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丹参C4H基因pET32a原核表达载体的构建
被引量：
8
1
作者
张婷婷
王春丽
+3 位作者
韩蕊莲
刘岩
赵旺生
梁宗锁
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2011年第7期158-162,共5页
【目的】克隆丹参中肉桂酸-4-羟化酶基因(SmC4H)的核心区,并构建SmC4H基因的原核表达载体。【方法】设计合成SmC4H基因全长引物,应用PCR克隆SmC4H基因的编码区并添加酶切位点,应用EcoRⅤ、NotⅠ双酶切SmC4H-pGM-T后与原核表达载体pET32...
【目的】克隆丹参中肉桂酸-4-羟化酶基因(SmC4H)的核心区,并构建SmC4H基因的原核表达载体。【方法】设计合成SmC4H基因全长引物,应用PCR克隆SmC4H基因的编码区并添加酶切位点,应用EcoRⅤ、NotⅠ双酶切SmC4H-pGM-T后与原核表达载体pET32a连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行双酶切鉴定,诱导表达重组蛋白并进行SDS-PAGE电泳以及Western Blot分析。【结果】克隆得到了1 200 bp大小的基因片段,经测序鉴定其为SmC4H基因片段;连接表达载体测序结果表明,SmC4H-pET32a构建成功,其诱导表达蛋白经SDS-PAGE检测及Western Blot分析发现,重组蛋白表达效果较好,且主要以包涵体形式存在。【结论】成功构建了SmC4H-pET32a原核表达载体,并成功诱导了SmC4H-pET32a重组蛋白的表达。
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关键词
丹参
肉桂酸-4-羟化酶
pet
32a
原核
表达
载体
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职称材料
日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶原核表达载体的构建及序列分析
被引量：
1
2
作者
方桂杰
乔宪凤
《江西农业学报》
CAS
2010年第11期8-10,14,共4页
为构建带有组氨酸标签(his-tag)的日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(sjGST)表达载体。以载有sjGST基因的载体PGEX-KG为模板,PCR扩增sjGST基因,并在进行酶切和基因测序后将其克隆到pET28a载体上。运用生物学软件与具有代表性的血吸虫GST基因...
为构建带有组氨酸标签(his-tag)的日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(sjGST)表达载体。以载有sjGST基因的载体PGEX-KG为模板,PCR扩增sjGST基因,并在进行酶切和基因测序后将其克隆到pET28a载体上。运用生物学软件与具有代表性的血吸虫GST基因进行比对并对可能的表达产物进行分析。结果表明,PCR产物与3种sjGST基因有99%的同源性。重组载体构建成功。
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关键词
日本血吸虫
谷胱甘肽硫转移酶
原核
表达
载体
的构建
序列分析
SCHISTOSOMA
JAPONICUM
Sequence
Analysis
基因测序
重组
载体
构建
组氨酸标签
生物学软件
表达
产物
PCR产物
HIS-TAG
GST基因
同源性
代表性
pet
28a
模板
酶切
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职称材料
含几丁质酶基因的粪产碱菌工程菌(BC2007)的构建
被引量：
1
3
作者
陈彬
郑斯平
郑伟文
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期894-897,926,共5页
从苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)中扩增出几丁质酶全长基因,通过克隆,测序得到2025 bp的序列。通过再线生物信息学软件,得到该几丁质酶的一级、二级、三级结构。将该基因通过电转化导入原核表达载体pET29 a,筛选到含该几丁质酶基...
从苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)中扩增出几丁质酶全长基因,通过克隆,测序得到2025 bp的序列。通过再线生物信息学软件,得到该几丁质酶的一级、二级、三级结构。将该基因通过电转化导入原核表达载体pET29 a,筛选到含该几丁质酶基因的BC2007。初步研究表明BC2007在含胶体几丁质的平板上产生了透明圈。
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关键词
几丁质酶基因
粪产碱菌
原核表达载体pet29a
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职称材料
题名
丹参C4H基因pET32a原核表达载体的构建
被引量：
8
1
作者
张婷婷
王春丽
韩蕊莲
刘岩
赵旺生
梁宗锁
机构
西北农林科技大学生命科学学院
中国科学院水利部水土保持研究所
天津天士力现代中药资源有限公司
出处
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2011年第7期158-162,共5页
基金
国家"十一五"科技支撑计划项目(2008BAD98B08-3)
文摘
【目的】克隆丹参中肉桂酸-4-羟化酶基因(SmC4H)的核心区,并构建SmC4H基因的原核表达载体。【方法】设计合成SmC4H基因全长引物,应用PCR克隆SmC4H基因的编码区并添加酶切位点,应用EcoRⅤ、NotⅠ双酶切SmC4H-pGM-T后与原核表达载体pET32a连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行双酶切鉴定,诱导表达重组蛋白并进行SDS-PAGE电泳以及Western Blot分析。【结果】克隆得到了1 200 bp大小的基因片段,经测序鉴定其为SmC4H基因片段;连接表达载体测序结果表明,SmC4H-pET32a构建成功,其诱导表达蛋白经SDS-PAGE检测及Western Blot分析发现,重组蛋白表达效果较好,且主要以包涵体形式存在。【结论】成功构建了SmC4H-pET32a原核表达载体,并成功诱导了SmC4H-pET32a重组蛋白的表达。
关键词
丹参
肉桂酸-4-羟化酶
pet
32a
原核
表达
载体
Keywords
Salvia miltiorrhiza
cinnamic acid-4-hydroxylase
pet
32a
induced expression vector
分类号
S567.53 [农业科学—中草药栽培]
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职称材料
题名
日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶原核表达载体的构建及序列分析
被引量：
1
2
作者
方桂杰
乔宪凤
机构
湖北工业大学生物工程学院发酵工程省部共建教育部重点实验室
湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程与分子育种湖北省重点实验室
出处
《江西农业学报》
CAS
2010年第11期8-10,14,共4页
基金
湖北工业大学博士启动基金(32700224)
文摘
为构建带有组氨酸标签(his-tag)的日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(sjGST)表达载体。以载有sjGST基因的载体PGEX-KG为模板,PCR扩增sjGST基因,并在进行酶切和基因测序后将其克隆到pET28a载体上。运用生物学软件与具有代表性的血吸虫GST基因进行比对并对可能的表达产物进行分析。结果表明,PCR产物与3种sjGST基因有99%的同源性。重组载体构建成功。
关键词
日本血吸虫
谷胱甘肽硫转移酶
原核
表达
载体
的构建
序列分析
SCHISTOSOMA
JAPONICUM
Sequence
Analysis
基因测序
重组
载体
构建
组氨酸标签
生物学软件
表达
产物
PCR产物
HIS-TAG
GST基因
同源性
代表性
pet
28a
模板
酶切
Keywords
Glutathlone S-transferase
S.japonicum
Gene amplification
Sequence analysis
Bioinformatic technique
分类号
S [农业科学]
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职称材料
题名
含几丁质酶基因的粪产碱菌工程菌(BC2007)的构建
被引量：
1
3
作者
陈彬
郑斯平
郑伟文
机构
福建省农业科学院生物技术研究所
出处
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期894-897,926,共5页
基金
福建省科技计划项目[闽科(2003)61号]
福建省农科院青年创新基金
文摘
从苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)中扩增出几丁质酶全长基因,通过克隆,测序得到2025 bp的序列。通过再线生物信息学软件,得到该几丁质酶的一级、二级、三级结构。将该基因通过电转化导入原核表达载体pET29 a,筛选到含该几丁质酶基因的BC2007。初步研究表明BC2007在含胶体几丁质的平板上产生了透明圈。
关键词
几丁质酶基因
粪产碱菌
原核表达载体pet29a
Keywords
chitinase
Alcaligenes faecalis
vector
pet
29a
分类号
Q939.149 [生物学—微生物学]
S482.28 [农业科学—农药学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
丹参C4H基因pET32a原核表达载体的构建
张婷婷
王春丽
韩蕊莲
刘岩
赵旺生
梁宗锁
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2011
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶原核表达载体的构建及序列分析
方桂杰
乔宪凤
《江西农业学报》
CAS
2010
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
含几丁质酶基因的粪产碱菌工程菌(BC2007)的构建
陈彬
郑斯平
郑伟文
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
1
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职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
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