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白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p的原核细胞表达及鉴定
被引量：
6
1
作者
孔倩倩
廖红
+3 位作者
李芳秋
马春芳
史利宁
胡毓安
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第11期919-921,930,共4页
目的原核细胞表达白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p,鉴定重组蛋白质的抗原性。方法用比对软件对白念珠菌H3K4甲基转移酶与其他物种甲基转移酶进行比对。选择与人类无同源性的抗原特异性片段,以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板...
目的原核细胞表达白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p,鉴定重组蛋白质的抗原性。方法用比对软件对白念珠菌H3K4甲基转移酶与其他物种甲基转移酶进行比对。选择与人类无同源性的抗原特异性片段,以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,PCR扩增Set1-208p的编码基因,以pET28a(+)为载体,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白质表达。用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊侵袭性白念珠菌感染(IC)患者血清进行抗原性鉴定。结果成功克隆了白念珠菌抗原特异性H3K4甲基转移酶片段Set1-208p基因并诱导表达,获得了纯化的重组肽段,所得蛋白质分子量(Mr)约为29 000,带有His标签,经western blot鉴定,诱导的重组蛋白可与IC患者血清特异性反应。结论成功诱导表达了具有良好抗原反应性的Set1-208p重组蛋白质,为建立相应的抗原、抗体ELISA检测方法提供基础。
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关键词
白念珠菌
H3K4甲基转移酶
基因克隆
原核细胞表达
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职称材料
白念珠菌β-葡萄糖苷酶2的原核细胞表达、鉴定及免疫反应性
被引量：
1
2
作者
贺政新
冉向阳
+2 位作者
陈晶
王宪灵
侯天文
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期59-61,共3页
目的构建白念珠菌β-葡萄糖苷酶2(BGL2)的原核细胞表达质粒,诱导其表达后加以鉴定,并初步判定重组蛋白质的免疫反应性。方法 PCR法获取白念珠菌SC5314的bgl2基因,插入原核细胞表达载体pET30a中,以重组质粒转染感受态细胞大肠埃希菌(E.co...
目的构建白念珠菌β-葡萄糖苷酶2(BGL2)的原核细胞表达质粒,诱导其表达后加以鉴定,并初步判定重组蛋白质的免疫反应性。方法 PCR法获取白念珠菌SC5314的bgl2基因,插入原核细胞表达载体pET30a中,以重组质粒转染感受态细胞大肠埃希菌(E.coli)BL21,经IPTG诱导表达后,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测蛋白质的表达情况,梯度透析法对包涵体蛋白质复性,用抗His标签单克隆抗体鉴定。用临床侵袭性念珠菌病(IC)患者血清判定重组蛋白质的免疫反应性。结果成功构建原核细胞表达质粒pET30a-bgl2,诱导后的重组蛋白质以包涵体形式表达,经梯度透析复性成功。重组蛋白质能被抗His标签抗体识别,并与IC患者血清有良好的反应性。结论用原核细胞表达体系成功表达了白念珠菌BGL2,该蛋白质具有良好的免疫反应性,为进一步研究其在IC诊断中的作用打下基础。
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关键词
白念珠菌
原核细胞表达
β-葡萄糖苷酶2
侵袭性念珠菌病
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职称材料
题名
白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p的原核细胞表达及鉴定
被引量：
6
1
作者
孔倩倩
廖红
李芳秋
马春芳
史利宁
胡毓安
机构
南京师范大学生命科学学院
南京军区南京总医院临床中心实验科
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第11期919-921,930,共4页
基金
江苏省科技支撑计划-社会发展项目(BE2009673)
南京军区医学科技创新重点课题(10Z027)
文摘
目的原核细胞表达白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p,鉴定重组蛋白质的抗原性。方法用比对软件对白念珠菌H3K4甲基转移酶与其他物种甲基转移酶进行比对。选择与人类无同源性的抗原特异性片段,以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,PCR扩增Set1-208p的编码基因,以pET28a(+)为载体,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白质表达。用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊侵袭性白念珠菌感染(IC)患者血清进行抗原性鉴定。结果成功克隆了白念珠菌抗原特异性H3K4甲基转移酶片段Set1-208p基因并诱导表达,获得了纯化的重组肽段,所得蛋白质分子量(Mr)约为29 000,带有His标签,经western blot鉴定,诱导的重组蛋白可与IC患者血清特异性反应。结论成功诱导表达了具有良好抗原反应性的Set1-208p重组蛋白质,为建立相应的抗原、抗体ELISA检测方法提供基础。
关键词
白念珠菌
H3K4甲基转移酶
基因克隆
原核细胞表达
Keywords
Candida albicans
histone 3 lysine 4 methyltransferase
gene cloning
prokaryotic expression
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
白念珠菌β-葡萄糖苷酶2的原核细胞表达、鉴定及免疫反应性
被引量：
1
2
作者
贺政新
冉向阳
陈晶
王宪灵
侯天文
机构
解放军白求恩国际和平医院检验实验科
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期59-61,共3页
基金
河北省自然科学基金(C2010001882)
文摘
目的构建白念珠菌β-葡萄糖苷酶2(BGL2)的原核细胞表达质粒,诱导其表达后加以鉴定,并初步判定重组蛋白质的免疫反应性。方法 PCR法获取白念珠菌SC5314的bgl2基因,插入原核细胞表达载体pET30a中,以重组质粒转染感受态细胞大肠埃希菌(E.coli)BL21,经IPTG诱导表达后,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测蛋白质的表达情况,梯度透析法对包涵体蛋白质复性,用抗His标签单克隆抗体鉴定。用临床侵袭性念珠菌病(IC)患者血清判定重组蛋白质的免疫反应性。结果成功构建原核细胞表达质粒pET30a-bgl2,诱导后的重组蛋白质以包涵体形式表达,经梯度透析复性成功。重组蛋白质能被抗His标签抗体识别,并与IC患者血清有良好的反应性。结论用原核细胞表达体系成功表达了白念珠菌BGL2,该蛋白质具有良好的免疫反应性,为进一步研究其在IC诊断中的作用打下基础。
关键词
白念珠菌
原核细胞表达
β-葡萄糖苷酶2
侵袭性念珠菌病
Keywords
Candida albicans
prokaryotic expression
β-glucosidase 2
invasive candidiasis
分类号
R446.5 [医药卫生—诊断学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p的原核细胞表达及鉴定
孔倩倩
廖红
李芳秋
马春芳
史利宁
胡毓安
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
6
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职称材料
2
白念珠菌β-葡萄糖苷酶2的原核细胞表达、鉴定及免疫反应性
贺政新
冉向阳
陈晶
王宪灵
侯天文
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
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