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DCLK1在胃癌干细胞中的作用及机制研究 被引量:2
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作者 张威 王光辉 +1 位作者 刘辉琦 刘永年 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期411-419,共9页
目的:研究双皮质素样激酶1(doublecortin-like kinase 1,DCLK1)对胃癌干细胞生物学特性的作用,初步探讨其可能的作用机制。方法:无血清培养液悬浮培养胃癌干细胞,用DCLK1抑制剂DCLK1-IN-1靶向抑制胃癌干细胞中DCLK1活性。用Western blo... 目的:研究双皮质素样激酶1(doublecortin-like kinase 1,DCLK1)对胃癌干细胞生物学特性的作用,初步探讨其可能的作用机制。方法:无血清培养液悬浮培养胃癌干细胞,用DCLK1抑制剂DCLK1-IN-1靶向抑制胃癌干细胞中DCLK1活性。用Western blot法检测胃癌干细胞中DCLK1、干性相关蛋白(SOX2和OCT4)、细胞增殖相关蛋白(cyclin D1和c-MYC)、耐药相关蛋白(ABCG2和TOP2A)、上皮-间充质转化相关蛋白(E-cadherin、vimen‐tin和Snail)和PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平。用CCK-8法测定DCLK1对胃癌干细胞活力及耐药的影响;用甲基纤维素成球法测定DCLK1对胃癌干细胞自我更新的影响。用细胞划痕实验和Transwell实验测定DCLK1对胃癌干细胞迁移和侵袭功能的影响。结果:胃癌干细胞中DCLK1及干性相关蛋白SOX2和OCT4表达明显高于亲本细胞(P<0.01)。DCLK1抑制组胃癌干细胞的增殖、耐药、迁移和侵袭能力明显低于Sphere细胞组(P<0.01)。DCLK1抑制组细胞增殖相关蛋白c-MYC和cyclin D1表达下调,耐药相关蛋白TOP2A和ABCG2表达下调,上皮标志物E-cadherin表达上调,间充质标志物vimentin和Snail表达下调,PI3K/AKT/mTOR相关蛋白表达及其磷酸化水平降低(P<0.01)。结论:DCLK1在胃癌干细胞中高表达,它可能通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路促进胃癌干细胞增殖、耐药、侵袭和迁移。DCLK1可作为靶向胃癌干细胞的潜在靶点。 展开更多
关键词 双皮质素样激酶1 胃癌干细胞 PI3K/AKT/mTOR信号通路
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DCLK1敲除对食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响 被引量:6
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作者 范晓娜 姚健楠 +2 位作者 葛洋 安广宇 李鹰 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第3期417-423,共7页
目的研究双皮质素样激酶1(doublecortin-like kinase 1,DCLK1)的敲除对食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其潜在的作用机制。方法使用CRISPR/Cas9基因编辑技术靶向敲除食管鳞癌细胞(Kyse450,Kyse70)的DCLK1基因。通过细胞划痕实验和Tr... 目的研究双皮质素样激酶1(doublecortin-like kinase 1,DCLK1)的敲除对食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其潜在的作用机制。方法使用CRISPR/Cas9基因编辑技术靶向敲除食管鳞癌细胞(Kyse450,Kyse70)的DCLK1基因。通过细胞划痕实验和Transwell实验评估DCLK1敲除对食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响。Western blotting法检测DCLK1敲除细胞系中上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关转录因子的表达变化。通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atla,TCGA)数据库进一步分析食管鳞癌患者(n=95)中DCLK1表达和EMT相关转录因子之间的相关性。结果CRISPR/Cas9基因编辑技术能够有效地敲除食管鳞癌细胞系DCLK1基因并影响其表达。DCLK1缺失显著抑制食管鳞癌细胞的体外迁移和侵袭能力(P<0.05),并上调上皮标志物E-cadherin的表达,下调间质标志物如Vimentin、ZEB1、Slug和Snail的表达(P<0.05)。另外TCGA数据库分析显示食管鳞癌患者中DCLK1与EMT相关转录因子存在相关性。结论DCLK1敲除可通过抑制EMT进程影响食管鳞癌细胞的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 双皮质素样激酶 1 食管鳞癌 上皮间质转化 迁移 侵袭
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血清DCLK1、sTim-3对前列腺癌根治术患者预后的评估价值 被引量:8
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作者 黄敏玉 吴军 +4 位作者 覃天资 周威 苏立泽 邱荣 黄璐 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第18期2368-2372,2378,共6页
目的 探讨血清双皮质素样激酶1(DCLK1)、可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(sTim-3)对前列腺癌根治术患者预后的评估。方法 选取2016年6月至2019年6月在右江民族医学附属医院行前列腺癌根治术的80例患者作为研究组,另选取同期80例健康... 目的 探讨血清双皮质素样激酶1(DCLK1)、可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(sTim-3)对前列腺癌根治术患者预后的评估。方法 选取2016年6月至2019年6月在右江民族医学附属医院行前列腺癌根治术的80例患者作为研究组,另选取同期80例健康体检者作为对照组;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清DCLK1、sTim-3水平;分析血清DCLK1、sTim-3与前列腺癌根治术患者病理临床特征及预后的关系。结果 研究组血清DCLK1、sTim-3水平显著高于对照组(P <0.05)。血清DCLK1、sTim-3水平呈正相关(P <0.05)。二者与PSA水平、Gleason评分均呈正相关(P <0.05)。血清DCLK1、sTim-3表达水平与PSA水平、Gleason评分以及TNM分期有关(P <0.05)。预后死亡组血清DCLK1、sTim-3水平显著高于预后生存组(P <0.05)。DCLK1和sTim-3高表达患者生存率低于低表达患者。根据Cox回归分析表明,DCLK1、sTim-3高表达是影响前列腺癌根治术患者预后的危险因素(P <0.05)。根据ROC曲线得知,二者联合预测前列腺癌根治术患者预后的AUC优于DCLK1、sTim-3各自单独预测。结论 DCLK1、sTim-3在前列腺癌患者血清中显著升高,二者联合可以更好对前列腺癌根治术患者预后进行评估。 展开更多
关键词 双皮质素样激酶1 可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3 前列腺癌根治术 预后
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肝细胞癌中DCLK1转录调控的机制研究 被引量:2
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作者 吴先闯 刘瑜新 +3 位作者 牛玉季 赫锦锦 乔辉 张蕾蕾 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2023年第11期1241-1246,共6页
目的:研究双皮质素样激酶1(doublecortin-like kinase 1,DCLK1)在肝癌中发生转录上调的机制,为肝癌的防治提供新思路。方法:实时定量PCR检测表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)是否通过表皮生长因子受体(epidermal growth facto... 目的:研究双皮质素样激酶1(doublecortin-like kinase 1,DCLK1)在肝癌中发生转录上调的机制,为肝癌的防治提供新思路。方法:实时定量PCR检测表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)是否通过表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)上调肝癌细胞中DCLK1 mRNA的表达,Western blot检测EGF是否通过EGFR上调肝癌细胞中DCLK1蛋白的表达,免疫组织化学染色检测EGFR和DCLK1在39例人肝癌组织中的表达情况。结果:EGF孵育肝癌细胞HepG2和Huh-7后,DCLK1 mRNA和蛋白的表达明显上调(P<0.05,P<0.01),而基因敲减EGFR可以显著抑制EGF诱导的DCLK1 mRNA和蛋白的上调(P<0.01)。在人肝癌标本中,EGFR和DCLK1表达呈显著的正相关(r=0.6696)。结论:EGFR参与了肝癌组织中DCLK1的转录调控。 展开更多
关键词 肝细胞癌 表皮生长因子受体 双皮质素样激酶1 转录
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MDCK细胞成瘤相关蛋白的筛选及验证
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作者 张凡 胡嘉琦 +5 位作者 敖慧娟 李睿 蓝雯琳 谈笑 乔自林 杨琨 《江苏农业学报》 2025年第10期2009-2017,共9页
为明确Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞成瘤机制,本研究基于数据非依赖性采集质谱(DIA-MS)技术,以非成瘤性MDCK细胞与高成瘤性MDCK细胞为供试材料,分析不同成瘤性MDCK细胞的蛋白质表达差异。结果表明,非成瘤性MDCK细胞与高成瘤性MDCK细胞中... 为明确Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞成瘤机制,本研究基于数据非依赖性采集质谱(DIA-MS)技术,以非成瘤性MDCK细胞与高成瘤性MDCK细胞为供试材料,分析不同成瘤性MDCK细胞的蛋白质表达差异。结果表明,非成瘤性MDCK细胞与高成瘤性MDCK细胞中共鉴定到11359个蛋白质,其中差异倍数(FC)>1.5且校正P<0.05的差异蛋白质数量为163个。非成瘤性MDCK细胞中93个差异蛋白质上调表达,70个差异蛋白质下调表达。差异蛋白质主要参与蛋白质磷酸化、胞内信号转导及肽酶活性负调控,且功能富集于细胞外空间。2个成瘤关键蛋白质双皮质素样激酶1(DCLK1)和组织因子通路抑制因子2(TFPI2)的实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)结果显示,非成瘤性MDCK细胞中,DCLK1基因相对表达水平极显著低于成瘤性MDCK细胞,TFPI2基因相对表达水平极显著高于成瘤性MDCK细胞。本研究结果为MDCK细胞成瘤机制及肿瘤标志物筛选提供了潜在分子调控靶点。 展开更多
关键词 MDCK细胞 数据非依赖性采集质谱(DIA-MS) 成瘤性 双皮质素样激酶1(DCLK1) 组织因子途径抑制剂2(TFPI2)
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