牛乳铁蛋白单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA检测方法的建立 被引量：1

1

作者 项开合 张乃生 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第10期34-36,共3页

本试验以牛乳铁蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了3株稳定分泌乳铁蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3C6、3F8和4D3,最后用相对亲和力最强的3C6所产生的抗体作为包被抗体,用辣根过氧化物酶... 本试验以牛乳铁蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了3株稳定分泌乳铁蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3C6、3F8和4D3,最后用相对亲和力最强的3C6所产生的抗体作为包被抗体,用辣根过氧化物酶标记过的多克隆抗体作为酶标抗体,最终建立了用于检测牛乳汁中乳铁蛋白含量的双抗夹心ELISA检测方法,该法对牛乳铁蛋白最低检测限为4 ng/m L,最适检测范围为4~256 ng/m L。 展开更多

关键词 乳铁蛋白 单克隆抗体 多克隆抗体 双抗夹心elisa检测方法

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IBDV单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

2

作者 姜艳平 刘薇 +6 位作者 宫浩阳 蔡李萌 李佳璇 崔文 周晗 韩建春 唐丽杰 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3433-3441,共9页

旨在建立一种快速有效的检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的方法,本研究以IBDV全病毒作为免疫原制备单克隆抗体,以获得的单抗6G3作为捕获抗体,单抗4C12作为检测抗体,建立检测IBDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该ELISA方法具有良好的... 旨在建立一种快速有效的检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的方法,本研究以IBDV全病毒作为免疫原制备单克隆抗体,以获得的单抗6G3作为捕获抗体,单抗4C12作为检测抗体,建立检测IBDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该ELISA方法具有良好的特异性,与REV、AEV、ALV和EDSV均无交叉反应;能检测病毒的最小量为1.585×10^(3) ELD50;批间和批内重复性试验显示,该方法具有良好的重复性;通过该方法对49份临床样品进行检测,与商品化的IBDV抗原检测卡进行比较,符合率达94.18%。综上,本研究建立的双抗体夹心ELISA方法,具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于IBDV的快速检测,为制备商品化的IBDV检测试剂盒奠定基础。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病毒 单克隆抗体 检测方法 双抗体夹心elisa

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双抗夹心ELISA方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌 被引量：19

3

作者 段霞 黄欣 +2 位作者 黄岭芳 魏华 赖卫华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第24期272-276,共5页

采用0.5%福尔马林灭活的单核细胞增生李斯特氏菌作为免疫原免疫日本大耳兔,获得抗单核细胞增生李斯特氏菌多克隆抗体,并以此多克隆抗体作为捕获抗体,以抗单核细胞增生李斯特氏菌InternalinA(InlA)单克隆抗体作为检测抗体,建立快速、特... 采用0.5%福尔马林灭活的单核细胞增生李斯特氏菌作为免疫原免疫日本大耳兔,获得抗单核细胞增生李斯特氏菌多克隆抗体,并以此多克隆抗体作为捕获抗体,以抗单核细胞增生李斯特氏菌InternalinA(InlA)单克隆抗体作为检测抗体,建立快速、特异的检测该菌的双抗夹心ELISA方法。结果表明:该方法对单核细胞增生李斯特氏菌纯培养液的最低检测量为1.7×105CFU/mL。在检测食品样品的实验中,食品样本对本方法干扰较小,运用选择性增菌液进行前增菌可提高该方法的准确性。 展开更多

关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 多克隆抗体 单克隆抗体 双抗夹心elisa方法

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双抗夹心ELISA检测食品中大肠杆菌O157:H7方法研究 被引量：31

4

作者 葛萃萃 钟青萍 +1 位作者 张旺 欧阳鑫 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第1期171-175,共5页

研究获得纯化抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体,经检测10mg/ml纯化IgY抗体的效价为1:320;以大肠杆菌O157:H7免疫新西兰大耳白兔,获得兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体,效价达1:25600。以兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体稀释3200倍作为捕获抗体,抗大肠杆... 研究获得纯化抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体,经检测10mg/ml纯化IgY抗体的效价为1:320;以大肠杆菌O157:H7免疫新西兰大耳白兔,获得兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体,效价达1:25600。以兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体稀释3200倍作为捕获抗体,抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体为检测抗体建立双抗夹心ELISA方法检测大肠杆菌O157:H7,正交试验分析表明,捕获抗体于37℃包被2h、不封闭、抗原与捕获抗体于37℃结合2h、检测抗体浓度为0.25mg/ml、与抗原于37℃结合1h为最优反应条件。该方法对纯培养菌液检出限为105CFU/ml,具有良好的敏感性及特异性。染菌样品经在EC增菌液中选择性培养后进行双抗夹心ELISA检测,接种量为0.1～1CFU/g(ml)的样品在培养12h后可检出阳性反应,1～10CFU/g(ml)的样品在培养8h后可检出阳性反应。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157:H7:双抗夹心elisa 检测

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检测乳粉中克罗诺杆菌属穆汀斯克罗诺杆菌的双抗夹心ELISA方法的研究 被引量：4

5

作者 石曼 生威 +5 位作者 杜欣军 王帅 杨丽 余桂春 郭柏雪 王硕 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期335-337,共3页

获得了抗穆汀斯克罗诺杆菌的多克隆抗体,抗体只对穆汀斯克罗诺杆菌菌株有特异性识别,而对非穆汀斯克罗诺杆菌无交叉反应。利用所得到的抗体,建立了一种双抗夹心ELISA检测方法,该方法对纯培养穆汀斯克罗诺杆菌菌液检出限为105cfu/mL;经过... 获得了抗穆汀斯克罗诺杆菌的多克隆抗体,抗体只对穆汀斯克罗诺杆菌菌株有特异性识别,而对非穆汀斯克罗诺杆菌无交叉反应。利用所得到的抗体,建立了一种双抗夹心ELISA检测方法,该方法对纯培养穆汀斯克罗诺杆菌菌液检出限为105cfu/mL;经过17h增菌,全脂乳粉染菌样品中的穆汀斯克罗诺杆菌的检出限为0.1cfu/g。该方法为快速检测乳粉中穆汀斯克罗诺杆菌的污染奠定了基础。 展开更多

关键词 穆汀斯克罗诺杆菌 双抗夹心elisa 全脂乳粉 检测

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乳品中热带假丝酵母菌的双抗夹心ELISA快速检测方法 被引量：3

6

作者 常江 刘熙 +8 位作者 柳增善 任洪林 卢士英 胡盼 李岩松 盖冬雪 金雯 张嵩 孟宪梅 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第24期63-68,共6页

本研究用于乳品中热带假丝酵母菌的快速检测。采用热带假丝酵母菌超声破碎后的上清蛋白作为免疫原分别免疫新西兰大耳白兔和Hartley豚鼠,获得热带假丝酵母菌的多克隆抗体。以兔抗体作为捕获抗体,豚鼠抗体作为检测抗体,通过矩阵法及正交... 本研究用于乳品中热带假丝酵母菌的快速检测。采用热带假丝酵母菌超声破碎后的上清蛋白作为免疫原分别免疫新西兰大耳白兔和Hartley豚鼠,获得热带假丝酵母菌的多克隆抗体。以兔抗体作为捕获抗体,豚鼠抗体作为检测抗体,通过矩阵法及正交分析建立乳品中热带假丝酵母菌快速、特异的双抗夹心ELISA检测方法。该方法检出限为98 ng/m L,板内变异系数小于2%,板间变异系数小于6%,特异性及重复性良好。实际样品检测中,通过对乳制品进行滤膜集菌并选择性增菌培养,超声后提取的蛋白上清应用本研究建立的双抗夹心ELISA检测方法,100 CFU/m L热带假丝酵母菌可在22 h内准确检测出阳性反应。 展开更多

关键词 乳品 热带假丝酵母菌 双抗夹心elisa 快速检测 选择性增菌 滤膜集菌

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传染性胰坏死病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：6

7

作者 张琳琳 连科迅 +7 位作者 张英 蒋烨 姜艳萍 崔文 乔薪瑗 唐丽杰 李一经 刘敏 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2014年第4期57-62,72,共7页

以纯化的兔抗传染性胰坏死病病毒(IPNV)VP2重组蛋白多克隆抗体为包被抗体,抗IPNV VP2单克隆抗体为检测抗体建立了IPNV双抗体夹心ELISA方法。优化反应条件为:兔抗IPNV VP2重组蛋白多克隆抗体包被浓度为1.28μg/mL,抗IPNV VP2单克隆抗体... 以纯化的兔抗传染性胰坏死病病毒(IPNV)VP2重组蛋白多克隆抗体为包被抗体,抗IPNV VP2单克隆抗体为检测抗体建立了IPNV双抗体夹心ELISA方法。优化反应条件为:兔抗IPNV VP2重组蛋白多克隆抗体包被浓度为1.28μg/mL,抗IPNV VP2单克隆抗体的工作浓度为1.34μg/mL,酶标二抗稀释比例为1∶2 000,以P/N>2,且OD490 nm>0.101 494作为阳性判定标准。该方法的重复性变异系数均小于10%,与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、病毒性出血败血症病毒(VHSV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、轮状病毒(HRV)无交叉反应。对41份虹鳟肝脏样品分别进行双抗体夹心ELISA和RT-PCR检测,结果双抗体夹心法与RT-PCR法检测符合率为97%,表明本实验建立的双抗体夹心ELISA检测方法检测IPNV具有较高的敏感性和特异性,可用于IPNV的病原学检测。 展开更多

关键词 传染性胰坏死病毒 双抗体夹心elisa检测方法 单克隆抗体 兔抗血清

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检测禽副粘病毒2型抗原的双抗体夹心ELISA方法的研究 被引量：3

8

作者 张国中 赵继勋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期474-476,共3页

以禽副粘病毒 2型 (Yucaipa株 )群特异性单抗 7E5为基础建立了检测PMV_2抗原的双抗体夹心ELISA方法。该方法对Yucaipa病毒的最低检出量为 1.6 96 2 μg/ml,对PMV_2不同形式病毒及各分离株也都有很好的检出率。用Yucaipa病毒尿囊液人工感... 以禽副粘病毒 2型 (Yucaipa株 )群特异性单抗 7E5为基础建立了检测PMV_2抗原的双抗体夹心ELISA方法。该方法对Yucaipa病毒的最低检出量为 1.6 96 2 μg/ml,对PMV_2不同形式病毒及各分离株也都有很好的检出率。用Yucaipa病毒尿囊液人工感染 10日龄SPF鸡 ,于感染后不同时间采集心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、气管等病科及泄殖腔拭子 ,经处理后用建立的方法进行检测 ,结果表明PMV_2病毒在感染鸡的法氏囊组织内大量存在 ,感染后 3天就可从法氏囊组织内检测到PMV_2病毒 ,粪便中仅个别有检出阳性者。 展开更多

关键词 双抗体夹心elisa方法 禽副粘病毒2型 单克隆抗体 抗原检测

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用双抗夹心间接ELISA方法检测p30确证人类精斑

9

作者 苟清 侯一平 +1 位作者 毛咏秋 吴梅筠 《法医学杂志》 CAS CSCD 1991年第3期10-13,共4页

检测p30确证精斑有下列几种方法：免疫扩散，免疫电泳，交叉免疫电泳，胶乳凝集抑制试验，薄层免疫分析和酶联免疫吸附试验(ELISA)。这些方法各有优缺点，就灵敏度而论，则以酶联免疫吸附试验为高。最近，我们在国家自然科学基金会的资... 检测p30确证精斑有下列几种方法：免疫扩散，免疫电泳，交叉免疫电泳，胶乳凝集抑制试验，薄层免疫分析和酶联免疫吸附试验(ELISA)。这些方法各有优缺点，就灵敏度而论，则以酶联免疫吸附试验为高。最近，我们在国家自然科学基金会的资助下，建立了双抗夹心间接ELISA法来确证人类的精斑，获得了满意的结果，现报导如下： 展开更多

关键词 双抗夹心间接elisa方法 检测 P30 精斑 法医物证检验学

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禽流感病毒夹心ELISA快速检测方法的研究 被引量：22

10

作者 肖运才 李自力 +6 位作者 胡思顺 石德时 许青荣 程峰 刘梅 毕丁仁 王桂枝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期536-541,共6页

以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原,制备出鸡抗AIV和兔抗AIV抗体,经用琼脂扩散法测得效价分别为1∶32和1∶16。以纯化的鸡抗AIVIgG为包被抗体,兔抗AIVIgG为第二抗体,建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明,鸡抗A... 以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原,制备出鸡抗AIV和兔抗AIV抗体,经用琼脂扩散法测得效价分别为1∶32和1∶16。以纯化的鸡抗AIVIgG为包被抗体,兔抗AIVIgG为第二抗体,建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明,鸡抗AIVIgG的最佳包被浓度为1μg/mL,兔抗AIVIgG的最适工作浓度为5μg/mL;对已知的阳性样品,用夹心ELISA法测得的病毒滴度比血球凝集滴度高16倍以上,且能检出其它亚型的禽流感病毒;与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、鸡痘病毒、马立克氏病病毒等无交叉反应,说明本方法有很高的特异性及敏感性。对14个鸡场送检的、患有呼吸道疾病或有腹膜炎、眼炎、产蛋下降、怀疑为禽流感感染的病鸡进行了检测,结果有7个鸡场为阳性。本方法的建立为禽流感病鸡群的临床检验提供了一种方便、敏感、快速的检测方法。 展开更多

关键词 禽流感病毒 夹心elisa 快速检测方法 禽流感

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双抗夹心ELISA法定量检测食品中大肠杆菌O157:H7初探 被引量：9

11

作者 宋宏新 马冬 +1 位作者 薛海燕 李红心 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第10期528-530,共3页

以鸡抗O157:H7特异性脂多糖(LPS)抗体(IgY)为捕获抗体,酶标抗体(HRP-IgY)为检测抗体建立双抗夹心ELISA法检测食品中大肠杆菌O157:H7的方法,确定了抗原浓度对数与OD450值的高度线性相关性,根据检测OD450值可从拟合回归曲线确定样品中的... 以鸡抗O157:H7特异性脂多糖(LPS)抗体(IgY)为捕获抗体,酶标抗体(HRP-IgY)为检测抗体建立双抗夹心ELISA法检测食品中大肠杆菌O157:H7的方法,确定了抗原浓度对数与OD450值的高度线性相关性,根据检测OD450值可从拟合回归曲线确定样品中的含菌量,含菌量≥104CFU/ml的食品样品可直接用双抗夹心法进行检测,含菌量≤104CFU/ml的食品样品可增菌14h后检测。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157:H7 食源性病原菌定量检测 双抗夹心elisa

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金黄色葡萄球菌新型肠毒素I双抗夹心-酶联免疫检测方法的建立 被引量：7

12

作者 朱安妮 唐俊妮 +3 位作者 赵燕英 汤承 陈娟 刘骥 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第16期193-198,共6页

目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体... 目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体、抗血清、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的羊抗兔Ig G(Ig G/HRP)的最佳稀释度,再通过检测不同包被缓冲液、封闭时间、抗原包被时间、Ig G/HRP作用时间以及四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine,TMB)显色时间条件下的OD450 nm值对实验条件进行优化,最后用灵敏度、批内变异、批间变异和加标回收率指标对方法进行评价。结果:抗SEI单克隆抗体的最佳稀释质量浓度为2.89 mg/L,抗SEI兔血清稀释度1∶2 000,酶标二抗稀释度1∶6 000;1×磷酸缓冲盐溶液(p H 7.4)为最佳包被缓冲液;最佳封闭时间、抗原孵育时间、酶标二抗孵育时间和TMB显色时间分别为60、90、30 min和15 min。该方法的回归方程为y=0.040 9x+0.042 9,R2=0.993 3;灵敏度为0.5μg/L,精密度批内变异低于10%,批间变异低于15%,除巴氏杀菌牛乳外,对生理盐水、熟牦牛肉糜、大米饭和超高温瞬时灭菌牛乳回收率达90%以上。结论:本研究建立了一种快速检测SEI的双抗夹心方法。 展开更多

关键词 双抗夹心酶联免疫吸附 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌肠毒素I 检测方法

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双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原的研究 被引量：1

13

作者 梁韶晖 潘长旺 +4 位作者 谭峰 黄慧聪 邢文鸾 秦茜 诸葛青云 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第10期880-882,共3页

目的建立双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原(Cag).方法采用两株抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,应用双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫CAg,并摸索该法的最佳实验条件.对感染大鼠、小鼠、疑似和确诊广州管圆线虫病病... 目的建立双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原(Cag).方法采用两株抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,应用双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫CAg,并摸索该法的最佳实验条件.对感染大鼠、小鼠、疑似和确诊广州管圆线虫病病例血清进行检测,评价方法的敏感性;对日本血吸虫、肺吸虫、旋毛虫、囊虫病人血清进行交叉反应试验,评价方法的特异性.结果 10μg/ml单抗包被,酶标记单抗1∶1 600稀释为最佳工作浓度.利用该法检测不同血清广州管圆线虫循环抗原的敏感性为84.2%～87.2%,特异性为100%.结论建立的双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原具有敏感性高、特异性强和经济、简便易行等优点. 展开更多

关键词 双抗体夹心elisa法 检测方法 广州管圆线虫 循环抗原 成虫 单克隆抗体

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应用双抗夹心ELISA检测葡萄球菌感染

14

《中国家禽》 北大核心 2011年第24期72-72,共1页

华中农业大学李卫等应用分子生物学技术原核表达鸡白细胞介素-6（ChIL一6），以ChIL-6重组蛋白为免疫原，按免疫程序分别制备兔抗和鼠抗IL-6重组蛋白的多克隆抗体。应用此抗体建立双抗夹心ELISA方法后，对该方法的最佳试验条件、标准曲... 华中农业大学李卫等应用分子生物学技术原核表达鸡白细胞介素-6（ChIL一6），以ChIL-6重组蛋白为免疫原，按免疫程序分别制备兔抗和鼠抗IL-6重组蛋白的多克隆抗体。应用此抗体建立双抗夹心ELISA方法后，对该方法的最佳试验条件、标准曲线、重复性和初步应用进行确定。 展开更多

关键词 elisa检测 葡萄球菌感染 应用 夹心 分子生物学技术 elisa方法 多克隆抗体 华中农业大学

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转Cp4 epsps基因大豆快速DAS-ELISA检测方法的建立 被引量：1

15

作者 候吉超 李忠鹏 +3 位作者 梁雨欣 张春雨 李小宇 王永志 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期128-133,173,共7页

为了快速检测转Cp4 epsps基因大豆,本研究以纯化后的CP4-EPSPS单克隆抗体1D12为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗CP4-EPSPS多克隆抗体8092为检测抗体,通过优化抗体工作浓度和抗原抗体反应时间,成功建立转Cp4 epsps基因大豆快速双抗夹... 为了快速检测转Cp4 epsps基因大豆,本研究以纯化后的CP4-EPSPS单克隆抗体1D12为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗CP4-EPSPS多克隆抗体8092为检测抗体,通过优化抗体工作浓度和抗原抗体反应时间,成功建立转Cp4 epsps基因大豆快速双抗夹心ELISA检测方法。结果显示:最佳检测条件为捕获抗体浓度10μg/mL,检测抗体浓度1.25μg/mL,样品与检测抗体先后加入酶标板37℃共同孵育60 min。该方法的检测范围为0.3125~80μg/mL,待检叶片、籽粒最佳检测范围为10~80倍稀释;板内变异系数为1.64%~5.42%,板间变异系数为3.05%~9.13%,符合ELISA定性试剂盒参考标准;对100份大豆叶片、20份大豆籽粒进行检测,与Western blot结果和标准结果进行比较,符合率为100%,表明该检测方法具有良好的准确性和重复性。该检测方法75 min内即可完成检测,适用于快速检测转Cp4 epsps基因大豆,为转Cp4 epsps基因快速检测试剂盒的开发奠定了基础。 展开更多

关键词 CP4-EPSPS 双抗夹心elisa 大豆 检测

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大豆过敏原夹心ELISA和竞争ELISA方法的建立及其在加工食品中应用研究 被引量：5

16

作者 朱礼艳 李思越 +4 位作者 黄建联 江银梅 万硕 赵金龙 李振兴 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第24期180-188,共9页

本文以大豆混合过敏原为目标,建立了快速、便捷检测大豆过敏原的夹心酶联免疫吸附方法(sandwichenzyme linked immunosorbent assay)和间接竞争酶联免疫吸附方法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay),通过实际加... 本文以大豆混合过敏原为目标,建立了快速、便捷检测大豆过敏原的夹心酶联免疫吸附方法(sandwichenzyme linked immunosorbent assay)和间接竞争酶联免疫吸附方法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay),通过实际加工样品的回收实验、加标食品回收实验以及对真实食物样本的检测,对这两种方法进行了比较,确定了各自的适用范围。结果表明,夹心ELISA方法标准品浓度在0.0078~30μg/mL范围内呈现出良好的线性关系,曲线方程为y=0.2333x+0.0692,决定系数R^(2)=0.995。竞争ELISA方法的检测范围为10~100000 ng/mL,最低检测限为10 ng/mL。对购入橙汁进行加标回收实验,夹心ELISA检测后的回收率要高于竞争ELISA检测后的回收率,达100%以上;而对成分和加工方式都比较复杂的巧克力、牛肉酱、面包或蛋糕来说,竞争ELISA检测后的回收率要高于夹心ELISA检测后的回收率。对发酵类食物进行检测,竞争ELISA方法检测到的浓度要高于夹心ELISA,而对成分比较简单的食物比如芝麻糊、豆奶等进行检测时,夹心ELISA的检测浓度要略高于竞争ELISA。综上,竞争ELISA方法更适用于食物基质复杂,经过深度加工的食品,而夹心ELISA方法更适用于食物成分简单,轻加工后的食品,两种方法在各自的适用范围内均能实现较准确的检测。 展开更多

关键词 大豆 过敏原 双抗夹心 elisa 竞争 elisa 检测

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CV-A5抗体制备及ELISA抗原检测方法的建立 被引量：4

17

作者 张小宇 靳卫平 +5 位作者 王文辉 吴杰 卢佳 孟胜利 王泽鋆 申硕 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1346-1351,共6页

目的:制备柯萨奇病毒A组5型(CV-A5)多克隆抗体和单克隆抗体,建立CV-A5抗原定量ELISA检测方法,用于CV-A5疫苗研制中抗原定量及质量控制。方法:纯化后的CV-A5全病毒颗粒作为免疫原,制备兔多克隆抗体并免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合技... 目的:制备柯萨奇病毒A组5型(CV-A5)多克隆抗体和单克隆抗体,建立CV-A5抗原定量ELISA检测方法,用于CV-A5疫苗研制中抗原定量及质量控制。方法:纯化后的CV-A5全病毒颗粒作为免疫原,制备兔多克隆抗体并免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合技术制备、中和试验和ELISA法筛选获得CV-A5单克隆抗体。建立CV-A5抗原检测方法,确定线性范围,验证其准确度、精密度、稳定性、特异性;检测CV-A5病毒颗粒纯化过程样品抗原含量。结果:制备了高效价的CV-A5兔多克隆抗体及单克隆抗体并建立ELISA抗原检测法,检测范围为15.61000.0 ng/ml;高、中、低3个浓度样品准确度验证回收率为88.5%128.7%;重复性验证CV分别为1.3%、3.2%、1.2%;中间精密度验证CV分别为2.1%、2.2%和3.5%;耐用性验证回收率为97.4%127.6%;包被微孔板37℃放置3 d,样品回收率为101.7%106.9%;特异性验证结果显示抗原检测方法仅识别CV-A5抗原,与CV-A5以外的抗原均无交叉反应。结论:建立的CV-A5 ELISA抗原检测法可用于纯化过程样品的抗原检测,为含CVA5的手足口病(HFMD)多价疫苗的研制提供质量控制方法。 展开更多

关键词 柯萨奇A组5型 多克隆抗体 单克隆抗体 双抗体夹心elisa 抗原检测方法

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夹心酶联免疫吸附试验检测人表皮生长因子的方法建立及其应用研究

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作者 夏勇 吴学诗 张美英 《实用医学杂志》 CAS 2005年第14期1588-1590,共3页

目的:建立临床适用的表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)酶联免疫检测方法,探讨EGF在临床常见肿瘤患者血清中的含量变化规律。方法:采用EGF单抗包被酶标板,兔抗EGF多抗为二抗,以辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG作为酶标抗体建立夹... 目的:建立临床适用的表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)酶联免疫检测方法,探讨EGF在临床常见肿瘤患者血清中的含量变化规律。方法:采用EGF单抗包被酶标板,兔抗EGF多抗为二抗,以辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG作为酶标抗体建立夹心法ELISA检测临床常见肿瘤患者及健康体检人群的血清EGF含量。结果:建立的EGF酶联免疫吸附法最小检测限达15.6ng/L,批内精密度为8.7%,批间精密度为11.6%,平均回收率为94.7%,符合临床检测要求。血清EGF含量在31名正常人为(1.305±0.382)ng/mL,24名乳腺癌病人术前值为(0.729±0.347)ng/mL,术后为(0.711±0.332)ng/mL,17名结直肠癌病人术前为(0.678±0.311)ng/mL,术后为(0.658±0.298)ng/mL,19名胃癌病人术前为(0.598±0.224)ng/mL,术后为(0.614±0.257)ng/mL。各肿瘤组患者血清EGF水平较健康对照组明显降低(P<0.01)。结论:建立了适用于临床检测的EGF酶联免疫检测方法,肿瘤患者血清中EGF含量较健康对照组明显下降,该检测方法的建立为进一步探讨肿瘤的发病机制提供了有效的手段。 展开更多

关键词 夹心酶联免疫吸附试验 人表皮生长因子 方法建立 酶联免疫检测方法 血清EGF elisa检测 酶联免疫吸附法 健康对照组 factor 含量变化规律 肿瘤患者 辣根过氧化物 病人术前 临床常见 临床检测 批间精密度 平均回收率 体检人群

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日粮中大豆抗原蛋白检测方法的研究进展 被引量：3

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作者 张诗尧 赵元 +3 位作者 刘丹丹 鲍男 赵寒冬 张迪 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期518-521,共4页

大豆抗原蛋白对动物造成不利的影响和不易灭活的特性,限制了大豆及其制品在动物饲料行业的应用。因而在当前蛋白质资源短缺的形式下,如何快速、简便、准确地检测出大豆中的抗原蛋白成为亟需解决的重要问题。文中综述了几种有关大豆抗原... 大豆抗原蛋白对动物造成不利的影响和不易灭活的特性,限制了大豆及其制品在动物饲料行业的应用。因而在当前蛋白质资源短缺的形式下,如何快速、简便、准确地检测出大豆中的抗原蛋白成为亟需解决的重要问题。文中综述了几种有关大豆抗原蛋白的常用检测方法,并比较其检测效果,为生产中选择适当的测定方法提供理论依据。 展开更多

关键词 大豆抗原蛋白 竞争elisa 双抗夹心elisa 检测方法

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食品中大肠杆菌O157:H7的两种检测方法研究 被引量：3

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作者 宋宏新 孙斌 +1 位作者 薛海燕 徐大鹏 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期402-404,共3页

研究食品中大肠杆菌O157∶H7的两种检测方法,PCR法引物针对特异性粘附毒素基因(eaeA)扩增检测,双抗夹心ELISA采用鸡抗O157∶H7特异性脂多糖(LPS)抗体(IgY)检测,结果显示两种方法对纯培养物的检测灵敏度都在103～104cfu/mL之间,特异性能... 研究食品中大肠杆菌O157∶H7的两种检测方法,PCR法引物针对特异性粘附毒素基因(eaeA)扩增检测,双抗夹心ELISA采用鸡抗O157∶H7特异性脂多糖(LPS)抗体(IgY)检测,结果显示两种方法对纯培养物的检测灵敏度都在103～104cfu/mL之间,特异性能满足食品检测需求;PCR法的敏感度较ELISA法高,且较省时。经以牛奶为参考的食品模拟样品(37℃增菌14h)验证两种检测方法的最低检出限均为2.5cfu/25mL样品。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157∶H7 食源性病原菌检测 双抗夹心elisa PCR

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