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彩鲫ran基因原核表达蛋白多克隆抗体的制备
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作者 李常健 蒋琼凤 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2006年第2期3-5,共3页
采用SDS-PAGE分离纯化彩鲫(Carassius auratus gibelio)ran基因编码区cDNA全长序列的原核表达蛋白,并以此为抗原免疫家兔,制备了相应的多克隆抗体;W estern b lotting结果表明,该抗体效价为1∶1000,具有较高的特异性。并从抗原蛋白相对... 采用SDS-PAGE分离纯化彩鲫(Carassius auratus gibelio)ran基因编码区cDNA全长序列的原核表达蛋白,并以此为抗原免疫家兔,制备了相应的多克隆抗体;W estern b lotting结果表明,该抗体效价为1∶1000,具有较高的特异性。并从抗原蛋白相对分子质量、每次注射蛋白量、注射方式、注射途径等诸方面对该技术的要点进行了介绍。 展开更多
关键词 彩鲫 ran基因 原核表达蛋白 多克隆抗体
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鸡IL-18真核表达质粒及原核表达蛋白对IBD死苗的免疫增强作用
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作者 孔娜 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第2期459-461,共3页
将80只14日龄SPF鸡随机分为4组,Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为单纯疫苗试验组,Ⅲ组为质粒试验组,Ⅳ组为蛋白试验组。通过T淋巴细胞增殖试验、ELISA抗体检测和攻毒保护试验研究其对IBD灭活疫苗的免疫增强作用。结果显示,从一免后21 d起,Ⅲ组和Ⅳ... 将80只14日龄SPF鸡随机分为4组,Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为单纯疫苗试验组,Ⅲ组为质粒试验组,Ⅳ组为蛋白试验组。通过T淋巴细胞增殖试验、ELISA抗体检测和攻毒保护试验研究其对IBD灭活疫苗的免疫增强作用。结果显示,从一免后21 d起,Ⅲ组和Ⅳ组都与Ⅱ组T淋巴细胞增殖和抗体水平差异显著(P<0.05),且Ⅳ组效果最好。一免42 d后进行攻毒保护性试验,Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组保护率依次为60%、80%和75%。结果表明,鸡IL-18的真核表达质粒和原核表达蛋白都具有显著增强IBD灭活疫苗免疫效果的作用。 展开更多
关键词 鸡IL-18 真核表达质粒 原核表达蛋白 IBD死苗 免疫增强作用
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拟南芥FT基因原核表达载体的构建、表达和蛋白纯化 被引量:8
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作者 任霞 吴忠义 +1 位作者 黄丛林 张秀海 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期99-103,共5页
FT基因是植物成花素,在植物的开花调控中起着重要作用。构建了用于原核表达的FT-eGFP表达载体,并在大肠杆菌BL21中进行重组蛋白的诱导表达。从IPTG诱导浓度、诱导时间和诱导温度等方面进行了细致的分析,最终建立了FT-eGFP融合蛋白诱导... FT基因是植物成花素,在植物的开花调控中起着重要作用。构建了用于原核表达的FT-eGFP表达载体,并在大肠杆菌BL21中进行重组蛋白的诱导表达。从IPTG诱导浓度、诱导时间和诱导温度等方面进行了细致的分析,最终建立了FT-eGFP融合蛋白诱导表达的优化体系:当菌液OD600=0.6-1.0时,采用IPTG1.0mol/L,在28℃诱导表达6h。摸索和建立了利用HisTrapKit标签,经过镍柱纯化,纯化目的蛋白的技术体系,为进一步研究FT基因在植物开花调控中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 FT—eGFP融合蛋白 原核表达蛋白纯化
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小球藻亲环蛋白A的酶活性及过表达拟南芥抗盐性分析 被引量:1
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作者 廖栩 何明良 +4 位作者 张素艳 马海燕 王旭辉 罗秋香 管清杰 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期722-729,共8页
在前期研究中分离到噬碳酸盐小球藻(Chlorella sp.X1)的亲环蛋白基因CsCyp1A(登录号:KY207381),编码CsCyp1A蛋白是否具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性功能是进一步研究它参与小球藻耐盐生物学过程的基础。通过His标签的p QE-30-CsC... 在前期研究中分离到噬碳酸盐小球藻(Chlorella sp.X1)的亲环蛋白基因CsCyp1A(登录号:KY207381),编码CsCyp1A蛋白是否具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性功能是进一步研究它参与小球藻耐盐生物学过程的基础。通过His标签的p QE-30-CsCyp1A原核蛋白表达载体,经IPTG诱导它的E.coli M15菌株表达融合蛋白,Nitra-柱纯化后获得纯化的30 kDa左右的His-CsCyp1A融合蛋白质,Western杂交检测到His CsCyp1A蛋白的杂交信号。酶活性分析显示,HisCsCyp1A融合蛋白中生色基团的产生速度明显快于对照,表明CsCyp1A蛋白可以催化底物N-succinyl-Xaa-Pro-Phe-p-nitroanilide中Xaa-Pro肽键的顺反折叠,说明纯化的CsCyp1A蛋白具有PPIase活性。典型的亲环蛋白家族成员具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性,参与折叠和转运、信号转导、免疫调节、细胞凋亡等生物学过程。真空渗入法侵染转化的拟南芥在35S启动子驱动下超表达CsCyp1A基因,耐盐性研究表明它提高了过表达株系对NaCl胁迫的耐性,揭示小球藻CsCyp1A基因的抗盐性功能,它将成为抗逆育种的基因资源。本研究也为探索小球藻亲环蛋白A的抗盐碱胁迫生物学作用和分子育种奠定了基础。 展开更多
关键词 噬碳酸盐小球藻 盐碱地 亲环蛋白A 肽脯氨酰顺反异构酶 原核表达蛋白
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两种水稻GDP解离抑制蛋白基因的分离及特征分析 被引量:25
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作者 梁卫红 唐朝荣 吴乃虎 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期785-791,共7页
以Rho家族成员OsRacD为诱饵 ,采用酵母双杂交体系 ,分离到两种与OsRacD互作的水稻RhoGDP解离抑制蛋白的基因 ,分别命名为OsRhoGDI1和OsRhoGDI2 .酵母体内结合和GSTpulldown分析结果显示 ,OsRhoGDI1和OsRhoGDI2与野生型和组成型激活的OsR... 以Rho家族成员OsRacD为诱饵 ,采用酵母双杂交体系 ,分离到两种与OsRacD互作的水稻RhoGDP解离抑制蛋白的基因 ,分别命名为OsRhoGDI1和OsRhoGDI2 .酵母体内结合和GSTpulldown分析结果显示 ,OsRhoGDI1和OsRhoGDI2与野生型和组成型激活的OsRacD都能结合 ,且不依赖GDI的N端部分序列 ;GDI和Rho的结合具有一定的特异性 .两种GDI在水稻根、地上组织和幼穗等多种组织和器官都有表达 ,但在表达特征上存在明显差异 .研究证实 ,在水稻中存在着调控RhoGTPases的GDP解离抑制蛋白基因家族 。 展开更多
关键词 RHO蛋白 酵母双杂交 GDP解离抑制蛋白 原核表达 GST PULL DOWN
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酿酒酵母RAVE复合物的155kD亚基Rav1p的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化
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作者 徐灿 张震宇 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期99-104,共6页
以酿酒酵母基因组DNA为模板,根据GenBank上公布的酿酒酵母Rav1p基因(ray1)序列和表达载体特性设计特异性引物,PCR扩增得到4074bp的DNA片段,将PCR产物和原核表达载体pET28a(+)同时进行双酶切;双酶切后的PCR产物和表达载体进行... 以酿酒酵母基因组DNA为模板,根据GenBank上公布的酿酒酵母Rav1p基因(ray1)序列和表达载体特性设计特异性引物,PCR扩增得到4074bp的DNA片段,将PCR产物和原核表达载体pET28a(+)同时进行双酶切;双酶切后的PCR产物和表达载体进行连接,构建成重组质粒pET28a.rav1。再将pET28a.rav1转化到BL21(DE3)感受态细胞中。经IPTG16℃低温诱导40h表达His-tag融合的Rav1p。诱导后的菌体进行超声波破碎,然后用GEheahhcare公司的AKTA蛋白纯化仪和HisTrapHP1mL亲和层析柱纯化目的蛋白。SDS—PAGE电泳分析和Westernblot分析显示在155kD有明显的条带,成功实现了Rav1p在大肠杆菌中的表达纯化。 展开更多
关键词 酿酒酵母RAVE复合物Ravlp克隆原核表达蛋白纯化
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