叉头框转录因子M1在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义 被引量：2

1

作者 吴文艺 张丽婷 +2 位作者 王朝阳 邱建龙 朱世泽 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期127-130,134,共5页

目的探讨叉头框转录因子M1(FoxM1)在人类甲状腺乳头状癌组织中的表达及其意义。方法利用实时荧光定量PCR、Western blot检测20例甲状腺乳头状癌组织及相应的20例癌旁正常甲状腺组织和20例甲状腺腺瘤组织中FoxM1mRNA和蛋白的表达水平并... 目的探讨叉头框转录因子M1(FoxM1)在人类甲状腺乳头状癌组织中的表达及其意义。方法利用实时荧光定量PCR、Western blot检测20例甲状腺乳头状癌组织及相应的20例癌旁正常甲状腺组织和20例甲状腺腺瘤组织中FoxM1mRNA和蛋白的表达水平并进行统计学分析。结果 FoxM1 mRNA及蛋白表达在甲状腺乳头状癌组织中显著高于癌旁正常甲状腺组织及甲状腺腺瘤组织(均P<0.01),癌旁正常甲状腺组织和甲状腺腺瘤组织比较差异无统计学意义(P>0.05),甲状腺乳头状癌有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P<0.01),包膜侵犯组高于包膜无侵犯组(P<0.01)。FoxM1 mRNA及蛋白表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小及TNM分期均无关(P>0.05)。结论 FoxM1 mRNA及蛋白的异常表达可能与甲状腺乳头状癌的发生发展、淋巴结转移、包膜侵犯有关,有望成为甲状腺乳头状癌诊治中的一个新的标志物。 展开更多

关键词 叉头框转录因子m1 甲状腺乳头状癌 转移

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LncRNA MALAT1/miR-876-5p/FOXM1轴对TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖、凋亡和炎症反应的影响 被引量：2

2

作者 金曌 刘钟 +4 位作者 彭静 胡荣毅 吴娟 黄琴斯 王飞 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第3期582-588,594,共8页

目的:探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录子1(lncRNA MALAT1)/miR-876-5p/叉头框蛋白质M1(FOXM1)轴对TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖、凋亡和炎症反应的影响。方法:将HaCaT细胞分为Ct组、Model组、si-NC组、si-MALAT1组、mimic NC组、miR-... 目的:探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录子1(lncRNA MALAT1)/miR-876-5p/叉头框蛋白质M1(FOXM1)轴对TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖、凋亡和炎症反应的影响。方法:将HaCaT细胞分为Ct组、Model组、si-NC组、si-MALAT1组、mimic NC组、miR-876-5p mimic组、si-MALAT1+inhibitor NC组、si-MALAT1+miR-876-5p inhibitor组,除Ct组外,其余组细胞均需用25μg/L TNF-α处理以诱导银屑病体外细胞模型,TNF-α诱导24 h后再转染对应的转染物48 h,用于后续实验。qRT-PCR检测细胞中MALAT1、miR-876-5p表达;CCK-8、EdU染色检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测细胞上清液中IL-6、TNF-α、IL-1β水平;Western blot检测FOXM1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证MALAT1与miR-876-5p、miR-876-5p与FOXM1的关系;RNA pull down实验验证MALAT1与miR-876-5p的关系。结果:相较于对照组,实验组MALAT1、FOXM1蛋白表达增加,miR-876-5p表达下降(P<0.05);相较于Ct组,Model组HaCaT细胞中MALAT1表达、FOXM1蛋白表达、A450值、EdU阳性率、细胞上清液中IL-6、TNF-α、IL-1β水平、PCNA、Bcl-2蛋白表达升高,miR-876-5p表达、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低(P<0.05);沉默MALAT1或过表达miR-876-5p可抑制TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖、炎症反应,促进细胞凋亡;miR-876-5p inhibitor恢复了MALAT1敲低对TNF-α刺激的HaCaT细胞凋亡、增殖及炎症反应的作用;MALAT1靶向下调miR-876-5p,miR-876-5p靶向下调FOXM1。结论:敲低MALAT1可能通过提高miR-876-5p表达来下调FOXM1表达,进而促进TNF-α刺激的HaCaT细胞凋亡,减轻炎症反应并降低增殖。 展开更多

关键词 肺腺癌转移相关转录子1 miR-876-5p 叉头框蛋白质m1 细胞增殖 银屑病

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miR-7-5p调控FOXM1对食管鳞状细胞癌KYSE-150细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

3

作者 程璐 陆小群 +3 位作者 孙艳 梅舟 王佳露 孙杰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第10期1044-1052,共9页

目的:探讨miR-7-5p调控叉头框转录因子M1(FOXM1)对食管鳞状细胞癌(ESCC)KYSE-150细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法:通过双萤光素酶报告基因实验验证miR-7-5p与FOXM1的靶向结合位点。收集2022年1月至2024年10月期间苏州大学附属常... 目的:探讨miR-7-5p调控叉头框转录因子M1(FOXM1)对食管鳞状细胞癌(ESCC)KYSE-150细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法:通过双萤光素酶报告基因实验验证miR-7-5p与FOXM1的靶向结合位点。收集2022年1月至2024年10月期间苏州大学附属常州老年病医院收治的56例ESCC患者的癌组织和癌旁组织标本,以及患者的基本临床资料。采用qRT-PCR法检测ESCC组织中miR-7-5p和FOXM1的表达水平,分析其表达与临床病理特征的关系。常规培养的KYSE-150细胞为Ctrl组,用Lipofectamine 3000转染试剂将质粒转染KYSE-150细胞,分为Mimic NC组、miR-7-5p mimic组、miR-7-5p mimic+OE-NC组和miR-7-5p mimic+OE-FOXM1组。EdU染色和CCK-8实验检测KYSE-150细胞增殖能力,流式细胞术检测KYSE-150细胞的凋亡和CD8+T细胞凋亡情况,WB法检测KYSE-150细胞中PD-L1、FOXM1、BAX和PCNA蛋白的表达。构建KYSE-150细胞裸鼠移植瘤模型,观察miR-7-5p过表达对移植瘤生长和组织中Ki-67、FOXM1表达的影响。结果:miR-7-5p可以靶向负调控FOXM1(P<0.05)。ESCC组织中miR-7-5p呈低表达,FOXM1呈高表达(均P<0.05),其表达分别与TNM分期、分化程度显著相关联(均P<0.05)。miR-7-5p过表达组EdU阳性细胞率、细胞增殖能力、CD8+T细胞凋亡率,以及PD-L1、PCNA、FOXM1 mRNA和蛋白均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率、miR-7-5p、BAX水平均显著升高(均P<0.05);同时过表达FOXM1则可逆转上述作用(均P<0.05)。miR-7-5p过表达可降低小鼠移植瘤质量和体积,以及移植瘤组织中Ki-67、FOXM1蛋白的表达(均P<0.05)。结论:miR-7-5p过表达能够显著抑制KYSE-150细胞增殖和免疫逃逸并促进细胞凋亡,其机制可能是通过靶向负调控FOXM1基因实现的。 展开更多

关键词 miR-7-5p 叉头框转录因子m1 食管鳞状细胞癌 KYSE-150细胞 增殖 凋亡 免疫逃逸

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卵巢高级别浆液性癌组织中叉头框转录因子M1和胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1的表达与患者临床病理特征和预后的关系 被引量：3

4

作者 田文秀 王晶 +3 位作者 徐丹 吴茜 王亚莉 郭红 《中国医学前沿杂志（电子版）》 2020年第6期66-69,共4页

目的探究卵巢高级别浆液性癌组织中叉头框转录因子M1(forkhead box M1,FOXM1)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1(glioma-associated oncogene homoglog-1,Gli-1蛋白)的表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法选取2009年1月至2013年9月中... 目的探究卵巢高级别浆液性癌组织中叉头框转录因子M1(forkhead box M1,FOXM1)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1(glioma-associated oncogene homoglog-1,Gli-1蛋白)的表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法选取2009年1月至2013年9月中国人民解放军中部战区总医院妇产科收治的经手术病理证实为卵巢高级别浆液性癌的82例患者为研究对象,采用免疫组织化学法检测石蜡标本中FOXM1和Gli-1蛋白的表达情况;收集患者临床资料,分析FOXM1和Gli-1蛋白表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果临床分期Ⅲ~Ⅳ期、高中分化和伴腹水的卵巢高级别浆液性癌患者FOXM1和Gli-1蛋白阳性表达率均显著升高(均P<0.05)。FOXM1和Gli-1蛋白阳性表达患者的20、40、60个月生存率均显著低于阴性表达患者(均P<0.05),累计存活时间均显著短于阴性表达患者(均P<0.05)。结论临床分期Ⅲ~Ⅳ期、高中分化和伴腹水的卵巢高级别浆液性癌患者FOXM1和Gli-1蛋白阳性表达率均显著升高,且FOXM1和Gli-1蛋白阳性表达患者的生存率均下降。 展开更多

关键词 叉头框转录因子m1 胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1 卵巢癌 预后

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泛素特异性肽酶21增加FOXM1稳定性促进子宫内膜异位症巨噬细胞M2极化的机制研究

5

作者 董敏 徐敏 +2 位作者 方德容 陈一源 张明哲 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第7期603-610,共8页

目的探究泛素特异性肽酶21(USP21)增加叉头框蛋白M1(FOXM1)稳定性促进子宫内膜异位症(EM)巨噬细胞M2极化的机制研究。方法收集子宫内膜异位症患者的异位子宫内膜基质细胞(EESC)和常规健康评估者正常子宫内膜基质细胞(NESC)进行体外培养... 目的探究泛素特异性肽酶21(USP21)增加叉头框蛋白M1(FOXM1)稳定性促进子宫内膜异位症(EM)巨噬细胞M2极化的机制研究。方法收集子宫内膜异位症患者的异位子宫内膜基质细胞(EESC)和常规健康评估者正常子宫内膜基质细胞(NESC)进行体外培养,实时定量PCR及Western blot法检测细胞中USP21和FOXM1表达水平。将EESC与巨噬细胞共培养,实时定量PCR检测M1极化标志物白细胞介素6(IL-6)、CXC趋化因子配体10(CXCL10)和M2极化标志物CD206、纤连蛋白1(FN1),流式细胞术检测M2标志物CD206,ELISA检测细胞上清液IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10、转化生长因子β(TGF-β)水平,免疫共沉淀检测USP21与FOXM1相互作用及FOXM1泛素化水平,放线菌酮(CHX)实验检测FOXM1蛋白稳定性。结果与NESC组相比,EESC组细胞中USP21和FOXM1表达水平显著升高;与NESC联合M0组相比,EESC联合M0组细胞中M1极化标志物(IL-6、CXCL10)表达无显著差异,M2极化标志物(CD206、FN1)表达升高,M2巨噬细胞数量显著增多,细胞上清液IL-6和TNF-α水平无显著差异,IL-10和TGF-β水平升高,以上表明去泛素化酶USP21在EM中高表达,促进巨噬细胞M2极化。敲低USP21或FOXM1均能抑制EM巨噬细胞M2极化。EESC中USP21与FOXM1存在相互作用,FOXM1泛素化水平下降,FOXM1蛋白稳定性增强。过表达FOXM1逆转敲低USP21对EM巨噬细胞M2极化的抑制作用。结论去泛素化酶USP21与FOXM1相互作用,增加FOXM1稳定性,促进EM巨噬细胞M2极化。 展开更多

关键词 巨噬细胞m2极化 子宫内膜异位症(Em) 泛素特异性肽酶21(USP21) 叉头框蛋白m1(foxm1) 去泛素化

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叉头框转录因子O1在肾纤维化中的作用及其调控 被引量：2

6

作者 徐仁凤 王正朝 张正红 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期999-1005,共7页

慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)已成为全球不可忽视的一种慢性疾病,而肾的纤维化是CKD的最终结果和关键性病理特征。在CKD的整个过程中均伴随着肾损伤的修复与愈合,且长期慢性刺激会促使肾纤维化逐渐步向肾衰竭,其主要特征是肌... 慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)已成为全球不可忽视的一种慢性疾病,而肾的纤维化是CKD的最终结果和关键性病理特征。在CKD的整个过程中均伴随着肾损伤的修复与愈合,且长期慢性刺激会促使肾纤维化逐渐步向肾衰竭,其主要特征是肌成纤维细胞持续活化及细胞外基质过度产生和沉积。肾的纤维化是一个由多种信号分子介导的多种信号通路参与的协同过程,而TGF-β/Smad和Wnt/β-Catenin信号通路是其中最经典的2个。FoxO1是人体中一个重要的转录因子,在多种细胞类型中表达,参与细胞多种生命活动并发挥重要调节作用。目前的研究已经表明,叉头框转录因子O1(forkhead transcription factor O1,FoxO1)在肾纤维化病变中扮演着重要角色。FoxO1可通过STAT、SIRT1、Wnt/β-Catenin、PI-3K/Akt等多种信号通路调控肾纤维化的发生和发展,例如FoxO1/STAT信号可调节TIF和肾小管凋亡;SIRT1/FoxO1信号可调控氧化应激反应和脂肪毒性;FoxO1/β-Catenin可抑制Wnt/β-Catenin信号通路;PI-3K/Akt/FoxO1通路调节炎症反应及糖脂代谢等。另外,一些相关研究表明,FoxO1/Smad很可能在肾的纤维化中发挥了作用。本文综述了FoxO1在肾纤维化中的作用及其分子调控机制,旨在进一步明确肾纤维化的发病机制,从而为CKD的治疗提供新的方向与前景。 展开更多

关键词 叉头框转录因子O1 纤维化 胞外基质 慢性肾病 肾

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TNF-α调控转录因子FoxM1在膀胱癌及腺性膀胱炎中的表达及意义 被引量：9

7

作者 洪英楷 林明恩 吴华涛 《海南医学院学报》 CAS 2020年第3期204-208,共5页

目的:研究TNF-α调控转录因子叉头框转录因子M1(FoxM1)在膀胱癌及腺性膀胱炎(CG)中的表达及意义。方法:选择本院2017年2月~2019年2月收治的膀胱癌患者30例进行研究,所有患者接受手术治疗,并于术后留取膀胱癌组织,同时取远离癌组织中心5... 目的:研究TNF-α调控转录因子叉头框转录因子M1(FoxM1)在膀胱癌及腺性膀胱炎(CG)中的表达及意义。方法:选择本院2017年2月~2019年2月收治的膀胱癌患者30例进行研究,所有患者接受手术治疗,并于术后留取膀胱癌组织,同时取远离癌组织中心5 cm以上的组织作为正常膀胱组织。此外,选取同期于我院接受手术治疗的CG患者30例,术后均留取CG组织。将膀胱癌细胞株RT4、BIU87进行细胞培养,采用不同浓度TNF-α(0、1、5、10 nmol/L)对上述细胞系进行处理。分析不同膀胱组织中TNF-α、FoxM1表达情况,不同浓度TNF-α处理膀胱癌细胞系对FoxM1的表达影响,不同浓度TNF-α处理膀胱癌细胞系对cyclin B1以及cyclin D1的表达影响。结果:正常膀胱、CG、膀胱癌组织中TNF-α、FoxM1表达水平呈逐渐升高趋势,且经单因素方差分析发现:各组间对比差异有统计学意义(P<0.05)。0、1、5、10 nmol/L浓度的TNF-α处理膀胱癌细胞系后,FoxM1表达呈逐渐升高趋势,且经单因素方差分析发现:各组间对比差异有统计学意义(P<0.05)。0、1、5、10 nmol/L浓度的TNF-α处理膀胱癌细胞系后,cyclin B1以及cyclin D1的表达呈逐渐升高趋势,且经单因素方差分析发现:各组间对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TNF-α可能通过调控转录因子FoxM1的表达,继而影响cyclin B1以及cyclin D1的表达,从而在CG的发生、发展过程中起着至关重要的作用,值得临床重点关注。 展开更多

关键词 膀胱癌 腺性膀胱炎 肿瘤坏死因子-Α 叉头框转录因子m1 表达意义

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叉头框蛋白M1在肿瘤信号转导中的作用 被引量：5

8

作者 徐凯 冒晓蓓 褚晓源 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第11期1226-1228,共3页

叉头框蛋白M1(forkhead box M1,Fox M1)属于Fox转录因子家族,在多种恶性肿瘤中异常高表达,与多个癌基因信号通路相关,在肿瘤的发生、进展和转移等方面发挥重要作用。Fox M1已成为肿瘤治疗研究的一个新靶点。

关键词 叉头框蛋白m1 信号转导 肿瘤 foxm1

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贝母素乙调节FOXO3-FOXM1信号轴对卵巢癌生物学行为和化疗耐药性的影响 被引量：1

9

作者 杨发珍 张红敏 +1 位作者 着么 王乾印 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期976-982,共7页

目的探讨贝母素乙(PMI)调节叉头框蛋白O3(FOXO3)-叉头框转录因子M1(FOXM1)信号轴对卵巢癌增殖、侵袭、迁移、凋亡和化疗耐药性的影响。方法以卵巢癌SKOV3细胞、SKOV3/顺铂(DDP)细胞为研究对象,MTT法检测DDP对SKOV3细胞、SKOV3/DDP细胞... 目的探讨贝母素乙(PMI)调节叉头框蛋白O3(FOXO3)-叉头框转录因子M1(FOXM1)信号轴对卵巢癌增殖、侵袭、迁移、凋亡和化疗耐药性的影响。方法以卵巢癌SKOV3细胞、SKOV3/顺铂(DDP)细胞为研究对象,MTT法检测DDP对SKOV3细胞、SKOV3/DDP细胞的增殖抑制情况以及PMI对SKOV3/DDP细胞的增殖抑制情况;将SKOV3/DDP细胞分为对照组(正常培养)、DDP组(20μg/mL DDP)、L-PMI组、M-PMI组、H-PMI组(20μg/mL DDP联合50、100、200μmol/L PMI)、甘珀酸(CBX)组(20μg/mL DDP和200μmol/L PMI联合50 ng/mL CBX)。平板克隆实验检测SKOV3/DDP细胞的增殖;Transwell TM实验检测SKOV3/DDP细胞的侵袭和迁移;流式细胞术检测SKOV3/DDP细胞的凋亡率;Western blot法检测SKOV3/DDP细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、多药耐药相关蛋白5抗体(MRP5)、FOXO3、FOXM1蛋白表达量。结果SKOV3细胞和SKOV3/DDP细胞增殖抑制率在DDP干预下以浓度依赖性的方式显著增加,且SKOV3细胞的增殖抑制率高于SKOV3/DPP细胞。SKOV3/DDP细胞增殖抑制率在PMI干预下以浓度依赖性的方式显著增加。DDP组克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细胞数、PCNA、MRP5、FOXM1蛋白表达低于对照组,凋亡率、caspase-3、FOXO3蛋白表达高于对照组;与DDP组比较,L-PMI组、M-PMI组、H-PMI组的克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细胞数、PCNA、MRP5、FOXM1蛋白表达显著下降,凋亡率、caspase-3、FOXO3蛋白表达显著上升;CBX组克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细胞数、PCNA、MRP5、FOXM1蛋白表达显著高于H-PMI组,凋亡率、caspase-3、FOXO3蛋白表达显著低于H-PMI组。结论PMI可能是通过激活FOXO3,抑制FOXM1,进而抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭、迁移和化疗耐药。 展开更多

关键词 贝母素乙 叉头框蛋白O3 叉头框转录因子m1 卵巢癌 肿瘤免疫微环境

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吉马酮通过FOXO3-FOXM1轴调控甲状腺癌BCPAP细胞的增殖、迁移和化疗耐药

10

作者 王洪涛 马正 +2 位作者 单四新 朱坤良 苑留云 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期871-877,共7页

目的:探究吉马酮通过叉头盒蛋白O3(FOXO3)-FOX亚类M1转录因子(FOXM1)信号通路调控人甲状腺癌细胞BCPAP和多柔比星(DOX)耐药BCPAP细胞(BCPAP/DOX)的增殖、迁移和化疗耐药。方法:常规培养BCPAP细胞,用BCPAP细胞构建BCPAP/DOX细胞,用MTT法... 目的:探究吉马酮通过叉头盒蛋白O3(FOXO3)-FOX亚类M1转录因子(FOXM1)信号通路调控人甲状腺癌细胞BCPAP和多柔比星(DOX)耐药BCPAP细胞(BCPAP/DOX)的增殖、迁移和化疗耐药。方法:常规培养BCPAP细胞,用BCPAP细胞构建BCPAP/DOX细胞,用MTT法检测不同浓度吉马酮对BCPAP和BCPAP/DOX细胞增殖的影响。将BCPAP和BCPAP/DOX细胞分为Ctrl组(空白对照)、sh-NC组(转染sh-NC质粒)、低浓度吉马酮组(0.10 mmol/L)、高浓度吉马酮组(0.15 mmol/L)、高浓度吉马酮(0.15 mmol/L)+sh-FOXO3组(转染sh-FOXO3质粒),用转染试剂将sh-NC质粒和sh-FOXO3质粒转至相应的BCPAP和BCPAP/DOX细胞中。用CCK-8法、划痕愈合实验和WB法分别检测各组细胞的增殖、迁移能力,以及FOXO3、FOXM1、BAX、MMP-9和多药耐药-1(MDR-1)蛋白的表达。结果:在BCPAP和BCPAP/DOX细胞中成功地敲减了FOXO3的表达,低浓度和高浓度吉马酮均可显著抑制BCPAP和BCPAP/DOX细胞的增殖、迁移能力,降低细胞中FOMX1、MMP-9或MDR-1(BCPAP/DOX细胞)蛋白的表达,提升FOXO3和BAX蛋白的表达(均P<0.05),与低浓度比较,高浓度吉马酮的作用更为显著(均P<0.05),敲减FOXO3后可部分逆转吉马酮对这两种细胞的作用(均P<0.05)。结论:吉马酮可能通过FOXO3/FOXM1信号通路调控BCPAP和BCPAP/DOX细胞的增殖和迁移能力,降低BCPAP/DOX细胞化疗耐药性。 展开更多

关键词 吉马酮 叉头盒蛋白O3 叉头盒亚类m1转录因子 甲状腺癌 增殖 迁移 化疗耐药

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SF3B1/FOXM1信号通路调控细胞周期干预宫颈癌进展的机制研究

11

作者 杨美平 邓颂 +1 位作者 陈明倩 袁超燕 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1129-1136,共8页

目的:基于剪接因子3B亚单位1(splicing-factor-3B-subunit-1,SF3B1)/叉头框蛋白M1(Forkhead Box M1,FOXM1)轴探讨调控细胞周期宫颈癌进展的作用机制。方法:通过转染SF3B1过表达质粒(SF3B1 overexpression plasmid,pSF3B1)和2个SF3B1特... 目的:基于剪接因子3B亚单位1(splicing-factor-3B-subunit-1,SF3B1)/叉头框蛋白M1(Forkhead Box M1,FOXM1)轴探讨调控细胞周期宫颈癌进展的作用机制。方法:通过转染SF3B1过表达质粒(SF3B1 overexpression plasmid,pSF3B1)和2个SF3B1特异性短发夹RNA(short hairpin RNA)(shSF3B1-1、shSF3B1-2)过表达HeLa细胞或敲低SiHa细胞SF3B1。通过试验和乙炔基-2'-脱氧尿苷分析细胞的增殖活力和增殖率。流式细胞术分析细胞周期分布。应用细胞周期聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)阵列分析、流式细胞术、染色质免疫共沉淀-定量聚合酶链式反应(chromatin immunoprecipitation-quantitative polymerase chain reaction,ChIP-qPCR)和荧光素酶实验明确SF3B1和FOXM1的靶向关系。结果:SF3B1过表达后,HeLa细胞的生长率和增殖能力均显著增加(P<0.05)。此外,SF3B1敲低后,SiHa细胞的生长率和增殖能力均显著降低(P<0.05)。在HeLa细胞中,与pENTER组相比,pSF3B1组细胞在细胞周期的G_(0)/G_(1)期降低。然而,在SiHa细胞系中,敲低SF3B1提高了G_(0)/G_(1)期比率。此外,SF3B1过表达促进了HeLa细胞中G_(1)期相关蛋白细胞周期蛋白D1表达,而敲低SF3B1抑制了SiHa细胞中周期蛋白D1表达。上调SF3B1表达明显增强FOXM1的表达,而下调SF3B1导致FOXM1的明显抑制。ChIP-qPCR分析进一步显示SF3B1在HeLa细胞系中与FOXM1启动子位点结合。在野生型FOXM1启动子中,与shNC组相比,荧光素酶活性在SF3B1敲低组中受到抑制(1.30±0.08 vs.0.73±0.02、0.70±0.04,均P<0.01),突变型FOXM1启动子不能在SiHa细胞中引发对shSF3B1的应答。HeLa细胞的增殖能力通过SF3B1过表达而增强(shNC+pENTER vs.shNC+pSF3B1:25.1±1.9 vs.61.2±3.8,P<0.01),并被shFOXM1降低(shNC+pSF3B1 vs.shFOXM1+pSF3B1:61.2±3.8 vs.18.5±1.9,P<0.001),并且SF3B1过表达诱导的细胞G_(0)/G_(1)周期降低通过敲低FOXM1而部分逆转(shNC+pSF3B1 vs.shFOXM1+pSF3B1:35.0±1.5 vs.58.0±1.8,P<0.05)。结论:SF3B1可以作为宫颈癌中的潜在肿瘤促进基因,其可能通过上调FOXM1的表达来促进宫颈癌细胞增殖并扰乱细胞周期。 展开更多

关键词 剪接因子3B亚单位1 叉头框蛋白m1 细胞周期 宫颈癌

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宫颈癌组织中FoxM1及下游相关靶分子表达量的探究 被引量：4

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作者 袁毅翀 杨琼 《海南医学院学报》 CAS 2016年第10期941-943,947,共4页

目的:研究宫颈癌组织中叉头框转录因子M1(FoxM1)及下游相关靶分子的表达量。方法:收集宫颈癌组织和正常宫颈组织,测定FoxM1、增殖相关基因细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)6、CDK8及血管新生相关基因血管内皮细胞生长因子(VEGF)A、VEGFB、VE... 目的:研究宫颈癌组织中叉头框转录因子M1(FoxM1)及下游相关靶分子的表达量。方法:收集宫颈癌组织和正常宫颈组织,测定FoxM1、增殖相关基因细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)6、CDK8及血管新生相关基因血管内皮细胞生长因子(VEGF)A、VEGFB、VEGFC的表达量;培养Hela细胞,转染FoxM1的siRNA后测定CDK6、CDK8、VEGFA、VEGFB、VEGFC的表达量。结果:宫颈癌组织中FoxM1、CDK6、CDK8、VEGFA、VEGFB、VEGFC的mRNA含量显著高于正常宫颈组织(P<0.05);FoxM1的mRNA含量与CDK6、CDK8、VEGFA、VEGFB、VEGFC的mRNA含量呈正相关(P<0.05);FoxM1-siRNA组细胞中CDK6、CDK8、VEGFA、VEGFB、VEGFC的mRNA含量显著低于阴性对照-siRNA组(P<0.05)。结论:宫颈癌组织中FoxM1的表达量异常升高,其下游靶基因包括CDK6、CDK8、VEGFA、VEGFB、VEGFC。 展开更多

关键词 宫颈癌 叉头框转录因子m1(foxm1) 增殖 细胞周期 血管新生

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下调FoxM1通过激活JNK/线粒体通路增加人鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感性 被引量：2

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作者 雷越 万婕 +4 位作者 李丹丹 叶琳 刘亚男 祝琳 陈鸿雁 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期780-787,共8页

目的探讨特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默转录因子叉头框M1(FoxM1)对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖、凋亡、紫杉醇敏感性的影响及可能的分子机制。方法采用siRNA靶向沉默鼻咽癌HONE-1细胞FoxM1表达并通过RT-PCR、实时定量PC... 目的探讨特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默转录因子叉头框M1(FoxM1)对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖、凋亡、紫杉醇敏感性的影响及可能的分子机制。方法采用siRNA靶向沉默鼻咽癌HONE-1细胞FoxM1表达并通过RT-PCR、实时定量PCR、Western blot检测转染后FoxM1的表达水平。siRNA转染后细胞的增殖和对紫杉醇的敏感性采用MTT法检测,流式细胞仪检测细胞周期分布,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。Western blot检测Ki67、CyclinE1、多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1)及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果转染后FoxM1 mRNA及蛋白的表达均被下调(P<0.01)。siRNA转染组细胞增殖速率减缓(P<0.05),Ki67表达降低(P<0.05)。siRNA转染组G_1期细胞比例增加(P<0.01),S期比例减低(P<0.05),CyclinE1低表达(P<0.01)。同时,siRNA+紫杉醇组凋亡率明显高于阴性及空白对照+紫杉醇组(P<0.01)。siRNA转染组细胞MDR1水平下降(P<0.05),对紫杉醇的敏感性较两对照组明显增强(P<0.01)。siRNA+紫杉醇组与阴性对照+紫杉醇组相比p-JNK1、p-c-Jun、Bax表达上调(P<0.01),Bcl-2表达下调(P<0.01)。结论特异性siRNA沉默FoxM1表达可以影响JNK/线粒体通路活性,抑制鼻咽癌HONE-1细胞增殖,促进其凋亡,提高其对紫杉醇的敏感性。 展开更多

关键词 鼻咽癌 转录因子叉头框m1 凋亡 化疗敏感性 紫杉醇 JNK/线粒体通路

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心力衰竭与血管性痴呆共病网络:整合单细胞多组学与靶向FOXC1药物筛选

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作者 夏天骄 张添琦 +5 位作者 王碧洁 张希源 曾巧春 汪诗娆 曹晓璐 王江友 《华中科技大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期498-506,共9页

目的 揭示心力衰竭(HF)与血管性痴呆(VaD)的共病机制,挖掘跨器官治疗靶点及心脑协同保护的天然化合物。方法 使用Seurat对GEO数据库中8例单细胞数据进行聚类及注释,利用CellChat构建器官通讯网络并筛选前95%高置信配体-受体对进行KEGG... 目的 揭示心力衰竭(HF)与血管性痴呆(VaD)的共病机制,挖掘跨器官治疗靶点及心脑协同保护的天然化合物。方法 使用Seurat对GEO数据库中8例单细胞数据进行聚类及注释,利用CellChat构建器官通讯网络并筛选前95%高置信配体-受体对进行KEGG富集分析,同时结合limma与CIBERSORT对70例常规转录组进行差异基因分析和免疫浸润评估。利用AutoDock Vina筛选TCMbank库31186种天然化合物,经分子动力学模拟验证其稳定性。结果单细胞图谱显示HF成纤维细胞占比43.75%(7亚群),VaD少突胶质细胞占76.57%(6亚群)。跨疾病分析表明HF成纤维细胞通过COLLAGEN信号、VaD胶质细胞通过SPP1信号驱动病理进程,共享PI3K-Akt和ECM-受体交互通路。鉴定出HF特征基因TNXB/THBS4/COL1A2,VaD特征基因SPP1/PDGFC/TGFA,联合分析得出FOXC1为共病核心转录因子。免疫微环境显示B细胞普遍激活。筛选出的8种FOXC1抑制剂中,青黛酮(Qingdainone)的结合最优[亲和力:-9.0 kcal/mol, RMSD:(0.2±0.06)nm]。结论 该研究阐明HF与VaD的纤维化-神经炎症共病机制,发现了靶向FOXC1的天然抑制剂青黛酮,为共病治疗药物研发提供了理论依据。 展开更多

关键词 血管性痴呆 心力衰竭 单细胞转录组 叉头框转录因子C1 青黛酮

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PTEN对FoxM1可变剪接的调控及该过程在肿瘤细胞迁移中的作用

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作者 王晓玲 葛梦凯 沈少明 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1339-1347,共9页

目的探讨10号染色体磷酸酶和张力同源蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)对叉头框转录因子M1(forkhead box M1,FoxM1)可变剪接的调控,以及该调控作用对肿瘤细胞迁移的影响。方法在人胚肾293T细胞,人前列腺癌DU145细胞,人结肠腺... 目的探讨10号染色体磷酸酶和张力同源蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)对叉头框转录因子M1(forkhead box M1,FoxM1)可变剪接的调控,以及该调控作用对肿瘤细胞迁移的影响。方法在人胚肾293T细胞,人前列腺癌DU145细胞,人结肠腺癌RKO细胞,人结肠癌SW480、SW620细胞中用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)敲低PTEN的mRNA水平。设计针对FoxM1及其亚型FoxM1B和FoxM1C的特异性引物,用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测FoxM1B和FoxM1C的mRNA表达水平在PTEN敲低前后的差异。在DU145细胞中分别过表达FoxM1B和FoxM1C,利用Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测两者对肿瘤细胞迁移的影响。通过免疫荧光和双荧光素酶报告基因检测实验,探索FoxM1B和FoxM1C对肿瘤细胞迁移调控差异的潜在机制。结果①将293T、DU145、RKO、SW480和SW620细胞内的PTEN敲低后,qRT-PCR检测发现,与对照细胞相比,在PTEN敲低的细胞中FoxM1B的mRNA均显著增多,而FoxM1C的mRNA表现为减少或不变。PTEN敲低不影响FoxM1的转录水平,而影响FoxM1的可变剪接,促进了FoxM1B亚型的生成。②Transwell细胞迁移实验结果显示,与对照细胞相比,FoxM1B过表达组DU145细胞迁移数量增多(P=0.024),FoxM1C过表达组DU145细胞迁移数量减少(P=0.000)。细胞划痕实验结果显示,过表达FoxM1B的DU145细胞愈合能力显著增强(P=0.001),过表达FoxM1C的DU145细胞愈合能力减弱(P=0.021)。FoxM1B和FoxM1C对肿瘤细胞迁移具有相反的调节作用:FoxM1B促进肿瘤细胞迁移,而FoxM1C则抑制肿瘤细胞迁移。③FoxM1B和FoxM1C过表达,均未引起β连环蛋白入核。双荧光素酶报告基因检测实验发现FoxM1B和FoxM1C的转录活性没有差别,FoxM1B和FoxM1C在调控肿瘤转移方面的差异不是由β连环蛋白转位介导的。结论PTEN敲低影响肿瘤细胞内FoxM1的可变剪接,导致促迁移的FoxM1B表达增加,从而促进肿瘤细胞迁移。 展开更多

关键词 磷酸酶和张力同源蛋白 叉头框转录因子m1 可变剪接 肿瘤细胞 迁移

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沉默FOXQ1基因抑制肝细胞癌SMMC-7721细胞迁移侵袭能力 被引量：4

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作者 王城 吴斌 +3 位作者 严舒 邓大炜 曾丽娟 李建水 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期48-52,共5页

目的:探讨沉默又头框蛋白Q1(forkhead box Q1,FOXQ1)基因后对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)SMMC-7721细胞迁移侵袭能力的影响及其机制。方法:制备FOXQ1-shRNA、NC-shRNA重组慢病毒,将其感染到SMMC-7721细胞中;实验设干扰组、... 目的:探讨沉默又头框蛋白Q1(forkhead box Q1,FOXQ1)基因后对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)SMMC-7721细胞迁移侵袭能力的影响及其机制。方法:制备FOXQ1-shRNA、NC-shRNA重组慢病毒,将其感染到SMMC-7721细胞中;实验设干扰组、阴性对照组和空白组,用Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭能力;利用qRT-PCR和Western blotting法检测SMMC-7721细胞中FOXQl、MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白的表达。结果:随着肝癌SMMC-7721细胞的迁移侵袭能力的增强,FOXQ1的表达逐渐增加;干扰组较阴性对照组与空白组FOXQl表达水平降低[(0.34±0.03)vs(0.89±0.07)和(0.84±0.05),P<0.05];沉默FOXQ1基因后,SMMC-7721细胞的迁移侵袭能力显著下降[(9.67±1.15)vs(25.67±2.08)和(27.33±2.52),P<0.05],MMP-2与MMP-9表达水平下降[MMP-2:(0.35±0.04)vs(0.61±0.05)和(0.65±0.08);MMP-9:(0.40±0.05)vs(0.73±0.07)和(0.77±0.06),均P<0.05]。结论:沉默FOXQl基因的表达能够抑制肝癌SMMC-7721细胞的迁移、侵袭能力,其机制可能与MMP-2与MMP-9的表达下调有关。 展开更多

关键词 肝细胞癌 叉头框蛋白Q1基因 转录因子 迁移 侵袭

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慢病毒介导shRNA干扰FoxO1促进猪成肌细胞中MyHCⅠ的表达 被引量：4

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作者 史新娥 郑雪莉 +3 位作者 刘月光 袁媛 张辉 杨公社 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期582-588,共7页

叉头框转录因子O亚族1(forkhead box transcription factor O1,FoxO1)是调控骨骼肌生长、代谢及细胞分化过程的重要转录因子,在肌纤维类型转化过程中发挥重要作用.为深入研究其对肌纤维类型的影响,构建FoxO1短发夹RNA(short hairpin RNA... 叉头框转录因子O亚族1(forkhead box transcription factor O1,FoxO1)是调控骨骼肌生长、代谢及细胞分化过程的重要转录因子,在肌纤维类型转化过程中发挥重要作用.为深入研究其对肌纤维类型的影响,构建FoxO1短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰慢病毒载体并感染猪成肌细胞,用real-time PCR和Western印迹法检测FoxO1和肌球蛋白重链Ⅰ(myosin heavy chainⅠ,MyHCⅠ)mRNA和蛋白的表达情况.测序结果证实,Lenti H1 RNAi FoxO1质粒构建正确,获得Lenti H1 RNAi FoxO1病毒颗粒滴度为8×107U/mL.病毒感染猪成肌细胞后,与对照组相比,siFoxO1a组FoxO1在转录水平上降低了58%,蛋白水平降低了77%,而MyHCⅠmRNA表达量提高了2.58倍.结果表明,本研究成功构建了猪FoxO1基因shRNA干扰慢病毒载体,且沉默FoxO1促进猪成肌细胞中MyHCⅠmRNA的表达. 展开更多

关键词 叉头框转录因子O亚族1(FoxO1) RNA干扰 慢病毒 成肌细胞 猪

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沉默FOXO1基因对人主动脉血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响 被引量：2

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作者 王琳茹 张晶 +2 位作者 赵冬婵 王晋军 胡文贤 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期431-441,共11页

目的:探讨叉头框转录因子O1(FOXO1)基因对腹主动脉瘤(AAA)血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响,阐明其可能的作用机制。方法:收集19例AAA患者动脉瘤组织(AAA组)及邻近正常主动脉组织(对照组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组研究对... 目的:探讨叉头框转录因子O1(FOXO1)基因对腹主动脉瘤(AAA)血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响,阐明其可能的作用机制。方法:收集19例AAA患者动脉瘤组织(AAA组)及邻近正常主动脉组织(对照组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组研究对象动脉瘤组织中FOXO1 mRNA表达水平,透射电镜观察2组研究对象动脉瘤组织中自噬溶酶体形成情况;Western blotting法检测2组研究对象动脉瘤组织中FOXO1及自噬相关蛋白卷曲螺旋肌球蛋白样B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)结合蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3α(LC3)和P62蛋白表达水平。体外培养人主动脉血管平滑肌细胞(hVSMCs),并采用FOXO1 siRNA(si-FOXO1)及其阴性对照(si-NC)慢病毒感染hVSMCs,10μmol·L^(-1)血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)联合自噬激活剂雷帕霉素(Rap)进行干预,将细胞分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+si-NC组、AngⅡ+si-FOXO1组、AngⅡ+si-NC+Rap组和AngⅡ+si-FOXO1+Rap组。CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,ELISA法检测各组细胞上清中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,RT-qPCR法检测各组细胞中FOXO1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中FOXO1、Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、Beclin1、LC3和P62蛋白表达水平。结果:与对照组比较,AAA组动脉瘤组织中FOXO1 mRNA表达水平升高(P<0.05),自噬溶酶体数量增多(P<0.05),Beclin1蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),P62蛋白表达水平降低(P<0.05)。与空白对照组比较,AngⅡ组hVSMCs增殖活性降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9水平升高(P<0.05),细胞中Bax、Cleaved caspase-3和Beclin1蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),Bcl-2和P62蛋白表达水平降低(P<0.05);与AngⅡ+si-NC组比较,AngⅡ+si-FOXO1组hVSMCs增殖活性升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9水平降低(P<0.05),细胞中Bax、Cleaved-caspase-3和Beclin1蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05),Bcl-2和P62蛋白表达水平升高(P<0.05)。与AngⅡ+si-FOXO1组比较,AngⅡ+si-FOXO1+Rap组细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9水平升高(P<0.05),细胞中Beclin1蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05),P62蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:FOXO1基因沉默可能通过降低自噬水平来提高AngⅡ暴露下hVSMCs增殖活性,并抑制其凋亡,从而参与AAA的发病。 展开更多

关键词 腹主动脉瘤 人血管平滑肌细胞 叉头框转录因子O1 自噬 细胞凋亡

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银杏叶提取物通过miR-145/FOXO1轴对实验性肾功能衰竭大鼠肾脏损伤的影响 被引量：2

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作者 李士旭 李林运 +2 位作者 王新 李轲 卞华 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2023年第7期728-735,共8页

目的:探讨银杏叶提取物(GBE)对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠肾损伤的影响及潜在的分子机制。方法:SD大鼠采用5/6肾切除术构建CRF模型,并分为模型(model)组、GBE组(100 mg/kg)、GBE+Agomir-NC组、GBE+Agomir-145组,每组12只;另取12只为假手术... 目的:探讨银杏叶提取物(GBE)对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠肾损伤的影响及潜在的分子机制。方法:SD大鼠采用5/6肾切除术构建CRF模型,并分为模型(model)组、GBE组(100 mg/kg)、GBE+Agomir-NC组、GBE+Agomir-145组,每组12只;另取12只为假手术(sham)组,仅暴露肾脏,不进行肾脏切除。GBE组大鼠每日给予GBE100 mg/kg灌胃,1次/d,连续4周;GBE+AgomirNC组和GBE+Agomir-145组大鼠每日给予GBE100 mg/kg灌胃,然后每3 d一次分别通过尾静脉注射Agomir-NC和Agomir-145,连续4周;sham组和model组灌胃和尾静脉注射等量生理盐水。观察大鼠的一般状态,检测大鼠肾功能指标[24 h尿微量白蛋白(24 h UAlb)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)]和氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)],采用Masson染色观察肾组织纤维化情况,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肾组织microRNA-145(miR-145)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和叉头框转录因子O1(FOXO1)m RNA表达水平,采用Western blot检测肾组织TGF-β1、FOXO1蛋白水平。结果:GBE干预后CRF大鼠的一般状态明显好转,体质量、肾组织SOD和GSH-Px活性、FOXO1的mRNA和蛋白水平显著高于model组(P<0.05);24 h UAlb、血清BUN、SCr和肾组织MDA水平、肾间质纤维化的相对面积以及肾组织miR-145、TGF-β1的mRNA和蛋白水平均显著低于model组(P<0.05);且在GBE干预的基础上,上调miR-145表达可明显减弱GBE对CRF大鼠肾损伤的保护作用(P<0.05)。结论:GBE可减轻CRF大鼠的肾脏损伤,其作用机制可能与下调miR-145,上调FOXO1表达,抑制肾纤维化有关。 展开更多

关键词 银杏叶提取物 慢性肾功能衰竭 肾纤维化 microRNA-145 叉头框转录因子O1

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氧化应激通过激活Cdk5抑制FOXO1的神经元损伤及其机制 被引量：8

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作者 杨慧丽 陈星宇 郑维红 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期399-405,共7页

目的探究氧化应激通过激活细胞周期蛋白依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5, Cdk5)抑制叉头框转录因子O亚家族蛋白1(forkhead box O1, FOXO1)的神经元损伤的具体机制。方法在HEK细胞中,共同转染过表达P39/Cdk5和FOXO1-WT或者FOXO1-S... 目的探究氧化应激通过激活细胞周期蛋白依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5, Cdk5)抑制叉头框转录因子O亚家族蛋白1(forkhead box O1, FOXO1)的神经元损伤的具体机制。方法在HEK细胞中,共同转染过表达P39/Cdk5和FOXO1-WT或者FOXO1-S249A突变体,利用特异性磷酸化抗体pS249-FOXO1能够特异识别FOXO1的Ser249位点磷酸化特点,通过Western blot检测Cdk5/p39对FOXO1的磷酸化。通过体外培养HEK细胞中过表达Cdk5、p39和FOXO1,免疫共沉淀探究Cdk5和FOXO1以及Cdk5和p39的相互作用。在原代神经元过表达不同的Cdk5激活因子(p25、p35、p39)以及Cdk5激酶复合物,使用双荧光素酶实验探究其不同组合对FOXO1转录活性的影响。用Cdk5抑制剂rocovitine干预,观察其对FOXO1出入的影响;同时通过核质分离的方法对比了Cdk5杂合小鼠和野生型大脑皮层组织的FOXO1核质定位。分别用H_2O_2、glutamate处理神经元,通过Western blot观察氧化应激对Cdk5的活性调节,同时用双荧光素酶实验探究其对FOXO1转录因子的影响;最后通过caspase-3染色观察H_2O_2、glutamate的不同时间梯度处理对神经元凋亡的影响。结果 Cdk5和p39能够直接与FOXO1相互作用,并磷酸化FOXO1的Ser249位点。激活Cdk5能够显著抑制FOXO1的转录活性,而用Cdk5抑制剂(roscovitine)能够显著提高FOXO1的转录活性并诱导FOXO1入核。与野生型对比,在Cdk5杂合子中,FOXO1蛋白在细胞核中定位显著提高。H_2O_2和glutamate处理诱导p35切割形成p25,同时抑制FOXO1的转录活性,而敲低Cdk5能够缓解H_2O_2和glutamate对FOXO1的转录活性的抑制。通过H_2O_2和glutamate处理的原代神经元,caspase3染色显著增加。结论 Cdk5/p39可以磷酸化FOXO1-ser249位点,并抑制FOXO1的转录活性;而氧化应激能够通过激活Cdk5,抑制FOXO1的转录活性,并诱导神经元凋亡。 展开更多

关键词 氧化应激 激活细胞周期蛋白依赖性激酶5(Cdk5) 叉头框转录因子O亚家族蛋白1(FOXO1) caspase-3

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