通过双原核显微注射提高转基因小鼠研制效率的实验研究 被引量：6

1

作者 王勇 刘勤 +3 位作者 倪勇 魏泓 孙新民 赵永聚 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第3期159-162,F0010,共5页

目的建立高效的转基因小鼠制备技术,为开展遗传工程动物模型研究奠定技术基础。方法通过向小鼠受精卵原核中注入不同浓度的DNA分子,筛选最适注射用DNA浓度;将K14/hCTLA4-Ig基因表达载体分子通过显微注射分别导入小鼠受精卵雌、雄原核,... 目的建立高效的转基因小鼠制备技术,为开展遗传工程动物模型研究奠定技术基础。方法通过向小鼠受精卵原核中注入不同浓度的DNA分子,筛选最适注射用DNA浓度;将K14/hCTLA4-Ig基因表达载体分子通过显微注射分别导入小鼠受精卵雌、雄原核,并设立单原核注射对照组;利用输卵管腹壶部穿刺移植法将注射后的小鼠受精卵移植于同期发情的受体母鼠;利用PCR对出生的转基因首建小鼠进行筛选。结果最适DNA分子浓度为10ng/μl;在单、双原核注射组胚胎2细胞卵裂率分别为52.3%(132/253)和45.0%(108/240),差异有显著性(P<0.05);注射胚胎移植后体内存活率分别为18.1%(24/132)和16.7%(18/108),差异无显著性;转基因首建小鼠阳性率分别为3/24和5/18,转基因阳性小鼠占总注射胚胎的比例为1.2%(3/253)和2.08%(5/240),差异有极显著性(P<0.01)。结论尽管双原核注射对胚胎的2细胞卵裂率有一定影响,但通过双原核注射可有效提高转基因小鼠的制备效率。 展开更多

关键词 双原核显微注射 转基因技术 小鼠 动物模型 医学实验 胚胎发育

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显微注射对绵羊体外受精胚胎的影响

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作者 张家新 雷蕾 +5 位作者 牛志宏 玛依拉 黄俊成 宋晓兰 赵文胜 郭志勤 《草食家畜》 2001年第3期1-4,共4页

本文研究了显微注射对绵羊体外受精胚胎发育的影响。显微注射组和对照组的囊胚率分别为 9.1%和 32 .2 % (P <0 .0 5 ) ;利用慢速冷冻的方法 ,显微注射组和对照组的囊胚的冷冻解冻后的存活率没有差异 (分别为 75 .5 %和 77.7% ,P >... 本文研究了显微注射对绵羊体外受精胚胎发育的影响。显微注射组和对照组的囊胚率分别为 9.1%和 32 .2 % (P <0 .0 5 ) ;利用慢速冷冻的方法 ,显微注射组和对照组的囊胚的冷冻解冻后的存活率没有差异 (分别为 75 .5 %和 77.7% ,P >0 .0 5 )。显微注射组和对照组的冷冻胚胎移植后的产羔率分别为 2 5 .0 %和 33.3% (P >0 .0 5 )。结果表明 ,绵羊合子原核显微注射外源DNA后的发育能力下降 。 展开更多

关键词 绵羊 转基因胚胎 原核显微注射 冷冻 体外受精 胚胎发育

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显微注射制备转基因小鼠的优化 被引量：2

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作者 张译捷 王智锋 +3 位作者 陈文彬 李杏 杨珍珍 杜玉涛 《黑龙江动物繁殖》 2015年第1期6-9,共4页

显微注射法是目前应用最广泛的转基因小鼠制备技术,但其效率较低,提高显微注射法制备转基因小鼠的效率有重要意义。外源DNA浓度、小鼠品系均是影响转基因小鼠制备效率的因素,但目前较多文献采用KM小鼠进行转基因小鼠制备效率的优化,对C5... 显微注射法是目前应用最广泛的转基因小鼠制备技术,但其效率较低,提高显微注射法制备转基因小鼠的效率有重要意义。外源DNA浓度、小鼠品系均是影响转基因小鼠制备效率的因素,但目前较多文献采用KM小鼠进行转基因小鼠制备效率的优化,对C57/BL6小鼠研究较少。本实验以C57/BL6小鼠为对象,分别进行2.5 ng/μl、5.0 ng/μl的外源DNA浓度原核注射。结果显示,2.5 ng/μl组的怀孕率、出生率、小鼠阳性率、转基因效率均显著高于5.0 ng/μl组的结果(P<0.05)。结论:通过原核注射方式获得C57/BL6转基因小鼠,注射的外源DNA浓度2.5 ng/μl效果较好。 展开更多

关键词 原核显微注射 外源DNA 浓度 C57/BL6小鼠 转基因效率

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慢病毒载体法制备遗传工程猴和小型猪的现状及应用前景展望 被引量：5

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作者 刘薇 贾俊双 +4 位作者 唐华 林晓琳 袁进 顾为望 肖东 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2012年第5期84-89,共6页

较小鼠等啮齿类动物而言,猴和小型猪等大型实验动物在亲缘关系上与人类更为接近,在解剖、生理生化代谢及疾病发病机制等多方面与人类更接近,使它们在复制人类疾病模型,研究疾病发病机制和新药研发等中有无可替代的应用。而制备遗传工程... 较小鼠等啮齿类动物而言,猴和小型猪等大型实验动物在亲缘关系上与人类更为接近,在解剖、生理生化代谢及疾病发病机制等多方面与人类更接近,使它们在复制人类疾病模型,研究疾病发病机制和新药研发等中有无可替代的应用。而制备遗传工程大动物可以更深入地解析人类疾病,并可为器官移植和新药研发提供更充分的实验材料。基于慢病毒介导的转基因方法近几年已越来越多地被用来制备遗传工程猴和小型猪。与传统的原核显微注射方法和体细胞核移植法相比,慢病毒介导的转基因方法转基因效率高,操作更简单。因此,构筑基于慢病毒介导的转基因方法制备遗传工程猴和小型猪的技术平台将对生物医学研究产生巨大推动作用。 展开更多

关键词 小型猪 猴 遗传工程动物 慢病毒载体法 原核显微注射法 体细胞核移植

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转基因牛研究进展 被引量：3

5

作者 崔文涛 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第7期47-51,共5页

综述了显微注射转基因牛和体细胞核移植转基因牛的国内外进展,介绍了基因打靶、RNA干扰和微细胞介导转染色体等新技术在转基因牛生产中的应用及转基因牛的安全评价,最后指出了当前转基因牛存在的问题及未来的发展前景。

关键词 牛 转基因 原核显微注射 体细胞核移植

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转基因动物关键技术及其进展 被引量：5

6

作者 崔保安 王莉娟 +1 位作者 赵楠 祁小乐 《河南畜牧兽医》 2003年第4期10-11,共2页

关键词 转基因动物 关键技术 原核显微注射法 载体法 胚胎干细胞介导

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角质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的研制

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作者 程萱 毛春明 杨晓 《中国比较医学杂志》 CAS 2006年第9期560-560,共1页

本研究采用转基因技术中最常用的受精卵原核显微注射法,制备角质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠。我们将经过超排处理的供体雌鼠拉颈处死,从其输卵管壶腹部取出卵丘细胞团,用透明质酸酶消化、清洗,得到形态饱满、极体和双原核明显... 本研究采用转基因技术中最常用的受精卵原核显微注射法,制备角质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠。我们将经过超排处理的供体雌鼠拉颈处死,从其输卵管壶腹部取出卵丘细胞团,用透明质酸酶消化、清洗,得到形态饱满、极体和双原核明显的受精卵培养。将构建好的包括角质细胞特异性角质素5(K5)启动子、Cre重组酶基因和人生长激素(hGH)polyA的转基因载体pK5-Cre-hGH制备成一定浓度的注射片段,通过显微注射的方法将4.2 kb的转基因片段引入小鼠受精卵的雄原核。共注射了720枚受精卵,移植至29只假孕母鼠的输卵管中发育,获得子代小鼠48只,经PCR鉴定有12只小鼠在基因组上整合有Cre基因,整合率为25%。此结果通过Southern杂交得到进一步证实。 展开更多

关键词 受精卵 原核显微注射法 CRE基因

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转基因动物应用及现存问题探讨 被引量：1

8

作者 李艳红 《上海畜牧兽医通讯》 2005年第2期58-59,共2页

关键词 转基因动物 20世纪80年代 应用 原核显微注射 转基因技术 启动子克隆 转基因小鼠 基因整合 外源基因 外来基因 疱疹病毒 小鼠胚胎 酶基因 DNA 增殖 后代 遗传 肾

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转基因技术及其在畜禽业上的应用

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作者 程安玮 万发春 崔为正 《饲料博览》 2004年第5期12-14,共3页

综述了动物转基因的常见操作方法,扼要介绍了转基因技术在畜禽业上的应用概况,转基因动物中出现的问题,并展望了转基因产品的应用前景。

关键词 转基因接术 畜禽业 原核显微注射法 逆转录病毒载体法

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转基因动物研究进展 被引量：7

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作者 郝捷 冯波 王建辰 《动物医学进展》 CSCD 2004年第1期1-4,共4页

转基因动物技术始于 2 0世纪 80年代 ,近 3 0年来 ,随着研究的深入 ,转基因动物的制作技术得到了突破性的发展。最初的原核注射法是应用最普遍、最可靠、效果最稳定的一种方法。但该方法存在价格昂贵 ,整合率低及不能定点整合的问题 ,... 转基因动物技术始于 2 0世纪 80年代 ,近 3 0年来 ,随着研究的深入 ,转基因动物的制作技术得到了突破性的发展。最初的原核注射法是应用最普遍、最可靠、效果最稳定的一种方法。但该方法存在价格昂贵 ,整合率低及不能定点整合的问题 ,所以近几年来转基因动物技术已出现了胚胎干细胞法 ,精子载体法 ,体细胞核移植法和人工酵母染色体法等一系列新方法。随着这些技术的不断发展 ,转基因动物技术应用正以其突出的优越性指导着多个领域的工作。目前 ,它的应用已渗透到基础理论、疾病动物模型、人异种器官移植、制药、畜牧兽医等领域。转基因动物应用正走向产业化的道路 ,具有十分广阔的前景。但作为一个新兴的技术 。 展开更多

关键词 转基因动物 显微原核注射法 逆转录病毒感染法 胚胎干细胞介导法 精子载体法

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转基因鸡的制备技术及其利用现状 被引量：4

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作者 单艳菊 胡艳 +1 位作者 李慧芳 陈宽维 《家禽科学》 2009年第10期45-48,共4页

转基因动物（Transgenic Animals）是指人们对其基因组进行遗传操作（导入目的基因或改变原有基因结构）后,能够使这种改变的遗传信息在其后代中稳定遗传的一类动物,是人类按照自己的意愿有目的有计划地改变动物的遗传组成。自上世纪80... 转基因动物（Transgenic Animals）是指人们对其基因组进行遗传操作（导入目的基因或改变原有基因结构）后,能够使这种改变的遗传信息在其后代中稳定遗传的一类动物,是人类按照自己的意愿有目的有计划地改变动物的遗传组成。自上世纪80年代初采用原核显微注射法生产出第一只转基因小鼠以来,转基因动物技术已取得快速发展, 展开更多

关键词 利用现状 制备技术 转基因鸡 转基因动物技术 原核显微注射法 转基因小鼠 基因结构 目的基因

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转基因猪技术研究进展 被引量：1

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作者 王占红 牛玉华 《辽宁畜牧兽医》 2000年第5期39-40,共2页

目前,对猪基因的操作依旧限制在利用原核显微注射将外源基因插入内源基因组阶段。这种方法有整合率低、容易形成嵌合体、外源基因插入位点不易控制等缺点。克服这些缺陷,需要我们采用新方法以替代原核显微注射。就小鼠而言,目前可采用... 目前,对猪基因的操作依旧限制在利用原核显微注射将外源基因插入内源基因组阶段。这种方法有整合率低、容易形成嵌合体、外源基因插入位点不易控制等缺点。克服这些缺陷,需要我们采用新方法以替代原核显微注射。就小鼠而言,目前可采用胚胎干细胞和同源重组技术来替代原核显微注射来控制插入位点。但是,在猪的胚胎内,至今还未分离出胚胎干细胞。采用核移植技术来重排早期分化的胚胎细胞和体细胞的方法也可能成为精确遗传修饰的一种方法。将来,在原位来进行这些操作的方法也可能会得到长足发展。 展开更多

关键词 转基因猪 研究进展 原核显微注射

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