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题名大肠杆菌glgC基因的定点突变及功能分析
被引量：1
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作者
周爽
许可
何明雄
张义正
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机构
四川大学生命科学学院
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出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期1372-1378,共7页
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基金
四川省"十一五"重点攻关项目(编号:07SG111-003-1)资助~~
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文摘
利用PCR从Escherichia coli JM109基因组中扩增到全长为1296bp的glgC基因编码区,通过PCR重组方法进行点突变,获得氨基酸突变的3个突变体,分别是Pro295Ser(Val121Ala,Met151Ile和Val334Asp)、Gly336Asp单点突变和Pro295Ser/Gly336Asp(Lys109Arg),其基因分别命名为295+3、336和295/336+1。将突变和未突变的基因分别克隆到pET32-a,构建重组质粒pET-glgC、pET-295+3、pET-336和pET-295/336+1,在文中分别简称为a、b、c和d。转化大肠杆菌BL21(DE3),在1mmol/L IPTG诱导下表达。SDS-PAGE电泳分析显示,在约67kDa处有1条明显与预期大小一致的蛋白质,表明目的基因已得到融合表达。上述转化子的碘染和糖原含量测定结果,第336位的Gly变成Asp后,宿主菌的糖原含量提高;Pro295Ser/Gly336Asp(Lys109Arg)的突变导致宿主菌的糖原含量与Gly336Asp突变体相近,表明在336突变基因的基础上增加Pro295Ser的突变没有进一步加大宿主菌中AGPase酶的反馈抑制效应的降低。已有的结果显示,Pro295Ser可以降低AGPase酶的反馈抑制效应活性,而实验中295+3突变基因转入宿主菌后细胞糖原含量明显降低,推测这个结果可能是295+3中的Val334Asp的突变造成,而334位的氨基酸可能是AGPase功能域中的一个重要位点。
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关键词
glgC基因
定点突变
重组PCR
原核表达:功能分析
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Keywords
glgC
site-directed mutagenesis
recombinant pcr
prokaryotic expression
functional analysis
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分类号
Q93
[生物学—微生物学]
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