沉默YTH结构域家族蛋白2改善血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠原代心肌细胞肥大与凋亡 被引量：1

1

作者 江克兵 徐璐晴 沈涤非 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2024年第2期202-206,共5页

目的探讨YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠原代心肌细胞肥大和凋亡的影响。方法为探讨AngⅡ刺激下YTHDF2的表达水平,将细胞分为正常组和AngⅡ组。为探讨沉默YTHDF2对心肌细胞肥大与凋亡的影响,将细胞分为... 目的探讨YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠原代心肌细胞肥大和凋亡的影响。方法为探讨AngⅡ刺激下YTHDF2的表达水平,将细胞分为正常组和AngⅡ组。为探讨沉默YTHDF2对心肌细胞肥大与凋亡的影响,将细胞分为4组,空白组[转染阴性对照小干扰RNA(siRNA)+PBS]、siYTHDF2组[转染YTHDF2 siRNA(siYTHDF2)+PBS]、模型组(siRNA+AngⅡ)和实验组(siYTHDF2+AngⅡ)。用Western blot和逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测YTHDF2基因表达水平,RT-qPCR检测心肌肥厚相关基因心房钠尿肽(ANP)、B型钠尿肽(BNP)和β肌球蛋白重链(β-MHC)及心肌细胞凋亡相关基因Bax、B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)mRNA的表达水平,免疫荧光染色观察心肌细胞表面积,原位末端标记法染色观察心肌细胞凋亡情况,免疫沉淀反应验证YTHDF2和Bcl-2的结合关系。结果AngⅡ组YTHDF2蛋白表达及mRNA水平显著高于正常组(1.49±0.03 vs 0.97±0.09,1.50±0.08 vs 1.00±0.07,P<0.05)。与空白组比较,模型组心肌细胞表面积增大,细胞凋亡率升高,ANP、BNP、β-MHC、Bax mRNA表达明显升高,Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,实验组心肌细胞表面积减小,细胞凋亡率降低,ANP、BNP、β-MHC、Bax mRNA表达明显降低,Bcl-2 mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论沉默YTHDF2可以缓解AngⅡ诱导的大鼠原代心肌细胞肥大与凋亡,YTHDF2通过与Bcl-2相结合抑制其表达水平。 展开更多

关键词 肌细胞 心脏 细胞凋亡 血管紧张素Ⅱ 病理性心肌肥厚 新生大鼠原代心肌细胞 YTH结构域家族蛋白2

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新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改良 被引量：10

2

作者 王佳南 张晓刚 +1 位作者 汤为学 郑丽娜 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期600-603,共4页

目的:探讨更为简便的新生大鼠心肌细胞原代培养的方法,使分离的心肌细胞达到理想的数量、存活率和纯度。方法:用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化,分离新生大鼠心肌细胞,进行体外培养,观察心肌细胞形态学变化,并以细胞免疫荧光进行心肌细... 目的:探讨更为简便的新生大鼠心肌细胞原代培养的方法,使分离的心肌细胞达到理想的数量、存活率和纯度。方法:用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化,分离新生大鼠心肌细胞,进行体外培养,观察心肌细胞形态学变化,并以细胞免疫荧光进行心肌细胞纯度鉴定。结果:心肌细胞分离良好,收获细胞数量及存活率高,可贴壁搏动生长,免疫荧光显示培养的心肌细胞纯度达95%以上。结论:改良的细胞培养技术可获得生长状态良好的心肌细胞。 展开更多

关键词 心肌细胞 原代培养 新生大鼠

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提高新生大鼠原代心肌细胞纯度方法的探讨 被引量：1

3

作者 王新陆 崔琳 +3 位作者 王幼平 李彬 谢世阳 朱明军 《世界科学技术-中医药现代化》 2015年第2期333-337,共5页

目的:探讨提高新生大鼠原代心肌细胞纯度的方法。方法:应用0.08%心肌细胞消化液重复消化出生第1-3天乳鼠的心肌组织多次;收集的细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基中和。用差速贴壁分离法分离后,加入红细胞裂解液,以除去红细胞,加入溴脱... 目的:探讨提高新生大鼠原代心肌细胞纯度的方法。方法:应用0.08%心肌细胞消化液重复消化出生第1-3天乳鼠的心肌组织多次;收集的细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基中和。用差速贴壁分离法分离后,加入红细胞裂解液,以除去红细胞,加入溴脱氧尿嘧啶(Brdu)纯化心肌细胞后置CO2培养箱孵育2天,无血清同步化1天。结果:分离1只乳鼠获得的心肌细胞产量约为1.2×106个,有活力心肌细胞占90%以上,心肌细胞纯度>90%,3-4天后心肌细胞融合成片,并出现自发性节律性搏动。结论:该方法在保证心肌细胞产量和心肌细胞活性的同时,能大幅度提高心肌细胞纯度。 展开更多

关键词 新生大鼠 心肌细胞 原代培养 鉴定

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新生SD大鼠心肌细胞的原代培养及荧光鉴定 被引量：8

4

作者 姬婷婷 徐岩 +1 位作者 张建华 赵勇 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第1期120-122,共3页

采用单纯胰蛋白酶消化法分离,差速贴壁法纯化新生大鼠心肌细胞。光学显微镜观察心肌细胞基本形态特征,台盼蓝染色检测成活率,肌钙蛋白Ⅰ、α-横纹肌肌动蛋白抗体鉴定心肌细胞。结果显示培养24 h后心肌细胞大部分已贴壁,并出现自发搏动现... 采用单纯胰蛋白酶消化法分离,差速贴壁法纯化新生大鼠心肌细胞。光学显微镜观察心肌细胞基本形态特征,台盼蓝染色检测成活率,肌钙蛋白Ⅰ、α-横纹肌肌动蛋白抗体鉴定心肌细胞。结果显示培养24 h后心肌细胞大部分已贴壁,并出现自发搏动现象,48 h后逐渐伸出伪足相互接触交织成网,72 h后逐渐形成细胞簇并出现同步搏动;台盼蓝染色法检测细胞成活率达90%以上;肌钙蛋白Ⅰ及α-横纹肌肌动蛋白免疫荧光染色法鉴定心肌细胞纯度达98%以上。 展开更多

关键词 心肌细胞 原代培养 新生大鼠 免疫荧光

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新生大鼠心肌细胞分离、纯化及培养方法的改进 被引量：10

5

作者 庞勇军 孙莉 +1 位作者 谢文娟 莫书荣 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期520-523,共4页

目的应用酶消化法消化心室肌组织,培养心肌细胞,探索获得高存活率和高纯度心肌细胞的培养条件,为生理学和药理学研究提供细胞模型。方法胰蛋白酶和胶原酶Ⅰ联合消化新生大鼠心室肌组织,控制消化时间和消化温度;用差速贴壁法和化学抑制... 目的应用酶消化法消化心室肌组织,培养心肌细胞,探索获得高存活率和高纯度心肌细胞的培养条件,为生理学和药理学研究提供细胞模型。方法胰蛋白酶和胶原酶Ⅰ联合消化新生大鼠心室肌组织,控制消化时间和消化温度;用差速贴壁法和化学抑制法纯化心肌细胞进行体外培养。荧光显微镜观察心肌细胞形态学变化;流式细胞仪检测肌钙蛋白Ⅰ的表达;Fluo-3/AM进行细胞质内游离钙离子染色。结果培养的心肌细胞4 h后开始贴壁生长,24 h后有少数单个细胞出现自发性节律性搏动,之后连接成片,细胞簇同步收缩,细胞形态、结构完整;肌钙蛋白Ⅰ阳性率为91%;所有心肌细胞细胞质内钙离子染色阳性,荧光强度随细胞搏动呈强弱周期性变化。结论应用酶消化法可简单快捷地获得大量活力好、纯度高的心肌细胞,为心血管相关研究提供良好的实验模型。 展开更多

关键词 心肌细胞 分离 原代培养 胶原酶 大鼠

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缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌细胞凋亡及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的变化 被引量：16

6

作者 刘英 郭世杰 +1 位作者 孙景辉 于侠 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1172-1176,共5页

目的了解缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的变化。方法通过结扎7日龄新生大鼠一侧颈总动脉,吸入低浓度氧复制缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的动物模型,并设假手术对照(NC)组,两组分别于HIBD后1h、4h、12h、24h、48h... 目的了解缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的变化。方法通过结扎7日龄新生大鼠一侧颈总动脉,吸入低浓度氧复制缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的动物模型,并设假手术对照(NC)组,两组分别于HIBD后1h、4h、12h、24h、48h、72h、7d取心脏组织,应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,SP法检测心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果NC组偶见心肌阳性凋亡细胞1～4个/mm2,各时间点阳性细胞数差异无统计学意义(F=0.5,P>0.05)。HIBD组12h心肌阳性凋亡细胞开始增多,为(14.40±3.21)个/mm2;72h达高峰,为(26.80±2.28)个/mm2,12～72h各时间点阳性凋亡细胞明显高于NC组(P<0.05);7d阳性细胞数减少,但仍高于NC组。NC组大鼠心肌组织Bax呈阳性表达,Bcl-2呈弱阳性表达。HIBD组Bax于24h开始增高,72h表达最明显,7d时表达有所降低,24h～7d表达高于NC组(P<0.05);Bcl-2于24h表达开始增高,以后缓慢增高,72h达高峰,24h～7d较NC组表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。HIBD组Bcl-2/Bax比值逐渐降低。Bax、Bcl-2的表达与凋亡细胞数之间均呈直线正相关(r=0.921、0.980,P均<0.01)。Bcl-2/Bax的比值与凋亡细胞数无相关性(r=0.702,P>0.05)。结论HIBD新生大鼠心肌细胞存在凋亡,心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白表达增加,且与心肌细胞凋亡有关。 展开更多

关键词 缺氧缺血性脑损伤 新生大鼠 心肌细胞 凋亡 BAX BCL-2

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L-carnitine对缺氧/复氧新生大鼠心肌细胞能量生成及CPT-Ⅱ mRNA表达的影响 被引量：5

7

作者 朱光旭 谢燕 +3 位作者 王小华 周舟 楼淑芬 余争平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期201-204,共4页

目的　探讨L 肉毒碱 (L carnitine ,L Car)对缺氧 复氧培养新生大鼠心肌细胞能量生成的影响及其机制。方法　以原代培养新生大鼠心肌细胞建立缺氧 复氧损伤模型 ,高效液相色谱检测单纯缺氧 复氧以及L Car预处理缺氧 复氧心肌细胞ATP... 目的　探讨L 肉毒碱 (L carnitine ,L Car)对缺氧 复氧培养新生大鼠心肌细胞能量生成的影响及其机制。方法　以原代培养新生大鼠心肌细胞建立缺氧 复氧损伤模型 ,高效液相色谱检测单纯缺氧 复氧以及L Car预处理缺氧 复氧心肌细胞ATP、ADP、AMP生成改变 ;RT PCR方法检测心肌细胞肉毒碱脂酰基转移酶 Ⅱ (carnitinepalmitoyltransferase Ⅱ ,CPT Ⅱ )mRNA表达。结果　与正常对照组比较 ,培养心肌细胞缺氧 2 4h复氧 0、2、4、8h后 ,心肌细胞ATP、ADP均明显下降。与单纯缺氧 复氧组比较 ,L Car预处理组心肌细胞缺氧 复氧后ATP含量明显增高 ;培养心肌细胞缺氧 2 4h后 ,CPT ⅡmRNA表达除复氧 2h有所上升外 ,复氧 4、8h表达渐次降低。L Car预处理使缺氧 2 4h复氧 4h心肌细胞CPT ⅡmRNA表达呈浓度依赖性增高 ,5 0nmol L处理组CPT ⅡmRNA表达显著高于 0nmol L处理组。结论　心肌细胞缺氧 复氧过程中能量生成明显降低 ,其损伤可能与三羧酸循环中呼吸酶CPT Ⅱ表达降低有关 ;L Car对培养仔鼠心肌细胞缺氧复氧损伤具有显著保护作用 ,其机制可能是与L Car从转录调控水平改善CPT Ⅱ合成有关。 展开更多

关键词 缺氧/复氧 L-camitine 能量代谢 CPT-Ⅱ 心肌细胞 新生大鼠

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缺氧缺血性脑病新生大鼠心肌Caspase-3、Cyt C蛋白表达与心肌细胞凋亡的关系 被引量：7

8

作者 刘英 郭世杰 +1 位作者 韩军 周文莉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期844-847,854,共5页

目的：探讨缺氧缺血性脑病（HIE）新生大鼠心肌Caspase-3、Cyt C蛋白的表达及其与心肌细胞凋亡的关系。方法：7日龄新生大鼠制备HIE经典模型。分为HIE组和假手术对照（NC）组,两组分别于HIE后1小时、4小时、12小时、24小时、48小时、72... 目的：探讨缺氧缺血性脑病（HIE）新生大鼠心肌Caspase-3、Cyt C蛋白的表达及其与心肌细胞凋亡的关系。方法：7日龄新生大鼠制备HIE经典模型。分为HIE组和假手术对照（NC）组,两组分别于HIE后1小时、4小时、12小时、24小时、48小时、72小时、7天取心脏组织,应用免疫组织化学法检测心肌组织Caspase-3、Cyt C蛋白的表达;应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果：HIE组24小时Caspase-3出现阳性细胞表达增多,48小时达高峰,24小时~7天Caspase-3的表达均明显高于NC组（P〈0.05）。HIE组24小时Cyt C出现较多的阳性细胞表达,72小时达高峰,至7天时仍高于NC组（P〈0.05）。HIE组12小时心肌阳性凋亡细胞开始增多,72小时达高峰,12~72小时各时间点阳性凋亡细胞明显高于NC组（P〈0.05）。Cas-pase-3、Cyt C蛋白表达与凋亡细胞数二者之间均呈直线正相关。结论：HIE新生大鼠心肌细胞Caspase-3、Cyt C蛋白表达增加,提示Caspase-3、Cyt C蛋白表达对心肌细胞凋亡起促进作用。 展开更多

关键词 CASPASE-3 CYT C 凋亡 缺氧缺血性脑病 新生 大鼠 心肌细胞

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参附益心方对缺氧条件下大鼠原代心肌细胞线粒体DNA相关基因表达的影响 被引量：3

9

作者 马腾 李彬 +4 位作者 王新陆 谢世阳 高原 朱明军 王永霞 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2020年第5期1421-1427,共7页

目的研究参附益心方(SF)对缺氧条件下大鼠原代心肌细胞线粒体DNA相关基因表达的影响。方法取1~3 d SD新生大鼠,分离、培养、鉴定原代心肌细胞。CCK-8检测SF、辅酶Q10(Coenzyme Q10)最适浓度。实验分为Normal(正常)组、Model(缺氧)组、S... 目的研究参附益心方(SF)对缺氧条件下大鼠原代心肌细胞线粒体DNA相关基因表达的影响。方法取1~3 d SD新生大鼠,分离、培养、鉴定原代心肌细胞。CCK-8检测SF、辅酶Q10(Coenzyme Q10)最适浓度。实验分为Normal(正常)组、Model(缺氧)组、SFL(参附益心方低剂量)组、SFH(参附益心方高剂量)组、Coenzyme Q10组,后三组在缺氧模型基础上分别给予SF 0.25 mg·ml-1、SF 0.5 mg·ml-1、Coenzyme Q101×10-4mol/L对细胞进行干预,收集细胞并用相关试剂盒检测ATP含量及乳酸脱氢酶(LDH)含量,RTPCR检测ND-1、ND-2、COX、tfam基因的表达。结果与Normal组相比,Model组心肌细胞ATP含量显著下降,LDH含量显著升高,ND-1、ND-2、COX、tfam基因表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与Model相比,SFL组LDH含量下降,ND-2、COX基因表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05);SFH组ATP含量升高,LDH含量下降,ND-1、ND-2、COX基因表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论参附益心方可上调原代心肌细胞线粒体DNA相关基因COX、ND1、ND2的表达,提高心肌ATP的含量,降低LDH含量,并呈剂量依赖性。 展开更多

关键词 参附益心方 大鼠原代心肌细胞 线粒体DNA 基因表达

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纯氧与空气复苏对窒息新生大鼠心肌细胞超微结构的影响 被引量：3

10

作者 孔元蓉 王自能 +1 位作者 唐福星 施云峰 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期271-274,共4页

目的:在建立新生大鼠窒息的动物模型基础上,研究纯氧与空气复苏对窒息新生大鼠心肌细胞超微结构的影响。方法:采用SD新生大鼠建立窒息模型,并分组进行纯氧与空气复苏。实验分组:1.正常对照组(n=5);2.缺氧组(n=5);3.纯氧复苏后24 h组(n=5... 目的:在建立新生大鼠窒息的动物模型基础上,研究纯氧与空气复苏对窒息新生大鼠心肌细胞超微结构的影响。方法:采用SD新生大鼠建立窒息模型,并分组进行纯氧与空气复苏。实验分组:1.正常对照组(n=5);2.缺氧组(n=5);3.纯氧复苏后24 h组(n=5);4.纯氧复苏后72 h组(n=5);5.空气复苏后24 h组(n=5);6.空气复苏后72 h组(n=5)。按时间点取心肌组织,制作超薄切片,在透射电镜下观察各组心肌细胞超微结构变化。结果:与正常对照组相比,缺氧组心肌细胞的线粒体肿胀,嵴断裂,肌原纤维扭曲,肌丝断裂,细胞核内染色质边集。氧气复苏组肌原纤维间水肿,肌丝扭曲,线粒体肿胀,核膜不清,染色质浓集。空气复苏组,特别是24 h组,心肌细胞严重水肿,肌丝断裂溶解,线粒体空泡化明显,细胞核肿胀,染色质淡染。结论:空气复苏较纯氧复苏后心肌细胞损伤严重,各组均以复苏后24 h出现较明显变化,而复苏后72 h心肌细胞有一定程度的再生修复。 展开更多

关键词 心肌细胞 纯氧 空气 复苏 窒息 新生大鼠 超微结构

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血管紧张素Ⅱ对培养新生大鼠心肌细胞MHC基因表达的影响 被引量：11

11

作者 吴扬 潘敬运 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期126-129,共4页

目的：本研究新生大鼠原代培养心肌细胞上，观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对心肌细胞ＭＨＣ基因表达的影响。方法和结果：（１）在培养新生大鼠心肌细胞中，用１０－７ｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ处理后，６ｈ就引起α－ＭＨＣｍＲＮＡ水平的迅... 目的：本研究新生大鼠原代培养心肌细胞上，观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对心肌细胞ＭＨＣ基因表达的影响。方法和结果：（１）在培养新生大鼠心肌细胞中，用１０－７ｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ处理后，６ｈ就引起α－ＭＨＣｍＲＮＡ水平的迅速增加，１２ｈ达峰值，为对照组的１７５倍（Ｐ＜００５）。β－ＭＨＣｍＲＮＡ水平也有所增加，为对照组的１２５倍（Ｐ＜００１），两者均呈量效关系。（２）ＡｎｇⅡ受体阻断剂ｓａｒａｌａｓｉｎ可阻断ＡｎｇⅡ诱导的α－ＭＨＣ和β－ＭＨＣ基因的表达。结论：ＡｎｇⅡ可能通过ＡｎｇⅡ受体的介导作用。 展开更多

关键词 血管紧张素Ⅱ 肌球蛋白 心肌细胞 新生大鼠 细胞培养 MHC基因

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丙泊酚对新生和成年大鼠心肌细胞钙离子移动的影响 被引量：5

12

作者 张莹 李士通 +1 位作者 庄心良 沈浩 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期189-191,228,共4页

目的　观察不同浓度丙泊酚对氯化钾和咖啡因诱发的新生和成年大鼠心肌细胞钙离子移动的影响 ,探讨其心肌抑制作用的可能机制。方法　用Fluo 3AM钙荧光指示剂染色培养的新生大鼠或急性分离的成年大鼠心肌细胞 ,在激光共聚焦显微镜下动... 目的　观察不同浓度丙泊酚对氯化钾和咖啡因诱发的新生和成年大鼠心肌细胞钙离子移动的影响 ,探讨其心肌抑制作用的可能机制。方法　用Fluo 3AM钙荧光指示剂染色培养的新生大鼠或急性分离的成年大鼠心肌细胞 ,在激光共聚焦显微镜下动态观察使用丙泊酚前及丙泊酚 (5 0 ,2 5 0 μmol/L)预处理后 ,氯化钾和咖啡因诱发的细胞内钙离子浓度的变化。结果　丙泊酚 5 0 μmol/L使氯化钾诱发的新生或成年大鼠心肌细胞内钙荧光强度的峰值下降 ,较对照组有明显差异 (P <0 .0 1 ) ,对新生大鼠心肌细胞的抑制作用较成年大鼠明显。丙泊酚 2 5 0 μmol/L使细胞内钙荧光强度峰值进一步降低。但两种浓度的丙泊酚对咖啡因诱发的两种心肌细胞钙荧光强度的升高均无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论　丙泊酚浓度依赖地降低心肌细胞内钙离子浓度 ,与其抑制细胞外钙内流有关 ,它对新生大鼠心肌细胞的抑制作用更强。提示临床上使用丙泊酚作为麻醉剂 ,尤其对小儿麻醉时应有足够重视。 展开更多

关键词 细胞钙离子 丙泊酚 细胞内钙离子浓度 成年大鼠心肌细胞 mol/L 心肌抑制作用 新生大鼠 钙荧光指示剂 荧光强度 心肌细胞内钙 激光共聚焦 心肌细胞钙 咖啡因 氯化钾 不同浓度 可能机制 急性分离 动态观察 显微镜下 浓度依赖 小儿麻醉 诱发 预处理 对照组 钙内流

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挤压伤大鼠血清对培养新生大鼠心肌细胞的作用 被引量：1

13

作者 刘水平 王江峰 +2 位作者 刘小山 李朝晖 陈玉川 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第B06期11-13,共3页

[目的]观察挤压伤大鼠血清对培养的新生大鼠心肌细胞搏动频率,胞内游离钙浓度,Fos蛋白表达的作用。[方 法]培养1～3 d龄SD大鼠心肌细胞,观察挤压伤大鼠血清对心肌细胞搏动频率、胞内钙浓度和Fos蛋白表达的影响。[结果] 与正常大鼠血清... [目的]观察挤压伤大鼠血清对培养的新生大鼠心肌细胞搏动频率,胞内游离钙浓度,Fos蛋白表达的作用。[方 法]培养1～3 d龄SD大鼠心肌细胞,观察挤压伤大鼠血清对心肌细胞搏动频率、胞内钙浓度和Fos蛋白表达的影响。[结果] 与正常大鼠血清组比较,挤压伤大鼠血清培养的心肌细胞搏动频率(次／min)由88.3±20.6降为26.4±16.7,胞内钙浓度 (nmol／L)和Fos蛋白表达阳性指数分别由104.7±4.7,0.6±0.1增加为136.8±3.9,5.1±2.1。[结论]挤压伤大鼠血清通 过增加胞内游离钙浓度和Fos蛋白表达,抑制心肌细胞的搏动,介导挤压伤早期的心脏损伤。 展开更多

关键词 挤压伤 心肌细胞 血清 FOS蛋白 表达 新生大鼠 胞内游离钙浓度 介导 SD大鼠 指数

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双黄连抗柯萨奇B_3型病毒感染大鼠原代心肌细胞的效应 被引量：2

14

作者 刘培辉 杨正修 王明丽 《安徽医科大学学报》 CAS 2002年第2期108-110,共3页

目的　观察双黄连抗柯萨奇B3 病毒感染原代大鼠心肌细胞的作用 ,并初步探讨其机制。方法　选用出生 1～ 3天的Sprague Dawley大鼠 ,取其心室肌组织 ,制备原代大鼠心肌细胞 ,培养 72h后 ,用不同浓度的双黄连对抗10 0TCID50 柯萨奇B3 型... 目的　观察双黄连抗柯萨奇B3 病毒感染原代大鼠心肌细胞的作用 ,并初步探讨其机制。方法　选用出生 1～ 3天的Sprague Dawley大鼠 ,取其心室肌组织 ,制备原代大鼠心肌细胞 ,培养 72h后 ,用不同浓度的双黄连对抗10 0TCID50 柯萨奇B3 型病毒感染细胞 ,观察细胞病变 ,测定感染 36h后细胞上清液中的病毒滴度及肌酸磷酸激酶。结果　 0 5、0 2 5、0 12 5 g/L双黄连均可明显减轻心肌细胞病变 ,降低细胞上清液的病毒滴度 ,减少感染心肌细胞肌酸磷酸激酶的释放 (分别和病毒对照组相比 ,P <0 0 1)。结论　双黄连对柯萨奇病毒感染的新生大鼠原代心肌细胞有保护作用。 展开更多

关键词 柯萨奇B3型病毒感染 大鼠 原代心肌细胞 中医药治疗 双黄连注射液

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血管紧张素Ⅳ促新生大鼠心肌细胞生长的实验研究 被引量：3

15

作者 陈敏 杨波 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期925-928,共4页

目的:研究血管紧张素Ⅳ(AngⅣ)对心肌细胞生长的影响及特点。方法:体外培养新生大鼠心肌细胞,将培养的心肌细胞分为对照组、不同浓度和不同干预时间组。分别用改良的Bradford法、流式细胞仪检测AngⅣ对新生大鼠心肌细胞的蛋白表达及细... 目的:研究血管紧张素Ⅳ(AngⅣ)对心肌细胞生长的影响及特点。方法:体外培养新生大鼠心肌细胞,将培养的心肌细胞分为对照组、不同浓度和不同干预时间组。分别用改良的Bradford法、流式细胞仪检测AngⅣ对新生大鼠心肌细胞的蛋白表达及细胞周期的影响。结果:AngⅣ使心肌细胞的蛋白量明显大于对照组(P<0.05),并且存在着时间依赖性(364、8 h时,P<0.01);而且,不同浓度的AngⅣ均加速心肌细胞由静止期、DNA合成前期向DNA合成期的转换,使DNA合成期及DNA合成后期的细胞数增加,促进心肌细胞的生长;且10-6mol/L的AngⅣ比10-5mol/L的AngⅣ使更多的细胞从G1期向S期转化。结论:AngⅣ可能是通过AT4介导,对新生大鼠心肌细胞具有直接促蛋白合成及促进心肌细胞生长,并各自存在着时间及浓度依赖性。 展开更多

关键词 血管紧张素Ⅳ 心肌细胞 细胞周期 流式细胞术 细胞生长 新生大鼠

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肾上腺素诱导培养新生大鼠心肌细胞肥大的实验研究 被引量：1

16

作者 谢协驹 符史干 吉丽敏 《海南医学院学报》 CAS 2001年第1期1-3,共3页

目的 :探讨肾上腺素诱导心肌细胞肥大的作用。方法 :在培养新生大鼠心肌细胞上 ,通过测量心肌细胞表面积和[3H] -Leu的掺入量来判断心肌细胞肥大。结果 :肾上腺素能明显增加心肌细胞表面积和[3H] -Leu的掺入量 ,并呈量效关系。结论

关键词 肾上腺素 诱导 心肌肥大 新生大鼠 心肌细胞 细胞培养

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视黄醇结合蛋白1通过激活TAK1促进大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大

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作者 谢菁 周艳丽 +2 位作者 陈思思 王继春 江洪 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期233-240,共8页

目的:探究视黄醇结合蛋白1(retinol binding protein 1, Rbp1)在大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大中的功能和机制。方法:本研究通过联合分析基因表达数据库(Gene Expression Omnibus, GEO)中的小鼠心肌肥厚基因芯片数据,寻找在心肌肥厚发生过... 目的:探究视黄醇结合蛋白1(retinol binding protein 1, Rbp1)在大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大中的功能和机制。方法:本研究通过联合分析基因表达数据库(Gene Expression Omnibus, GEO)中的小鼠心肌肥厚基因芯片数据,寻找在心肌肥厚发生过程中的关键调控因子,构建该基因过表达及敲减腺病毒并感染大鼠乳鼠原代心肌细胞,利用血管紧张素II(angiotensin II, Ang II)诱导大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大模型,研究目的基因对大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大的影响,应用Western blot及RT-qPCR探究目的基因调控大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大的分子机制。结果:在小鼠心肌肥厚心脏组织中Rbp1的表达显著上调(P<0.01),体外细胞实验显示与对照组相比,Rbp1过表达组的大鼠乳鼠原代心肌细胞面积显著增大,心肌肥厚标志基因心钠肽(atrial natriuretic peptide, Anp)和肌球蛋白重链7(myosin heavy chain 7, Myh7)的表达显著升高(P<0.01),证实Rbp1过表达能促进Ang II诱导的大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大;相反,Rbp1敲减则能显著抑制Ang II诱导的大鼠乳鼠原代心肌细胞面积增加和心肌肥厚标志物表达。机制研究显示,Rbp1过表达显著激活转化生长因子β激活激酶1(transforming growth factor-β-activated kinase 1, TAK1)和P38(P<0.01),应用TAK1抑制剂可阻断Rbp1过表达对Ang II诱导大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大的促进作用。结论:Rbp1可通过激活TAK1信号通路促进Ang II诱导的大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大。 展开更多

关键词 视黄醇结合蛋白1 大鼠乳鼠原代心肌细胞 心肌肥大 TAK1/P38信号通路

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环孢素A对血管紧张素Ⅱ诱导的新生大鼠心肌细胞肥大及c-fos表达的影响

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作者 杨运海 韩召敏 +2 位作者 付琴 向继洲 胡本容 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期672-674,682,共4页

目的　在培养的新生大鼠心肌细胞上观察环孢素A (CsA)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )诱导的心肌细胞肥大和c fos表达增加的作用 ,借以探讨CsA抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥厚的机制。方法　用Bradford比色法测量心肌细胞总蛋白的含量 ;用Western... 目的　在培养的新生大鼠心肌细胞上观察环孢素A (CsA)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )诱导的心肌细胞肥大和c fos表达增加的作用 ,借以探讨CsA抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥厚的机制。方法　用Bradford比色法测量心肌细胞总蛋白的含量 ;用WesternBlot方法定量测定心肌细胞c fos蛋白含量。结果　①AngⅡ可明显增加心肌细胞的蛋白总量 ,CsA可以浓度依赖地抑制AngⅡ诱导的心肌蛋白含量的增加 ;②AngⅡ可诱导c fos蛋白表达增加 ,CsA可浓度依赖性抑制AngⅡ的这一作用。结论　CsA可以抑制AngⅡ诱导的培养新生大鼠心肌细胞肥大 ,抑制AngⅡ引起的心肌细胞c fos蛋白表达增加可能是其作用机制之一。 展开更多

关键词 AngⅡ 诱导 心肌细胞肥大 新生大鼠 表达 环孢素A C-FOS 蛋白含量 定量测定 依赖

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改良的乳小鼠心肌细胞原代培养方法 被引量：13

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作者 吴丹 冯健 +1 位作者 莫显刚 刘应才 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第4期62-67,共6页

目的建立一种稳定而快速的乳小鼠心肌细胞的原代培养方法。方法用多聚赖氨酸预包被处理培养皿,采用两步法(0.25%胰酶4℃过夜,0.5 mg/m L-1.0 mg/m L II型胶原酶+5 mg/m L白蛋白的胶原消化液37℃短时多次消化),通过差速贴壁70 min+5-溴... 目的建立一种稳定而快速的乳小鼠心肌细胞的原代培养方法。方法用多聚赖氨酸预包被处理培养皿,采用两步法(0.25%胰酶4℃过夜,0.5 mg/m L-1.0 mg/m L II型胶原酶+5 mg/m L白蛋白的胶原消化液37℃短时多次消化),通过差速贴壁70 min+5-溴脱氧尿嘧啶的使用来纯化心肌细胞。倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态变化,台盼蓝染色法检测细胞存活率,α-actinin特异性免疫荧光染色鉴定心肌细胞并计算纯度。结果心肌细胞形态良好,自发搏动,细胞成活率可达到98%,纯度可达到95%。结论本方法培养的心肌细胞存活率高,纯度高,是一种理想的心肌细胞原代培养方法。 展开更多

关键词 乳小鼠 心肌细胞 原代培养

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瓜蒌皮水提物通过PI3K/Akt/eNOS信号通路抑制缺血缺氧大鼠原代心肌细胞的凋亡 被引量：15

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作者 杨玉婕 薛慧文 +3 位作者 胡超群 孙笛洋 董振飞 赵启韬 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期111-118,共8页

以激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路、抑制心肌细胞凋亡为切入点,探究瓜蒌皮水提物(TP-W)保护心肌缺血的机制.分离大鼠心肌细胞,通过缺氧气体+无血清培养液培养制造缺血缺氧损伤模型,以模... 以激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路、抑制心肌细胞凋亡为切入点,探究瓜蒌皮水提物(TP-W)保护心肌缺血的机制.分离大鼠心肌细胞,通过缺氧气体+无血清培养液培养制造缺血缺氧损伤模型,以模拟急性心肌缺血时的体内心肌细胞环境;同时添加PI3K特异性抑制剂(LY294002)和TP-W处理细胞,利用倒置相差显微镜观察细胞形态,噻唑兰法、末端标记法分别检测细胞存活率及凋亡率,免疫荧光联合免疫印迹方法定位、定量地检测细胞内PI3K、Akt及eNOS蛋白表达及磷酸化水平.结果显示:对上述缺血缺氧损伤的心肌细胞,TP-W可显著改善其生长状态、提高存活率、降低凋亡率;同时显著上调上述3种蛋白表达水平及磷酸化水平,但磷酸化水平均可被LY294002处理显著削弱.可见,激活PI3K/Akt/eNOS信号通路、抑制心肌细胞凋亡可能是TP-W抗心肌缺血的重要机制,也是中药“开胸除痹”的关键生物学内涵. 展开更多

关键词 瓜蒌皮 水提物 原代心肌细胞 大鼠 PI3K/Akt/eNOS信号通路 缺血缺氧

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