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抗转铁蛋白受体双价抗体的构建、表达及鉴定被引量：2: 1; 作者肖代雯朱慧芬 +6 位作者沈昕邢薇黄宇雷萍黄韬王国斌沈关心《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期59-61,共3页; 目的:抗转铁蛋白受体(TfR)双价抗体(bsFv)构建、表达及其与细胞结合的活性鉴定。方法:以抗TfR的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI,通过PCR方法扩增两条scFv片段,将其连接并克隆至原核表达载体pAB1,转化... 展开更多; 关键词转铁蛋白受体单链抗体双价抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

肝癌细胞特异性结合双价抗体的构建表达与鉴定被引量：1: 2; 作者黄宇余冰 +8 位作者邢薇沈昕肖代雯刁智娟刘静代维赵晓蓉雷萍沈关心《医药导报》 CAS 2006年第7期642-645,共4页; 目的构建和表达与肝癌细胞特异结合的双价单链抗体(bivalentsingle-chainFv,BsFv),并鉴定该双价抗体的生物活性。方法以与肝癌细胞特异结合的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI,通过聚合酶链反应(PCR)方... 展开更多; 关键词单链抗体肝癌细胞双价抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

抗人CD86双价抗体的表达及与抗原的结合特性: 3; 作者王志强安萌 +5 位作者朱华亭孔永王婧韩莲花夏永洁邱玉华《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1173-1176,共4页; 目的:用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达抗人CD86双价抗体(CD86-diabody),鉴定该抗体对表达CD86分子肿瘤细胞的识别及介导的生物学效应。方法:从分泌抗人CD86小鼠源抗体的杂交瘤1D1中克隆抗体重、轻链可变区基因VH及VL。SOE-PCR构建VH-(GGGGS... 展开更多; 关键词人CD86 CHO细胞双价抗体抑制增殖; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性双价纳米抗体原核表达及活性鉴定被引量：4: 4; 作者王长江曲光刚 +4 位作者武曰星郭广君韩强赵中伟沈志强《动物医学进展》北大核心 2021年第3期7-11,共5页; 以猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白VHH_(cap)基因为模板,通过PCR分别克隆下游片段VHH_(down)和带(G_(4)S)_(3)-linker接头序列的上游片段VHH_(up),通过两步酶切连接反应,将VHH_(down)片段插入到pCold-SUMO载体中构建VHH_(down)-pCold-SUMO... 展开更多; 关键词猪圆环病毒2型 CAP蛋白双价纳米抗体原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

人源性抗地高辛单链抗体(scFv)及diabody的获取: 5; 作者陈宇萍张国民 +4 位作者乔媛媛王刚刘玉峰化冰王琰《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期710-713,共4页; 目的:从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗地高辛单链抗体(scFv),并构建双价抗体(diabody)。方法:以固相化的Dig对构建的大容量噬菌体抗体库进行筛选,4轮后挑取集落,用ELISA法鉴定其特异性,并对抗Dig阳性抗体基因进行DNA指纹分析及测序... 展开更多; 关键词噬菌体抗体库地高辛单链抗体双价抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名抗转铁蛋白受体双价抗体的构建、表达及鉴定被引量：2: 1; 作者肖代雯朱慧芬沈昕邢薇黄宇雷萍黄韬王国斌沈关心; 机构四川省人民医院检验科华中科技大学同济医学院; 出处《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期59-61,共3页; 基金 "863"国家高新技术发展计划(2006AA02Z158) 教育部博士点专项资金(20060487024) 湖北省十一五重大科技攻关项目(2006AA301A05)资助; 文摘目的:抗转铁蛋白受体(TfR)双价抗体(bsFv)构建、表达及其与细胞结合的活性鉴定。方法:以抗TfR的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI,通过PCR方法扩增两条scFv片段,将其连接并克隆至原核表达载体pAB1,转化大肠杆菌TG1,阳性菌经IPTG诱导表达,FCM检测bsFv与K562,HepG2肿瘤细胞结合的活性及特异性。结果:酶切鉴定及DNA测序证明该bsFv构建成功;SDS-PAGE、Western blot鉴定表明表达蛋白分子量与bsFv理论值一致;FCM结果证明bsFv可与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合,且结合的阳性率较scFv有所提高。结论:成功构建了抗转TfR的bsFv,且能与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合。; 关键词转铁蛋白受体单链抗体双价抗体; Keywords Transferrin receptor Single chain variable fragment Bivalent scFv; 分类号 R392.11 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名肝癌细胞特异性结合双价抗体的构建表达与鉴定被引量：1: 2; 作者黄宇余冰邢薇沈昕肖代雯刁智娟刘静代维赵晓蓉雷萍沈关心; 机构华中科技大学同济医学院免疫学系; 出处《医药导报》 CAS 2006年第7期642-645,共4页; 基金国家重点基础研究发展计划基金资助(基金编号:2002CB513109); 文摘目的构建和表达与肝癌细胞特异结合的双价单链抗体(bivalentsingle-chainFv,BsFv),并鉴定该双价抗体的生物活性。方法以与肝癌细胞特异结合的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI,通过聚合酶链反应(PCR)方法扩增出两个scFv片段,将其连入原核表达载体pAB1;构建的表达载体转化大肠埃希菌TG1,挑取单克隆细菌进行扩增,提取质粒酶切、测序鉴定。阳性菌经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE,Westernblot鉴定,间接免疫荧光流式细胞术(FACS)测定与肝癌细胞特异结合的特性。结果经酶切鉴定以及DNA测序结果表明该BsFv构建成功,SDS-PAGE、Westernblot鉴定表明表达蛋白相对分子量与BsFv理论值一致,且表达产物同亲本scFv比较,与肝癌细胞特异结合活性增强。结论BsFv构建成功,BsFv较scFv具有明显优势,为其用于临床肿瘤的诊断和治疗奠定了基础。; 关键词单链抗体肝癌细胞双价抗体; Keywords Single-chain variable fragment Liver cancer ceils Bivalent scFv; 分类号 R966 [医药卫生—药理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名抗人CD86双价抗体的表达及与抗原的结合特性: 3; 作者王志强安萌朱华亭孔永王婧韩莲花夏永洁邱玉华; 机构苏州大学医学部免疫学系; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1173-1176,共4页; 基金苏州市科技计划项目(SYS201104) 科技部科技重大专项(2009ZX09103-705); 文摘目的:用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达抗人CD86双价抗体(CD86-diabody),鉴定该抗体对表达CD86分子肿瘤细胞的识别及介导的生物学效应。方法:从分泌抗人CD86小鼠源抗体的杂交瘤1D1中克隆抗体重、轻链可变区基因VH及VL。SOE-PCR构建VH-(GGGGS)-VL双价抗体基因,整合到真核表达载体pIRES2-EGFP中,脂质体法转染CHO细胞,FCM筛选G418加压培养的阳性克隆。IMAC纯化并定量抗体。免疫荧光法分析抗体对人B系淋巴瘤细胞株Raji及Daudi膜型CD86分子的阳性结合率,将抗体加入到Raji细胞的培养体系中,培养72 h,MTT法分析抗体对细胞体外增殖的影响。结果:获得了稳定分泌抗人CD86-diabody的CHO细胞株。培养上清中抗体纯品的得率为5.24 mg/L。抗体与Raji及Daudi细胞的阳性结合率分别为77.2%及70.6%。经抗体孵育72 h,Raji细胞体外增殖抑制率为37%。结论:成功制备了抗人CD86-diabody,可特异性结合细胞膜型CD86分子,并对表达该分子的肿瘤细胞体外增殖具有抑制效应。; 关键词人CD86 CHO细胞双价抗体抑制增殖; Keywords human CD86 CHO cell diabody proliferationinhibition; 分类号 R392.1 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性双价纳米抗体原核表达及活性鉴定被引量：4: 4; 作者王长江曲光刚武曰星郭广君韩强赵中伟沈志强; 机构山东省滨州畜牧兽医研究院山东绿都生物科技有限公司; 出处《动物医学进展》北大核心 2021年第3期7-11,共5页; 基金山东省自然科学基金项目(ZR2018PC027) 山东省重点研发计划项目(2017JHZ007)。; 文摘以猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白VHH_(cap)基因为模板,通过PCR分别克隆下游片段VHH_(down)和带(G_(4)S)_(3)-linker接头序列的上游片段VHH_(up),通过两步酶切连接反应,将VHH_(down)片段插入到pCold-SUMO载体中构建VHH_(down)-pCold-SUMO重组质粒,再将VHH_(up)片段插入到构建成功的VHH_(down)-pCold-SUMO重组质粒中,构建双价单特异性纳米抗体原核重组表达质粒biVHH_(cap)-pCold-SUMO,转化宿主菌E.coli BL21(DE3)后用IPTG进行诱导表达,表达产物经Ni^(2+)亲和层析柱纯化并进行SDS-PAGE鉴定;通过间接ELISA方法测定纯化后的双价纳米抗体重组蛋白biVHH_(cap)的效价水平,并与相同浓度的单价纳米抗体蛋白VHH_(cap)的ELISA效价进行比较分析。结果表明,重组表达质粒biVHH_(cap)-pCold-SUMO构建正确,Cap蛋白双价单特异性纳米抗体重组蛋白在原核表达系统中以可溶性形式表达,分子质量约为45 ku;该双价纳米抗体与其单价组分相比,ELISA抗体效价提高约20倍,Cap蛋白双价纳米抗体的制备为PCV2的抗原检测和PCV2相关疾病的防控提供了新型候选抗体工具。; 关键词猪圆环病毒2型 CAP蛋白双价纳米抗体原核表达; Keywords Porcine circovirus type 2 Cap protein bivalent nanobody prokaryotic expression; 分类号 S852.659.2 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人源性抗地高辛单链抗体(scFv)及diabody的获取: 5; 作者陈宇萍张国民乔媛媛王刚刘玉峰化冰王琰; 机构第四军医大学西京医院皮肤科海军总医院中心实验科; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期710-713,共4页; 基金国家高技术研究发展计划(863)资助(No.2001AA215361) 第四军医大学博士后科研基金资助(2004年度); 文摘目的:从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗地高辛单链抗体(scFv),并构建双价抗体(diabody)。方法:以固相化的Dig对构建的大容量噬菌体抗体库进行筛选,4轮后挑取集落,用ELISA法鉴定其特异性,并对抗Dig阳性抗体基因进行DNA指纹分析及测序分析。选取活性好的抗体基因进行改造,构建diabody。结果:在抗体库的筛选过程中可见到明显的富集现象,获得4株可与Dig特异性结合的人源单链抗体,经DNA指纹分析及测序分析证明为不同抗体基因,分泌抗Dig抗体的阳性克隆的可变区基因轻链均属于λ第1亚群,重链基因分别属于第3和第4亚群。选取4号克隆进行基因改造,构建diabody的表达载体,获得活性较好的diabody。结论:利用噬菌体抗体技术获得了人源性抗Dig的抗体,并改造成应用前景较好的diabody,为临床诊断及治疗洋地黄类药物的中毒提供了具有实用价值的人源抗体。; 关键词噬菌体抗体库地高辛单链抗体双价抗体; Keywords phage antibody libraries digoxin scFv diabody; 分类号 Q782 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	抗转铁蛋白受体双价抗体的构建、表达及鉴定	肖代雯朱慧芬沈昕邢薇黄宇雷萍黄韬王国斌沈关心	《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2008	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	肝癌细胞特异性结合双价抗体的构建表达与鉴定	黄宇余冰邢薇沈昕肖代雯刁智娟刘静代维赵晓蓉雷萍沈关心	《医药导报》 CAS	2006	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	抗人CD86双价抗体的表达及与抗原的结合特性	王志强安萌朱华亭孔永王婧韩莲花夏永洁邱玉华	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性双价纳米抗体原核表达及活性鉴定	王长江曲光刚武曰星郭广君韩强赵中伟沈志强	《动物医学进展》北大核心	2021	4	在线阅读下载PDF 职称材料
5	人源性抗地高辛单链抗体(scFv)及diabody的获取	陈宇萍张国民乔媛媛王刚刘玉峰化冰王琰	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2005	0	在线阅读下载PDF 职称材料