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应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究被引量：16: 1; 作者布日额李宝臣 +2 位作者马波王君伟 Ulrich Neumann 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期199-203,共5页; 利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅Ig... 展开更多; 关键词鹅细小病毒 VP3基因重组原核表达产物间接-ELISA Dot—ELISA; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE的构建和表达被引量：1: 2; 作者焦志勇陈旻湖 +3 位作者李国庆朱森林陈为胡品津《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期34-36,67,共4页; 目的　构建表达幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B亚单位 (ureB)基因与大肠杆菌K - 12株hlyE基因融合表达的原核表达质粒 pTrc99A -hlyE 并表达。方法　用PCR扩增hlyE基因 ,经酶切连接反应将其克隆入重组原核表达质粒并测序 ,... 展开更多; 关键词重组原核表达质粒 pTrc99A-ureB/hlyE 尿素酶B亚单位幽门螺杆菌; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪圆环病毒2型ORF2截短基因的原核表达与纯化被引量：4: 3; 作者林彦星孙彦伟 +3 位作者刘镇明徐铮鲁俊鹏龚善中《动物医学进展》 CSCD 2006年第12期66-70,共5页; 对重组原核表达载体pET-ORF2的表达条件进行优化,结果表明,最佳IPTG诱导浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时间为5h。在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒2型重组Cap蛋白的基础上,利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,再分别用SDS-PAGE... 展开更多; 关键词猪圆环病毒2型重组原核表达载体重组CAP蛋白表达纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

HBV/HEV融合二价抗原原核表达载体的构建及蛋白的初步表达: 4; 作者何秀霞于源华 +1 位作者张春兰荀恒杰《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期631-633,共3页; 目的：构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价抗原的重组原核表达载体,并在E.coliBL21（DE3）中表达。方法：采用PCR方法扩增出HBV的S基因和HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414-606aa的基因片段,将两片段连接后克隆入T载体,得到融合基因,将... 展开更多; 关键词 HBV HEV 重组原核表达载体二价疫苗; 在线阅读下载PDF 职称材料

结核分支杆菌Mtb8.4真核、原核表达质粒的构建与表达被引量：2: 5; 作者杨宏倩李博 +1 位作者蔡宏朱玉贤《动物医学进展》 CSCD 2006年第1期54-57,共4页; 低分子质量蛋白抗原Mtb8.4是一种非常重要的结核分支杆菌抗原,为了研制结核病核酸疫苗和进行结核病的诊断,分别将其构建到原核和真核载体中进行表达。以结核分支杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增目的基因Mtb8.4,扩增产物酶切... 展开更多; 关键词结核病 Mtb8.4重组原核表达载体核酸疫苗; 在线阅读下载PDF 职称材料

一种贻贝酰胺酶型肽聚糖识别蛋白的分子特征及功能分析: 6; 作者阳宗欣王昊东 +6 位作者何志巧肖文慧杨子霖张晓林何建瑜严小军廖智《水生生物学报》北大核心 2025年第2期116-128,共13页; 从厚壳贻贝(Mytilus coruscus)鳃组织中鉴定到一种新型贻贝肽聚糖识别蛋白(Peptidoglycan recognition protein,PGRP)分子,为探讨其在贻贝先天免疫系统中的作用,对其开展了序列分析,表达模式,亚细胞定位,原核重组表达及表达产物的功能... 展开更多; 关键词肽聚糖识别蛋白荧光定量PCR 原核重组表达免疫厚壳贻贝; 在线阅读下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白单克隆抗体的研制被引量：4: 7; 作者提金凤李志杰 +1 位作者王海燕吴卫东《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第3期7-11,共5页; 为研制鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)VP1蛋白单克隆抗体,用已鉴定的Ⅰ型DHV的全病毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,并以构建的原核重组质粒pET-VP-1在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的VP1蛋白作为筛选... 展开更多; 关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒杂交瘤单克隆抗体原核重组表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究被引量：16: 1; 作者布日额李宝臣马波王君伟 Ulrich Neumann; 机构东北农业大学动物医学院农业部青岛动植物检疫局汉诺威兽医学院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期199-203,共5页; 基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目(重大项目10541z004); 文摘利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅IgG的工作浓度是1：200，检测血清的最适稀释度是1：400，阳性判定标准为OD492≥0．20，且P／N≥2．0。用此方法检测弱毒疫苗免疫血清，其抗体滴度在1：400～1：51200。Dot-ELISA的结果与间接-ELISA的结果一致。; 关键词鹅细小病毒 VP3基因重组原核表达产物间接-ELISA Dot—ELISA; Keywords goose parvovirus recombinant VP3 gene prokaryotic expression product indirect ELISA Dot-ELISA; 分类号 S854.43 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE的构建和表达被引量：1: 2; 作者焦志勇陈旻湖李国庆朱森林陈为胡品津; 机构中山大学第一附属医院消化内科; 出处《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期34-36,67,共4页; 基金 2002年度教育部骨干教师基金(2 0 0 0 -0 65) 2 0 0 2年广东省自然科学基金重点项目 (0 2 1898) +1 种基金 CMB -Sumsscholarprogram(NO .98-677); 文摘目的　构建表达幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B亚单位 (ureB)基因与大肠杆菌K - 12株hlyE基因融合表达的原核表达质粒 pTrc99A -hlyE 并表达。方法　用PCR扩增hlyE基因 ,经酶切连接反应将其克隆入重组原核表达质粒并测序 ,与GenBank中的核酸和蛋白序列进行BLAST分析 ,重组的阳性克隆经IPTG诱导培养 ,SDS -PAGE电泳进行表达分析 ,薄层扫描分析融合蛋白的含量。结果　对重组质粒进行酶切和PCR检测 ,证明构建了携带hlyE及ureB基因的重组原核表达质粒 pTrc99A -ureB/hlyE ,核酸序列测定及同源性分析证实所构建的原核表达质粒pTrc99A -ureB/hlyE中所含的Hp -ureB及hlyE与GeneBank中的Hp -ureB和hlyE序列的同源性分别为 97 4 2 % (16 6 3/ 170 7)、99% (910 / 918)。重组细菌JM10 9可表达约 10 0kD的融合蛋白ureB/hlyE ,含量占全菌体蛋白含量的 15 5 %。结论　构建并鉴定了原核表达质粒pTrc99A -hlyE并高效表达。; 关键词重组原核表达质粒 pTrc99A-ureB/hlyE 尿素酶B亚单位幽门螺杆菌; Keywords Helicobacter pylori ureB gene hlyE gene Vaccine Recombinant; 分类号 R378.2 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪圆环病毒2型ORF2截短基因的原核表达与纯化被引量：4: 3; 作者林彦星孙彦伟刘镇明徐铮鲁俊鹏龚善中; 机构华南农业大学兽医学院广东省动物防疫监督总所; 出处《动物医学进展》 CSCD 2006年第12期66-70,共5页; 文摘对重组原核表达载体pET-ORF2的表达条件进行优化,结果表明,最佳IPTG诱导浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时间为5h。在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒2型重组Cap蛋白的基础上,利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,再分别用SDS-PAGE电泳和Westernblotting对纯化产物的纯化效果及特异性进行检测,结果显示表达产物纯化良好,并能被PCV-2阳性血清识别,具有良好的抗原性。; 关键词猪圆环病毒2型重组原核表达载体重组CAP蛋白表达纯化; Keywords PCV-2 recombinant prokaryot ic expression vector recombinant Cap expression purification; 分类号 S852.659.2 [农业科学—基础兽医学] Q785 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名HBV/HEV融合二价抗原原核表达载体的构建及蛋白的初步表达: 4; 作者何秀霞于源华张春兰荀恒杰; 机构长春理工大学生命科学技术学院; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期631-633,共3页; 基金吉林省教育厅基金资助项目(20050402-5); 文摘目的：构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价抗原的重组原核表达载体,并在E.coliBL21（DE3）中表达。方法：采用PCR方法扩增出HBV的S基因和HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414-606aa的基因片段,将两片段连接后克隆入T载体,得到融合基因,将融合基因克隆入含有Ω增强子的pTΩ-TE高效的原核表达载体中,构建重组质粒pTΩ-T7SE。将pTΩ-T7SE转化E.coliBL21（DE3）,经IPTG诱导后用Western blot鉴定融合蛋白。结果：获得全长为1284bp的融合的HBV/HEV的基因片段。已构建的重组质粒pTΩ-T7SE转化E.coliBL21（DE3）后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量（Mr）约为50000重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于胞质中,表达量约占全菌蛋白的30.52%。Western blot结果表明在Mr为50000处可见特异性着色带。结论：成功构建了原核表达载体pTΩ-T7SE,并表达出目的蛋白,为研制预防乙型和戊型肝炎双价疫苗提供了实验技术基础。; 关键词 HBV HEV 重组原核表达载体二价疫苗; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名结核分支杆菌Mtb8.4真核、原核表达质粒的构建与表达被引量：2: 5; 作者杨宏倩李博蔡宏朱玉贤; 机构北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室; 出处《动物医学进展》 CSCD 2006年第1期54-57,共4页; 基金国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2001AA213141); 文摘低分子质量蛋白抗原Mtb8.4是一种非常重要的结核分支杆菌抗原,为了研制结核病核酸疫苗和进行结核病的诊断,分别将其构建到原核和真核载体中进行表达。以结核分支杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增目的基因Mtb8.4,扩增产物酶切后分别克隆到真核表达载体pJW4303和原核表达载体pGEX-4T-1中,构成重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4,用限制性内切酶消化,PCR扩增及DNA序列分析等多种方法鉴定;并将正确构建的原核表达载体转入E.coliBL21(DE3)plysS中,IPTG诱导表达。结果表明,重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4构建成功。构建的真核重组质粒pJW-Mtb8.4即可作为结核病DNA疫苗。原核表达载体pGEX-Mtb8.4在BL21(DE3)plysS中成功表达,将表达蛋白进行纯化,作为保护性结核分支杆菌抗原以便检测DNA疫苗的免疫效果。; 关键词结核病 Mtb8.4重组原核表达载体核酸疫苗; Keywords tuberculosis Mtb8.4 recombinant prokaryotic expression vectors DNA vaccine; 分类号 S852.618 [农业科学—基础兽医学] Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一种贻贝酰胺酶型肽聚糖识别蛋白的分子特征及功能分析: 6; 作者阳宗欣王昊东何志巧肖文慧杨子霖张晓林何建瑜严小军廖智; 机构浙江海洋大学海洋科学与技术学院; 出处《水生生物学报》北大核心 2025年第2期116-128,共13页; 基金国家自然科学基金(32271580和42020104009)资助。; 文摘从厚壳贻贝(Mytilus coruscus)鳃组织中鉴定到一种新型贻贝肽聚糖识别蛋白(Peptidoglycan recognition protein,PGRP)分子,为探讨其在贻贝先天免疫系统中的作用,对其开展了序列分析,表达模式,亚细胞定位,原核重组表达及表达产物的功能验证研究。研究结果表明,厚壳贻贝新型PGRP由438个氨基酸残基组成。序列中含典型肽聚糖识别蛋白/酰胺酶(PGRP/Amidase)结构域,属于酰胺酶型PGRP。该蛋白在厚壳贻贝各组织中呈组成型表达特征。微生物胁迫可明显上调PGRP表达量,其响应速度和表达量上调幅度对不同微生物胁迫具有差异。利用原核重组表达技术成功表达出可溶性重组厚壳贻贝PGRP。对表达产物的功能验证结果表明,重组厚壳贻贝PGRP蛋白表现出明显的抑菌活性、细菌凝集活性和对PGN的酰胺酶活性,上述活性均具有锌离子依赖性。亚细胞定位分析结果表明,该PGRP分子主要定位于细胞核内。上述结果为深入了解厚壳贻贝的免疫识别机制奠定了基础。; 关键词肽聚糖识别蛋白荧光定量PCR 原核重组表达免疫厚壳贻贝; Keywords Peptidoglycan recognition protein Quantitative PCR Prokaryotic recombinant expression Immune Mytilus coruscus; 分类号 Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白单克隆抗体的研制被引量：4: 7; 作者提金凤李志杰王海燕吴卫东; 机构山东畜牧兽医职业学院山东省寿光市圣城畜牧兽医管理站山东省菏泽市畜牧局; 出处《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第3期7-11,共5页; 基金山东省高等学校科技计划项目(J10LC51); 文摘为研制鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)VP1蛋白单克隆抗体,用已鉴定的Ⅰ型DHV的全病毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,并以构建的原核重组质粒pET-VP-1在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的VP1蛋白作为筛选抗原,通过间接ELISA法对杂交瘤进行筛选,经亚克隆后获得1株针对Ⅰ型DHV VP1蛋白的特异性单克隆抗体。对该株单克隆抗体的特性鉴定发现其特异性强、中和性较好。该抗体为今后I型鸭肝炎病毒的检测试剂盒研制提供了重要的生物制剂。; 关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒杂交瘤单克隆抗体原核重组表达; Keywords Duck hepatitis virus hybridoma monoconal antibodies prokaryotic recombinant expression; 分类号 S852.659.6 [农业科学—基础兽医学] S852.43 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究	布日额李宝臣马波王君伟 Ulrich Neumann	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2006	16	在线阅读下载PDF 职称材料
2	重组原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE的构建和表达	焦志勇陈旻湖李国庆朱森林陈为胡品津	《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心	2003	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	猪圆环病毒2型ORF2截短基因的原核表达与纯化	林彦星孙彦伟刘镇明徐铮鲁俊鹏龚善中	《动物医学进展》 CSCD	2006	4	在线阅读下载PDF 职称材料
4	HBV/HEV融合二价抗原原核表达载体的构建及蛋白的初步表达	何秀霞于源华张春兰荀恒杰	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2008	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	结核分支杆菌Mtb8.4真核、原核表达质粒的构建与表达	杨宏倩李博蔡宏朱玉贤	《动物医学进展》 CSCD	2006	2	在线阅读下载PDF 职称材料
6	一种贻贝酰胺酶型肽聚糖识别蛋白的分子特征及功能分析	阳宗欣王昊东何志巧肖文慧杨子霖张晓林何建瑜严小军廖智	《水生生物学报》北大核心	2025	0	在线阅读下载PDF 职称材料
7	Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白单克隆抗体的研制	提金凤李志杰王海燕吴卫东	《中国动物传染病学报》 CAS	2012	4	在线阅读下载PDF 职称材料