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檀香SaMYB36基因克隆及原核表达分析
1
作者 周云清 杨舒淇 +3 位作者 陆俊锟 胡立盼 覃方锉 孟森 《西北林学院学报》 2025年第6期120-127,137,共9页
MYB转录因子在萜类化合物的生物合成中发挥重要作用。通过酵母文库筛选得到1个可能与檀香萜合成酶基因启动子相互作用的候选基因SaMYB36。本研究从檀香中克隆SaMYB36基因,对其进行生物信息学、蛋白亚细胞定位、组织表达、干旱胁迫表达... MYB转录因子在萜类化合物的生物合成中发挥重要作用。通过酵母文库筛选得到1个可能与檀香萜合成酶基因启动子相互作用的候选基因SaMYB36。本研究从檀香中克隆SaMYB36基因,对其进行生物信息学、蛋白亚细胞定位、组织表达、干旱胁迫表达和原核表达分析,为进一步探究其在干旱诱导檀香心材形成过程中的功能奠定理论基础。结果显示,SaMYB36基因开放阅读框全长744 bp,预测编码蛋白分子量为26.97 ku;SaMYB36蛋白含有典型的R2R3-MYB结构域,属于R2R3-MYB型转录因子。系统发育分析结果显示,SaMYB36蛋白与MtMYB36和TwMYB36-like蛋白的亲缘关系较近。亚细胞定位表明,SaMYB36蛋白定位在细胞核。组织特异性分析表明,SaMYB36基因在檀香过渡区中显著富集表达。干旱胁迫处理的3和9 d,檀香中SaMYB36基因表达水平显著升高,表明SaMYB36基因对干旱响应明显。构建重组pET-SUMO-SaMYB36表达载体,在大肠杆菌中成功表达并纯化得到SaMYB36蛋白。 展开更多
关键词 檀香 SaMYB36 干旱胁迫 基因克隆 原核表达分析
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茶树4-香豆酸辅酶A连接酶基因Cs4CL1的克隆与蛋白表达分析 被引量：3
2
作者 高荣广 李昊 +1 位作者 向勤锃 李敏 《山东农业科学》 2020年第3期8-12,共5页
4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)是木质素合成过程中的关键酶。本试验以‘福鼎大白’茶树为材料,克隆得到Cs4CL1基因,该基因长度为1715 bp,开放阅读框长度1623 bp,编码540个氨基酸。氨基酸同源性分析显示,Cs4CL1蛋白具有植物4CL酶的典型特征,... 4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)是木质素合成过程中的关键酶。本试验以‘福鼎大白’茶树为材料,克隆得到Cs4CL1基因,该基因长度为1715 bp,开放阅读框长度1623 bp,编码540个氨基酸。氨基酸同源性分析显示,Cs4CL1蛋白具有植物4CL酶的典型特征,即AMP结合功能域和GEICIRG保守区。系统进化分析显示,Cs4CL1蛋白与蓝果树、烟草、番茄等植物的4CL1蛋白聚为一类,属于4CL亚家族A。利用原核表达系统可诱导出具有活性的Cs4CL1重组蛋白,该蛋白大小为78 kD。本研究为深入解析Cs4CL1在茶树木质素合成途径中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 茶树 木质素 Cs4CL1基因 Cs4CL1蛋白 同源性分析 原核表达分析
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薄荷柠檬烯-6-羟化酶基因(MhL60H)的克隆与表达分析 被引量：3
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作者 陈吟 亓希武 +3 位作者 徐东北 陈泽群 房海灵 梁呈元 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期25-31,共7页
从薄荷(Mentha haplocalyx Briq.)叶cDNA中克隆到1个参与精油合成的柠檬烯-6-羟化酶基因,命名为MhL6OH,编码的蛋白质为MhL6OH。序列分析结果表明:该基因蛋白质编码区(CDS)全长1 479 bp,编码492个氨基酸残基;MhL6OH蛋白的理论相对分子质... 从薄荷(Mentha haplocalyx Briq.)叶cDNA中克隆到1个参与精油合成的柠檬烯-6-羟化酶基因,命名为MhL6OH,编码的蛋白质为MhL6OH。序列分析结果表明:该基因蛋白质编码区(CDS)全长1 479 bp,编码492个氨基酸残基;MhL6OH蛋白的理论相对分子质量为55 855.69,理论等电点为pI 8.71,其二级结构中α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-转角的比例分别为51.02%、30.49%、12.40%和6.10%,且该蛋白质含有保守的细胞色素P450结构域,说明薄荷MhL6OH蛋白属于CYP71家族的D亚家族。多重序列比对结果表明:薄荷MhL6OH蛋白与椒样薄荷(M.piperita Linn.)MpL6OH蛋白和留兰香(M.spicata Linn.)MsL6OH蛋白的氨基酸序列高度相似,均具有细胞色素P450的血红素结合区;并且,MhL6OH蛋白与MpL6OH蛋白底物识别位点(SRS)的序列相似性更高,二者的SRS2、SRS3、SRS5和SRS6序列完全相同,仅分别在SRS1和SRS4序列上存在1个氨基酸差异,说明MhL6OH蛋白与MpL6OH蛋白可能具有相似的底物识别特异性。系统进化树分析结果表明:薄荷与椒样薄荷的亲缘关系最近。组织表达特性分析结果显示:MhL6OH基因的相对表达量在薄荷叶中最高,并远高于其在茎和根中的相对表达量。原核表达分析结果显示:MhL6OH蛋白能够在大肠杆菌[Escherichia coli(Migula) Castellani et Chalmers]中高量表达,且其表达量随诱导时间延长而逐渐增大。研究结果显示:薄荷MhL6OH基因组织表达模式与其精油分布一致,MhL6OH蛋白底物识别位点的特异性可能是薄荷醇为薄荷精油主要成分的重要原因。 展开更多
关键词 薄荷 柠檬烯-6-羟化酶基因(MhL6OH) 基因克隆 生物信息学分析 组织表达特性 原核表达分析
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大肠杆菌glgC基因的定点突变及功能分析 被引量：1
4
作者 周爽 许可 +1 位作者 何明雄 张义正 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1372-1378,共7页
利用PCR从Escherichia coli JM109基因组中扩增到全长为1296bp的glgC基因编码区,通过PCR重组方法进行点突变,获得氨基酸突变的3个突变体,分别是Pro295Ser(Val121Ala,Met151Ile和Val334Asp)、Gly336Asp单点突变和Pro295Ser/Gly336Asp(Lys... 利用PCR从Escherichia coli JM109基因组中扩增到全长为1296bp的glgC基因编码区,通过PCR重组方法进行点突变,获得氨基酸突变的3个突变体,分别是Pro295Ser(Val121Ala,Met151Ile和Val334Asp)、Gly336Asp单点突变和Pro295Ser/Gly336Asp(Lys109Arg),其基因分别命名为295+3、336和295/336+1。将突变和未突变的基因分别克隆到pET32-a,构建重组质粒pET-glgC、pET-295+3、pET-336和pET-295/336+1,在文中分别简称为a、b、c和d。转化大肠杆菌BL21(DE3),在1mmol/L IPTG诱导下表达。SDS-PAGE电泳分析显示,在约67kDa处有1条明显与预期大小一致的蛋白质,表明目的基因已得到融合表达。上述转化子的碘染和糖原含量测定结果,第336位的Gly变成Asp后,宿主菌的糖原含量提高;Pro295Ser/Gly336Asp(Lys109Arg)的突变导致宿主菌的糖原含量与Gly336Asp突变体相近,表明在336突变基因的基础上增加Pro295Ser的突变没有进一步加大宿主菌中AGPase酶的反馈抑制效应的降低。已有的结果显示,Pro295Ser可以降低AGPase酶的反馈抑制效应活性,而实验中295+3突变基因转入宿主菌后细胞糖原含量明显降低,推测这个结果可能是295+3中的Val334Asp的突变造成,而334位的氨基酸可能是AGPase功能域中的一个重要位点。 展开更多
关键词 glgC基因 定点突变 重组PCR 原核表达:功能分析
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羊口疮病毒ORF019基因的克隆及表达 被引量：3
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作者 沈岩尔 贾怀杰 +5 位作者 王晓霞 陈国华 何小兵 房永祥 薛慧文 景志忠 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1-7,共7页
【目的】克隆、分析羊口疮病毒(ORFV)的ORF019基因,进而表达、纯化和鉴定重组表达产物.【方法】根据GenBank登录的ORFV OV-SA00株(AY386264)E2L基因序列设计1对引物,以提取的ORFV/QH02/2010株基因组DNA为模板,通过PCR获得该毒株的ORF01... 【目的】克隆、分析羊口疮病毒(ORFV)的ORF019基因,进而表达、纯化和鉴定重组表达产物.【方法】根据GenBank登录的ORFV OV-SA00株(AY386264)E2L基因序列设计1对引物,以提取的ORFV/QH02/2010株基因组DNA为模板,通过PCR获得该毒株的ORF019基因,将该基因连接至原核表达载体pET-32a(+)上,获得重组质粒pET-32a-ORF019,并对其测序,测序结果与副痘病毒属及其脊椎动物痘病毒亚科代表毒株的E2L蛋白进行一致性分析;并转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导获得重组融合蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot对表达的目的蛋白进行分析.【结果】成功获得重组质粒pET-32a-ORF019,读码框正确;生物信息学分析发现,ORF019基因在副痘病毒属各成员间高度保守,也在脊椎动物痘病毒亚科痘病毒的遗传进化过程中保留了相对稳定的氨基酸残基;获得了约100 ku的融合蛋白表达产物,并以包涵体的形式存在于宿主菌.【结论】成功对ORFV019基因进行系统的遗传演化分析,并利用原核表达系统获得了重组表达产物. 展开更多
关键词 羊口疮病毒 ORF019基因 进化分析 原核表达 纯化
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甘蔗过氧化物酶基因ScPOD02的克隆与功能鉴定 被引量：17
6
作者 苏亚春 王竹青 +5 位作者 李竹 刘峰 许莉萍 阙友雄 戴明剑 陈允浩 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期510-521,共12页
过氧化物酶(POD)广泛存在于植物各种器官及其不同发育阶段,在植物生长发育及应对逆境胁迫中起重要作用。本研究基于前期转录组数据,从黑穗病菌侵染2 d的甘蔗抗黑穗病品种崖城05-179中分离到ScPOD02基因的cDNA(GenBank登录号为KU593507)... 过氧化物酶(POD)广泛存在于植物各种器官及其不同发育阶段,在植物生长发育及应对逆境胁迫中起重要作用。本研究基于前期转录组数据,从黑穗病菌侵染2 d的甘蔗抗黑穗病品种崖城05-179中分离到ScPOD02基因的cDNA(GenBank登录号为KU593507)及基因组DNA(GenBank登录号为KU593508)序列。其cDNA全长为1434 bp,ORF区为1047 bp,编码348个氨基酸,而基因组DNA全长为1558 bp,含2个外显子和1个内含子。系统发育树显示,ScPOD02与水稻Os Prx11(GenBank登录号为gi|55700889)属于同一个进化分支,推测ScPOD02属于酸性胞外分泌/细胞壁类型的I.1型过氧化物酶家族。将该基因克隆到原核表达载体p ET 32a上,转化大肠杆菌BL21,经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷诱导成功获得了大小约60 k D的融合蛋白,且该重组菌在聚乙二醇胁迫下的长势较对照快,表明其耐受干旱胁迫的能力更强。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析表明,除ROC22和YZ03-103外,ScPOD02基因在甘蔗抗病品种(YZ03-258、YZ01-1413、YT96-86和LC05-136)中受黑穗病菌诱导上调表达,但在中感(GT02-467和FN39)和感病(FN40)品种中的基因表达量基本维持不变或略有降低;此外,ScPOD02积极应答水杨酸、脱落酸、聚乙二醇及氯化钠的胁迫。通过农杆菌介导法在本氏烟叶片上瞬时表达ScPOD02,结果显示出较深的DAB染色,且过表达后本氏烟中的目标基因(ScPOD02)及过敏性反应(HR)标记基因(Nt HSR201和Nt HSR203)和乙烯合成依赖基因(Nt EFE26和Nt Accdeaminase)均上调表达。以上研究结果显示,ScPOD02具有参与甘蔗免疫应答及抗旱和抗盐害的潜在功能。 展开更多
关键词 甘蔗 ScPOD02 基因克隆 生物和非生物胁迫 基因表达量 原核表达分析 瞬时表达分析
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茶树两个MYB转录因子基因的克隆及功能验证 被引量：7
7
作者 贡年娣 郭丽丽 +7 位作者 王弘雪 赵磊 王婕 王文钊 刘亚军 王云生 高丽萍 夏涛 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期36-36,37-44,共9页
第4亚组R2R3-MYB可能参与木质素合成的调控,从而影响植物的生长发育。本文利用RACE技术,克隆了两个茶树第4亚组MYB转录因子(CsMYB4-5和CsMYB4-6)。生物信息学分析发现CsMYB4-5氨基酸序列与金鱼草中的AmMYB330一致性为48.45%,与拟南芥中... 第4亚组R2R3-MYB可能参与木质素合成的调控,从而影响植物的生长发育。本文利用RACE技术,克隆了两个茶树第4亚组MYB转录因子(CsMYB4-5和CsMYB4-6)。生物信息学分析发现CsMYB4-5氨基酸序列与金鱼草中的AmMYB330一致性为48.45%,与拟南芥中的AtMYB3一致性为44.79%;CsMYB4-6氨基酸序列与金鱼草中的AmMYB308一致性为69.80%,与拟南芥中的AtMYB4一致性为62.41%。实时荧光定量PCR分析表明两个基因均在根中高表达而在茎中低表达。原核表达分析表明,CsMYB4-5和CsMYB4-6的分子量分别为32 kD和27 kD左右。烟草转化实验表明,与野生型烟草相比较,转CsMYB4-6基因的烟草叶片的叶脉紧缩而脉间凹凸不平,老叶有白色斑点,而转CsMYB4-5基因的烟草老叶发黄。 展开更多
关键词 茶树 MYB转录因子 表达分析 原核表达分析 烟草转化分析
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