核心 2021年第9期24-29,共6页

为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)双重RT-PCR检测方法,根据BVDV-1(AF091605.1、KF501393.1、MK204904.1、MN513404.1和MG923683.1)和BVDV-2(AF502399.1、MG436782.1、AF145969.1、KC176777.1和MN513411.1)流行毒株5′-UTR保守序列设计2对... 为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)双重RT-PCR检测方法,根据BVDV-1(AF091605.1、KF501393.1、MK204904.1、MN513404.1和MG923683.1)和BVDV-2(AF502399.1、MG436782.1、AF145969.1、KC176777.1和MN513411.1)流行毒株5′-UTR保守序列设计2对特异性引物,通过优化反应条件,建立可同时检测BVDV-1和BVDV-2的双重RT-PCR方法。结果显示,该检测方法重复性好、特异性强,可分别检测出BVDV-1和BVDV-2核酸,与牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)、猪瘟病毒(CSFV)均不发生交叉反应;最低检测量为1×103拷贝/μL和1×102拷贝/μL;对达州及周边地区的332份临床样品进行检测,结果表明,该地区BVDV-1阳性率为7.83%,BVDV-2阳性率为0.90%,未检出BVDV-1和BVDV-2混合感染的临床样品。综上所述,建立的双重RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和临床适用性,可用于BVDV的临床诊断和分子流行病学调查。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒1型 牛病毒性腹泻病毒2型 双重反转录-聚合酶链反应

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BRSV和BPIV-3双重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：10

18

作者 王嵩 林红丽 +5 位作者 王宇鹏 刘振格 王杰 杨明发 余丽芸 侯喜林 《黑龙江八一农垦大学学报》 2014年第5期35-38,共4页

为建立一种快速诊断牛呼吸道合胞体病毒(BRSV),牛副流感病毒3型(BPIV-3)病毒病的方法,根据Genbank中登录的BRSV核衣壳蛋白N基因序列和BPIV-3的核衣壳蛋白N基因序列,利用分子生物学软件Primer5.0设计2对特异引物,经过条件优化,建立了BRSV... 为建立一种快速诊断牛呼吸道合胞体病毒(BRSV),牛副流感病毒3型(BPIV-3)病毒病的方法,根据Genbank中登录的BRSV核衣壳蛋白N基因序列和BPIV-3的核衣壳蛋白N基因序列,利用分子生物学软件Primer5.0设计2对特异引物,经过条件优化,建立了BRSV和BPIV-3的双重PCR检测方法。采用该方法检测BRSV和BPIV-3参考毒株,特异性良好。对参考毒株进行梯度稀释检测,结果该方法检测BRSV的敏感性可达10 TCID50·100μL-1,BPIV-3可达10 TCID50·100μL-1。应用建立的双重PCR方法能够从临床样品中检测出BRSV和BPIV-3。表明建立的双重PCR方法具有特异、敏感、快速的特点,可用于BRSV和BPIV-3的临床检测。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒 牛副流感病毒3型 双重反转录聚合酶链反应

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禽流感病毒H9和N2亚型双重RT-PCR检测方法的建立 被引量：10

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作者 徐倩 谢芝勋 +6 位作者 谢丽基 邓显文 谢志勤 罗思思 黄莉 黄娇玲 曾婷婷 《动物医学进展》 北大核心 2015年第1期11-15,共5页

为建立简便快速检测H9及N2亚型禽流感病毒(AIV)的方法,根据AIV H9亚型和N2亚型基因序列,分别设计了2对针对H9亚型AIV的HA基因和N2亚型AIV的NA基因的引物,建立了H9亚型和N2亚型AIV双重RT-PCR检测方法。对H9N2亚型AIV的RNA模板进行RT-PCR... 为建立简便快速检测H9及N2亚型禽流感病毒(AIV)的方法,根据AIV H9亚型和N2亚型基因序列,分别设计了2对针对H9亚型AIV的HA基因和N2亚型AIV的NA基因的引物,建立了H9亚型和N2亚型AIV双重RT-PCR检测方法。对H9N2亚型AIV的RNA模板进行RT-PCR扩增,可得到545bp H9基因特异性条带和341bp N2基因的特异性条带;对非H9亚型的N2亚型AIV进行扩增,则仅出现1个特异性扩增条带,即341bp N2基因条带;对非H9或N2亚型AIV和其他禽呼吸道病原体进行PCR扩增,结果均为阴性。结果表明该双重RT-PCR最低能检出100fg H9N2亚型AIV的cDNA模板。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H9亚型 N2亚型 双重逆转录-聚合酶链反应

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降落式PCR和SSCP检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体γ基因重排

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作者 韩西群 齐宗利 +2 位作者 贺莉 陆地 赵彤 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第2期188-191,共4页

目的以降落式PCR和单链构型多态性(SSCP)方法检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体(TCR)γ基因重排,探讨其在淋巴细胞白血病诊断中的价值。方法盐析法提取淋巴细胞白血病患者外周血白细胞DNA,TCR-γ基因重排通用引物和降落式PCR扩增基因... 目的以降落式PCR和单链构型多态性(SSCP)方法检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体(TCR)γ基因重排,探讨其在淋巴细胞白血病诊断中的价值。方法盐析法提取淋巴细胞白血病患者外周血白细胞DNA,TCR-γ基因重排通用引物和降落式PCR扩增基因重排。分别采用琼脂糖凝胶电泳、SSCP和DNA直接测序方法检测PCR扩增产物。阳性细胞系DNA模板与反应增生性淋巴组织DNA按不同比例混合后扩增,检测降落式PCR的灵敏度。结果琼脂糖电泳中,18例T淋巴细胞白血病中有15例、4例B淋巴细胞白血病中有2例为阳性,阳性标本经SSCP进一步分析,呈不连续条带。DNA直接测序证实扩增产物为TCR-γ基因重排。阳性对照模板占1%以上时可得到阳性扩增结果。结论TCR-γ基因重排通用引物结合降落式PCR可有效扩增T淋巴细胞白血病基因重排,可用于T淋巴细胞白血病的辅助诊断。 展开更多

关键词 降落式PCR SSCP 检测 淋巴细胞白血病 单克隆T细胞受体γ 基因重排 单链构型多态性 聚合酶链反应 检测

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