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我国登革2/4型病毒株Pr-M-E基因的双表达质粒构建及在真核细胞中的共表达 被引量:7
1
作者 姜涛 于曼 +6 位作者 范宝昌 陈水平 段鸿元 邓永强 彭文明 祝庆余 秦鄂德 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期278-282,共5页
将我国登革 2、4型病毒分离株PrM E基因通过RT PCR以病毒RNA为模板扩增我国登革 2型 4 3株和 4型B5株的PrM E基因 .并分别克隆至pGEM TEasy载体 ,然后亚克隆至双顺反子表达质粒的两个多克隆位点 ,获得同时含有登革 2型 4 3株和 4型B5株... 将我国登革 2、4型病毒分离株PrM E基因通过RT PCR以病毒RNA为模板扩增我国登革 2型 4 3株和 4型B5株的PrM E基因 .并分别克隆至pGEM TEasy载体 ,然后亚克隆至双顺反子表达质粒的两个多克隆位点 ,获得同时含有登革 2型 4 3株和 4型B5株PrM E基因的双顺反子重组表达质粒pIDME2 4 .在用该重组质粒转染的BHK2 1细胞中 ,不但可检测到PrM E基因的转录产物 ,而且采用间接免疫荧光法还可观察到针对登革 2型 4型病毒的特异荧光 .研究结果表明 ,重组的双顺反子表达质粒在真核细胞中可共表达登革两个血清型PrM E基因 。 展开更多
关键词 登革病毒 PrM-E基因 双表达质粒 真核细胞 表达
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IL-2与猪瘟病毒E_2基因真核双表达载体的构建及其免疫增强作用的研究 被引量:1
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作者 陈创夫 余兴龙 +4 位作者 乔军 马正海 李作生 涂长春 殷震 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2001年第2期90-94,共5页
应用DNA重组技术构建了猪瘟病毒E2 基因与IL 2基因的双表达真核表达载体 ,观察其表达水平 ,并对其免疫增强效果进行了观察。结果是构建了猪瘟病毒E2 基因与白细胞介素 2的真核表达质粒pIRSTIL 2。将质粒转染BHK 2 1细胞 ,可在体外表达E2... 应用DNA重组技术构建了猪瘟病毒E2 基因与IL 2基因的双表达真核表达载体 ,观察其表达水平 ,并对其免疫增强效果进行了观察。结果是构建了猪瘟病毒E2 基因与白细胞介素 2的真核表达质粒pIRSTIL 2。将质粒转染BHK 2 1细胞 ,可在体外表达E2 和有生物活性IL 2。pIRSTIL 2质粒能诱导产生CSFV的特异性免疫反应。pIRSTIL 2所诱导的免疫应答反应比使用单表达质粒pIRST强。实验表明 :IL 2与猪瘟病毒E2 展开更多
关键词 双表达质粒 IL-2 猪瘟 基因疫苗 DNA重组技术 免疫增强作用 真核表达载体
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双诱导模式原核表达系统的建立与应用 被引量:1
3
作者 方向东 高基民 +5 位作者 马骊 周俊岭 黄树其 刁志宏 陈泽洪 王小宁 《第一军医大学学报》 CSCD 1997年第4期253-257,共5页
将hG-CSFCDNA片段克隆于T7噬菌体RNA聚合酶启动子系统的表达载体pJGW1中,并与可热诱导T7RNA聚合酶产生的质粒pGP1-2共同转化大肠杆菌DHSα。经化学诱导或温度诱导,hG-CSF重组蛋白表达率>30%,并具有特异的生物活性。所构建的重... 将hG-CSFCDNA片段克隆于T7噬菌体RNA聚合酶启动子系统的表达载体pJGW1中,并与可热诱导T7RNA聚合酶产生的质粒pGP1-2共同转化大肠杆菌DHSα。经化学诱导或温度诱导,hG-CSF重组蛋白表达率>30%,并具有特异的生物活性。所构建的重组表达工程菌具有良好的稳定性。 展开更多
关键词 质粒表达系统 基因重组 温度诱导 化学诱导
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BAG-1、Bcl-2双靶区反义RNA重组载体诱导SGC-7901细胞凋亡 被引量:2
4
作者 陈建国 卢天龙 +2 位作者 韩跃武 冯惟萍 任慧子 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期132-135,共4页
目的构建BAG-1、Bcl-2双靶区反义RNA重组载体并初步探讨其对SGC-7901细胞增殖活性的影响。方法从SGC-7901细胞总RNA中逆转录扩增包括全部编码序列的BAG-1和Bcl-2 cDNA,利用生物工程技术,反向插入真核细胞双表达载体pVITRO2的多克隆位点... 目的构建BAG-1、Bcl-2双靶区反义RNA重组载体并初步探讨其对SGC-7901细胞增殖活性的影响。方法从SGC-7901细胞总RNA中逆转录扩增包括全部编码序列的BAG-1和Bcl-2 cDNA,利用生物工程技术,反向插入真核细胞双表达载体pVITRO2的多克隆位点中,转染SGC-7901细胞,MTT法检测对细胞增殖的影响,RT-PCR法观察对细胞BAG-1和Bcl-2 mRNA表达水平的变化,流式细胞术检测对细胞周期的影响。结果限制性内切酶和测序分析表明,双表达质粒pVITRO2-AsBAG-1-Bcl-2构建成功。MTT法检测显示pVITRO2-AsBAG-1-Bcl-2载体抑制SGC-7901细胞增殖,并呈时间依赖性,其中以72 h转染组抑制作用最显著(P<0.01);与对照组比较,pVITRO2-AsBAG-1-Bcl-2组BAG-1和Bcl-2mRNA表达水平下降(P<0.05),细胞凋亡比例升高(P<0.01)。结论成功构建反义双靶区重组载体pVITRO2-AsBAG-1-Bcl-2,并发现其能抑制SGC-7901细胞增殖并引起细胞凋亡。 展开更多
关键词 BAG-1 BCL-2 双表达质粒 反义RNA 胃癌
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