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抗菌肽B、D双基因表达载体的构建及转化广藿香的研究 被引量:12
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作者 张家明 孙雪飘 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1997年第1期50-57,共8页
将人工合成的柞蚕抗菌肽D基因和天蚕抗菌肽B基因分别接上启动子和终止于,克隆到双元表达载体PBin19上,构建成双价抗菌肽基因表达载体pTBD。用三亲交配的方法将pTBD导入根癌农杆菌菌株LBA4404,再通过农杆菌将抗菌肽B、D基因导入广藿... 将人工合成的柞蚕抗菌肽D基因和天蚕抗菌肽B基因分别接上启动子和终止于,克隆到双元表达载体PBin19上,构建成双价抗菌肽基因表达载体pTBD。用三亲交配的方法将pTBD导入根癌农杆菌菌株LBA4404,再通过农杆菌将抗菌肽B、D基因导入广藿香,获27个转基因植株。Southern杂交结果表明,抗菌肽B、D基因已同时整合进3个株系染色体组中。与病原细菌Pseudomonassolanacearum试管共培养结果表明,转基因植株获得较强抗病性。盆栽接菌试验结果也表明.转基因植株具有较强抗病性。 展开更多
关键词 广藿香 抗菌肽 双基因表达载体 基因植株
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联合双基因表达载体的构建及其拟南芥转化
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作者 钟胜 段瑞军 +2 位作者 郭建春 胡新文 符少萍 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第1期52-54,共3页
[目的]为了研究CBF3冷诱导转录因子和细胞渗透调节物质AtGloS3在抗寒中的相互作用,寻找理想的抗寒转基因方式。[方法]根据GenBank中拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组序列设计引物,通过PCR反应克隆包括CBF3(C-repeat Binding Factor 3... [目的]为了研究CBF3冷诱导转录因子和细胞渗透调节物质AtGloS3在抗寒中的相互作用,寻找理想的抗寒转基因方式。[方法]根据GenBank中拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组序列设计引物,通过PCR反应克隆包括CBF3(C-repeat Binding Factor 3)基因以及基因上游启动子的DNA序列:CP-CBF3,共2 075 bp。CP是CBF3基因的启动子,受低温诱导。用EcoRI和BamHI双酶切CP-CBF3并置于植物表达载体pCAMBIA1300中,构建CBF3基因冷诱导表达载体pCA-CP-CBF3。然后将带有组成型启动子的肌醇半乳糖苷酶基因AtG-loS3合并于pCA-CP-CBF3中,构建双基因植物表达载体pCA-CP-CBF3-35S-AtGloS3。用真空抽滤虑法将这两个表达载体转化到拟南芥中,并用潮霉素筛选出转基因植物苗。[结果]CBF3和AtGloS3基因均来自拟南芥,而CBF3不存在内含子,AtGloS3基因存在内含子,故以CB-1、CB-2为引物的非转基因植物中也能得到带,而以AT-1、AT-2为引物的非转基因植物不能得到带。[结论]该研究中pCA-CP-CBF3是1个对照,实验的后续工作需进一步进行。 展开更多
关键词 CBF3冷诱导表达载体 CBF3和AtGolS3双基因表达载体 拟南芥转化
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CMO,BADH双基因植物表达载体的构建 被引量:1
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作者 何宇锋 刘君 +1 位作者 韩烈保 陈其军 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第5期63-66,共4页
以pC1303质粒和pC1391质粒为基础,利用载体pBIUC和pBIB构建了分别有Ubi启动子、35S启动子调控的带有控制甜菜碱合成的CMO和BADH的植物表达载体pC1303-Ubi-CMO-35S-BADH,为进一步开展提高植物抗逆性基因工程提供了基础。
关键词 双基因表达载体 甜菜碱 CMO BADH 植物表达载体 BADH 基因工程 CMO 构建 35S启动子 植物抗逆性 甜菜碱 基础
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双价抗菌肽基因转化辣椒 被引量:23
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作者 李乃坚 余小林 +3 位作者 李颖 黄自然 张银东 王得元 《热带作物学报》 CSCD 2000年第4期45-51,共7页
在建立高效快速辣椒(Capsicum  annuum  L,)子叶离体培养和植株再生体系的基础上,将昆虫抗菌肽B、D基因构建而成的双价质粒pCDB-II以农杆菌为介导转入5个辣椒栽培品种,共获得KanR植株1200多株... 在建立高效快速辣椒(Capsicum  annuum  L,)子叶离体培养和植株再生体系的基础上,将昆虫抗菌肽B、D基因构建而成的双价质粒pCDB-II以农杆菌为介导转入5个辣椒栽培品种,共获得KanR植株1200多株,对部分KanR植株进行点杂交、PCR、Southern杂交检测,结果证明了外源基因被成功整合。盆栽接青枯菌试验,结果显示,转基因植株具有较强的抗病力。 展开更多
关键词 辣椒 抗菌肽 双基因表达载体 基因转化
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神经氨酸酶基因联合抗黏液病毒基因的抗病毒作用 被引量:1
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作者 傅德智 张亚妮 +6 位作者 陈昊 李伟 郑蒙蒙 王丹 张振韬 施青青 李碧春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期78-86,共9页
拟构建神经氨酸酶(NA)基因和抗黏液病毒(Mx)基因双基因真核共表达载体,并检测基因表达以及转染鸡成纤维(CEF)细胞后的抗病毒效果。克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA;分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2中,酶切和测序鉴定双基因... 拟构建神经氨酸酶(NA)基因和抗黏液病毒(Mx)基因双基因真核共表达载体,并检测基因表达以及转染鸡成纤维(CEF)细胞后的抗病毒效果。克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA;分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2中,酶切和测序鉴定双基因共表达载体pVITRO2-Mx-NA的正确性。用pVITRO2-Mx-NA转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光(IFA)方法检测目的基因的表达。随后用pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞,利用RT-PCR及微量细胞病变抑制法测定重组蛋白抗新城疫病毒(NDV)的效果。结果:酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达载体pVITRO2-Mx-NA,在转染后的NIH-3T3和CEF细胞中同时检测到了NA和Mx基因的表达。联合基因表达的重组蛋白可保护CEF细胞在孵育的72h内免受NDV的感染,而转染了突变型Mx或者NA单基因真核表达载体的CEF细胞在孵育的48h内亦未受到NDV的侵染;与单基因转染组相比,联合基因转染组明显延迟NDV感染CEF细胞的时间,差异显著(P<0.05)。构建的双基因真核表达载体pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞后,其表达的重组蛋白Mx-NA在细胞水平上具有协同延缓NDV感染的能力,且优于单个基因。 展开更多
关键词 NA MX 双基因表达载体 抗病毒活性 抗NDV
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