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鸡传染性喉气管炎病毒抗原双抗夹心ELISA方法的建立
1
作者 谢晶 于吉锋 +12 位作者 肖璐 吴学婧 叶勇刚 魏勇 李兴玉 曹冶 潘梦 毛从剑 杨竣雁 叶健强 曾子轩 康玮笠 康润敏 《中国动物检疫》 2025年第6期99-105,127,共8页
为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)抗原的检测方法,利用ILTV gJ蛋白的2株单克隆抗体,1株用作捕获抗体,另1株经辣根过氧化物酶(HRP)标记后用作检测抗体,采用棋盘法优化反应条件,建立了一种检测ILTV抗原的双抗夹心ELISA方法,并对其进行了... 为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)抗原的检测方法,利用ILTV gJ蛋白的2株单克隆抗体,1株用作捕获抗体,另1株经辣根过氧化物酶(HRP)标记后用作检测抗体,采用棋盘法优化反应条件,建立了一种检测ILTV抗原的双抗夹心ELISA方法,并对其进行了性能评估。结果显示:捕获抗体的最佳包被质量浓度为2μg/m L,酶标单克隆抗体的最适稀释度为1:4 000;临界值为0.295 6,当待测样品OD_(450 nm)值大于0.295 6且P/N值大于2时,判为阳性;建立的双抗夹心ELISA方法可特异性检测ILTV抗原,而对其他禽类常见抗原的检测结果均为阴性;最低检测限为49.4 ELD_(50)/0.1 mL,批内和批间变异系数均小于10%。48份临床样品的检测结果显示,该方法与行业标准中PCR方法的符合率为93.75%。结果表明,本研究建立的ILTV双抗夹心ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于ILTV抗原检测。该方法的建立为该病的检测、监测以及防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) 单克隆抗体 双抗夹心ELISA
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十二指肠贾第虫CWP2蛋白双抗夹心ELISA检测方法的建立
2
作者 赵利杰 李洁 +8 位作者 吕志航 谢静静 孟文俊 曲存 苌生科 张龙现 李晓迎 李俊强 王荣军 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期713-720,共8页
为建立一种快速检测十二指肠贾第虫的双抗夹心ELISA(DAS-ELISA)方法,本研究通过原核系统表达并采用梯度浓度尿素法纯化重组CWP2蛋白(rCWP2),利用SDS-PAGE检测rCWP2的表达与纯化效果,结果显示在约39 ku处出现目的条带,rCWP2主要以包涵体... 为建立一种快速检测十二指肠贾第虫的双抗夹心ELISA(DAS-ELISA)方法,本研究通过原核系统表达并采用梯度浓度尿素法纯化重组CWP2蛋白(rCWP2),利用SDS-PAGE检测rCWP2的表达与纯化效果,结果显示在约39 ku处出现目的条带,rCWP2主要以包涵体形式存在,纯化后在约39 ku处出现单一目的条带。以纯化的rCWP2免疫BALB/c雌鼠,采用杂交瘤技术与间接ELISA筛选稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株,采用Protein G柱纯化各株小鼠MAb腹水并经SDS-PAGE检测抗体的纯化效果,采用间接免疫荧光试验(IFA)检测MAb的反应性,利用试剂盒鉴定MAb的亚类,利用试剂盒将HRP标记纯化的rCWP2 MAb(MAb-HRP)后,采用间接ELISA法检测不同稀释度MAb-HRP的抗体效价。结果显示,获得5株能够稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株,纯化后的5株MAb均出现重链(50 ku)和轻链(25 ku)的目的条带;十二指肠贾第虫滋养体与5株MAb反应后均出现绿色荧光,而阴性对照无绿色荧光,5株MAb重链均为IgG,轻链均为κ亚类。间接ELISA能够检测到不同稀释度的5株MAb-HRP,其中YC501与HRP的偶联效果最好。采用棋盘滴定法将5株MAb与5株MAb-HRP两两组合后经DAS-ELISA检测以确定最佳配对抗体,并优化各反应条件初步建立检测十二指肠贾第虫的DAS-ELISA方法。利用建立的DAS-ELISA方法检测微小隐孢子虫、弓形虫、芽囊原虫、球虫和贾第虫,结果显示,该方法仅能检测到十二指肠贾第虫,其他5种寄生虫均为阴性。利用本研究建立的DAS-ELISA方法分别检测2倍倍比稀释的十二指肠贾第虫滋养体总蛋白(0.16 mg/mL~0.0003mg/mL),结果显示该方法对该虫滋养体总蛋白的检测限为0.0006 mg/mL。采用DAS-ELISA方法分别对5份十二指肠贾第虫滋养体总蛋白进行批内和批间重复性试验,结果显示批间和批内重复性试验的变异系数均在5%以下。对采集的72份犬和奶牛粪便样品分别采用DAS-ELISA及双重套式PCR方法检测,结果显示DAS-ELISA方法检测到11份阳性样品,61份阴性样品;套式PCR检测到14份阳性样品,58份阴性样品。二者的阳性、阴性与总符合率分别为78.57%、95.08%与95.83%。综上,本研究利用制备的贾第虫rCWP2的两种MAb初步建立检测十二指肠贾第虫的DAS-ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好,为研制十二指肠贾第虫DAS-ELISA检测试剂盒奠定了基础,同时为贾第虫病的流行病学调查提供了可行技术手段。 展开更多
关键词 十二指肠贾第虫 囊壁蛋白 单克隆抗体 双抗夹心ELISA
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布鲁氏菌双抗夹心ELISA检测方法的建立与初步验证
3
作者 姚梦欣 彭泽宇 +5 位作者 任文浩 徐艺玫 郭伟 陈创夫 马忠臣 王勇 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期255-262,共8页
目的 建立灵敏、特异的布鲁氏菌双抗体夹心ELISA检测方法。方法 筛选用于布鲁氏菌检测的单克隆捕获抗体和检测抗体,优化并确定最佳抗体包被时间和浓度,最佳封闭液、封闭时间和阴阳性临界值;通过检验其他易与布鲁氏菌发生交叉反应的细菌... 目的 建立灵敏、特异的布鲁氏菌双抗体夹心ELISA检测方法。方法 筛选用于布鲁氏菌检测的单克隆捕获抗体和检测抗体,优化并确定最佳抗体包被时间和浓度,最佳封闭液、封闭时间和阴阳性临界值;通过检验其他易与布鲁氏菌发生交叉反应的细菌来验证该方法的特异性;通过对灭活布鲁氏菌梯度稀释液的检测,验证该方法的灵敏性;将该夹心ELISA检测结果与试管凝集和qPCR检测结果进行比较。结果 筛选出的捕获抗体为4A12,检测抗体为6C12。试验分析显示,捕获抗体4A12的最佳包被浓度为5μg/mL,检测抗体6C12的最佳稀释比为1∶2 000。该研究的最佳包被条件为4℃过夜、5%脱脂奶粉封闭、封闭时间2 h。该研究建立的双抗体夹心ELISA方法只与布鲁氏菌发生反应,与其他细菌未发生反应;布鲁氏菌灭活菌液浓度稀释到1×10^(5) CFU/mL时仍能检测出。批内、批间变异系数均小于10%。结论 该研究成功建立了布鲁氏菌双抗夹心ELISA检测方法,该方法具有良好的特异性与灵敏性,为布鲁氏菌病的精确诊断和有效防控提供有效途径。 展开更多
关键词 单克隆抗体 布鲁氏菌 双抗夹心ELISA法 诊断
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双抗夹心酶联免疫吸附快速检测冷鲜肉中的6种血清型沙门氏菌 被引量：25
4
作者 张帅 齐颖颖 +3 位作者 张红星 王怡雯 谢远红 刘慧 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第16期211-215,共5页
为快速检测冷鲜肉中的沙门氏菌,筛选出1株产抗6种沙门氏菌单克隆抗体的细胞株,运用产生的抗体建立酶联免疫吸附检测方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)。实验采用6种血清型致病沙门氏菌制备出混合抗原,对BALB/c小鼠及新西... 为快速检测冷鲜肉中的沙门氏菌,筛选出1株产抗6种沙门氏菌单克隆抗体的细胞株,运用产生的抗体建立酶联免疫吸附检测方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)。实验采用6种血清型致病沙门氏菌制备出混合抗原,对BALB/c小鼠及新西兰大白兔进行免疫,运用杂交瘤技术进行细胞融合,制备出抗沙门氏菌单克隆抗体以及多克隆抗体,并建立双抗夹心ELISA体系检测冷鲜肉中沙门氏菌。结果表明,成功筛选出1株能稳定分泌抗沙门氏菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株6E7,保藏编号为CGMCC 10313以及多克隆抗体,效价分别为1∶1.28×106和1∶8.0×105;将多抗作为包被抗体吸附于96孔酶标板上,并用辣根过氧化物酶标记单抗,建立双抗夹心ELISA体系;检测模拟污染肉样中沙门氏菌,其检测限为800 CFU/g;并与其他血清型沙门氏菌、志贺氏菌、阪崎肠杆菌、大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌均无交叉反应,特异性良好。 展开更多
关键词 沙门氏菌 杂交瘤技术 单克隆抗体 双抗夹心ELISA
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双抗夹心酶联免疫吸附法检测沙门氏菌 被引量：36
5
作者 伍燕华 牛瑞江 +4 位作者 赖卫华 山珊 刘道峰 倪小琴 冯荣华 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期62-65,共4页
沙门氏菌是自然界中普遍存在的一种食源性致病菌,在中国的食物中毒中沙门氏菌引起的病例占第一位。本研究以福尔马林灭活的鼠伤寒沙门氏菌免疫雌性日本大耳兔,制备抗沙门氏菌多克隆抗体。以抗沙门氏菌多克隆抗体作为捕获抗体,以抗沙门... 沙门氏菌是自然界中普遍存在的一种食源性致病菌,在中国的食物中毒中沙门氏菌引起的病例占第一位。本研究以福尔马林灭活的鼠伤寒沙门氏菌免疫雌性日本大耳兔,制备抗沙门氏菌多克隆抗体。以抗沙门氏菌多克隆抗体作为捕获抗体,以抗沙门氏菌单克隆抗体C1359作为检测抗体,建立快速检测沙门氏菌双抗夹心ELISA方法。结果表明:该方法可以检测A、B、C、D、E等五种典型的沙门氏菌,对沙门氏菌纯培养液的最低检测量为1×104CFU/mL,与其他杂菌不存在交叉反应,具有较好的灵敏性和特异性。 展开更多
关键词 沙门氏菌 多克隆抗体 双抗夹心酶联免疫吸附法
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双抗夹心ELISA方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌 被引量：19
6
作者 段霞 黄欣 +2 位作者 黄岭芳 魏华 赖卫华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第24期272-276,共5页
采用0.5%福尔马林灭活的单核细胞增生李斯特氏菌作为免疫原免疫日本大耳兔,获得抗单核细胞增生李斯特氏菌多克隆抗体,并以此多克隆抗体作为捕获抗体,以抗单核细胞增生李斯特氏菌InternalinA(InlA)单克隆抗体作为检测抗体,建立快速、特... 采用0.5%福尔马林灭活的单核细胞增生李斯特氏菌作为免疫原免疫日本大耳兔,获得抗单核细胞增生李斯特氏菌多克隆抗体,并以此多克隆抗体作为捕获抗体,以抗单核细胞增生李斯特氏菌InternalinA(InlA)单克隆抗体作为检测抗体,建立快速、特异的检测该菌的双抗夹心ELISA方法。结果表明:该方法对单核细胞增生李斯特氏菌纯培养液的最低检测量为1.7×105CFU/mL。在检测食品样品的实验中,食品样本对本方法干扰较小,运用选择性增菌液进行前增菌可提高该方法的准确性。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 多克隆抗体 单克隆抗体 双抗夹心ELISA方法
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双抗夹心ELISA检测转Bar基因抗除草剂大豆 被引量：9
7
作者 李小宇 张春雨 +5 位作者 郭东全 张淋淋 尤晴 董英山 王永志 李启云 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第4期222-225,共4页
为快捷有效地检测转Bar基因抗除草剂大豆,利用已制备的抗除草剂Bar基因编码蛋白,膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase,PAT)单克隆抗体和多克隆抗体,建立PAT蛋白双抗夹心酶联免疫吸附检测方法,对转Bar基因抗除草剂大... 为快捷有效地检测转Bar基因抗除草剂大豆,利用已制备的抗除草剂Bar基因编码蛋白,膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase,PAT)单克隆抗体和多克隆抗体,建立PAT蛋白双抗夹心酶联免疫吸附检测方法,对转Bar基因抗除草剂大豆不同组织材料进行定量检测。结果显示,最佳检测条件为捕获抗体质量浓度0.125μg/m L,包被酶标板,37℃孵育1 h后4℃静置过夜,检测样品37℃孵育1.5 h,检测抗体质量浓度6.25μg/m L,37℃孵育1.5 h;PAT蛋白的最低检测限为0.04 ng/m L,大豆蛋白体系中为8 ng/m L;重复性变异系数小于3%。利用上述检测条件,对实验建立的转Bar基因抗除草剂大豆进行PAT蛋白定量检测,成功地在根、茎、花、叶、种子不同部位检测到该蛋白的表达。 展开更多
关键词 BAR 双抗夹心酶联免疫吸附 大豆 检测
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双抗夹心ELISA检测食品中大肠杆菌O157:H7方法研究 被引量：31
8
作者 葛萃萃 钟青萍 +1 位作者 张旺 欧阳鑫 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第1期171-175,共5页
研究获得纯化抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体,经检测10mg/ml纯化IgY抗体的效价为1:320;以大肠杆菌O157:H7免疫新西兰大耳白兔,获得兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体,效价达1:25600。以兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体稀释3200倍作为捕获抗体,抗大肠杆... 研究获得纯化抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体,经检测10mg/ml纯化IgY抗体的效价为1:320;以大肠杆菌O157:H7免疫新西兰大耳白兔,获得兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体,效价达1:25600。以兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体稀释3200倍作为捕获抗体,抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体为检测抗体建立双抗夹心ELISA方法检测大肠杆菌O157:H7,正交试验分析表明,捕获抗体于37℃包被2h、不封闭、抗原与捕获抗体于37℃结合2h、检测抗体浓度为0.25mg/ml、与抗原于37℃结合1h为最优反应条件。该方法对纯培养菌液检出限为105CFU/ml,具有良好的敏感性及特异性。染菌样品经在EC增菌液中选择性培养后进行双抗夹心ELISA检测,接种量为0.1～1CFU/g(ml)的样品在培养12h后可检出阳性反应,1～10CFU/g(ml)的样品在培养8h后可检出阳性反应。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7:双抗夹心ELISA 检测
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应用双抗夹心ELISA法检测皱纹盘鲍致病病原—创伤弧菌的研究 被引量：21
9
作者 王崇明 杨冰 +1 位作者 宋晓玲 黄偼 《海洋水产研究》 CSCD 1999年第1期30-34,共5页
以皱纹盘鲍脓足病致病病原－ － 创伤弧菌为抗原，制备兔抗血清，抗体纯化后以辣根过氧化物酶标记，建立检测创伤弧菌的双抗夹心ＥＬＩＳＡ 检测法。结果表明，双抗夹心ＥＬＩＳＡ 法有较高的灵敏度，可检出含菌１０４ 个／ｍｌ 的菌悬... 以皱纹盘鲍脓足病致病病原－ － 创伤弧菌为抗原，制备兔抗血清，抗体纯化后以辣根过氧化物酶标记，建立检测创伤弧菌的双抗夹心ＥＬＩＳＡ 检测法。结果表明，双抗夹心ＥＬＩＳＡ 法有较高的灵敏度，可检出含菌１０４ 个／ｍｌ 的菌悬液。与创伤弧菌对照菌株有明显的阳性反应不与副溶血弧菌、溶藻胶弧菌、河流弧菌等８ 株对照菌株产生影响检测结果的交叉反应。应用该法检测３０ 份病鲍样品，阳性检出率为６６ ．７ ％ 。 展开更多
关键词 双抗夹心ELISA 创伤弧菌 皱纹盘鲍 鲍鱼 病原
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金黄色葡萄球菌新型肠毒素I双抗夹心-酶联免疫检测方法的建立 被引量：7
10
作者 朱安妮 唐俊妮 +3 位作者 赵燕英 汤承 陈娟 刘骥 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第16期193-198,共6页
目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体... 目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体、抗血清、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的羊抗兔Ig G(Ig G/HRP)的最佳稀释度,再通过检测不同包被缓冲液、封闭时间、抗原包被时间、Ig G/HRP作用时间以及四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine,TMB)显色时间条件下的OD450 nm值对实验条件进行优化,最后用灵敏度、批内变异、批间变异和加标回收率指标对方法进行评价。结果:抗SEI单克隆抗体的最佳稀释质量浓度为2.89 mg/L,抗SEI兔血清稀释度1∶2 000,酶标二抗稀释度1∶6 000;1×磷酸缓冲盐溶液(p H 7.4)为最佳包被缓冲液;最佳封闭时间、抗原孵育时间、酶标二抗孵育时间和TMB显色时间分别为60、90、30 min和15 min。该方法的回归方程为y=0.040 9x+0.042 9,R2=0.993 3;灵敏度为0.5μg/L,精密度批内变异低于10%,批间变异低于15%,除巴氏杀菌牛乳外,对生理盐水、熟牦牛肉糜、大米饭和超高温瞬时灭菌牛乳回收率达90%以上。结论:本研究建立了一种快速检测SEI的双抗夹心方法。 展开更多
关键词 双抗夹心酶联免疫吸附 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌肠毒素I 检测方法
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双抗夹心ELISA法定量检测食品中大肠杆菌O157:H7初探 被引量：9
11
作者 宋宏新 马冬 +1 位作者 薛海燕 李红心 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第10期528-530,共3页
以鸡抗O157:H7特异性脂多糖(LPS)抗体(IgY)为捕获抗体,酶标抗体(HRP-IgY)为检测抗体建立双抗夹心ELISA法检测食品中大肠杆菌O157:H7的方法,确定了抗原浓度对数与OD450值的高度线性相关性,根据检测OD450值可从拟合回归曲线确定样品中的... 以鸡抗O157:H7特异性脂多糖(LPS)抗体(IgY)为捕获抗体,酶标抗体(HRP-IgY)为检测抗体建立双抗夹心ELISA法检测食品中大肠杆菌O157:H7的方法,确定了抗原浓度对数与OD450值的高度线性相关性,根据检测OD450值可从拟合回归曲线确定样品中的含菌量,含菌量≥104CFU/ml的食品样品可直接用双抗夹心法进行检测,含菌量≤104CFU/ml的食品样品可增菌14h后检测。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7 食源性病原菌定量检测 双抗夹心ELISA
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黄瓜绿斑驳花叶病毒的双抗夹心ELISA检测 被引量：7
12
作者 杨柳 任春梅 +2 位作者 缪倩 陆芳 程兆榜 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期769-774,共6页
为建立快速、灵敏、准确且易操作的黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)检测方法以实现早期诊断与控制病害,制备了8株效价大于1×10^(-7)的单克隆抗体,配对筛选结果表明经辣根过氧化物酶标记的A8H与单抗A3配对检测的灵敏度最高,并据此创制了... 为建立快速、灵敏、准确且易操作的黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)检测方法以实现早期诊断与控制病害,制备了8株效价大于1×10^(-7)的单克隆抗体,配对筛选结果表明经辣根过氧化物酶标记的A8H与单抗A3配对检测的灵敏度最高,并据此创制了双抗夹心ELISA试剂盒。该试剂盒对CGMMV具有特异反应,灵敏度达1∶12 800(g∶ml),准确度与RT-PCR结果吻合,检测周期小于5 h,可用于生产上病害发生初期的快速诊断与鉴定。 展开更多
关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV) 单克隆抗体 双抗夹心ELISA
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禽流感(H9N2亚型)酶标抗体的制备及双抗夹心Dot-ELISA检测方法的建立 被引量：5
13
作者 张春杰 王大军 +3 位作者 吴庭才 李银聚 余祖华 程相朝 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2006年第10期101-103,111,共4页
采用AIV灭活油乳苗(H9N2)对AIV非免疫鸡进行接种并获取高免血清,取高免血清采用饱和硫酸铵沉淀法,经过Sephadex G25层析柱提纯后可获得纯度很好的IgG。将IgG应用过碘酸钠法标记辣根过氧化酶(HRP),制备禽流感酶标抗体(IgG-HRP),利用所提... 采用AIV灭活油乳苗(H9N2)对AIV非免疫鸡进行接种并获取高免血清,取高免血清采用饱和硫酸铵沉淀法,经过Sephadex G25层析柱提纯后可获得纯度很好的IgG。将IgG应用过碘酸钠法标记辣根过氧化酶(HRP),制备禽流感酶标抗体(IgG-HRP),利用所提取的AI-IgG和所制备的禽流感酶标抗体按照双抗夹心Dot-ELISA试验操作步骤,采用方阵法分别摸索包被抗原及酶标抗体的最佳浓度,以及各步反应时间等最佳反应条件,以建立一种优化的AIV双抗夹心Dot-ELISA检测法。结果表明,所制备的AI高免血清HI效价为10log2;AI酶标抗体克分子比值为2.45;优化的Dot-ELISA各条件为:包被AI-IgG最佳稀释倍数为1∶50;最佳封闭剂为1%牛血清白蛋白;AI酶标抗体最佳稀释倍数为1∶100;待检抗原与2种抗体的感作时间均为0.5h(37℃)。优化后的检测方法可在2.5h内诊断结果,制备好的包被膜在4℃下保存2个月不影响其效果。而且敏感性提高了3倍,与新城疫病毒液、传染性支气管炎及减蛋综合症病毒液无交叉反应。 展开更多
关键词 禽流感 酶标抗体 双抗夹心Dot—ELISA
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检测乳粉中克罗诺杆菌属穆汀斯克罗诺杆菌的双抗夹心ELISA方法的研究 被引量：4
14
作者 石曼 生威 +5 位作者 杜欣军 王帅 杨丽 余桂春 郭柏雪 王硕 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期335-337,共3页
获得了抗穆汀斯克罗诺杆菌的多克隆抗体,抗体只对穆汀斯克罗诺杆菌菌株有特异性识别,而对非穆汀斯克罗诺杆菌无交叉反应。利用所得到的抗体,建立了一种双抗夹心ELISA检测方法,该方法对纯培养穆汀斯克罗诺杆菌菌液检出限为105cfu/mL;经过... 获得了抗穆汀斯克罗诺杆菌的多克隆抗体,抗体只对穆汀斯克罗诺杆菌菌株有特异性识别,而对非穆汀斯克罗诺杆菌无交叉反应。利用所得到的抗体,建立了一种双抗夹心ELISA检测方法,该方法对纯培养穆汀斯克罗诺杆菌菌液检出限为105cfu/mL;经过17h增菌,全脂乳粉染菌样品中的穆汀斯克罗诺杆菌的检出限为0.1cfu/g。该方法为快速检测乳粉中穆汀斯克罗诺杆菌的污染奠定了基础。 展开更多
关键词 穆汀斯克罗诺杆菌 双抗夹心ELISA 全脂乳粉 检测
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乳品中热带假丝酵母菌的双抗夹心ELISA快速检测方法 被引量：3
15
作者 常江 刘熙 +8 位作者 柳增善 任洪林 卢士英 胡盼 李岩松 盖冬雪 金雯 张嵩 孟宪梅 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第24期63-68,共6页
本研究用于乳品中热带假丝酵母菌的快速检测。采用热带假丝酵母菌超声破碎后的上清蛋白作为免疫原分别免疫新西兰大耳白兔和Hartley豚鼠,获得热带假丝酵母菌的多克隆抗体。以兔抗体作为捕获抗体,豚鼠抗体作为检测抗体,通过矩阵法及正交... 本研究用于乳品中热带假丝酵母菌的快速检测。采用热带假丝酵母菌超声破碎后的上清蛋白作为免疫原分别免疫新西兰大耳白兔和Hartley豚鼠,获得热带假丝酵母菌的多克隆抗体。以兔抗体作为捕获抗体,豚鼠抗体作为检测抗体,通过矩阵法及正交分析建立乳品中热带假丝酵母菌快速、特异的双抗夹心ELISA检测方法。该方法检出限为98 ng/m L,板内变异系数小于2%,板间变异系数小于6%,特异性及重复性良好。实际样品检测中,通过对乳制品进行滤膜集菌并选择性增菌培养,超声后提取的蛋白上清应用本研究建立的双抗夹心ELISA检测方法,100 CFU/m L热带假丝酵母菌可在22 h内准确检测出阳性反应。 展开更多
关键词 乳品 热带假丝酵母菌 双抗夹心ELISA 快速检测 选择性增菌 滤膜集菌
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酶联免疫吸附分析双抗夹心法检测临床鼻咽抽吸物中呼吸道合胞病毒 被引量：3
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作者 孙永鹏 靳输梅 +5 位作者 詹炉停 温桂平 赵敏 张伟 夏宁邵 郑子峥 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期505-510,共6页
呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是引起5周岁以下儿童下呼吸道感染的主要病原体.目前常用的试剂盒是美国Diagnostic Hybrids公司研发的7项呼吸道病毒检测试剂盒,但其价格昂贵,且需荧光显微镜辅助诊断,不利于在基层医... 呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是引起5周岁以下儿童下呼吸道感染的主要病原体.目前常用的试剂盒是美国Diagnostic Hybrids公司研发的7项呼吸道病毒检测试剂盒,但其价格昂贵,且需荧光显微镜辅助诊断,不利于在基层医疗机构中推广,国内尚无上市的快速诊断试剂用于临床检测.为此建立用于RSV抗原检测的早期快速诊断试剂,并以反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测为参比,同时使用酶联免疫吸附分析(ELISA)双抗夹心法和免疫荧光法对112份临床鼻咽抽吸物(NPA)样本进行检测.ELISA双抗夹心法和免疫荧光法的灵敏度分别为79.31%和74.14%,特异度分别为100%和96.30%,Kappa值分别为0.787 1和0.689 5,两者均与RT-PCR检测结果具有高度一致性.此外,将ELISA双抗夹心法与免疫荧光法比较,两者无显著差异(p>0.05).综上,ELISA双抗夹心法操作简便,特异性高,有望代替进口检测试剂盒完成RSV感染的早期快速诊断. 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 融合蛋白 酶联免疫吸附分析双抗夹心法 快速诊断
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双抗夹心ELISA检测兔出血症病毒抗原方法的建立及初步评估 被引量：3
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作者 郭慧敏 谭永贵 +5 位作者 缪秋红 朱杰 刘腾 陈宗艳 李传峰 刘光清 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第2期20-24,共5页
为建立一种快速、特异性强的用于检测兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)抗原的双抗夹心ELISA方法,本研究通过抗体配对实验,确定以抗兔出血症病毒结构蛋白VP60单克隆抗体9H9为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的9H9为检... 为建立一种快速、特异性强的用于检测兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)抗原的双抗夹心ELISA方法,本研究通过抗体配对实验,确定以抗兔出血症病毒结构蛋白VP60单克隆抗体9H9为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的9H9为检测抗体建立双抗夹心ELISA方法。通过优化,确定最佳条件为:0.5μg/m L稀释后的9H9作为捕获抗体,底物显色液37℃包被2 h 4℃过夜,1%明胶溶液37℃封闭2 h,用含10%胎牛血清的PBST按5μg/m L稀释后的辣根过氧化物酶标记的9H9作为检测抗体,37℃作用15 min。建立的ELISA方法与杯状病毒科其他病毒无交叉反应,应用本方法和RT-PCR方法对85份兔肝脏样品进行检测,证明双抗夹心ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,有望作为临床快速检测的一种简便方法。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 单克隆抗体 双抗夹心ELISA
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双抗夹心ELISA法检测双歧杆菌反应条件的优化 被引量：4
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作者 庄翘楚 孟祥晨 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2008年第5期55-58,共4页
研究利用双抗夹心酶联免疫吸附法(Double-antibody Sandwich Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,Double-antibody Sand-wich ELISA)快速检测双歧杆菌(Bifidobacterium)的最佳反应条件。使用实验室自制的兔抗两歧双歧杆菌免疫血清和鼠... 研究利用双抗夹心酶联免疫吸附法(Double-antibody Sandwich Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,Double-antibody Sand-wich ELISA)快速检测双歧杆菌(Bifidobacterium)的最佳反应条件。使用实验室自制的兔抗两歧双歧杆菌免疫血清和鼠抗两歧双歧杆菌免疫血清,利用方阵法对两种血清抗体的反应浓度进行筛选,之后对包被液、封闭液、封闭时间及底物作用时间进行比较和选择,从而确定运用双夹心ELISA法快速检测双歧杆菌的最佳反应条件。最佳反应条件分别为:兔抗两歧双歧杆菌免疫血清和鼠抗两歧双歧杆菌免疫血清反应浓度分别为1︰1280,1︰320,包被液浓度0.05 mol/L(pH值为9.6)的Na2CO3-NaHCO3,封闭液为质量分数为5%的BSA-PBS,封闭30min,底物作用时间为30 min。优化了双抗夹心ELISA法检测双歧杆菌的反应条件,为双歧杆菌的血清学检测提供了参考。 展开更多
关键词 双歧杆菌 双抗夹心ELISA 反应条件
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抗腺病毒五邻体单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA方法的建立 被引量：1
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作者 陈平 杜惠芬 李克生 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期21-28,共8页
为获得稳定性好、特异性强、效价高的抗腺病毒五邻体单克隆抗体,用腺病毒五邻体基因工程表达抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,以腺病毒五邻体为筛选抗原对融合后的杂交瘤细胞间接ELISA进行筛选.结果表明:试验... 为获得稳定性好、特异性强、效价高的抗腺病毒五邻体单克隆抗体,用腺病毒五邻体基因工程表达抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,以腺病毒五邻体为筛选抗原对融合后的杂交瘤细胞间接ELISA进行筛选.结果表明:试验获得5株杂交瘤细胞,标记为3C4、4C4、4D7、4F2和4H3,4D7免疫球蛋白亚类为IgG2a,其余4株为IgG1;对5株细胞连续3个月体外传代试验和小鼠腹水连续传代试验,5株细胞都能持续稳定分泌单克隆抗体,对细胞上清和腹水采用间接ELISA进行效价测定,细胞上清效价稳定维持在2 000左右,腹水效价稳定维持在200 000以上,且与引起腹泻的鼠伤寒沙门氏菌和轮状病毒无交叉反应;对其中可以配对的2株单抗4D7、4F2建立双抗夹心ELISA,可以应用于临床检测腺病毒. 展开更多
关键词 腺病毒 单克隆抗体 杂交瘤细胞 间接 ELISA 特异性 双抗夹心 ELISA
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牛乳铁蛋白单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA检测方法的建立 被引量：1
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作者 项开合 张乃生 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第10期34-36,共3页
本试验以牛乳铁蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了3株稳定分泌乳铁蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3C6、3F8和4D3,最后用相对亲和力最强的3C6所产生的抗体作为包被抗体,用辣根过氧化物酶... 本试验以牛乳铁蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了3株稳定分泌乳铁蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3C6、3F8和4D3,最后用相对亲和力最强的3C6所产生的抗体作为包被抗体,用辣根过氧化物酶标记过的多克隆抗体作为酶标抗体,最终建立了用于检测牛乳汁中乳铁蛋白含量的双抗夹心ELISA检测方法,该法对牛乳铁蛋白最低检测限为4 ng/m L,最适检测范围为4~256 ng/m L。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 单克隆抗体 多克隆抗体 双抗夹心ELISA检测方法
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