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双价抗病基因植物表达载体构建及在烟草中表达的初步研究 被引量:4
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作者 陈英 戴咏梅 +2 位作者 黄敏仁 诸葛强 王明庥 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第5期81-85,共5页
多基因转化是基因工程研究热点之一。本研究应用DNA重组技术,将两个抗病机制不同,抗菌谱较广的抗病基因(天麻抗真菌蛋白GAFP和兔防御素NP1基因)构建在一个植物表达载体pBin35SGAFP-NP1上,两者具有各自的CaMV35S启动子和Nos终止子。通过... 多基因转化是基因工程研究热点之一。本研究应用DNA重组技术,将两个抗病机制不同,抗菌谱较广的抗病基因(天麻抗真菌蛋白GAFP和兔防御素NP1基因)构建在一个植物表达载体pBin35SGAFP-NP1上,两者具有各自的CaMV35S启动子和Nos终止子。通过根癌农杆菌介导,采用叶盘法转化烟草,PCR和PCR-Southern分析证明已将NP1和GAFP基因整合到烟草基因组中。离体抑菌实验表明转基因植株对真菌和细菌表现出一定的抗性。以上结果表明通过该表达载体进行遗传转化可获得含双价抗病基因植物,并能有效表达,提高转基因植物抗病能力。 展开更多
关键词 防御素基因NP1 天麻抗真菌蛋白基因翻肿 双价抗病基因植物表达载体 基因烟草 抗病
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双价抗虫基因植物表达载体的构建 被引量:16
2
作者 张志云 张虎生 +1 位作者 孙毅 梁爱华 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第8期1402-1408,共7页
将蝎毒基因BmKITS和几丁质酶基因chitinase2个抗虫基因采用不同的启动子ubi或35S,连到2个高效的植物表达载体pWM101和pBI101中,2个重组表达质粒分别经过限制性酶切分析和PCR鉴定,实验结果表明2个含有双价抗虫基因的植物重组表达质粒均... 将蝎毒基因BmKITS和几丁质酶基因chitinase2个抗虫基因采用不同的启动子ubi或35S,连到2个高效的植物表达载体pWM101和pBI101中,2个重组表达质粒分别经过限制性酶切分析和PCR鉴定,实验结果表明2个含有双价抗虫基因的植物重组表达质粒均已构建成功. 展开更多
关键词 蝎毒基因 几丁质酶基因 植物表达载体 PGR鉴定
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大豆抗病相关基因SR1正反义植物表达载体的构建及遗传转化研究 被引量:3
3
作者 林世锋 张淑珍 +3 位作者 杨秀红 陈庆山 杨庆凯 李文滨 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期90-94,共5页
实验构建了CaMV35S启动子控制下的大豆抗病相关基因SR1的正反义植物双元表达载体pBISR1(+)和pBISR1(-)。通过根癌农杆菌叶盘转化法,将正义和反义SR1 基因导入烟草Ha vana 425,经卡那霉素筛选,获得了抗性植株。经PCR和PCR-Southern印迹分... 实验构建了CaMV35S启动子控制下的大豆抗病相关基因SR1的正反义植物双元表达载体pBISR1(+)和pBISR1(-)。通过根癌农杆菌叶盘转化法,将正义和反义SR1 基因导入烟草Ha vana 425,经卡那霉素筛选,获得了抗性植株。经PCR和PCR-Southern印迹分析,证明抗性植株中整和了SR1基因,RT-PCR分析进一步表明正义和反义基因皆能转录为完整的mRNA,经疫霉根腐接种及抗病性鉴定表明,转反义基因株系和未转基因株系均轻微感病,而转正义基因株系始终没有出现感病症状。 展开更多
关键词 抗病相关基因 反义植物表达载体 遗传转化 构建 大豆 双元表达载体 35S启动子 抗性植株 反义基因 PCR分析 抗病性鉴定 CaMV 基因导入 卡那霉素 mRNA 正义基因 转化法 株系 基因 感病 根癌 烟草 接种 根腐 疫霉
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Chi-linker-Glu融合基因双价植物表达载体的构建及其相关鉴定 被引量:3
4
作者 贾小霞 张金文 +1 位作者 王汉宁 吴文俊 《兰州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期34-38,共5页
将木霉几丁质酶基因Chi和β-1,3-葡聚糖酶基因Glu通过8个中性氨基酸连接起来,形成Chi- linker-Glu融合基因.其中编码区基因长2376 bp,共编码792个氨基酸和一个终止子.将该融合基因克隆到中间载体pAHC25中,然后将整个ubi-chi-linker-glu-... 将木霉几丁质酶基因Chi和β-1,3-葡聚糖酶基因Glu通过8个中性氨基酸连接起来,形成Chi- linker-Glu融合基因.其中编码区基因长2376 bp,共编码792个氨基酸和一个终止子.将该融合基因克隆到中间载体pAHC25中,然后将整个ubi-chi-linker-glu-nos表达盒插入用ubi-bar-nos表达盒代替CaMV35S-gus-nos的高效植物表达载体pBI121中,构建了双价抗真菌基因的重组质粒pBIb-CG,并通过根癌农杆菌介导,采用叶盘法转化烟草.PCR扩增和PCR-Southern分析证明已将Chi-linker- Glu融合基因整合到烟草基因组中. 展开更多
关键词 融合基因 几丁质酶基因 Β-1 3-葡聚糖酶基因 植物表达载体
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纤维素酶基因(BGLⅠ、CBHⅡ)与DREB1A基因双价植物表达载体的构建 被引量:1
5
作者 吕明 李杰 +2 位作者 柏锡 才华 朱延明 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第5期619-623,共5页
本研究以pAHC17、pCD29A质粒为基础,分别构建了玉米泛蛋白(Ubi)启动子调控的纤维素酶基因(BGLⅠ、CBHⅡ)与rd29A启动子调控的DREB1A基因的双价植物表达载体pBDB,pBDC。其植物选择标记基因为乙酰CoA转移酶基因(BAR),该载体适用于单子叶... 本研究以pAHC17、pCD29A质粒为基础,分别构建了玉米泛蛋白(Ubi)启动子调控的纤维素酶基因(BGLⅠ、CBHⅡ)与rd29A启动子调控的DREB1A基因的双价植物表达载体pBDB,pBDC。其植物选择标记基因为乙酰CoA转移酶基因(BAR),该载体适用于单子叶植物的遗传转化。并通过冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404中,为利用农杆菌介导法进行BGLⅠ,CBHⅡ和DREB1A基因对单子叶植物的基因工程研究奠定了基础。 展开更多
关键词 BGL I基因 CBHlI基因 DREBlA基因 植物表达载体
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含VHb基因和GFMcryIA基因的双价基因植物高效表达载体的构建 被引量:1
6
作者 王友如 崔洪志 郭三堆 《武汉植物学研究》 CSCD 北大核心 2007年第2期118-122,共5页
将人工合成的、密码子优化后的透明颤菌血红蛋白基因与人工合成的GFMcryIA基因构建成双价基因植物高效表达载体PGBI4ASVHBBt,vgbM基因表达盒中含2个增强子的35S启动子、Ω前导序列、Kozak序列、多联终止密码子及Nos终止子;Bt基因表达盒... 将人工合成的、密码子优化后的透明颤菌血红蛋白基因与人工合成的GFMcryIA基因构建成双价基因植物高效表达载体PGBI4ASVHBBt,vgbM基因表达盒中含2个增强子的35S启动子、Ω前导序列、Kozak序列、多联终止密码子及Nos终止子;Bt基因表达盒中,除含有以上提高转录和翻译的调控元件外,还包含有正确切割、加工序列、Poly(A)信号序列。利用根癌农杆菌介导转化烟草,获得了转基因植株;PCR及Southern blot检测,证实了双价基因在烟草基因组中的整合;Western blot检测证实了vgbM基因在转基因烟草中的表达;杀虫实验表明GFMcryIA基因也表达出活性毒蛋白。 展开更多
关键词 双价基因 表达载体 抗虫性 活性蛋白
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大麦核糖体失活蛋白基因与天花粉蛋白基因双价植物表达载体的构建
7
作者 齐岩 李杰 +1 位作者 朱延明 柏锡 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第1期28-32,共5页
大麦核糖体失活蛋白(B-RIP)和天花粉蛋白(TCS)均具有广谱抗病毒作用,研究构建了分别由2×CaMV35S启动子调控的大麦核糖体失活基因(rip)和天花粉蛋白基因(tcs)双价植物表达载体pABTR,其植物选择标记为新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ),... 大麦核糖体失活蛋白(B-RIP)和天花粉蛋白(TCS)均具有广谱抗病毒作用,研究构建了分别由2×CaMV35S启动子调控的大麦核糖体失活基因(rip)和天花粉蛋白基因(tcs)双价植物表达载体pABTR,其植物选择标记为新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ),适用于双子叶植物的遗传转化。并通过三亲本杂交法将重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404中,为通过农杆菌介导法将双价基因导入植物,培育理想的抗病毒转基因植物奠定基础。 展开更多
关键词 双价植物表达栽体 rip基因 tes基因 2x CaMV35S启动子
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中国水仙NtBCH基因的克隆及LCYE RNAi与反义BCH双价植物表达载体的构建 被引量:3
8
作者 廖正平 郑益平 +2 位作者 罗鹏 吴雪琴 曾黎辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第12期2382-2390,共9页
参考洋水仙BCH基因设计引物,以中国水仙花瓣cDNA为模板克隆出中国水仙NtBCH基因,全长959 bp,编码303个氨基酸。以中国水仙LCYE和BCH为目的基因,利用pKANNBIAL、pBI121和pCAMBIA1301等载体构建了LCYE RNAi与反义BCH双价植物表达载体,为... 参考洋水仙BCH基因设计引物,以中国水仙花瓣cDNA为模板克隆出中国水仙NtBCH基因,全长959 bp,编码303个氨基酸。以中国水仙LCYE和BCH为目的基因,利用pKANNBIAL、pBI121和pCAMBIA1301等载体构建了LCYE RNAi与反义BCH双价植物表达载体,为利用基因工程技术改良中国水仙奠定了基础。 展开更多
关键词 中国水仙 LCYE基因 BCH基因 反义技术 RNAI 双价植物表达载体
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NPR1和Defensin双价抗病基因过量表达载体构建及其对沙田柚的遗传转化 被引量:1
9
作者 穆一帆 钟广炎 +5 位作者 高峰 钟云 胡敏伦 闫化学 姜波 吴波 《华南师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2017年第6期60-64,共5页
通过PCR技术,从克里曼丁橘和荔枝品种"三月红"叶片中克隆获得了NPR1和Defensin基因序列.以p BI-121作为载体骨架,构建了NPR1和Defensin双价抗病基因过量表达载体,命名为ND-p BI121.通过根癌农杆菌介导的遗传转化,获得了6株PC... 通过PCR技术,从克里曼丁橘和荔枝品种"三月红"叶片中克隆获得了NPR1和Defensin基因序列.以p BI-121作为载体骨架,构建了NPR1和Defensin双价抗病基因过量表达载体,命名为ND-p BI121.通过根癌农杆菌介导的遗传转化,获得了6株PCR检测为阳性的双抗沙田柚植株,为探究NPR1和Defensin基因的过量表达对柑橘黄龙病的抗性影响提供试材. 展开更多
关键词 抗病基因 表达载体 柑橘黄龙病 遗传转化 沙田柚
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多基因植物表达载体的构建 被引量:13
10
作者 冯道荣 邱国华 +2 位作者 许新萍 刘秋云 李宝健 《西北植物学报》 CAS CSCD 2001年第4期609-614,共6页
将功能互补的抗真菌病基因或抗虫基因共同转化水稻植株 ,可望获得既抗病又抗虫的转基因水稻植株。马铃薯蛋白酶抑制剂 基因 Pin ,苏云金杆菌毒蛋白 Cry ( b)基因 B.t.,以及 PPT乙酰转移酶基因 bar构建在一个载体上。水稻碱性几丁质酶基... 将功能互补的抗真菌病基因或抗虫基因共同转化水稻植株 ,可望获得既抗病又抗虫的转基因水稻植株。马铃薯蛋白酶抑制剂 基因 Pin ,苏云金杆菌毒蛋白 Cry ( b)基因 B.t.,以及 PPT乙酰转移酶基因 bar构建在一个载体上。水稻碱性几丁质酶基因 RC2 4与大麦核糖体失活蛋白基因 B- RIP构建在另一个载体上。两载体共同转化水稻植株的工作正在进行之中。 展开更多
关键词 PinⅡ B.t RC24 B-RIP 植物 表达载体 基因 基因表达 抗病抗虫性
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植物基因工程表达载体的改进和优化策略 被引量:55
11
作者 侯丙凯 夏光敏 陈正华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期492-497,共6页
外源基因在转基因植物中表达效率低一直是令相关研究者困扰的一个问题。转基因植物的生物安全性最近在全球范围内开始引起世人的担忧。本文简要介绍了近年来在植物表达载体构建方面所采用的一些新策略 ,这些策略有助于增强外源基因的表... 外源基因在转基因植物中表达效率低一直是令相关研究者困扰的一个问题。转基因植物的生物安全性最近在全球范围内开始引起世人的担忧。本文简要介绍了近年来在植物表达载体构建方面所采用的一些新策略 ,这些策略有助于增强外源基因的表达水平、提高生物工程体的安全性。 展开更多
关键词 植物 基因 表达载体 优化 改进
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DREB1A基因植物表达载体的构建 被引量:23
12
作者 李杰 李晶 +4 位作者 朱延明 张晶 代翠红 纪巍 才华 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第2期199-204,共6页
以 p Bch质粒为基础 ,构建了分别由 35 s启动子、 rd2 9A启动子调控的 DREB1A基因双子叶植物表达载体p BD35 s、p BD2 9A,其植物选择标记为新霉素磷酸转移酶基因 (N PT ) ,适用于双子叶植物的遗传转化。以 p CU质粒为基础 ,构建了分别由... 以 p Bch质粒为基础 ,构建了分别由 35 s启动子、 rd2 9A启动子调控的 DREB1A基因双子叶植物表达载体p BD35 s、p BD2 9A,其植物选择标记为新霉素磷酸转移酶基因 (N PT ) ,适用于双子叶植物的遗传转化。以 p CU质粒为基础 ,构建了分别由 E12启动子、 rd2 9A启动子调控的 DREB1A基因单子叶植物表达载体 p CDE12、p CD2 9A,其植物选择标记为乙酰 Co A转移酶基因 (bar) ,适用于单子叶植物的遗传转化。并分别通过三亲本杂交法和冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌 L BA4 4 0 4中 ,为通过农杆菌介导法将 展开更多
关键词 DREBlA基因 植物表达载体 基因构建 生长发育 水分胁迫 植株表现
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香石竹ACC氧化酶基因的克隆与植物表达载体构建 被引量:15
13
作者 余义勋 张俊卫 +1 位作者 孙振元 包满珠 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2002年第3期256-260,共5页
根据已发表的ACO核苷酸序列 ,设计一对引物 ,以香石竹品种‘American’基因组DNA为模板 ,扩增出香石竹ACC氧化酶基因 ,将其连接到pMD18加T质粒载体上 ,通过中间载体pBluescriptSK ,构建了ACO基因正向和反向插入的植物表达载体 ,并将其... 根据已发表的ACO核苷酸序列 ,设计一对引物 ,以香石竹品种‘American’基因组DNA为模板 ,扩增出香石竹ACC氧化酶基因 ,将其连接到pMD18加T质粒载体上 ,通过中间载体pBluescriptSK ,构建了ACO基因正向和反向插入的植物表达载体 ,并将其导入了农杆菌。酶切检测表明该片段已插入表达载体 ,序列测定结果显示所克隆基因片段含 3个外显子 ,2个内含子 ,其中 展开更多
关键词 植物表达载体 香石竹 ACC氧化酶 基因克隆 重组载体
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细胞质雄性不育相关基因orf224的克隆及其植物表达载体的构建 被引量:16
14
作者 王永飞 马三梅 +2 位作者 张鲁刚 王鸣 郑学勤 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2002年第4期9-12,共4页
利用 PCR技术从油菜 Polim a不育系中扩增出细胞质雄性不育相关基因 orf 2 2 4 ,并将其克隆到p GEM- T Easy载体上得到重组质粒 p GEMORF。在此基础上 ,用限制性内切酶将 orf 2 2 4基因从质粒 p GEMORF上切下 ,连接在 p BI12 1质粒的 Ca... 利用 PCR技术从油菜 Polim a不育系中扩增出细胞质雄性不育相关基因 orf 2 2 4 ,并将其克隆到p GEM- T Easy载体上得到重组质粒 p GEMORF。在此基础上 ,用限制性内切酶将 orf 2 2 4基因从质粒 p GEMORF上切下 ,连接在 p BI12 1质粒的 Ca MV 35 S启动子和 NOS终止子之间。经 PCR和酶切鉴定 ,得到了 orf 2 2 4基因的植物表达载体 p 展开更多
关键词 细胞质 雄性不育 相关基因 orf224 克隆 植物 表达载体
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梭梭CMO基因的克隆与植物表达载体的构建 被引量:11
15
作者 石磊 甘晓燕 +3 位作者 夏兴雷 陈虞超 李苗 宋玉霞 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1514-1519,共6页
采用RT-PCR、RACE等方法从超旱生耐盐植物梭梭(Haloxylon ammodendron)中扩增出甜菜碱合成过程中的限速酶胆碱单加氧酶(CMO)编码基因的cDNA序列(命名为HaCMO),其开放阅读框为1 344 bp,推测的氨基酸序列全长为447个氨基酸残基.根... 采用RT-PCR、RACE等方法从超旱生耐盐植物梭梭(Haloxylon ammodendron)中扩增出甜菜碱合成过程中的限速酶胆碱单加氧酶(CMO)编码基因的cDNA序列(命名为HaCMO),其开放阅读框为1 344 bp,推测的氨基酸序列全长为447个氨基酸残基.根据已获得的开放阅读框,构建重组植物表达载体pCAMBIA2300-HaCMO.HaCMO核苷酸序列与藜科几种盐生植物如菠菜(Spinacia oleracea)、山菠菜(Atriplex hortensis)、辽宁碱蓬(Suaeda liaotungensis)、盐角草(Salicornia europaea)和甜菜(Beta vulgaris)等的一致性均在74.5%以上,推导编码蛋白的氨基酸序列一致性均在73.5%以上,表明CMO编码基因在藜科植物中是一种比较保守的基因.研究结果为进一步从分子水平探明梭梭的抗旱、耐盐机制,挖掘并利用植物抗逆基因奠定了基础. 展开更多
关键词 梭梭 胆碱单加氧酶 基因克隆 植物表达载体
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植物抗病性信号传导调控基因的克隆与表达检测方法的研究 被引量:8
16
作者 董宏平 彭建令 +3 位作者 余晓江 赵静 王颖 董汉松 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期30-35,共6页
建立了从不同植物中克隆抗病性信号传导调控基因及检测其表达的方法 ,并优化了相关条件。用RT PCR和PCR方法从拟南芥、烟草、番茄、中华鳖中克隆了 7个信号传导通路中 18个调控基因的cDNA和DNA序列 ,它们分别是 :抗病基因Pto介导的蛋白... 建立了从不同植物中克隆抗病性信号传导调控基因及检测其表达的方法 ,并优化了相关条件。用RT PCR和PCR方法从拟南芥、烟草、番茄、中华鳖中克隆了 7个信号传导通路中 18个调控基因的cDNA和DNA序列 ,它们分别是 :抗病基因Pto介导的蛋白激酶级联中的Pti4、Pti5和Pti6 ,细胞编程死亡通路中的Hin1和hsr2 0 3,水杨酸介导的系统性获得抗病性通路中的NPR1,乙烯信号通路中的ETR1、ERS1、CTR1、EIN2和ERF1,茉莉酸信号通路中的COI1,核黄素信号通路中的RFBP和LR ,脱落酸信号通路中的ABF3、ABF4和ABH1,以及调控不同信号通路的通调基因NDR1。进一步研究了这些基因表达的定量测定方法 :用细菌激发子harpinEa处理植物 ,提取RNA作为cDNA第1链合成的模板 ,以在真核生物中广泛同源和高度保守的细胞伸长翻译因子基因EF1α为内参 ,用半定量RT PCR法测定基因mRNA的积累 ,可以比较准确地检测不同基因的相对表达水平。 展开更多
关键词 植物 抗病 信号传导 调控基因 基因克隆 基因表达 检测方法 半定量RT-PCR
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Cu/Zn-SOD基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达 被引量:11
17
作者 姚冉 李轶女 +2 位作者 张志芳 沈桂芳 潘沈元 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期78-82,共5页
为研究Cu/Zn-SOD基因在提高转基因植物抗逆性方面的作用,从一株地热芽孢杆菌(Geobacillus)中克隆得到Cu/Zn-SOD基因,以pZP211质粒为表达载体,构建了植物表达载体pZP211-Cu/ZnSOD,并通过农杆菌介导对烟草进行遗传转化。经PCR检测证明已... 为研究Cu/Zn-SOD基因在提高转基因植物抗逆性方面的作用,从一株地热芽孢杆菌(Geobacillus)中克隆得到Cu/Zn-SOD基因,以pZP211质粒为表达载体,构建了植物表达载体pZP211-Cu/ZnSOD,并通过农杆菌介导对烟草进行遗传转化。经PCR检测证明已获得转Cu/Zn-SOD基因的烟草。进而测定转基因烟草的SOD活力,结果表明Cu/Zn-SOD基因在烟草中高效表达。对转基因烟草进行耐盐性检测,证明Cu/Zn-SOD基因确实能够提高烟草对盐胁迫的耐受性。 展开更多
关键词 CU Zn-SOD基因 植物表达载体 基因烟草
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抗真菌和抗除草剂基因多价植物表达载体构建及对烟草遗传转化的研究 被引量:12
18
作者 贾小霞 张金文 +2 位作者 王汉宁 马怀义 梁慧光 《草业学报》 CSCD 北大核心 2009年第1期86-93,共8页
利用基因重组技术,将木霉几丁质酶基因(Chi)和-β1,3-葡聚糖酶基因(Glu)进行融合并将其引入含bar基因的载体pAHC25中,成功构建了由Ubiquitin启动子分别驱动Chi-linker-Glu和bar的中间载体,然后将其上的Ubi-Chi-linker-Glu-nos和Ubi-bar-... 利用基因重组技术,将木霉几丁质酶基因(Chi)和-β1,3-葡聚糖酶基因(Glu)进行融合并将其引入含bar基因的载体pAHC25中,成功构建了由Ubiquitin启动子分别驱动Chi-linker-Glu和bar的中间载体,然后将其上的Ubi-Chi-linker-Glu-nos和Ubi-bar-nos表达盒引入pBI121中,获得兼具除草剂抗性基因bar和真菌抗性基因Chi与Glu的三价植物表达载体pBIb-CG,并对烟草进行遗传转化,经PCR及Southern检测,共获得转基因烟草32株。外源基因已整合到烟草基因组中。离体抑菌试验表明转基因烟草叶片提取液对木霉菌和镰刀菌表现出一定的抗性。 展开更多
关键词 融合基因 几丁质酶 β—1 3葡聚糖酶 BAR基因 植物表达载体
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甜瓜ACC氧化酶反义基因植物表达载体的构建及转化烟草的研究 被引量:10
19
作者 黄永红 陶兴林 +1 位作者 陆璐 赵长增 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期262-268,共7页
用限制性内切酶从目的基因供体质粒pBI-aACO1上切下大小约2.3kb的目的基因,将其定向连接在受体质粒pCAMBIA2301载体上,构建成含有GUS基因的甜瓜ACC氧化酶反义基因植物表达载体pCB-aACO1.采用直接转化法将pCB-aACO1导入根癌农杆菌菌株EHA... 用限制性内切酶从目的基因供体质粒pBI-aACO1上切下大小约2.3kb的目的基因,将其定向连接在受体质粒pCAMBIA2301载体上,构建成含有GUS基因的甜瓜ACC氧化酶反义基因植物表达载体pCB-aACO1.采用直接转化法将pCB-aACO1导入根癌农杆菌菌株EHA105,并用新构建的工程菌对普通烟草进行了遗传转化研究.在Kanamycin选择压力下获得的烟草转化不定芽和完整植株,经过GUS基因组织化学法检测以及PCR方法鉴定,证实了该反义基因已导入烟草基因组中.此项研究为下一阶段用该反义基因转化甜瓜品种以改良甜瓜果实耐贮运性打下基础. 展开更多
关键词 甜瓜 ACC氧化酶 反义基因 植物表达载体 转化
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石斛兰dfr基因植物表达载体的构建 被引量:7
20
作者 潘丽晶 范干群 +2 位作者 张妙彬 肖杨 曹友培 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期71-75,共5页
石斛兰花瓣缺乏橙色、蓝色,这与其二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)活性有着密切的关系。根据已报道的石斛兰dfr基因序列设计引物,从Den.Burana Emerald中分离了dfr基因。将该基因序列正向与反向连接到植物表达载体... 石斛兰花瓣缺乏橙色、蓝色,这与其二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)活性有着密切的关系。根据已报道的石斛兰dfr基因序列设计引物,从Den.Burana Emerald中分离了dfr基因。将该基因序列正向与反向连接到植物表达载体pCAM BIA1301中,并由组成型启动子CaMV35S驱动,成功构建了dfr基因的正义和反义植物表达载体pC-SDN1和pCSDN2,并导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefacien)EHA105,以期利用转基因技术培育出石斛兰花色新品种。 展开更多
关键词 石斛兰 dfr基因 正义 反义 植物表达载体
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