目的:探讨胎儿皮肤中β1整合素与基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2)表达的意义。方法:选取11～25周胎儿背部皮肤25例,采用苏木精-...目的:探讨胎儿皮肤中β1整合素与基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2)表达的意义。方法:选取11～25周胎儿背部皮肤25例,采用苏木精-伊红染色、免疫组化和反转录(RT)-PCR分别从蛋白质、mRNA水平检测β1整合素与MMP-2及TIMP-2的表达情况。结果:13～21周胎儿的皮肤表皮由3层逐渐发展为4层,毛囊和皮脂腺等皮肤附属结构由开始发育到结构的形成,基底层细胞β1整合素均为阳性,表皮外层角蛋白(K)10染色阳性细胞数逐渐增多,胎龄11～13周与23～25周时相比差异有统计学意义(P<0.01)。MMP-2与TIMP-2表达水平均呈逐渐升高趋势,两种基因在胎龄11～13周与23～25周时相比差异均有统计学意义(P=0.000)。结论:人胎儿期表皮基底层增殖细胞主要为表皮干细胞,随胎龄增加,终末分化细胞的比例明显增高。MMP-2和TIMP-2对皮肤的生长发育、结构功能的维持具有重要的调节作用。展开更多
目的探讨miR-25-3p靶向解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)调控Notch信号通路对P19细胞向心肌细胞分化的影响。方法采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,分别收集诱导分化第0、5、10天的细胞,实时荧光定量PCR检测诱导分化过程中...目的探讨miR-25-3p靶向解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)调控Notch信号通路对P19细胞向心肌细胞分化的影响。方法采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,分别收集诱导分化第0、5、10天的细胞,实时荧光定量PCR检测诱导分化过程中心肌分化标志物GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心房利钠尿多肽(ANP)的mRNA以及miR-25-3p水平, Western blot法检测诱导分化过程中ADAM10蛋白水平。通过逆转录病毒感染P19细胞过表达miR-25-3p,采用实时荧光定量PCR检测感染后P19细胞中miR-25-3p水平, Western blot法检测感染后P19细胞ADAM10蛋白水平。生物信息学软件预测并通过荧光素酶报告实验验证miR-25-3p与ADAM10之间的靶向结合作用。感染后的P19细胞经DMSO诱导分化10d后,免疫荧光实验检测细胞中心肌肌钙蛋白I(cTnI)蛋白的表达情况,并计算心肌细胞分化率;Western blot法检测GATA4、cTnT、ANP以及Notch信号通路相关蛋白Notch1、Hes家族bHLH转录因子1(Hes1)、Hairy相关转录因子1(Hey1)和Hey2蛋白水平。结果P19细胞向心肌细胞诱导分化的第0、5、10天过程中, GATA4、cTnT、ANP的mRNA水平及ADAM10蛋白水平均逐渐增加,而miR-25-3p水平逐渐降低;逆转录病毒感染后, P19细胞中miR-25-3p水平显著增加,而ADAM10蛋白水平显著降低;生物信息学分析证实ADAM10为miR-25-3p的靶基因;诱导分化10 d后,过表达miR-25-3p可显著降低心肌细胞分化率,下调GATA4、cTnT、ANP及Notch信号通路相关分子Notch1、Hes1、Hey1和Hey2的蛋白水平。结论miR-25-3p可显著抑制P19细胞向心肌细胞分化,其机制可能与其靶向抑制ADAM10表达,进而抑制Notch信号通路的激活有关。展开更多
文摘目的:探讨胎儿皮肤中β1整合素与基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2)表达的意义。方法:选取11～25周胎儿背部皮肤25例,采用苏木精-伊红染色、免疫组化和反转录(RT)-PCR分别从蛋白质、mRNA水平检测β1整合素与MMP-2及TIMP-2的表达情况。结果:13～21周胎儿的皮肤表皮由3层逐渐发展为4层,毛囊和皮脂腺等皮肤附属结构由开始发育到结构的形成,基底层细胞β1整合素均为阳性,表皮外层角蛋白(K)10染色阳性细胞数逐渐增多,胎龄11～13周与23～25周时相比差异有统计学意义(P<0.01)。MMP-2与TIMP-2表达水平均呈逐渐升高趋势,两种基因在胎龄11～13周与23～25周时相比差异均有统计学意义(P=0.000)。结论:人胎儿期表皮基底层增殖细胞主要为表皮干细胞,随胎龄增加,终末分化细胞的比例明显增高。MMP-2和TIMP-2对皮肤的生长发育、结构功能的维持具有重要的调节作用。
文摘目的探讨miR-25-3p靶向解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)调控Notch信号通路对P19细胞向心肌细胞分化的影响。方法采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,分别收集诱导分化第0、5、10天的细胞,实时荧光定量PCR检测诱导分化过程中心肌分化标志物GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心房利钠尿多肽(ANP)的mRNA以及miR-25-3p水平, Western blot法检测诱导分化过程中ADAM10蛋白水平。通过逆转录病毒感染P19细胞过表达miR-25-3p,采用实时荧光定量PCR检测感染后P19细胞中miR-25-3p水平, Western blot法检测感染后P19细胞ADAM10蛋白水平。生物信息学软件预测并通过荧光素酶报告实验验证miR-25-3p与ADAM10之间的靶向结合作用。感染后的P19细胞经DMSO诱导分化10d后,免疫荧光实验检测细胞中心肌肌钙蛋白I(cTnI)蛋白的表达情况,并计算心肌细胞分化率;Western blot法检测GATA4、cTnT、ANP以及Notch信号通路相关蛋白Notch1、Hes家族bHLH转录因子1(Hes1)、Hairy相关转录因子1(Hey1)和Hey2蛋白水平。结果P19细胞向心肌细胞诱导分化的第0、5、10天过程中, GATA4、cTnT、ANP的mRNA水平及ADAM10蛋白水平均逐渐增加,而miR-25-3p水平逐渐降低;逆转录病毒感染后, P19细胞中miR-25-3p水平显著增加,而ADAM10蛋白水平显著降低;生物信息学分析证实ADAM10为miR-25-3p的靶基因;诱导分化10 d后,过表达miR-25-3p可显著降低心肌细胞分化率,下调GATA4、cTnT、ANP及Notch信号通路相关分子Notch1、Hes1、Hey1和Hey2的蛋白水平。结论miR-25-3p可显著抑制P19细胞向心肌细胞分化,其机制可能与其靶向抑制ADAM10表达,进而抑制Notch信号通路的激活有关。
