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利用根瘤农杆菌LBA4404 Ti质粒介导高效转化产黄青霉及克隆vgb基因
被引量：
7
1
作者
孙传宝
朱春宝
+1 位作者
朱宝泉
许文思
《中国抗生素杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第2期87-91,107,共6页
通过根瘤农杆菌 (Agrobacterium tumefaciens) L BA4 4 0 4中 Ti-质粒的介导将含有透明颤菌血红蛋白 (Vitreoscilla Hemoglobin,VHb)基因 vgb和博来霉素 (bleomycin)抗性基因转移到产黄青霉 (Penicilliumchrysogenum)中 ;利用根瘤农杆...
通过根瘤农杆菌 (Agrobacterium tumefaciens) L BA4 4 0 4中 Ti-质粒的介导将含有透明颤菌血红蛋白 (Vitreoscilla Hemoglobin,VHb)基因 vgb和博来霉素 (bleomycin)抗性基因转移到产黄青霉 (Penicilliumchrysogenum)中 ;利用根瘤农杆菌介导转化产黄青霉孢子时需要有乙酰丁香酮诱导 ;转化菌丝体时乙酰丁香酮不是必要的 ,但一定浓度的乙酰丁香酮可提高转化率 ,与原生质体转化法相比可提高转化率 10倍左右。
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关键词
根瘤农杆菌
TI质粒
产黄青霉
VGB基因
原生质体转化法
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职称材料
大丽轮枝菌(Verticillim dahliae)突变体库的构建与分析
2
作者
潘国强
吴思源
+3 位作者
刘璐
郭惠明
程红梅
苏晓峰
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期112-119,共8页
为了更加快捷地筛选大丽轮枝菌致病关键基因,利用聚乙二醇介导的原生质体转化法构建病原菌随机插入突变体库,对部分阳性转化子的生长表型指标和致病力进行分析,筛选生长发育与致病缺陷突变体并进行靶标基因定位。结果表明,本研究共获得1...
为了更加快捷地筛选大丽轮枝菌致病关键基因,利用聚乙二醇介导的原生质体转化法构建病原菌随机插入突变体库,对部分阳性转化子的生长表型指标和致病力进行分析,筛选生长发育与致病缺陷突变体并进行靶标基因定位。结果表明,本研究共获得13030多个阳性转化子,随机挑选5个转化子与V991野生型菌株进行比较分析,发现其中一个突变体在PDA和不同碳源培养基上的菌落直径、产孢量以及致病力均显著降低。侧翼序列测序结果结合Blast比对分析表明,该缺陷突变体中的潮霉素抗性基因表达盒定位于大丽轮枝菌3号染色体1528782 bp处,属于内切葡聚糖酶1基因(VDAG_04017)。综上所述,本研究通过大丽轮枝菌插入突变体库构建、突变体生长表型指标和致病力鉴定及靶标基因定位等一系列分子生物学手段,可初步鉴定病原菌致病相关基因,为从全基因组层面深入研究大丽轮枝菌致病机制奠定了一定基础。
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关键词
大丽轮枝菌
聚乙二醇介导的
原生质体转化法
致病相关基因
致病力
侧翼序列分析
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职称材料
题名
利用根瘤农杆菌LBA4404 Ti质粒介导高效转化产黄青霉及克隆vgb基因
被引量：
7
1
作者
孙传宝
朱春宝
朱宝泉
许文思
机构
上海医药工业研究院
出处
《中国抗生素杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第2期87-91,107,共6页
文摘
通过根瘤农杆菌 (Agrobacterium tumefaciens) L BA4 4 0 4中 Ti-质粒的介导将含有透明颤菌血红蛋白 (Vitreoscilla Hemoglobin,VHb)基因 vgb和博来霉素 (bleomycin)抗性基因转移到产黄青霉 (Penicilliumchrysogenum)中 ;利用根瘤农杆菌介导转化产黄青霉孢子时需要有乙酰丁香酮诱导 ;转化菌丝体时乙酰丁香酮不是必要的 ,但一定浓度的乙酰丁香酮可提高转化率 ,与原生质体转化法相比可提高转化率 10倍左右。
关键词
根瘤农杆菌
TI质粒
产黄青霉
VGB基因
原生质体转化法
Keywords
Agrobacterium tumefaciens
Ti plasmid
Penicillium chrysogenum
Transform
分类号
R978.11 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
大丽轮枝菌(Verticillim dahliae)突变体库的构建与分析
2
作者
潘国强
吴思源
刘璐
郭惠明
程红梅
苏晓峰
机构
中国农业科学院生物技术研究所
中国农业大学植物保护学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期112-119,共8页
基金
国家自然科学基金项目(32072376)。
文摘
为了更加快捷地筛选大丽轮枝菌致病关键基因,利用聚乙二醇介导的原生质体转化法构建病原菌随机插入突变体库,对部分阳性转化子的生长表型指标和致病力进行分析,筛选生长发育与致病缺陷突变体并进行靶标基因定位。结果表明,本研究共获得13030多个阳性转化子,随机挑选5个转化子与V991野生型菌株进行比较分析,发现其中一个突变体在PDA和不同碳源培养基上的菌落直径、产孢量以及致病力均显著降低。侧翼序列测序结果结合Blast比对分析表明,该缺陷突变体中的潮霉素抗性基因表达盒定位于大丽轮枝菌3号染色体1528782 bp处,属于内切葡聚糖酶1基因(VDAG_04017)。综上所述,本研究通过大丽轮枝菌插入突变体库构建、突变体生长表型指标和致病力鉴定及靶标基因定位等一系列分子生物学手段,可初步鉴定病原菌致病相关基因,为从全基因组层面深入研究大丽轮枝菌致病机制奠定了一定基础。
关键词
大丽轮枝菌
聚乙二醇介导的
原生质体转化法
致病相关基因
致病力
侧翼序列分析
Keywords
Verticillium dahliae
polyethylene glycol mediated protoplast transformation
pathogenicity-related genes
pathogenicity
flanking sequence analysis
分类号
S51 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用根瘤农杆菌LBA4404 Ti质粒介导高效转化产黄青霉及克隆vgb基因
孙传宝
朱春宝
朱宝泉
许文思
《中国抗生素杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2002
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
大丽轮枝菌(Verticillim dahliae)突变体库的构建与分析
潘国强
吴思源
刘璐
郭惠明
程红梅
苏晓峰
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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职称材料
已选择
0
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引证文献
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