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携强绿色荧光蛋白重组慢病毒的构建及其在原代培养SD大鼠皮层神经细胞中的表达
被引量：
6
1
作者
杨宇
吴江
+4 位作者
杨欣
孙欣
吴昊
王全颖
杨广笑
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期237-240,共4页
目的:构建携带强绿色荧光蛋白的重组慢病毒(Lent/EGFP),感染原代培养SD大鼠皮层神经细胞,观察其感染能力及报告基因的表达水平。方法:采用PCR方法克隆EGFP cDNA;将EGFP基因片段亚克隆到慢病毒穿梭质粒多克隆位点内;用4质粒共转染系统在2...
目的:构建携带强绿色荧光蛋白的重组慢病毒(Lent/EGFP),感染原代培养SD大鼠皮层神经细胞,观察其感染能力及报告基因的表达水平。方法:采用PCR方法克隆EGFP cDNA;将EGFP基因片段亚克隆到慢病毒穿梭质粒多克隆位点内;用4质粒共转染系统在293ET细胞中包装出携带EGFP基因的重组慢病毒Lent/EGFP;重组病毒感染NIH 3T3细胞,FACS检测重组病毒滴度;Lent/EGFP感染体外培养的原代SD大鼠皮层神经细胞,共聚焦荧光纤维镜观察原代神经细胞内绿色荧光蛋白的表达情况。结果:基因测序证明克隆的EGFP cDNA与GenBank提供的序列完全一致;琼脂糖凝胶电泳结果证实EGFP正确插入pLenti6/V5TOPO;FACS检测病毒滴度为2×106;在体外分离培养的原代SD大鼠皮层神经细胞中,重组病毒感染72 h后可见较强的绿色荧光蛋白表达。结论:采用改良的4质粒共转染方法成功构建了携EGFP的重组慢病毒载体;Lent/EGFP对非分裂的神经细胞具有较强的感染能力,且携带的EGFP基因可以在神经细胞内有效表达。
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关键词
增强绿色荧光蛋白
慢病毒属
原代培养神经细胞
基因表达
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职称材料
DREAM A和B在原代培养的小鼠神经细胞中的表达
2
作者
赵雪花
孙峰波
周艳玲
《神经解剖学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期51-55,共5页
目的:研究DREAM蛋白的2个主要亚型DREAM A和DREAM B在原代培养的小鼠大脑皮层星形胶质细胞、小鼠大脑皮层γ-氨基丁酸能神经元以及小鼠小脑谷氨酸能神经元中的表达水平的差异。方法:提取原代培养的小鼠大脑皮层星形胶质细胞、小鼠大脑...
目的:研究DREAM蛋白的2个主要亚型DREAM A和DREAM B在原代培养的小鼠大脑皮层星形胶质细胞、小鼠大脑皮层γ-氨基丁酸能神经元以及小鼠小脑谷氨酸能神经元中的表达水平的差异。方法:提取原代培养的小鼠大脑皮层星形胶质细胞、小鼠大脑皮层γ-氨基丁酸能神经元以及小鼠小脑谷氨酸能神经元的RNA,采用普通PCR及real time PCR的方法检测上述各种细胞中DREAM蛋白2个亚型A和B的mRNA的表达水平。结果:DREAM的两个亚型A和B在上述三种神经细胞都存在。在发育成熟的原代培养细胞中,DREAMA的mRNA水平要远高于DREAM B。在三种不同的细胞中,谷氨酸能神经元表达DREAM A的水平最高。结论:DREAM的两个亚型A和B在小鼠三种原代培养的神经细胞中的表达水平及其差异提示DREAM A是成年小鼠中DREAM的主要亚型,DREAM A和B在不同类型的神经细胞中发挥的作用及其机制有所不同。
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关键词
DREAM
亚型
REAL
TIME
PCR
神经细胞
原代
培养
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职称材料
题名
携强绿色荧光蛋白重组慢病毒的构建及其在原代培养SD大鼠皮层神经细胞中的表达
被引量：
6
1
作者
杨宇
吴江
杨欣
孙欣
吴昊
王全颖
杨广笑
机构
吉林大学第一医院神经内科
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期237-240,共4页
基金
国家自然科学基金资助课题(30371567)
吉林省科技厅基金资助课题(200505217)
吉林大学研究生创新基金资助课题(703050)
文摘
目的:构建携带强绿色荧光蛋白的重组慢病毒(Lent/EGFP),感染原代培养SD大鼠皮层神经细胞,观察其感染能力及报告基因的表达水平。方法:采用PCR方法克隆EGFP cDNA;将EGFP基因片段亚克隆到慢病毒穿梭质粒多克隆位点内;用4质粒共转染系统在293ET细胞中包装出携带EGFP基因的重组慢病毒Lent/EGFP;重组病毒感染NIH 3T3细胞,FACS检测重组病毒滴度;Lent/EGFP感染体外培养的原代SD大鼠皮层神经细胞,共聚焦荧光纤维镜观察原代神经细胞内绿色荧光蛋白的表达情况。结果:基因测序证明克隆的EGFP cDNA与GenBank提供的序列完全一致;琼脂糖凝胶电泳结果证实EGFP正确插入pLenti6/V5TOPO;FACS检测病毒滴度为2×106;在体外分离培养的原代SD大鼠皮层神经细胞中,重组病毒感染72 h后可见较强的绿色荧光蛋白表达。结论:采用改良的4质粒共转染方法成功构建了携EGFP的重组慢病毒载体;Lent/EGFP对非分裂的神经细胞具有较强的感染能力,且携带的EGFP基因可以在神经细胞内有效表达。
关键词
增强绿色荧光蛋白
慢病毒属
原代培养神经细胞
基因表达
Keywords
enhanced green flurosecent protein
lentivirus
primary neocorticall cells
gene expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
DREAM A和B在原代培养的小鼠神经细胞中的表达
2
作者
赵雪花
孙峰波
周艳玲
机构
武汉科技大学医学院基础医学部
北京大学神经科学研究所
出处
《神经解剖学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期51-55,共5页
基金
国家自然科学基金(31070974)
文摘
目的:研究DREAM蛋白的2个主要亚型DREAM A和DREAM B在原代培养的小鼠大脑皮层星形胶质细胞、小鼠大脑皮层γ-氨基丁酸能神经元以及小鼠小脑谷氨酸能神经元中的表达水平的差异。方法:提取原代培养的小鼠大脑皮层星形胶质细胞、小鼠大脑皮层γ-氨基丁酸能神经元以及小鼠小脑谷氨酸能神经元的RNA,采用普通PCR及real time PCR的方法检测上述各种细胞中DREAM蛋白2个亚型A和B的mRNA的表达水平。结果:DREAM的两个亚型A和B在上述三种神经细胞都存在。在发育成熟的原代培养细胞中,DREAMA的mRNA水平要远高于DREAM B。在三种不同的细胞中,谷氨酸能神经元表达DREAM A的水平最高。结论:DREAM的两个亚型A和B在小鼠三种原代培养的神经细胞中的表达水平及其差异提示DREAM A是成年小鼠中DREAM的主要亚型,DREAM A和B在不同类型的神经细胞中发挥的作用及其机制有所不同。
关键词
DREAM
亚型
REAL
TIME
PCR
神经细胞
原代
培养
Keywords
DREAM
isoforms
real time PCR
nerve cell
primary culture
分类号
R741 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
携强绿色荧光蛋白重组慢病毒的构建及其在原代培养SD大鼠皮层神经细胞中的表达
杨宇
吴江
杨欣
孙欣
吴昊
王全颖
杨广笑
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
DREAM A和B在原代培养的小鼠神经细胞中的表达
赵雪花
孙峰波
周艳玲
《神经解剖学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
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已选择
0
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