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抗菌肽B、D双基因表达载体的构建及转化广藿香的研究
被引量:
12
1
作者
张家明
孙雪飘
郑学勤
《热带作物学报》
CSCD
1997年第1期50-57,共8页
将人工合成的柞蚕抗菌肽D基因和天蚕抗菌肽B基因分别接上启动子和终止于,克隆到双元表达载体PBin19上,构建成双价抗菌肽基因表达载体pTBD。用三亲交配的方法将pTBD导入根癌农杆菌菌株LBA4404,再通过农杆菌将抗菌肽B、D基因导入广藿...
将人工合成的柞蚕抗菌肽D基因和天蚕抗菌肽B基因分别接上启动子和终止于,克隆到双元表达载体PBin19上,构建成双价抗菌肽基因表达载体pTBD。用三亲交配的方法将pTBD导入根癌农杆菌菌株LBA4404,再通过农杆菌将抗菌肽B、D基因导入广藿香,获27个转基因植株。Southern杂交结果表明,抗菌肽B、D基因已同时整合进3个株系染色体组中。与病原细菌Pseudomonassolanacearum试管共培养结果表明,转基因植株获得较强抗病性。盆栽接菌试验结果也表明.转基因植株具有较强抗病性。
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关键词
广藿香
抗菌肽
双基因表达载体
转
基因
植株
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职称材料
联合双基因表达载体的构建及其拟南芥转化
2
作者
钟胜
段瑞军
+2 位作者
郭建春
胡新文
符少萍
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008年第1期52-54,共3页
[目的]为了研究CBF3冷诱导转录因子和细胞渗透调节物质AtGloS3在抗寒中的相互作用,寻找理想的抗寒转基因方式。[方法]根据GenBank中拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组序列设计引物,通过PCR反应克隆包括CBF3(C-repeat Binding Factor 3...
[目的]为了研究CBF3冷诱导转录因子和细胞渗透调节物质AtGloS3在抗寒中的相互作用,寻找理想的抗寒转基因方式。[方法]根据GenBank中拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组序列设计引物,通过PCR反应克隆包括CBF3(C-repeat Binding Factor 3)基因以及基因上游启动子的DNA序列:CP-CBF3,共2 075 bp。CP是CBF3基因的启动子,受低温诱导。用EcoRI和BamHI双酶切CP-CBF3并置于植物表达载体pCAMBIA1300中,构建CBF3基因冷诱导表达载体pCA-CP-CBF3。然后将带有组成型启动子的肌醇半乳糖苷酶基因AtG-loS3合并于pCA-CP-CBF3中,构建双基因植物表达载体pCA-CP-CBF3-35S-AtGloS3。用真空抽滤虑法将这两个表达载体转化到拟南芥中,并用潮霉素筛选出转基因植物苗。[结果]CBF3和AtGloS3基因均来自拟南芥,而CBF3不存在内含子,AtGloS3基因存在内含子,故以CB-1、CB-2为引物的非转基因植物中也能得到带,而以AT-1、AT-2为引物的非转基因植物不能得到带。[结论]该研究中pCA-CP-CBF3是1个对照,实验的后续工作需进一步进行。
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关键词
CBF3冷诱导
表达
载体
CBF3和AtGolS3
双基因表达载体
拟南芥转化
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职称材料
CMO,BADH双基因植物表达载体的构建
被引量:
1
3
作者
何宇锋
刘君
+1 位作者
韩烈保
陈其军
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2005年第5期63-66,共4页
以pC1303质粒和pC1391质粒为基础,利用载体pBIUC和pBIB构建了分别有Ubi启动子、35S启动子调控的带有控制甜菜碱合成的CMO和BADH的植物表达载体pC1303-Ubi-CMO-35S-BADH,为进一步开展提高植物抗逆性基因工程提供了基础。
关键词
双基因表达载体
甜菜碱
CMO
BADH
植物
表达
载体
BADH
基因
工程
CMO
构建
35S启动子
植物抗逆性
甜菜碱
基础
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职称材料
双价抗菌肽基因转化辣椒
被引量:
23
4
作者
李乃坚
余小林
+3 位作者
李颖
黄自然
张银东
王得元
《热带作物学报》
CSCD
2000年第4期45-51,共7页
在建立高效快速辣椒(Capsicum annuum L,)子叶离体培养和植株再生体系的基础上,将昆虫抗菌肽B、D基因构建而成的双价质粒pCDB-II以农杆菌为介导转入5个辣椒栽培品种,共获得KanR植株1200多株...
在建立高效快速辣椒(Capsicum annuum L,)子叶离体培养和植株再生体系的基础上,将昆虫抗菌肽B、D基因构建而成的双价质粒pCDB-II以农杆菌为介导转入5个辣椒栽培品种,共获得KanR植株1200多株,对部分KanR植株进行点杂交、PCR、Southern杂交检测,结果证明了外源基因被成功整合。盆栽接青枯菌试验,结果显示,转基因植株具有较强的抗病力。
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关键词
辣椒
抗菌肽
双基因表达载体
基因
转化
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职称材料
神经氨酸酶基因联合抗黏液病毒基因的抗病毒作用
被引量:
1
5
作者
傅德智
张亚妮
+6 位作者
陈昊
李伟
郑蒙蒙
王丹
张振韬
施青青
李碧春
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期78-86,共9页
拟构建神经氨酸酶(NA)基因和抗黏液病毒(Mx)基因双基因真核共表达载体,并检测基因表达以及转染鸡成纤维(CEF)细胞后的抗病毒效果。克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA;分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2中,酶切和测序鉴定双基因...
拟构建神经氨酸酶(NA)基因和抗黏液病毒(Mx)基因双基因真核共表达载体,并检测基因表达以及转染鸡成纤维(CEF)细胞后的抗病毒效果。克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA;分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2中,酶切和测序鉴定双基因共表达载体pVITRO2-Mx-NA的正确性。用pVITRO2-Mx-NA转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光(IFA)方法检测目的基因的表达。随后用pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞,利用RT-PCR及微量细胞病变抑制法测定重组蛋白抗新城疫病毒(NDV)的效果。结果:酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达载体pVITRO2-Mx-NA,在转染后的NIH-3T3和CEF细胞中同时检测到了NA和Mx基因的表达。联合基因表达的重组蛋白可保护CEF细胞在孵育的72h内免受NDV的感染,而转染了突变型Mx或者NA单基因真核表达载体的CEF细胞在孵育的48h内亦未受到NDV的侵染;与单基因转染组相比,联合基因转染组明显延迟NDV感染CEF细胞的时间,差异显著(P<0.05)。构建的双基因真核表达载体pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞后,其表达的重组蛋白Mx-NA在细胞水平上具有协同延缓NDV感染的能力,且优于单个基因。
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关键词
NA
MX
双基因表达载体
抗病毒活性
抗NDV
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职称材料
题名
抗菌肽B、D双基因表达载体的构建及转化广藿香的研究
被引量:
12
1
作者
张家明
孙雪飘
郑学勤
机构
中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室
出处
《热带作物学报》
CSCD
1997年第1期50-57,共8页
文摘
将人工合成的柞蚕抗菌肽D基因和天蚕抗菌肽B基因分别接上启动子和终止于,克隆到双元表达载体PBin19上,构建成双价抗菌肽基因表达载体pTBD。用三亲交配的方法将pTBD导入根癌农杆菌菌株LBA4404,再通过农杆菌将抗菌肽B、D基因导入广藿香,获27个转基因植株。Southern杂交结果表明,抗菌肽B、D基因已同时整合进3个株系染色体组中。与病原细菌Pseudomonassolanacearum试管共培养结果表明,转基因植株获得较强抗病性。盆栽接菌试验结果也表明.转基因植株具有较强抗病性。
关键词
广藿香
抗菌肽
双基因表达载体
转
基因
植株
Keywords
Pogostemon cablin Benth
cecropin
double gene expression vector
transgenic plants
分类号
S567.190.3 [农业科学—中草药栽培]
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职称材料
题名
联合双基因表达载体的构建及其拟南芥转化
2
作者
钟胜
段瑞军
郭建春
胡新文
符少萍
机构
中国热带农业科学院热带生物技术研究所
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008年第1期52-54,共3页
文摘
[目的]为了研究CBF3冷诱导转录因子和细胞渗透调节物质AtGloS3在抗寒中的相互作用,寻找理想的抗寒转基因方式。[方法]根据GenBank中拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组序列设计引物,通过PCR反应克隆包括CBF3(C-repeat Binding Factor 3)基因以及基因上游启动子的DNA序列:CP-CBF3,共2 075 bp。CP是CBF3基因的启动子,受低温诱导。用EcoRI和BamHI双酶切CP-CBF3并置于植物表达载体pCAMBIA1300中,构建CBF3基因冷诱导表达载体pCA-CP-CBF3。然后将带有组成型启动子的肌醇半乳糖苷酶基因AtG-loS3合并于pCA-CP-CBF3中,构建双基因植物表达载体pCA-CP-CBF3-35S-AtGloS3。用真空抽滤虑法将这两个表达载体转化到拟南芥中,并用潮霉素筛选出转基因植物苗。[结果]CBF3和AtGloS3基因均来自拟南芥,而CBF3不存在内含子,AtGloS3基因存在内含子,故以CB-1、CB-2为引物的非转基因植物中也能得到带,而以AT-1、AT-2为引物的非转基因植物不能得到带。[结论]该研究中pCA-CP-CBF3是1个对照,实验的后续工作需进一步进行。
关键词
CBF3冷诱导
表达
载体
CBF3和AtGolS3
双基因表达载体
拟南芥转化
Keywords
Cold-induced expression vector CBF3
Double-gene expression vector of CBF3 and AtGolS3
Transformation of Arabidopsis thaliana
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
在线阅读
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职称材料
题名
CMO,BADH双基因植物表达载体的构建
被引量:
1
3
作者
何宇锋
刘君
韩烈保
陈其军
机构
北京林业大学草坪研究所北京林业大学省部共建森林培育与保护教育部重点实验室
中国农业大学
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2005年第5期63-66,共4页
基金
国家转基因植物研究与产业化专项项目"抗干旱
耐盐碱基因工程黑麦草
+1 种基金
草熟禾新品种选育"资助(J2002-B-006)
国家863项目(2001AA244082)资助
文摘
以pC1303质粒和pC1391质粒为基础,利用载体pBIUC和pBIB构建了分别有Ubi启动子、35S启动子调控的带有控制甜菜碱合成的CMO和BADH的植物表达载体pC1303-Ubi-CMO-35S-BADH,为进一步开展提高植物抗逆性基因工程提供了基础。
关键词
双基因表达载体
甜菜碱
CMO
BADH
植物
表达
载体
BADH
基因
工程
CMO
构建
35S启动子
植物抗逆性
甜菜碱
基础
Keywords
Double gene expression vector Lycine CMO BADH
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
S512.1 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
双价抗菌肽基因转化辣椒
被引量:
23
4
作者
李乃坚
余小林
李颖
黄自然
张银东
王得元
机构
广东省农业科学院蔬菜研究所
华南农业大学蚕桑系
中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室
出处
《热带作物学报》
CSCD
2000年第4期45-51,共7页
基金
本研究为广东省自然科学基金!(960677)资助项目部分内容
文摘
在建立高效快速辣椒(Capsicum annuum L,)子叶离体培养和植株再生体系的基础上,将昆虫抗菌肽B、D基因构建而成的双价质粒pCDB-II以农杆菌为介导转入5个辣椒栽培品种,共获得KanR植株1200多株,对部分KanR植株进行点杂交、PCR、Southern杂交检测,结果证明了外源基因被成功整合。盆栽接青枯菌试验,结果显示,转基因植株具有较强的抗病力。
关键词
辣椒
抗菌肽
双基因表达载体
基因
转化
Keywords
Capsicum annuum cecropin double gene expression vector gene transformation
分类号
S641.303 [农业科学—蔬菜学]
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职称材料
题名
神经氨酸酶基因联合抗黏液病毒基因的抗病毒作用
被引量:
1
5
作者
傅德智
张亚妮
陈昊
李伟
郑蒙蒙
王丹
张振韬
施青青
李碧春
机构
扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室
苏州大学第一附属医院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期78-86,共9页
基金
江苏省高校自然科学重大基础研究项目资助(08KJA230001)
高等学校博士学科点专项
"六大人才高峰"资助项目
文摘
拟构建神经氨酸酶(NA)基因和抗黏液病毒(Mx)基因双基因真核共表达载体,并检测基因表达以及转染鸡成纤维(CEF)细胞后的抗病毒效果。克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA;分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2中,酶切和测序鉴定双基因共表达载体pVITRO2-Mx-NA的正确性。用pVITRO2-Mx-NA转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光(IFA)方法检测目的基因的表达。随后用pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞,利用RT-PCR及微量细胞病变抑制法测定重组蛋白抗新城疫病毒(NDV)的效果。结果:酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达载体pVITRO2-Mx-NA,在转染后的NIH-3T3和CEF细胞中同时检测到了NA和Mx基因的表达。联合基因表达的重组蛋白可保护CEF细胞在孵育的72h内免受NDV的感染,而转染了突变型Mx或者NA单基因真核表达载体的CEF细胞在孵育的48h内亦未受到NDV的侵染;与单基因转染组相比,联合基因转染组明显延迟NDV感染CEF细胞的时间,差异显著(P<0.05)。构建的双基因真核表达载体pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞后,其表达的重组蛋白Mx-NA在细胞水平上具有协同延缓NDV感染的能力,且优于单个基因。
关键词
NA
MX
双基因表达载体
抗病毒活性
抗NDV
Keywords
NA Mx dual eukaryotic gene co-expression vector anti-viral activity anti-NDV
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗菌肽B、D双基因表达载体的构建及转化广藿香的研究
张家明
孙雪飘
郑学勤
《热带作物学报》
CSCD
1997
12
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职称材料
2
联合双基因表达载体的构建及其拟南芥转化
钟胜
段瑞军
郭建春
胡新文
符少萍
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008
0
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职称材料
3
CMO,BADH双基因植物表达载体的构建
何宇锋
刘君
韩烈保
陈其军
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2005
1
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职称材料
4
双价抗菌肽基因转化辣椒
李乃坚
余小林
李颖
黄自然
张银东
王得元
《热带作物学报》
CSCD
2000
23
在线阅读
下载PDF
职称材料
5
神经氨酸酶基因联合抗黏液病毒基因的抗病毒作用
傅德智
张亚妮
陈昊
李伟
郑蒙蒙
王丹
张振韬
施青青
李碧春
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
1
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