马铃薯质体表达载体构建及GFP基因在块茎中的瞬时表达 被引量：5

1

作者 丁玉梅 杨正安 +2 位作者 周晓罡 张绍松 孙茂林 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期978-983,共6页

利用高等植物质体基因组在进化中高度保守的特点,根据烟草质体基因组全序列设计合成引物,PCR扩增并克隆了马铃薯质体的trnI-trnA基因片段。将测序正确的trnI基因和trnA基因作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建成包含Prrn-gfp-aadA-... 利用高等植物质体基因组在进化中高度保守的特点,根据烟草质体基因组全序列设计合成引物,PCR扩增并克隆了马铃薯质体的trnI-trnA基因片段。将测序正确的trnI基因和trnA基因作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建成包含Prrn-gfp-aadA-TpsbA表达盒的马铃薯质体定点转化载体pBMLSIA-GFP,酶切鉴定表明,所构建载体符合预期设计。采用该载体对马铃薯块茎进行基因枪法转化,结果表明,GFP基因可在质体特异性启动子Prrn及终止子TpsbA的调控下在马铃薯块茎中瞬时高量表达,经基因枪轰击后马铃薯块茎在紫外投射仪下产生很强的绿色荧光,在距离为6cm,压力1100psi轰击2枪的条件下产生的绿色荧光最强。马铃薯块茎可溶性蛋白SDS-PAGE电泳分析表明,GFP蛋白表达量约占总可溶性蛋白的15.4%-30.2%,均达到了较高的表达水平。该载体对后期马铃薯质体转化体系的建立和其他功能基因导入马铃薯质体进行性状改良具有重要应用价值。 展开更多

关键词 马铃薯 质体 载体构建 gfp基因 瞬时表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

gfP基因甘蓝质体表达载体构建及原核表达分析 被引量：4

2

作者 杨正安 丁玉梅 +1 位作者 许彬 张应华 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期12-17,共6页

以甘蓝自交系‘03097’为试材,PCR扩增并克隆了甘蓝质体的trnI-trnA基因区段,利用该基因区段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了甘蓝质体定点转化载体,并进行了原核表达分析。结果表明,所扩增的基因区段大小为2.7 kb。进行序列... 以甘蓝自交系‘03097’为试材,PCR扩增并克隆了甘蓝质体的trnI-trnA基因区段,利用该基因区段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了甘蓝质体定点转化载体,并进行了原核表达分析。结果表明,所扩增的基因区段大小为2.7 kb。进行序列分析后,经酶切、连接和转化,构建成含Prrn-gfp-aadA-TpsbA表达盒的质体表达载体,酶切鉴定表明,所构建载体符合预期设计;gfp基因能够在质体特异性启动子Prrn及终止子TpsbA的调控下高水平表达,表达量约占总可溶性蛋白的41.0%,包涵体占菌体蛋白的38.0%。该载体的构建为后期甘蓝质体转化体系的建立和其它功能基因导入甘蓝质体进行性状改良奠定了基础。 展开更多

关键词 甘蓝 质体 表达载体 gfp基因 高水平表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

生菜质体表达载体构建及gfp基因原核表达分析 被引量：1

3

作者 周丽英 李虎 +5 位作者 丁玉梅 卜璐璐 侯思明 许俊强 张应华 杨正安 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期2644-2648,共5页

以四季耐抽薹生菜为材料,PCR扩增并克隆了生菜质体rpo A基因的两侧翼的基因片段,利用该两基因区段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了生菜质体定点转化载体p Brpo A-GFP,并进行了原核表达分析。结果表明,PCR所扩增的两条基因区... 以四季耐抽薹生菜为材料,PCR扩增并克隆了生菜质体rpo A基因的两侧翼的基因片段,利用该两基因区段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了生菜质体定点转化载体p Brpo A-GFP,并进行了原核表达分析。结果表明,PCR所扩增的两条基因区段大小为1.2与1.1 kb。进行序列分析后,经酶切、连接和转化,构建成含Prrn-gfp-aad A-Tpsb A表达盒的质体表达载体,酶切鉴定表明,所构建载体符合预期设计;gfp基因能够在质体特异性启动子Prrn及终止子Tpsb A的调控下高效表达,表达量约占总可溶性蛋白的45.6%,包涵体占菌体蛋白的47.5%,该载体的构建为后期生菜质体转化体系的建立和其它功能基因导入生菜质体进行性状改良奠定了基础。 展开更多

关键词 生菜 质体 表达载体 gfp基因 高水平表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

新型HMW-GS基因1Dy12.1^(*t)植物双元表达载体的构建及其遗传转化 被引量：1

4

作者 张艳贞 王轲 +1 位作者 张静 晏月明 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期683-687,共5页

为了建立快速研究高分子量谷蛋白亚基(high molecular weightglutenin subunit,HMW-GS)基因功能活性的植物表达体系,以自主克隆的新型HMW-GS基因1Dy12.1*t为目的基因,利用限制性内切酶XhoⅠ和SalⅠ切割后5’端能形成相同粘性末端的特性... 为了建立快速研究高分子量谷蛋白亚基(high molecular weightglutenin subunit,HMW-GS)基因功能活性的植物表达体系,以自主克隆的新型HMW-GS基因1Dy12.1*t为目的基因,利用限制性内切酶XhoⅠ和SalⅠ切割后5’端能形成相同粘性末端的特性,成功构建了1Dy12.1*t的植物双元表达载体pBINHP-GluT。该载体选择使用胚乳特异性强启动子,利用已知HMW-GS基因内部均不含有的XbaⅠ和KpnⅠ内切酶位点引入1Dy12.1*t编码区,并将1Dy12.1*t的表达调控置于T-DNA区内,从而奠定了其在不同HMW-GS基因功能活性研究上的便利性。通过根癌农杆菌烟草叶盘转化研究目的基因1Dy12.1*t在植物体的表达特性,SDS-PAGE和western blotting鉴定结果表明,1Dy12.1*t在转基因烟草种子胚乳中得到高效表达,进一步证实了所克隆基因的正确性和所构建载体的有效性。 展开更多

关键词 HMW-GS基因 双元表达载体 遗传转化 植物体 高分子量谷蛋白亚基 SDS-PAGE 限制性内切酶 基因功能

在线阅读 下载PDF 职称材料

GFP-pl6融合基因表达载体的构建

5

作者 李华 刘维全 +2 位作者 崔振中 金春元 王太一 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 1997年第2期125-128,共4页

本文报道了以ＧＦＰ（绿色荧光蛋白）基因为报告基因，ｐｌ６基因为目的基因，将ｐｌ６基因分别插入ＧＦＰ基因的上游和下游，构建成ＧＦＰ－ｐｌ６融合基因表达载体ｐＣｐｌ６Ｇ和ｐＣＧｐ１６，并通过酶切、电泳技术对重组体进行了鉴定。

关键词 融合基因 表达载体 转基因动物模型 P16基因 gfp基因 CG 构建 目的基因 重组体 绿色荧光蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

口蹄疫病毒vp1基因的克隆与植物双元表达载体的构建

6

作者 王宝琴 王小龙 +2 位作者 张永光 潘丽 王文秀 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期166-169,共4页

通过RT-PCR法获得阿克苏(Akesu/O/58)FMDV结构蛋白基因vp1,将该基因克隆到pGEM-T Easy载体进行核苷酸序列测定。将vp1基因、Kozak序列等插入中间表达质粒pBin438,构建重组中间表达载体pBinVP1。采用三亲融合法构建植物双元表达载体pBinF... 通过RT-PCR法获得阿克苏(Akesu/O/58)FMDV结构蛋白基因vp1,将该基因克隆到pGEM-T Easy载体进行核苷酸序列测定。将vp1基因、Kozak序列等插入中间表达质粒pBin438,构建重组中间表达载体pBinVP1。采用三亲融合法构建植物双元表达载体pBinFMDV-VP1。结果表明:vp1基因为639bp。重组中间表达载体pBinVP1经BamHⅠ/SalⅠ双酶切、PCR扩增和序列测定,表明vp1基因、Kozak序列等插入pBinVP1中。在含50mg/L卡那霉素、25mg/L链霉素和50mg/L利福平的YEB培养基上筛选及对融合农杆菌质粒进行vp1基因的PCR检测,证明植物双元表达载体pBinFMDV-VP1构建正确。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 VP1基因 克隆 三亲融合 双元表达载体 根癌农杆菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

新型柞蚕双元基因转移载体的构建及在Sf9细胞中的表达

7

作者 刘丹梅 李文利 安利佳 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期38-44,共7页

启动子、转座子、报告基因等转基因元件的优化以及基因转移载体的构建对外源基因的表达尤为重要。利用TAILPCR方法延长柞蚕丝素蛋白基因Fib的5′端和3′端序列,插入柞蚕肌动蛋白基因A1启动子驱动的红色荧光蛋白基因,并利用piggyBac转座... 启动子、转座子、报告基因等转基因元件的优化以及基因转移载体的构建对外源基因的表达尤为重要。利用TAILPCR方法延长柞蚕丝素蛋白基因Fib的5′端和3′端序列,插入柞蚕肌动蛋白基因A1启动子驱动的红色荧光蛋白基因,并利用piggyBac转座子元件构建新型柞蚕双元基因转移载体pBac[A1-DsRed+Fib-GFP]-A1-piggyBac。通过对Sf9细胞的转染实验,证明该双元基因转移载体系统能行使正常功能,而且比传统的双质粒载体转移系统具有更高的整合效率,在柞蚕转基因研究中具有应用潜力。 展开更多

关键词 柞蚕 转基因 双元基因载体 细胞表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

GFP-p16融合基因表达载体在BHK HeLa细胞中荧光蛋白表达的研究

8

作者 李华 王禄增 +2 位作者 刘维全 崔振中 王太一 《中国实验动物学杂志》 1998年第1期10-13,共4页

本文报道了通过脂质体转染技术将本室构建成的ＧＦＰ－ｐ１６融合基因表达载体ｐＣｐ１６Ｇ和ｐＣＧｐ１６分别导入ＢＨＫ、ＨｅＬａ细胞中，研究它们在真核细胞中荧光蛋白的表达。结果表明，外源脂质体对ＢＨＫ、ＨｅＬａ等真核细胞无... 本文报道了通过脂质体转染技术将本室构建成的ＧＦＰ－ｐ１６融合基因表达载体ｐＣｐ１６Ｇ和ｐＣＧｐ１６分别导入ＢＨＫ、ＨｅＬａ细胞中，研究它们在真核细胞中荧光蛋白的表达。结果表明，外源脂质体对ＢＨＫ、ＨｅＬａ等真核细胞无损伤，经斑点杂交检测证明，外源基因可以通过脂质体转染技术整合到细胞基因组中。研究结果还表明，ｐ１６基因与ＧＦＰ基因的３′端连接，可以保持ＧＦＰ的荧光特性，表达荧光蛋白，而与ＧＦＰ基因的５′端连接，则不能表达荧光。 展开更多

关键词 HELA细胞 表达载体 融合基因 荧光蛋白 脂质体转染 真核细胞 p16基因 gfp基因 外源基因 细胞基因

全文增补中

以UPS构建的酿酒酵母表达载体及GFP的表达 被引量：3

9

作者 王弘 郑文岭 +2 位作者 杨连生 于淑娟 马文丽 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第9期30-32,39,共4页

利用通用载体质粒融合系统UPS构建出了以GFP(绿色荧光蛋白 )为报告基因的酵母表达载体 ,经PCR、电泳、测序等手段证明了构建的准确性 。

关键词 UPS 酿酒酵母 通用载体质粒融合系统 酵母表达载体 gfp基因 绿色荧光蛋白 基因表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

SeNHX1与GFP融合基因在酵母中表达及其耐盐性表现 被引量：2

10

作者 杨小玲 季静 +3 位作者 王罡 杨少辉 孙建学 张达威 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第4期60-64,共5页

通过构建盐角草的液泡型Na^＋／H^＋反向转运蛋白SeNHX1基因的酵母表达载体，研究该基因对酵母耐盐性的影响。将SeNHXI基因与荧光报告基因GFP融合，分别构建酵母表达载体pYES2-SeNHX1-GFP、pYES2-SeNHX1和pYES2-GFP，转化酵母W303，诱导... 通过构建盐角草的液泡型Na^＋／H^＋反向转运蛋白SeNHX1基因的酵母表达载体，研究该基因对酵母耐盐性的影响。将SeNHXI基因与荧光报告基因GFP融合，分别构建酵母表达载体pYES2-SeNHX1-GFP、pYES2-SeNHX1和pYES2-GFP，转化酵母W303，诱导3个载体表达，并测定含有不同表达载体的酵母生长曲线。结果表明，荧光显微镜下观察到带有报告基因GFP的2个转化子W303（pYES2-SeNHX1-GFP）和W303（pYES2-GFP）均可发出绿色荧光，而没有报告基因的转化子W303（pYES2-SeNHX1）不发出荧光；在含有0．8mol／LNaCI培养基中培养0～48h内，W303（pYES2-SeNHX1-GFP）和W303（pYES2-SeNHX1）菌株前期生长比对照菌株W303（pYES2-GFP）慢，但在培养48h后则大大超过对照菌株。表明所构建带有目的基因SeNHX1的酵母表达载体已表达，且证实SeNHX1基因可提高酵母的耐扑件。 展开更多

关键词 SeNHX1基因 gfp基因 酵母 表达载体 生长曲线 荧光 耐盐性

在线阅读 下载PDF 职称材料

大豆抗病相关基因SR1正反义植物表达载体的构建及遗传转化研究 被引量：3

11

作者 林世锋 张淑珍 +3 位作者 杨秀红 陈庆山 杨庆凯 李文滨 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期90-94,共5页

实验构建了CaMV35S启动子控制下的大豆抗病相关基因SR1的正反义植物双元表达载体pBISR1(+)和pBISR1(-)。通过根癌农杆菌叶盘转化法,将正义和反义SR1 基因导入烟草Ha vana 425,经卡那霉素筛选,获得了抗性植株。经PCR和PCR-Southern印迹分... 实验构建了CaMV35S启动子控制下的大豆抗病相关基因SR1的正反义植物双元表达载体pBISR1(+)和pBISR1(-)。通过根癌农杆菌叶盘转化法,将正义和反义SR1 基因导入烟草Ha vana 425,经卡那霉素筛选,获得了抗性植株。经PCR和PCR-Southern印迹分析,证明抗性植株中整和了SR1基因,RT-PCR分析进一步表明正义和反义基因皆能转录为完整的mRNA,经疫霉根腐接种及抗病性鉴定表明,转反义基因株系和未转基因株系均轻微感病,而转正义基因株系始终没有出现感病症状。 展开更多

关键词 抗病相关基因 反义植物表达载体 遗传转化 构建 大豆 双元表达载体 35S启动子 抗性植株 反义基因 PCR分析 抗病性鉴定 CaMV 基因导入 卡那霉素 mRNA 正义基因 转化法 株系 转基因 感病 根癌 烟草 接种 根腐 疫霉

在线阅读 下载PDF 职称材料

MSTN RNAi双元表达载体对成肌细胞增殖及分化的影响 被引量：3

12

作者 吴丹 胡兰 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期38-42,共5页

为了确定MSTN RNAi双元表达载体pEGFP-N1-M1-M2对成肌细胞增殖和分化的影响,利用脂质体介导法将该双元表达载体转染成肌细胞,MTT法检测MSTN RNAi双元表达载体对成肌细胞增殖的作用,Giemsa染色检测pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体对成肌细胞... 为了确定MSTN RNAi双元表达载体pEGFP-N1-M1-M2对成肌细胞增殖和分化的影响,利用脂质体介导法将该双元表达载体转染成肌细胞,MTT法检测MSTN RNAi双元表达载体对成肌细胞增殖的作用,Giemsa染色检测pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体对成肌细胞融合率的影响。试验结果表明,pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体有促进成肌细胞增殖和分化的作用,能够促进成肌细胞大量融合。该结果为进一步探讨MSTN基因的作用机理提供了更为便捷的研究方法。 展开更多

关键词 MSTN基因 双元表达载体 成肌细胞 增殖分化

在线阅读 下载PDF 职称材料

不结球白菜L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶基因(GLDH)cDNA片段克隆与RNAi表达载体构建

13

作者 高红亮 李英 +2 位作者 宋玉萍 马成英 侯喜林 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期20-24,共5页

根据植物中hpRNA(hairpin RNA)原理,选择GLDH基因cDNA序列同源性较低区域设计1对携带双酶切位点的特异引物,以不结球白菜‘苏州青’叶片为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆了GLDH基因片段。构建中间克隆载体,经过3次亚克隆将测序正确的... 根据植物中hpRNA(hairpin RNA)原理,选择GLDH基因cDNA序列同源性较低区域设计1对携带双酶切位点的特异引物,以不结球白菜‘苏州青’叶片为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆了GLDH基因片段。构建中间克隆载体,经过3次亚克隆将测序正确的GLDH基因片段分别以正向和反向两种形式插入到间隔基因YYT的两端,经鉴定已插入到植物表达载体中,成功地构建了干扰GLDH基因表达的RNAi植物双元表达载体pRNAi-GLDH,并将表达载体转化到农杆菌菌株LBA4404中,为深入研究GLDH基因功能提供有效的工具。 展开更多

关键词 不结球白菜 GLDH基因 RNAi植物双元表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

Anti-SAD基因植物表达载体的构建

14

作者 黄锐之 刘智宏 +2 位作者 郎春秀 胡张华 陈锦清 《浙江农业学报》 CSCD 2001年第5期272-275,共4页

硬脂酰 ACP脱饱和酶 (SAD ;EC 1.14.99.)是植物中广泛存在的酶系 ,在脂肪酸合成途径中脱饱和的起始阶段中起催化作用 ,在脂肪酸饱和度调控中起着关键作用。本研究通过对已克隆的硬脂酰 ACP脱饱和酶基因分析 ,合成了SAD基因保守区域基... 硬脂酰 ACP脱饱和酶 (SAD ;EC 1.14.99.)是植物中广泛存在的酶系 ,在脂肪酸合成途径中脱饱和的起始阶段中起催化作用 ,在脂肪酸饱和度调控中起着关键作用。本研究通过对已克隆的硬脂酰 ACP脱饱和酶基因分析 ,合成了SAD基因保守区域基因片段 ,并将该片段插入载体pIG12 1的SacI位点 ,构建了Anti SAD植物表达双元载体 ,为进一步开展植物脂肪酸成份基因工程调控研究提供了基础。 展开更多

关键词 硬脂酰-ACP脱饱和酶 植物表达双元载体 反义基因 重组质粒 Anti-SAD基因 植物油料 脂肪酸成分

在线阅读 下载PDF 职称材料

MSTN RNAi双元表达载体构建及效果试验

15

作者 胡兰 隋世慧 吴丹 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第7期11-13,17,共4页

为了建立有效抑制MSTN基因表达的方法,本试验利用基因克隆技术构建MSTN RNAi双元表达载体,并利用脂质体介导转染成肌细胞、用SDS-PAGE和Western blottingf法检测蛋白质的表达。试验结果表明,以TA载体为克隆载体,pHANNIBAL为中间载体,可... 为了建立有效抑制MSTN基因表达的方法,本试验利用基因克隆技术构建MSTN RNAi双元表达载体,并利用脂质体介导转染成肌细胞、用SDS-PAGE和Western blottingf法检测蛋白质的表达。试验结果表明,以TA载体为克隆载体,pHANNIBAL为中间载体,可成功构建pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体,将其转染成肌细胞48h后,该双元表达载体可明显抑制成肌细胞MSTN基因的表达。 展开更多

关键词 MSTN基因 RNAI 双元表达载体 成肌细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

水稻OsWRKY17基因定位表达载体的构建

16

作者 王小兰 唐馨 刘忠渊 《安徽农业科学》 CAS 2012年第3期1318-1320,共3页

[目的]研究水稻OsWRKY17基因的生理生化特性,确定OsWRKY17蛋白在植物中的定位。[方法]根据GenBank数据库中Os-WRKY17全序列设计引物,进行OsWRKY17的RT-PCR扩增,克隆了该基因,将该片段与带绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒载体pBinG-FP重组,... [目的]研究水稻OsWRKY17基因的生理生化特性,确定OsWRKY17蛋白在植物中的定位。[方法]根据GenBank数据库中Os-WRKY17全序列设计引物,进行OsWRKY17的RT-PCR扩增,克隆了该基因,将该片段与带绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒载体pBinG-FP重组,将构建正确的表达载体pBinGFP-OsWRKY17通过农杆菌介导的花蕾浸泡法转化到拟南芥中。[结果]经菌落PCR与酶切鉴定表明成功构建了OsWRKY17基因与GFP融合的植物表达载体pBinGFP-OsWRKY17,并成功将OsWRKY17基因整合到拟南芥的基因组中,获得了抗性植株。[结论]OsWRKY17基因表达载体的构建为研究该基因的生理生化特性奠定了基础。 展开更多

关键词 OsWRKY17基因 gfp基因 表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

开花调控基因BpMADS4无抗性表达载体的构建

17

作者 李玉生 吴永杰 +3 位作者 赵艳华 吴雅琴 程和禾 陈龙 《河北农业科学》 2012年第1期51-57,共7页

为了构建含有报告基因GFP基因和BpMADS4基因的无抗性双元表达载体pCAMBIA1302-GFP-Bp,参考已发表的欧洲白桦(Betula pendula)开花调控基因(BpMADS4)序列,利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从欧洲白桦的幼嫩花序中克隆得到促进开花的BpM... 为了构建含有报告基因GFP基因和BpMADS4基因的无抗性双元表达载体pCAMBIA1302-GFP-Bp,参考已发表的欧洲白桦(Betula pendula)开花调控基因(BpMADS4)序列,利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从欧洲白桦的幼嫩花序中克隆得到促进开花的BpMADS4基因。将该基因替换pCAMBIA1302载体中的潮霉素抗性基因,构建含有报告基因GFP基因和BpMADS4基因的无抗性双元表达载体pCAM-BIA1302-GFP-Bp。结果表明:成功构建了无抗性双元表达载体pCAMBIA1302-GFP-Bp。该表达载体在苹果遗传转化中不使用抗生素筛选,可以解决抗生素抗性筛选降低苹果转基因转化效率的问题以及转基因苹果中选择标记基因造成的生物安全性问题,用该载体转化苹果可以缩短苹果童期,有效提高其育种效率。本研究为筛选对环境安全的、具有易成花特性的苹果新种质奠定了基础。 展开更多

关键词 开花调控基因(BpMADS4) gfp基因 转基因 表达载体构建

在线阅读 下载PDF 职称材料

GFP为外源报告基因在地衣芽孢杆菌20386中表达的研究 被引量：1

18

作者 朱科 韩玲 杨渝珍 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期478-480,共3页

目的　探讨外源基因在野生型地衣芽孢杆菌 2 0 386中表达的可行性。方法　利用大肠杆菌 枯草芽孢杆菌穿梭表达载体在大肠杆菌DH5α中构建含绿色荧光蛋白 (GFP)基因的重组质粒 ,通过电转化将重组质粒转入到野生型地衣芽孢杆菌 2 0 386... 目的　探讨外源基因在野生型地衣芽孢杆菌 2 0 386中表达的可行性。方法　利用大肠杆菌 枯草芽孢杆菌穿梭表达载体在大肠杆菌DH5α中构建含绿色荧光蛋白 (GFP)基因的重组质粒 ,通过电转化将重组质粒转入到野生型地衣芽孢杆菌 2 0 386中表达 ,通过检测绿色荧光蛋白的存在 ,考察该野生型菌株表达外源基因的可能性和表达能力。结果　在紫外光激发下 ,在固体LB平板上生长的菌落能显示绿色荧光 ,而在液体LB培养基中培养的菌体和培养上清中未能检测到绿色荧光蛋白的存在。结论　外源基因在野生型地衣芽孢杆菌 2 0 386中能够表达 ,但在液体LB中培养时 ,可能会被该菌自身分泌的蛋白酶分解 ;亦可能被稀释而无法测到荧光 。 展开更多

关键词 gfp 外源报告基因 地衣芽孢杆菌 表达 研究 穿梭载体 绿色荧光蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

虾青素合成相关酶基因Adketo果实特异表达载体的构建 被引量：1

19

作者 陈新君 黄静 +2 位作者 李伟 钟克焱 高新征 《海南医学院学报》 CAS 2019年第2期90-93,共4页

目的:采用克隆的番茄E8启动子和夏侧金盏花虾青素合成相关酶基因Adketo构建果实特异表达载体,为利用植物基因工程进行虾青素生产提供新途径。方法:采用RT-PCR的方法,从夏侧金盏花中克隆到虾青素合成相关酶基因Adketo,同时以番茄基因组DN... 目的:采用克隆的番茄E8启动子和夏侧金盏花虾青素合成相关酶基因Adketo构建果实特异表达载体,为利用植物基因工程进行虾青素生产提供新途径。方法:采用RT-PCR的方法,从夏侧金盏花中克隆到虾青素合成相关酶基因Adketo,同时以番茄基因组DNA为模板PCR扩增果实特异性启动子E8,克隆进T载体,菌液PCR初步鉴定后测序,序列分析。从T载体切下的E8启动子和Adketo基因经回收后同时插入到植物双元表达载体pBI121上,获得重组载体,然后进行菌液PCR检测和酶切鉴定。结果:测序结果分析显示获得正确的E8和Adketo基因序列。重组质粒经菌液PCR检测及酶切鉴定均获得预期大小条带。结论:该实验成功构建了番茄果实特异性E8启动子驱动虾青素合成相关酶基因Adketo的植物表达载体。 展开更多

关键词 番茄E8启动子 植物双元表达载体 Adketo基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

T7RNAP基因的克隆及其质体定位表达载体的构建

20

作者 张香琴 苏承刚 +1 位作者 杜小兵 张兴国 《南方农业》 2010年第3期35-37,共3页

为在番茄成熟果实组织中建立T7/T7RNAP质体转基因特异与高效表达系统,本文克隆了原核T7RNAP基因,在添加上质体定位信号肽编码序列后,由番茄果实成熟特异表达启动子PDS和Tnos终止子控制,构成了含有PDS-ptT7RNAP-Tnos基因表达盒的植物基... 为在番茄成熟果实组织中建立T7/T7RNAP质体转基因特异与高效表达系统,本文克隆了原核T7RNAP基因,在添加上质体定位信号肽编码序列后,由番茄果实成熟特异表达启动子PDS和Tnos终止子控制,构成了含有PDS-ptT7RNAP-Tnos基因表达盒的植物基因双元表达载体。该研究为在番茄质体工程中控制外源质体转基因在番茄成熟果实成熟组织中定点表达奠定了基础。 展开更多

关键词 T7RNAP基因 质体定位表达 双元表达载体 番茄

在线阅读 下载PDF 职称材料