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海洋创伤弧菌反式翻译系统关键因子SmpB基因的克隆及原核表达
被引量：
1
1
作者
刘鹏
岑妍慧
+4 位作者
林江
梁忠秀
兰太进
韩丝银
陈振兴
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第4期100-106,共7页
创伤弧菌(Vibrio vulnificus)是一种重要的"人鱼共患病"病原菌。通过克隆创伤弧菌反式翻译系统核心因子小蛋白B(Small molecular protein B,SmpB)基因,构建携带目的基因的原核表达质粒,为后续研究SmpB蛋白的互作网络、SmpB蛋...
创伤弧菌(Vibrio vulnificus)是一种重要的"人鱼共患病"病原菌。通过克隆创伤弧菌反式翻译系统核心因子小蛋白B(Small molecular protein B,SmpB)基因,构建携带目的基因的原核表达质粒,为后续研究SmpB蛋白的互作网络、SmpB蛋白与创伤弧菌致病性之间的关系并以此开发新型的抑菌靶标奠定基础。使用LiCl沉淀法提取创伤弧菌基因组DNA,以它为模板,PCR扩增目的基因,并构建到pET-28a原核表达载体上测序鉴定后对SmpB序列进行生物信息学分析,将正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定。结果表明使用LiCl沉淀法成功提取到高质量创伤弧菌基因组DNA,以其为模板,扩增到smpB基因,并成功构建pET-28a原核表达重组质粒,测序鉴定正确;smpB基因全长为486 bp,编码161个氨基酸,分子量为18.41 kD,理论等电点为10.28,不稳定系数为35.02,总平均亲水性为-0.635,SmpB蛋白整体表现为稳定亲水性蛋白。生物信息学分析显示其高级结构核心部分为5个β折叠组成的桶状结构,外围由3个α螺旋组成,SmpB C-端亦为α螺旋。诱导表达的重组融合蛋白相对分子质量大小在25.0 kD附近,显示在E.coli中成功表达了SmpB蛋白。
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关键词
创伤弧菌
小蛋白B
原核表达质粒构建
基因
表达
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职称材料
题名
海洋创伤弧菌反式翻译系统关键因子SmpB基因的克隆及原核表达
被引量：
1
1
作者
刘鹏
岑妍慧
林江
梁忠秀
兰太进
韩丝银
陈振兴
机构
广西中医药大学基础医学院医学创新综合实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第4期100-106,共7页
基金
广西自然科学基金项目(QJJ17016)
林江-特聘专家经费项目(050170120)
+1 种基金
广西自然科学基金青年科学基金项目(2018JJB140089)
广西中医药大学2017年博士科研启动基金项目(2017BS006)。
文摘
创伤弧菌(Vibrio vulnificus)是一种重要的"人鱼共患病"病原菌。通过克隆创伤弧菌反式翻译系统核心因子小蛋白B(Small molecular protein B,SmpB)基因,构建携带目的基因的原核表达质粒,为后续研究SmpB蛋白的互作网络、SmpB蛋白与创伤弧菌致病性之间的关系并以此开发新型的抑菌靶标奠定基础。使用LiCl沉淀法提取创伤弧菌基因组DNA,以它为模板,PCR扩增目的基因,并构建到pET-28a原核表达载体上测序鉴定后对SmpB序列进行生物信息学分析,将正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定。结果表明使用LiCl沉淀法成功提取到高质量创伤弧菌基因组DNA,以其为模板,扩增到smpB基因,并成功构建pET-28a原核表达重组质粒,测序鉴定正确;smpB基因全长为486 bp,编码161个氨基酸,分子量为18.41 kD,理论等电点为10.28,不稳定系数为35.02,总平均亲水性为-0.635,SmpB蛋白整体表现为稳定亲水性蛋白。生物信息学分析显示其高级结构核心部分为5个β折叠组成的桶状结构,外围由3个α螺旋组成,SmpB C-端亦为α螺旋。诱导表达的重组融合蛋白相对分子质量大小在25.0 kD附近,显示在E.coli中成功表达了SmpB蛋白。
关键词
创伤弧菌
小蛋白B
原核表达质粒构建
基因
表达
Keywords
Vibrio vulnificus
SmpB
construction of prokaryotic expression plasmids
gene expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
S941.42 [农业科学—水产养殖]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
海洋创伤弧菌反式翻译系统关键因子SmpB基因的克隆及原核表达
刘鹏
岑妍慧
林江
梁忠秀
兰太进
韩丝银
陈振兴
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
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参考文献
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