双价抗菌肽基因表达载体的构建 被引量：1

1

作者 张银东 金小平 +2 位作者 曾宪松 彭存智 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1994年第S1期61-66,共6页

将人工合成的抗菌肽Ｄ基因和抗菌肽Ｂ基因克隆到同一植物表达载体ｐＢⅠ１２１，且各自具有其３５ｓ启动子和Ｎｏｓ终止子。先将抗菌肽Ｄ基因及其启动子和终止子克隆到ｐＢ１２１ＨｉｎｄⅢ位点获得ｐＥＣＶⅠ重组子。然后将抗菌肽Ｂ基... 将人工合成的抗菌肽Ｄ基因和抗菌肽Ｂ基因克隆到同一植物表达载体ｐＢⅠ１２１，且各自具有其３５ｓ启动子和Ｎｏｓ终止子。先将抗菌肽Ｄ基因及其启动子和终止子克隆到ｐＢ１２１ＨｉｎｄⅢ位点获得ｐＥＣＶⅠ重组子。然后将抗菌肽Ｂ基因克隆到ｐＥＣＶⅠ的ＢａｍＨⅠ位点，经Ａｇａｒｏｓｅｇｅｌ检测和酶切鉴定获得具有抗菌肽Ｄ，抗菌肽Ｂ基因的双价基因表达载体ｐＥＣＶⅡ。 展开更多

关键词 抗菌肽D基因 抗菌肽B基因 双价抗菌肽基因植物表达载体

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韧皮部特异启动子驱动密码子优化的抗菌肽D基因的植物表达载体构建 被引量：7

2

作者 胡桂兵 张上隆 +1 位作者 徐昌杰 林顺权 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期639-643,共5页

根据177个GenBank中登录的柑橘编码蛋白密码子用法的分析结果,优化并重新设计和合成了含柑橘偏爱密码子、对柑橘黄龙病有杀灭作用的柞蚕抗菌肽D基因(命名为CAPD),克隆入pUC19克隆载体并经测序验证后,获得了含新抗病基因的重组质粒pUC19-... 根据177个GenBank中登录的柑橘编码蛋白密码子用法的分析结果,优化并重新设计和合成了含柑橘偏爱密码子、对柑橘黄龙病有杀灭作用的柞蚕抗菌肽D基因(命名为CAPD),克隆入pUC19克隆载体并经测序验证后,获得了含新抗病基因的重组质粒pUC19-CAPD。用限制性内切酶BamHI和SacI双酶切pUC19-CAPD克隆载体和pBI121植物表达载体的质粒DNA,回收pUC19-CAPD克隆载体中的CAPD基因小片段和pBI121植物表达载体中去掉GUS报告基因的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由CaMV35S组成型启动子(35SP)驱动CAPD目的基因的新植物表达载体(命名为pHZ05);用限制性内切酶BamHI和HindIII双酶切含笋瓜韧皮部特异启动子(PSP)的pUCm-PSP克隆载体和pHZ05植物表达载体的质粒DNA,分别回收pUCm-PSP克隆载体中的PSP小片段和pHZ05植物表达载体中去掉CAPD目的基因上游35SP的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由PSP驱动CAPD目的基因的新植物表达载体(命名为pHZ06)。利用细胞感受态法直接将2个由不同启动子驱动的含CAPD目的基因的新重组植物表达载体分别导入根癌农杆菌LBA4404、GV3101、EHA105和发根农杆菌Ri15834等4个农杆菌菌株中,为利用农杆菌介导的遗传转化技术培育抵抗由韧皮部传导的毁灭性和检疫性病害柑橘黄龙病的新种质奠定了基础。 展开更多

关键词 柑橘 密码子优化 抗菌肽D基因 韧皮部特异启动子 植物表达载体

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抗菌肽B基因合成与在植物表达载体中的克隆

3

作者 李文利 范琦 《辽宁农业科学》 2000年第1期10-12,共3页

设计了两条引物(F1:75bp、F2:75bp),用PCR扩增的方法合成惜古比天蚕抗菌肽基因B(cecropinB),包括两侧的酶切点、保护基团全长为132个碱基。经测序分析证实合成的结构基因与原序列一致。将此基因克隆到植物表达载体PBI121上。

关键词 抗菌肽 基因合成 植物载体 克隆

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抗菌肽B、D双基因表达载体的构建及转化广藿香的研究 被引量：12

4

作者 张家明 孙雪飘 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1997年第1期50-57,共8页

将人工合成的柞蚕抗菌肽D基因和天蚕抗菌肽B基因分别接上启动子和终止于，克隆到双元表达载体PBin19上，构建成双价抗菌肽基因表达载体pTBD。用三亲交配的方法将pTBD导入根癌农杆菌菌株LBA4404，再通过农杆菌将抗菌肽B、D基因导入广藿... 将人工合成的柞蚕抗菌肽D基因和天蚕抗菌肽B基因分别接上启动子和终止于，克隆到双元表达载体PBin19上，构建成双价抗菌肽基因表达载体pTBD。用三亲交配的方法将pTBD导入根癌农杆菌菌株LBA4404，再通过农杆菌将抗菌肽B、D基因导入广藿香，获27个转基因植株。Southern杂交结果表明，抗菌肽B、D基因已同时整合进3个株系染色体组中。与病原细菌Pseudomonassolanacearum试管共培养结果表明，转基因植株获得较强抗病性。盆栽接菌试验结果也表明．转基因植株具有较强抗病性。 展开更多

关键词 广藿香 抗菌肽 双基因表达载体 转基因植株

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节瓜抗镰刀菌酸突变体内切几丁质酶基因的克隆与植物表达载体构建 被引量：3

5

作者 赵芹 谢大森 +3 位作者 何晓明 彭庆务 罗少波 陈俊秋 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第3期539-547,共9页

根据节瓜与枯萎病菌互作构建抑制消减文库获得的内切几丁质酶基因EST序列,以节瓜抗镰刀菌酸突变体＂LT3＂为试材,通过RT-PCR与RACE相结合的方法,获得了该基因全长c DNA序列,命名为Cq Chi I。序列测定和生物信息学分析结果表明,该基因c ... 根据节瓜与枯萎病菌互作构建抑制消减文库获得的内切几丁质酶基因EST序列,以节瓜抗镰刀菌酸突变体＂LT3＂为试材,通过RT-PCR与RACE相结合的方法,获得了该基因全长c DNA序列,命名为Cq Chi I。序列测定和生物信息学分析结果表明,该基因c DNA序列全长1 139 bp,编码区在38~982 bp之间,编码314个氨基酸,蛋白质分子量为33.94 ku,等电点为8.43,具有chitinase_gluco_hydro_19及lysozome_like superfamily功能域,推测该蛋白可能兼具几丁质酶与溶菌酶活性。结构分析表明,该蛋白二级结构中α螺旋、延伸链、β转角与无规则卷曲分别占24.20%、18.15%、7.96%和49.68%,该蛋白为亲水性非跨膜蛋白,1~23氨基酸预测为信号肽。其三级结构高度保守,为class I碱性几丁质酶,属于几丁质酶第19家族,为分泌细胞外蛋白。序列比对与系统进化分析结果显示,Cq Chi I与黄瓜、甜瓜、葫芦、苦瓜等植物几丁质酶基因亲缘关系紧密,与黄瓜碱性内切几丁质酶（XP004134833）相似性最高为85%。进一步构建了植物表达载体p Cambia1300并转化农杆菌EHA105,通过蘸花法转化拟南芥,为后续开展基因功能研究奠定基础。 展开更多

关键词 节瓜 抗镰刀菌酸突变体 内切几丁质酶基因 c DNA克隆 植物表达载体

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杂合抗菌肽基因的设计及表达载体的构建 被引量：1

6

作者 王金固 杜娟 李尚伟 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第5期133-136,共4页

为高效表达具有高抗菌活性的抗菌肽,根据Magainin 2(MA)、Sapecin(SA)和Melittin(ME)基因核心序列,设计杂合抗菌肽MA-SA-ME(MSM)基因并进行密码子优化。生物信息学分析显示,该抗菌肽具有很好的抗菌作用。将MSM基因与毕赤酵母表达载体pP... 为高效表达具有高抗菌活性的抗菌肽,根据Magainin 2(MA)、Sapecin(SA)和Melittin(ME)基因核心序列,设计杂合抗菌肽MA-SA-ME(MSM)基因并进行密码子优化。生物信息学分析显示,该抗菌肽具有很好的抗菌作用。将MSM基因与毕赤酵母表达载体pPICZα-A连接,构建重组表达载体pPICZ-αA-MSM,以实现抗菌肽基因MSM在毕赤酵母GS115中进行分泌表达。构建的重组表达质粒经PCR检测、双酶切和测序3步鉴定表明,构建的重组表达质粒与预期完全相符,可用于下一步的毕赤酵母表达试验。 展开更多

关键词 杂合抗菌肽 毕赤酵母 基因克隆 表达载体构建

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抗菌肽Fa-AMP基因的克隆及其原核表达载体的构建 被引量：3

7

作者 李蒙 刘璞 张芝星 《江西农业学报》 CAS 2021年第5期38-41,共4页

为研究抗菌肽Fa-AMP的高效制备方法。采用大肠杆菌偏嗜性密码子设计编码该抗菌肽的核苷酸序列,通过重叠区扩增基因拼接法合成目的基因,并将其连接到表达载体pET-47b上,转化获得其BL21(DE3)pLysS工程菌,经PCR和测序鉴定,表明重组表达载... 为研究抗菌肽Fa-AMP的高效制备方法。采用大肠杆菌偏嗜性密码子设计编码该抗菌肽的核苷酸序列,通过重叠区扩增基因拼接法合成目的基因,并将其连接到表达载体pET-47b上,转化获得其BL21(DE3)pLysS工程菌,经PCR和测序鉴定,表明重组表达载体构建成功,这为体外生物活性检测与开发提供了参考。 展开更多

关键词 抗菌肽 原核表达 Fa-AMP 基因 载体

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奶牛气管抗菌肽(TAP)基因乳腺特异性表达载体的构建与鉴定

8

作者 曹随忠 姚学萍 +4 位作者 崔亚飞 杨德英 雍康 余树民 刘宗平 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第6期1-7,18,共8页

【目的】构建奶牛气管抗菌肽(TAP)基因乳腺特异性表达载体。【方法】根据GenBank中牛TAP基因cDNA序列(GenBank号:NM_174776)设计引物,从奶牛乳腺组织中RT-PCR扩增TAP基因编码序列,将其克隆到pMD19-T(simple)载体中测序。重组质粒pMD-TAP... 【目的】构建奶牛气管抗菌肽(TAP)基因乳腺特异性表达载体。【方法】根据GenBank中牛TAP基因cDNA序列(GenBank号:NM_174776)设计引物,从奶牛乳腺组织中RT-PCR扩增TAP基因编码序列,将其克隆到pMD19-T(simple)载体中测序。重组质粒pMD-TAP经EcoRⅠ+KpnⅠ双酶切回收目的基因片段,亚克隆到携带增强型绿色荧光蛋白的通用型乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP中,采用脂质体法转染奶牛乳腺上皮细胞(bMEC)、COS-7细胞,并注射泌乳家兔乳腺组织,荧光显微镜检测转染细胞中绿色荧光蛋白的表达,半定量RT-PCR检测家兔乳腺组织中TAP mRNA的表达。【结果】成功构建了乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP-TAP,该载体可在bMEC中特异性地表达绿色荧光蛋白;半定量RT-PCR检测发现,转染pBLG-EGFP-TAP可显著提高家兔乳腺组织中TAPmRNA的表达水平。【结论】成功构建了乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP-TAP,为进一步研究奶牛TAP基因的表达特性及利用基因工程技术防治奶牛乳房炎提供了重要材料。 展开更多

关键词 奶牛 乳房炎 Β-防御素 气管抗菌肽基因 乳腺特异性表达载体

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肠出血性大肠埃希菌EIS基因的克隆与植物表达载体的构建

9

作者 吴仙花 李贺 +5 位作者 施利利 罗峰 夏卜贤 陈晓木 孙守钧 裴忠有 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2014年第5期12-15,共4页

为给利用转基因植物生产出血性大肠杆菌疫苗的研究奠定基础,应用PCR扩增技术从原核表达载体pET-28a(+)-EIS上克隆对出血性大肠杆菌具有保护性免疫的EIS基因序列,并采用T-A克隆方法克隆到pUC18上,通过酶切、连接、转化等技术构建植物表... 为给利用转基因植物生产出血性大肠杆菌疫苗的研究奠定基础,应用PCR扩增技术从原核表达载体pET-28a(+)-EIS上克隆对出血性大肠杆菌具有保护性免疫的EIS基因序列,并采用T-A克隆方法克隆到pUC18上,通过酶切、连接、转化等技术构建植物表达载体,经酶切、测序验证后将构建植物表达载体导入农杆菌中。结果:扩增到约为1 800bp的EIS基因,成功构建了植物表达载体pCAMBIA1300-EIS,并导入到农杆菌EHA105中。 展开更多

关键词 肠出血性大肠埃希菌 EIS基因 植物表达载体 PCR 克隆 疫苗

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抗菌肽Defensin基因pcr3.1真核表达载体的构建

10

作者 张守纯 刘潇然 郭宇航 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第1期39-41,共3页

通过克隆果蝇的defensin基因,构建了defensin基因的哺乳动物细胞真核表达载体。把黑腹果蝇基因组DNA通过PCR获得defensin,克隆载体pMD18-T/defensin,并将其转化到大肠杆菌里,最后进行抗菌肽基因重组真核表达载体pcr3.1/defensin的构建... 通过克隆果蝇的defensin基因,构建了defensin基因的哺乳动物细胞真核表达载体。把黑腹果蝇基因组DNA通过PCR获得defensin,克隆载体pMD18-T/defensin,并将其转化到大肠杆菌里,最后进行抗菌肽基因重组真核表达载体pcr3.1/defensin的构建和鉴定。结果表明,以果蝇总DNA为模板扩增出280bp左右的特异性条带,测序结果与GeneBank测序结果相比,除一个碱基外,其余的完全一致,译成的氨基酸序列相同。对重组质粒pcr3.1/defensin进行双酶切鉴定并测序,结果也完全一致。所以,重组质粒pcr3.1/defensin由真核载体pcr3.1和defensin DNA片段组成。且插入的defensin DNA片段与已知序列完全相同。 展开更多

关键词 抗菌肽 defensin基因 PCR 真核表达载体构建

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黄鳝抗菌肽hepcidin基因大肠杆菌表达载体的构建 被引量：2

11

作者 刘成都 邱庆崇 +1 位作者 耿晓雪 李伟 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第9期5245-5246,共2页

[目的]构建黄鳝抗菌肽hepcidin基因大肠杆菌表达载体。[方法]根据Genbank中黄鳝hepcidin基因序列设计引物进行PCR扩增,将测序正确的基因片段连接入载体pET-28a中。[结果]以黄鳝cDNA为模板,扩增出hepcidin基因片段,长度为291 bp,连接到pE... [目的]构建黄鳝抗菌肽hepcidin基因大肠杆菌表达载体。[方法]根据Genbank中黄鳝hepcidin基因序列设计引物进行PCR扩增,将测序正确的基因片段连接入载体pET-28a中。[结果]以黄鳝cDNA为模板,扩增出hepcidin基因片段,长度为291 bp,连接到pET-28a上。经PCR扩增、双酶切验证,证实成功构建原核表达载体。[结论]成功构建了黄鳝hepcidin基因大肠杆菌表达载体。 展开更多

关键词 黄鳝 抗菌肽 基因 原核表达载体

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日本血吸虫Mr=26×10^3谷胱甘肽S-转移酶基因植物表达载体的构建 被引量：2

12

作者 高丽丽 余新炳 +1 位作者 吴忠道 徐劲 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期536-539,共4页

【目的】构建日本血吸虫Mr=26×103谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因的植物表达载体,为研制血吸虫病口服疫苗做前期准备。【方法】采用PCR技术,扩增目的基因GST,与植物表达载体pBI121连结,构建重组表达载体pBI121-GST。【结果】通过PCR检... 【目的】构建日本血吸虫Mr=26×103谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因的植物表达载体,为研制血吸虫病口服疫苗做前期准备。【方法】采用PCR技术,扩增目的基因GST,与植物表达载体pBI121连结,构建重组表达载体pBI121-GST。【结果】通过PCR检测和双酶切鉴定以及重组质粒序列测定,结果表明,该目的基因片段已被整合到植物表达载体pBI121中,通过电激转化,将质粒转入农杆菌菌株LBA4404、EHA105中。【结论】本实验成功地构建了日本血吸虫Mr=26×103谷胱甘肽S-转移酶GST基因的植物表达载体。 展开更多

关键词 日本血吸虫 Mr=26×10^3 谷胱甘肽S-转移酶基因 植物表达载体

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抗菌肽基因工程表达载体的研究进展 被引量：3

13

作者 朱春玲 李梅 +8 位作者 刘丽 刘少龙 夏小静 王青 徐彦召 杭柏林 孙亚伟 胡建和 王磊 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期80-83,共4页

近年来,由于传统抗生素的滥用,药物残留及耐药性问题日益严重,时刻威胁着人类的健康,寻找新的抗菌药物迫在眉睫。抗菌肽是一类分子量相对较小并由基因编码核糖体合成的生物活性肽[1]。

关键词 抗菌肽 表达载体 基因工程 生物活性肽 药物残留 抗菌药物 基因编码 抗生素

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双价抗菌肽基因转化辣椒 被引量：24

14

作者 李乃坚 余小林 +3 位作者 李颖 黄自然 张银东 王得元 《热带作物学报》 CSCD 2000年第4期45-51,共7页

在建立高效快速辣椒（Ｃａｐｓｉｃｕｍ　 ａｎｎｕｕｍ　 Ｌ，）子叶离体培养和植株再生体系的基础上，将昆虫抗菌肽Ｂ、Ｄ基因构建而成的双价质粒ｐＣＤＢ－ＩＩ以农杆菌为介导转入５个辣椒栽培品种，共获得ＫａｎＲ植株１２００多株... 在建立高效快速辣椒（Ｃａｐｓｉｃｕｍ　 ａｎｎｕｕｍ　 Ｌ，）子叶离体培养和植株再生体系的基础上，将昆虫抗菌肽Ｂ、Ｄ基因构建而成的双价质粒ｐＣＤＢ－ＩＩ以农杆菌为介导转入５个辣椒栽培品种，共获得ＫａｎＲ植株１２００多株，对部分ＫａｎＲ植株进行点杂交、ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测，结果证明了外源基因被成功整合。盆栽接青枯菌试验，结果显示，转基因植株具有较强的抗病力。 展开更多

关键词 辣椒 抗菌肽 双基因表达载体 基因转化

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抗菌肽(tachyplesin Ⅰ)串联基因的构建、表达及抗菌活性 被引量：2

15

作者 谢海伟 孙兰萍 +2 位作者 王娣 许晖 郭勇 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第4期640-647,共8页

为了实现通过基因工程方法制备具有稳定结构的抗菌肽tachyplesinⅠ,采取了tachyplesinⅠ基因串联表达的方法。实验以高拷贝穿梭表达载体pSBPTQ为表达载体,通过RT-PCR扩增tachyplesinⅠ基因(tac)和采用直接退火的方法合成tachyplesinⅠ... 为了实现通过基因工程方法制备具有稳定结构的抗菌肽tachyplesinⅠ,采取了tachyplesinⅠ基因串联表达的方法。实验以高拷贝穿梭表达载体pSBPTQ为表达载体,通过RT-PCR扩增tachyplesinⅠ基因(tac)和采用直接退火的方法合成tachyplesinⅠ串联基因(2tac)。构建重组表达载体pSBPTQ-TAC和pSBPTQ-2TAC,转化到枯草杆菌WB800实现高效表达,经2%蔗糖诱导获得表达串联产物(2TAC)和TAC。通过离子交换柱层析纯化后得表达产物2TAC和TAC,2TAC经BrCN水解后,对表达产物抑菌活性分析,观察发酵液上清对大肠杆菌(E.coli K88)和伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)的抑菌圈和细胞微观形态的变化。实验结果表明:基因tac和2tac在枯草杆菌中表达成功,表达产物在发酵上清液中的含量分别约为8.25、17.36 mg L 1;表达产物TAC和2TAC对大肠杆菌K88和伤寒沙门氏菌都具有明显的抑菌作用,2TA C经BrCN水解产物抑菌活力高于TAC。 展开更多

关键词 抗菌肽tachyplesinⅠ 表达载体构建 串联基因表达 抗菌活性

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小麦GPX基因的克隆及植物表达载体构建 被引量：4

16

作者 张蕾 于永昂 +1 位作者 张明霞 胡喜贵 《贵州农业科学》 CAS 2015年第4期31-34,共4页

谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPXs)是植物体内清除活性氧的主要酶,与植物抗逆性紧密相关。为利用农杆菌介导法转化小麦以及提高小麦抗逆能力奠定基础,采用RT-PCR方法从小麦品种新麦26中克隆GPX基因的编码区序列,运用T-A... 谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPXs)是植物体内清除活性氧的主要酶,与植物抗逆性紧密相关。为利用农杆菌介导法转化小麦以及提高小麦抗逆能力奠定基础,采用RT-PCR方法从小麦品种新麦26中克隆GPX基因的编码区序列,运用T-A克隆方法克隆pGM-T载体,通过酶切、连接和转化等技术构建植物表达载体。结果表明:扩增到约为500bp的GPX基因,成功构建植物表达载体pBI121-GPX,并导入农杆菌LBA4044中。 展开更多

关键词 小麦 谷胱甘肽过氧化物酶基因 植物表达载体

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烟粉虱内共生菌传毒相关groEL基因dsRNA载体的构建及其在烟草中的表达

17

作者 唐前君 张德咏 +3 位作者 刘勇 李基光 谢丙炎 肖启明 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期620-625,共6页

烟粉虱内共生菌groEL基因编码一种与植物病毒传毒相关的GroEL蛋白.以B型烟粉虱为研究对象,利用1对特异引物,对B型烟粉虱体内的groEL基因进行PCR扩增,选取502 bp groEL基因片段构建dsRNA,并将其连接植物表达载体pBIN19,将重组质粒电激转... 烟粉虱内共生菌groEL基因编码一种与植物病毒传毒相关的GroEL蛋白.以B型烟粉虱为研究对象,利用1对特异引物,对B型烟粉虱体内的groEL基因进行PCR扩增,选取502 bp groEL基因片段构建dsRNA,并将其连接植物表达载体pBIN19,将重组质粒电激转化农杆菌菌株LBA4404.采用农杆菌浸染转化本氏烟草,PCR筛选表明,目的片段已整合至转基因植株的基因组DNA;RT-PCR结果表明,502 bp的groEL基因片段在转基因植株中被转录. 展开更多

关键词 烟粉虱 groEL基因 内共生菌 病毒结合蛋白 双生病毒 植物表达载体

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A、O型口蹄疫T/B细胞多抗原表位融合基因植物表达载体的构建

18

作者 谭昕 肖旭倩 +3 位作者 言普 沈文涛 王亚 周鹏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期172-175,共4页

通过对(pMD-xsB/xsT/xsBT/xsBTT)4个克隆载体进行PCR,在(xsB/xsT/xsBT/xsBTT)目的基因前接入引导肽序列(用Y表示),克隆中间载体(pMD-xsYB/xsYT/xsYBT/xsYBTT),再利用同尾酶的酶切及连接得到4个重组植物表达载体(pB I-xsYB/xsYT/xsYBT/xs... 通过对(pMD-xsB/xsT/xsBT/xsBTT)4个克隆载体进行PCR,在(xsB/xsT/xsBT/xsBTT)目的基因前接入引导肽序列(用Y表示),克隆中间载体(pMD-xsYB/xsYT/xsYBT/xsYBTT),再利用同尾酶的酶切及连接得到4个重组植物表达载体(pB I-xsYB/xsYT/xsYBT/xsYBTT)。经限制性酶切鉴定和测序分析证实表达载体构建正确,为下一步热研2号柱花草转基因植株的获得奠定了基础。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 多表位融合基因 引导肽序列 植物表达载体

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鲎抗菌肽polyphemusinⅡ基因的改造、克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：5

19

作者 张钫 郑伟 韩文瑜 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2005年第B06期31-34,共4页

中国鲎(Tachypleus trideutatus)血细胞产生的抗菌肽(Antibacterial peptide)—鲎素,具有广谱的杀菌、抑病毒和抗肿瘤细胞的作用。实验根据已报道的美洲鲎的抗菌肽polyphemusinⅡ氨基酸序列,设计了一对引物,并对原抗菌肽基因进行改造,... 中国鲎(Tachypleus trideutatus)血细胞产生的抗菌肽(Antibacterial peptide)—鲎素,具有广谱的杀菌、抑病毒和抗肿瘤细胞的作用。实验根据已报道的美洲鲎的抗菌肽polyphemusinⅡ氨基酸序列,设计了一对引物,并对原抗菌肽基因进行改造,在基因开放阅读框末端添加了Asn密码子,使抗菌肽羧基末端酰胺化,旨在提高其稳定性和抗菌活性。PCR扩增获得改造过的目的片段,连接于载体pMD18-T,测序后,与pEI-28c(+)连接,构建表达质粒pET28c-rr,测序鉴定正确后,转化大肠杆菌E.coli.BK21(DE3)。表达菌株经终浓度为1mmol/L的IPTG诱导后以包涵体的形式表达,在体外表现出明显的抑菌活性。 展开更多

关键词 改造 大肠杆菌E.coli Ⅱ基因 克隆 氨基酸序列 抗菌肽基因 开放阅读框 PCR扩增 肿瘤细胞 抗菌活性 表达质粒 抑菌活性 中国鲎 血细胞 密码子 Asn 酰胺化 稳定性 包涵体 连接 测序 引物 载体

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以莱茵衣藻为载体表达外源抗菌肽的研究 被引量：2

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作者 赵艳苹 李小燕 +2 位作者 彭婷婷 黄开耀 王高鸿 《水生态学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第3期106-113,共8页

将黑水虻抗菌肽基因sarcotoxin3转入到莱茵衣藻细胞中,以期实现抗菌肽活性片段的大规模表达生产,为将来完成抗菌肽的临床测试及水产应用奠定实验基础。以质粒pHK85为骨架,插入荧光素酶基因和黑水虻抗菌肽sarcotoxin3基因,用DNA连接酶将... 将黑水虻抗菌肽基因sarcotoxin3转入到莱茵衣藻细胞中,以期实现抗菌肽活性片段的大规模表达生产,为将来完成抗菌肽的临床测试及水产应用奠定实验基础。以质粒pHK85为骨架,插入荧光素酶基因和黑水虻抗菌肽sarcotoxin3基因,用DNA连接酶将质粒连接,构成抗菌肽质粒。抗菌肽质粒经克隆、提取、酶切线性化、衣藻玻璃珠转化、荧光素酶活性筛选和抑菌实验,结果表明:经过测序进一步确认质粒成功构建,碱基序列与所设计质粒序列一致,质粒浓度472.8 ng/μL、纯度(A_(260)/A_(280))1.93,7 d后每个巴龙霉素平板长有单克隆约200个,大多数单克隆荧光素酶活力值可高达10^(6),少数单克隆荧光值甚至可达10^(8);藻株在26 kDa附近出现了特异信号,含有抗菌肽的蛋白对大肠杆菌DH5α有一定的抑制作用。莱茵衣藻可以作为抗菌肽外源表达的一种载体,为抗菌肽的大量生产提供了一种可能。 展开更多

关键词 抗菌肽 莱茵衣藻 基因表达 载体

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