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重组原核表达载体pGEX-4T-1-MAGE-1的构建及表达
被引量：
1
1
作者
何炜
章茜
+1 位作者
张朝
赵国强
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2006年第3期491-494,共4页
目的:构建人肿瘤相关抗原MAGE1基因原核表达载体。方法:从人肝细胞性肝癌组织中提取总RNA,RT- PCR扩增出MAGE1基因。酶切鉴定后,将其插入pGEM T载体,再克隆至原核表达载体pGEX4T-1中,构建重组表达质粒pGEX4T-1MAGE-1。将重组质粒转化大...
目的:构建人肿瘤相关抗原MAGE1基因原核表达载体。方法:从人肝细胞性肝癌组织中提取总RNA,RT- PCR扩增出MAGE1基因。酶切鉴定后,将其插入pGEM T载体,再克隆至原核表达载体pGEX4T-1中,构建重组表达质粒pGEX4T-1MAGE-1。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经1mmol/L异丙基βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导4h,SDS PAGE及凝胶密度扫描分析目的蛋白的表达情况。结果:RT-PCR扩增出长度为927bp的MAGE1基因。重组表达质粒pGEX4T1MAGE1转化大肠杆菌BL21(DE3)后经诱导表达,目的蛋白约57000,占菌体总蛋白的23%。结论:成功构建出重组原核表达载体pGEX4T-1MAGE-1,该载体在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。
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关键词
MAGE-1
PGEX-
4
t-
1
表达
载体
原核
表达
融合蛋白
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职称材料
犬新孢子虫NcSRS2基因原核表达质粒的构建
被引量：
1
2
作者
丁德
梁晚枫
+3 位作者
田野
田万年
贾立军
张守发
《动物医学进展》
CSCD
2008年第2期24-27,共4页
根据已发表的犬新孢子虫NcSRS2基因序列,设计1对含有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点的引物。以提取犬新孢子虫虫体基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得NcSRS2 ORF基因片段,将此基因片段克隆到pMD18-T Simple载体上,用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切该片段,回...
根据已发表的犬新孢子虫NcSRS2基因序列,设计1对含有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点的引物。以提取犬新孢子虫虫体基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得NcSRS2 ORF基因片段,将此基因片段克隆到pMD18-T Simple载体上,用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切该片段,回收得到含有两个酶切位点黏端的Nc-SRS2 ORF基因,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的PGEM-4T-2原核表达载体中,获得重组质粒pGEX-NcSRS2,经PCR鉴定,限制性内切酶分析和克隆片段序列测定比较,证实了重组质粒的正确性。
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关键词
犬新孢子虫
聚合酶链反应
NCSRS
2
基因
原核表达载体pgem-4t-2
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职称材料
烟草C4H2基因的克隆与表达特性分析
被引量：
2
3
作者
刘晨
王祯
+3 位作者
朱先约
王文婷
黄申
翟玉俊
《轻工学报》
北大核心
2022年第1期68-78,共11页
以中烟202无菌幼苗为供试材料克隆出C4H2基因的CDS区,对该基因进行生物信息学分析,构建原核表达载体,在大肠杆菌中对重组质粒进行诱导表达及纯化分析,考查其在不同组织中的表达特性,以及叶片中黄酮含量变化趋势。结果表明:1)NtC4H2蛋白...
以中烟202无菌幼苗为供试材料克隆出C4H2基因的CDS区,对该基因进行生物信息学分析,构建原核表达载体,在大肠杆菌中对重组质粒进行诱导表达及纯化分析,考查其在不同组织中的表达特性,以及叶片中黄酮含量变化趋势。结果表明:1)NtC4H2蛋白属于细胞色素P450超家族成员,有1个跨膜区,为不稳定亲水蛋白,二级结构中α螺旋和无规则卷曲占比较高;2)重组NtC4H2蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于表达细菌中;3)Nt C4H2基因在烟草不同组织的表达水平为下部叶<茎<中部叶<根<上部叶,NtC4H2蛋白活性大小与基因表达量变化趋势相同,表明试验植株在不同生命阶段中的木质化进程会直接影响该基因在各个组织中的表达丰度;4)不同采样时间内上部叶中Nt C4H2基因表达量有明显波动,48 h表达量达峰值,确定了该基因表达模式与叶中黄酮的积累呈正相关。
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关键词
烟草
C
4
H
2
基因
生物信息学
原核
表达
载体
黄酮
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职称材料
肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域研究
被引量：
3
4
作者
韩旭
于潜
+4 位作者
田野
赵希彤
张磊
周镝
田大力
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第8期678-681,共4页
目的明确肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域。方法通过转化技术,在E.coli BL21(DE3)中诱导表达前期研究获得的表达载体pGEX-4T-1-ABCE1-55,获得GST-ABCE1-55重组融合蛋白表达,应用GST pull-down的方法验证p G...
目的明确肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域。方法通过转化技术,在E.coli BL21(DE3)中诱导表达前期研究获得的表达载体pGEX-4T-1-ABCE1-55,获得GST-ABCE1-55重组融合蛋白表达,应用GST pull-down的方法验证p GEX-4T-1-ABCE1-55与β-肌动蛋白有无相互作用。结果 GST-ABCE1-55是带有GST标签的含有357个氨基酸的重组蛋白,大小约66×10~3,在GST pull-down实验中,GST-ABCE1-55并不能与β-肌动蛋白特异结合。结论肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域应位于ABCE1蛋白第358位至第600位编码氨基酸中。
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关键词
ATP结合盒转运子E1
pGEX-
4
t-
1
原核
表达
载体
重组蛋白
表达
蛋白质相互作用结构域
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职称材料
题名
重组原核表达载体pGEX-4T-1-MAGE-1的构建及表达
被引量：
1
1
作者
何炜
章茜
张朝
赵国强
机构
郑州大学基础医学院生理学教研室
郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2006年第3期491-494,共4页
基金
河南省医学科技创新人才工程基金资助项目20043008
文摘
目的:构建人肿瘤相关抗原MAGE1基因原核表达载体。方法:从人肝细胞性肝癌组织中提取总RNA,RT- PCR扩增出MAGE1基因。酶切鉴定后,将其插入pGEM T载体,再克隆至原核表达载体pGEX4T-1中,构建重组表达质粒pGEX4T-1MAGE-1。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经1mmol/L异丙基βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导4h,SDS PAGE及凝胶密度扫描分析目的蛋白的表达情况。结果:RT-PCR扩增出长度为927bp的MAGE1基因。重组表达质粒pGEX4T1MAGE1转化大肠杆菌BL21(DE3)后经诱导表达,目的蛋白约57000,占菌体总蛋白的23%。结论:成功构建出重组原核表达载体pGEX4T-1MAGE-1,该载体在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。
关键词
MAGE-1
PGEX-
4
t-
1
表达
载体
原核
表达
融合蛋白
Keywords
MAGE-1
pGEX-
4
t-
1
expressive vector
prokaryotic expression
fusion protein
分类号
R730.3 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
犬新孢子虫NcSRS2基因原核表达质粒的构建
被引量：
1
2
作者
丁德
梁晚枫
田野
田万年
贾立军
张守发
机构
延边大学农学院动物医学系
出处
《动物医学进展》
CSCD
2008年第2期24-27,共4页
基金
延边大学农学院研究生创新基金项目
文摘
根据已发表的犬新孢子虫NcSRS2基因序列,设计1对含有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点的引物。以提取犬新孢子虫虫体基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得NcSRS2 ORF基因片段,将此基因片段克隆到pMD18-T Simple载体上,用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切该片段,回收得到含有两个酶切位点黏端的Nc-SRS2 ORF基因,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的PGEM-4T-2原核表达载体中,获得重组质粒pGEX-NcSRS2,经PCR鉴定,限制性内切酶分析和克隆片段序列测定比较,证实了重组质粒的正确性。
关键词
犬新孢子虫
聚合酶链反应
NCSRS
2
基因
原核表达载体pgem-4t-2
Keywords
Neospora caninum
PCR
NcSRS
2
gene
prokaryotic expression vector
分类号
S858.292 [农业科学—临床兽医学]
S852.723 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
烟草C4H2基因的克隆与表达特性分析
被引量：
2
3
作者
刘晨
王祯
朱先约
王文婷
黄申
翟玉俊
机构
甘肃烟草工业有限责任公司技术研发中心
郑州轻工业大学食品与生物工程学院
出处
《轻工学报》
北大核心
2022年第1期68-78,共11页
基金
烟草总公司重点科技研发项目(中烟办[2020]66号)
中烟实业科技项目(ZYSY-2019-12)。
文摘
以中烟202无菌幼苗为供试材料克隆出C4H2基因的CDS区,对该基因进行生物信息学分析,构建原核表达载体,在大肠杆菌中对重组质粒进行诱导表达及纯化分析,考查其在不同组织中的表达特性,以及叶片中黄酮含量变化趋势。结果表明:1)NtC4H2蛋白属于细胞色素P450超家族成员,有1个跨膜区,为不稳定亲水蛋白,二级结构中α螺旋和无规则卷曲占比较高;2)重组NtC4H2蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于表达细菌中;3)Nt C4H2基因在烟草不同组织的表达水平为下部叶<茎<中部叶<根<上部叶,NtC4H2蛋白活性大小与基因表达量变化趋势相同,表明试验植株在不同生命阶段中的木质化进程会直接影响该基因在各个组织中的表达丰度;4)不同采样时间内上部叶中Nt C4H2基因表达量有明显波动,48 h表达量达峰值,确定了该基因表达模式与叶中黄酮的积累呈正相关。
关键词
烟草
C
4
H
2
基因
生物信息学
原核
表达
载体
黄酮
Keywords
Nicotiana tabacum
cinnamate-
4
-hydroxylase-
2
gene
Bioinformatics
prokaryotic expression vector
flavone
分类号
TS413 [农业科学—烟草工业]
在线阅读
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职称材料
题名
肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域研究
被引量：
3
4
作者
韩旭
于潜
田野
赵希彤
张磊
周镝
田大力
机构
中国医科大学附属第四医院胸外科
出处
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第8期678-681,共4页
基金
国家自然科学基金(30973502
30170914)
辽宁省教育厅科学研究一般项目(L2013302)
文摘
目的明确肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域。方法通过转化技术,在E.coli BL21(DE3)中诱导表达前期研究获得的表达载体pGEX-4T-1-ABCE1-55,获得GST-ABCE1-55重组融合蛋白表达,应用GST pull-down的方法验证p GEX-4T-1-ABCE1-55与β-肌动蛋白有无相互作用。结果 GST-ABCE1-55是带有GST标签的含有357个氨基酸的重组蛋白,大小约66×10~3,在GST pull-down实验中,GST-ABCE1-55并不能与β-肌动蛋白特异结合。结论肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域应位于ABCE1蛋白第358位至第600位编码氨基酸中。
关键词
ATP结合盒转运子E1
pGEX-
4
t-
1
原核
表达
载体
重组蛋白
表达
蛋白质相互作用结构域
Keywords
ATP-binding cassette E1
prokaryotic expression vector pGEX-
4
t-
1-ABCE1
recombinant protein expression
interacting domain
分类号
R734.2 [医药卫生—肿瘤]
在线阅读
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组原核表达载体pGEX-4T-1-MAGE-1的构建及表达
何炜
章茜
张朝
赵国强
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2006
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
犬新孢子虫NcSRS2基因原核表达质粒的构建
丁德
梁晚枫
田野
田万年
贾立军
张守发
《动物医学进展》
CSCD
2008
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
烟草C4H2基因的克隆与表达特性分析
刘晨
王祯
朱先约
王文婷
黄申
翟玉俊
《轻工学报》
北大核心
2022
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域研究
韩旭
于潜
田野
赵希彤
张磊
周镝
田大力
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
3
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