右美托咪定诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响 被引量：4

1

作者 李建立 刘玉茹 +2 位作者 张煜东 吴红海 侯艳宁 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第12期1252-1256,共5页

目的右美托咪定神经保护作用受到广泛关注,文中旨在探讨右美托咪定对氯胺酮诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法原代培养7 d的大鼠皮层神经元细胞,随机分为溶剂对照a组(等渗盐水)、氯胺酮a组(氯胺酮终浓度为100μmol/L)、氯胺... 目的右美托咪定神经保护作用受到广泛关注,文中旨在探讨右美托咪定对氯胺酮诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法原代培养7 d的大鼠皮层神经元细胞,随机分为溶剂对照a组(等渗盐水)、氯胺酮a组(氯胺酮终浓度为100μmol/L)、氯胺酮+右美托咪定组[(100μmol/L氯胺酮+浓度分别为0.001、0.01、0.1、1μmol/L的右美托咪定,分为0.001μmol/L亚组、0.01μmol/L亚组、0.1μmol/L亚组、1μmol/L亚组)],处理24 h后,用MTT法检测神经元存活率的变化。此外,再将神经元细胞随机分为溶剂对照b组(等渗盐水)、氯胺酮b组(氯胺酮终浓度为100μmol/L)、右美托咪定+氯胺酮组(0.1μmol/L右美托咪定+100μmol/L氯胺酮)、LY294002预处理组(100μmol/L氯胺酮+0.1μmol/L右美托咪定+10μmol/L的LY294002),处理24 h后,用Hoechst33258核染色法检测神经元调亡,Western blot法测定神经元p Akt和cleavedcaspase-3蛋白水平。结果 0.001μmol/L亚组、0.01μmol/L亚组、0.1μmol/L亚组、1μmol/L亚组的神经元存活率分别为(56.4±7.21)%、(60.5±4.2)%、(69.6±6.1)%、(84.5±7.3)%、(81.5±6.2)%,其中0.1μmol/L亚组右美托咪定产生的保护作用最好(P<0.05)。LY294002预处理组、氯胺酮b组神经元凋亡率[(36.8±4.4)、(43.4±4.5)%]较溶剂对照b组、右美托咪定+氯胺酮组[(7.5±1.1)、(16.4±3.6)%]显著增加(P<0.01)。LY294002预处理组、氯胺酮b组的p Akt蛋白水平(0.26±0.02、0.15±0.01)较溶剂对照b组(0.61±0.05)、右美托咪定+氯胺酮组(0.50±0.04)显著降低(P<0.01)。LY294002预处理组、氯胺酮b组的cleaved-caspase-3蛋白水平(0.40±0.02、0.65±0.03)较溶剂对照b组(0.10±0.02)、右美托咪定+氯胺酮组(0.12±0.01)显著增加(P<0.01)。结论右美托咪定可对抗氯胺酮引起的原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与激活PI3K-Akt信号通路有关。 展开更多

关键词 氯胺酮 右美托咪定 原代培养皮层神经元 凋亡 PI3K-AKT信号通路

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丙泊酚诱导大鼠原代培养皮层神经元凋亡 被引量：2

2

作者 李建立 梁巍 +2 位作者 庞鑫鑫 吴红海 侯艳宁 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期491-494,共4页

目的探讨丙泊酚对原代培养皮层神经元凋亡的影响及可能机制。方法原代培养7d的大鼠皮层神经元,随机分为两组:对照组(给予相同容积的20%脂肪乳剂)和丙泊酚组(丙泊酚终浓度为500μmol/L),上述药物处理12h后,采用MTT法检测两组神经元存活率... 目的探讨丙泊酚对原代培养皮层神经元凋亡的影响及可能机制。方法原代培养7d的大鼠皮层神经元,随机分为两组:对照组(给予相同容积的20%脂肪乳剂)和丙泊酚组(丙泊酚终浓度为500μmol/L),上述药物处理12h后,采用MTT法检测两组神经元存活率,Hoechst33258核染色法检测神经元的凋亡,罗丹明染色检测线粒体膜电位,Western blot法检测神经元cyt-c和cleaved-caspase-3蛋白含量。结果丙泊酚组皮层神经元存活率(54.4%±6.4%),明显低于对照组(99.8%±4.1%)(P<0.05);神经元凋亡率(46.5%±5.3%),明显高于对照组(7.2%±0.9%)(P<0.05),线粒体膜电位(59.6%±4.3%)明显低于对照组(99.9%±5.7%)(P<0.05);cyt-c蛋白含量(0.38±0.03),明显高于对照组(0.15±0.02)(P<0.05),cleaved-caspase-3蛋白含量(0.46±0.04)明显高于对照组(0.13±0.02)(P<0.05)。结论丙泊酚可诱导发育期原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与抑制线粒体膜电位,增加cyt-c和cleaved-caspase-3蛋白含量有关。 展开更多

关键词 原代培养皮层神经元 丙泊酚 神经凋亡 线粒体膜电位 细胞色素C cleaved-caspase-3

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丙泊酚对原代培养大鼠皮层神经元BDNF和p75NTR水平的影响 被引量：2

3

作者 李建立 崔红赏 +2 位作者 王蓓 吴红海 侯艳宁 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第6期818-821,共4页

目的探讨丙泊酚对原代培养大鼠皮层神经元凋亡的影响及可能机制。方法原代培养7 d的大鼠皮层神经元,随机分为两组:溶剂对照组(给予相同容积的20%脂肪乳剂),丙泊酚组(丙泊酚终浓度为500μmol/L),上述药物处理皮层神经元12 h后,用光学显... 目的探讨丙泊酚对原代培养大鼠皮层神经元凋亡的影响及可能机制。方法原代培养7 d的大鼠皮层神经元,随机分为两组:溶剂对照组(给予相同容积的20%脂肪乳剂),丙泊酚组(丙泊酚终浓度为500μmol/L),上述药物处理皮层神经元12 h后,用光学显微镜观察两组皮层神经元的形态学变化,MTT法检测神经元存活率的变化,Western blot法检测神经元脑源性神经营养因子(BDNF)、p75神经营养因子受体(p75NTR)以及B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白水平的变化。结果与溶剂对照组比较,丙泊酚组光镜下观察显示皮层神经元数量明显减少,胞体立体感消失,细胞轮廓不清,神经元轴突断裂。神经元存活率显著性下降(P<0.01),BDNF和Bcl-2蛋白水平显著性下降(P<0.01),p75NTR蛋白水平显著性增加(P<0.01)。结论丙泊酚可引起发育期原代培养皮层神经元损伤,其机制可能与下调BDNF、Bcl-2和上调p75NTR蛋白水平有关。 展开更多

关键词 原代培养皮层神经元 丙泊酚 神经凋亡 BDNF P75NTR BCL-2

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柴胡提取物对大鼠海马原代培养神经元5-HT_3受体介导离子通道的影响 被引量：9

4

作者 李芳 王杰琼 +3 位作者 宋春红 魏盛 张惠云 乔明琦 《世界科学技术-中医药现代化》 2015年第11期2224-2228,共5页

目的 :探讨柴胡提取物(Radix Bupleuri Extract,RBE)含药血清对抑郁情绪模型大鼠原代培养的海马神经元5-羟色胺3受体(5-HT3R)通道电流的作用。方法:复制抑郁情绪大鼠模型,以柴胡提取物进行药物干预,采用旷场实验和糖水偏好实验评价模型... 目的 :探讨柴胡提取物(Radix Bupleuri Extract,RBE)含药血清对抑郁情绪模型大鼠原代培养的海马神经元5-羟色胺3受体(5-HT3R)通道电流的作用。方法:复制抑郁情绪大鼠模型,以柴胡提取物进行药物干预,采用旷场实验和糖水偏好实验评价模型,制备各组大鼠血清并灭活除菌,对原代培养的大鼠海马神经元干预24 h后,采用全细胞膜片钳技术检测各组神经元5-HT_3R通道电流。结果 :与正常组相比,模型组大鼠旷场实验总分显著性降低(P<0.01),糖水偏好系数显著降低(P<0.01),模型组大鼠血清孵育的海马神经元电流密度值明显增加(P<0.01);与模型组相比,柴胡提取物组和氟西汀组旷场实验总得分明显提高(P<0.05,P<0.01),糖水偏好系数均明显增加(P<0.05,P<0.05),柴胡提取物和氟西汀含药血清孵育的海马神经元电流密度值均明显减少(P<0.01,P<0.01)。结论:柴胡提取物能改善抑郁情绪模型大鼠异常的5-HT3R通道电流,这可能是其发挥抗抑郁情绪的中枢机制之一。 展开更多

关键词 柴胡提取物 抑郁情绪模型 5-HT3R 海马神经元 原代培养 全细胞膜片钳

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17β雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响 被引量：1

5

作者 李建立 尹德云 +3 位作者 王蕴欣 庞鑫鑫 吴红海 侯艳宁 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第9期925-928,共4页

目的 17β雌二醇的神经保护作用受到广泛关注,文中旨在探讨17β雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法原代培养7 d的大鼠皮层神经元,随机分为3组:对照组(给予等体积20%脂肪乳),丙泊酚组(500μmol/L丙泊酚),丙泊酚... 目的 17β雌二醇的神经保护作用受到广泛关注,文中旨在探讨17β雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法原代培养7 d的大鼠皮层神经元,随机分为3组:对照组(给予等体积20%脂肪乳),丙泊酚组(500μmol/L丙泊酚),丙泊酚+17β雌二醇组(500μmol/L丙泊酚,0.1μmol/L 17β雌二醇)。药物处理12 h后,在光镜下观察各组神经元的形态变化,MTT法检测神经元存活率的变化,流式细胞仪检测神经元的调亡,罗丹明染色检测线粒体膜电位的变化。结果与对照组比较,丙泊酚组光镜下神经元数量明显减少,胞体立体感消失,细胞轮廓不清,神经元轴突断裂。与丙泊酚组神经元形态变化比较,丙泊酚+17β雌二醇组明显改善。丙泊酚组神经元存活率、线粒体膜电位[(52.3±5.2)%、(59.1±5.3)%]较对照组[(99.9±3.6)%、(99.6±5.8)%]、丙泊酚+17β雌二醇组[(90.1±7.2)%、(89.2±7.1)%]均显著下降(P<0.01)。丙泊酚组神经元凋亡率[(43.4±4.6)%]较对照组[(3.1±0.2)%]、丙泊酚+17β雌二醇组[(22.3±3.2)%]均显著增加(P<0.01)。结论 17β雌二醇可能通过抑制神经元线粒体膜电位的下降对丙泊酚诱导的原代培养皮层神经元凋亡产生保护作用。 展开更多

关键词 丙泊酚 17Β雌二醇 神经凋亡 原代培养皮层神经元 线粒体膜电位

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新生大鼠视皮层神经元的原代培养及鉴定

6

作者 宋海岩 邓晓慧 +1 位作者 赵超 连辉 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第8期733-735,共3页

目的探讨新生大鼠视皮层神经元的原代培养方法,以获取数量多、纯度高的视皮层神经元。方法取新生1d内的SD大鼠视皮层,通过胰酶消化法获取单细胞悬液,倒置相差显微镜下计数后种植于6孔培养板内培养。培养24h后用终浓度10μmol·L-1... 目的探讨新生大鼠视皮层神经元的原代培养方法,以获取数量多、纯度高的视皮层神经元。方法取新生1d内的SD大鼠视皮层,通过胰酶消化法获取单细胞悬液,倒置相差显微镜下计数后种植于6孔培养板内培养。培养24h后用终浓度10μmol·L-1阿糖胞苷处理,抑制非神经元的生长,作用24h后半量换液,以后每隔1d半量换液1次。每天倒置相差显微镜下观察细胞的生长状况和形态变化,Nissl染色法进行视皮层神经元鉴定,免疫荧光显示神经元特异性烯醇化酶鉴定培养视皮层神经元的纯度。结果接种4h后,大部分细胞已贴壁,细胞立体感较强;接种后24h,大部分细胞长出短的突起,细胞形态发生变化,胞体呈多边形或三角形,细胞周围有或多或少的光晕;培养4d后,细胞突起伸长、增粗;培养6～8d后,细胞状态较佳,细胞胞体饱满,光晕明显,突起进一步伸长、增粗,且分支多,突起交织成网状,非神经元细胞减少,为实验的最佳时间;培养14d后,细胞开始退化。培养6d行焦油紫染后,倒置相差显微镜下观察,可见细胞内的尼氏体呈蓝紫色的颗粒或斑块。免疫荧光染色结果显示,原代培养的细胞中,大部分细胞为绿染细胞,形态良好,核大而清晰,神经元所占比例高。结论本研究获得视皮层神经元的方法简单经济,通过形态学观察、Nissl染色及免疫荧光染色可以对体外培养的视皮层神经元细胞进行准确鉴定。 展开更多

关键词 视皮层 神经元 原代培养 大鼠

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氯化锂抑制丙泊酚诱导原代培养神经元凋亡 被引量：1

7

作者 李建立 朱喜春 +1 位作者 崔红赏 刘锐 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第11期1608-1612,共5页

目的探讨氯化锂对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法体外原代培养7 d的大鼠皮层神经元,用MTT法检测不同浓度氯化锂(0.1、1、5、10μmol/L)单独作用皮层神经元12 h后神经元存活率的变化。神经元随机分为6组:溶剂对照组... 目的探讨氯化锂对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法体外原代培养7 d的大鼠皮层神经元,用MTT法检测不同浓度氯化锂(0.1、1、5、10μmol/L)单独作用皮层神经元12 h后神经元存活率的变化。神经元随机分为6组:溶剂对照组(给予等容积的20%脂肪乳),丙泊酚组(终浓度为500μmol/L),氯化锂+丙泊酚组(氯化锂终浓度分别为0.1、1、5、10μmol/L,丙泊酚终浓度为500μmol/L),药物处理12 h后,MTT法检测神经元存活率的变化,Hoechst33258核染色法和流式细胞仪检测神经元调亡,Western blot法测定神经元磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pG SK-3β)和裂解半胱天冬酶-3(cleaved-Caspase-3)蛋白水平。结果与溶剂对照组比较,不同浓度氯化锂单独作用神经元12 h后,神经元存活率未见显著变化。与溶剂对照组比较,丙泊酚组神经元存活率显著下降(P<0.01),神经元凋亡率显著增加(P<0.01),pG SK-3β蛋白水平显著下降(P<0.01),cleaved-Caspase-3蛋白水平显著增加(P<0.01)。与丙泊酚组比较,氯化锂可剂量依赖性增加神经元存活率(P<0.01),神经元凋亡率显著下降(P<0.01),pG SK-3β蛋白水平显著增加(P<0.01),cleaved-Caspase-3蛋白水平显著下降(P<0.01)。结论氯化锂可抑制丙泊酚诱导的原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与提高神经元pG SK-3β蛋白水平和降低cleaved-Caspase-3蛋白水平有关。 展开更多

关键词 丙泊酚 氯化锂 神经凋亡 原代培养皮层神经元pgsk-3β cleaved-Caspase-3

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新生大鼠皮层神经元分离和培养方法的优化 被引量：6

8

作者 赵艳萌 马秀娟 +2 位作者 张怡 靳晓飞 高维娟 《神经解剖学杂志》 CSCD 2021年第4期405-410,共6页

目的:优化新生大鼠皮层神经元提取、培养的方法,以获得高纯度并且生长状态良好的神经元,为神经系统的体外研究提供实验技术。方法:取新生24 h内的SD大鼠皮层组织,通过单次消化法、分步消化法两种不同的消化方法制备单细胞悬液,并以3种... 目的:优化新生大鼠皮层神经元提取、培养的方法,以获得高纯度并且生长状态良好的神经元,为神经系统的体外研究提供实验技术。方法:取新生24 h内的SD大鼠皮层组织,通过单次消化法、分步消化法两种不同的消化方法制备单细胞悬液,并以3种不同接种密度铺板,采用Neurobasal-A培养基+2%B27+0.5 mmol/L L-谷氨酰胺的体系进行培养。通过台盼蓝染色计数的方法计数两种消化方法得到的单细胞悬液中总细胞数和活细胞数,并计算细胞成活率。采用分步消化法制备单细胞悬液,用倒置显微镜观察不同密度接种后的神经元培养至7 d的生长状态,并观察以适宜密度接种的神经元培养1~7 d的生长状态。分别用神经元核抗原(NeuN)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)两种神经元标志物鉴定神经元纯度。结果:分步消化法得到的细胞数量及细胞成活率均明显高于单次消化法(P <0.01);以5×105细胞/孔的密度接种细胞得到的神经元生长状态良好,密度适宜,形成的突触网络丰富而均匀;神经元培养1~7 d,胞体逐渐增大,突触逐渐伸长,直到第7 d,神经元胞体立体饱满、折光性强,形成均匀密集的突触网络;经鉴定,培养的神经元纯度可达95%以上。结论:分步消化法提取神经元、接种密度为5×105细胞/孔的培养稳定、高效,得到的神经元纯度高、生长状态好,可作为神经系统疾病体外研究的良好细胞模型。 展开更多

关键词 皮层神经元 原代培养 纯度鉴定 新生大鼠

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银杏内酯对缺氧诱导的大鼠皮层神经元早期凋亡的影响 被引量：9

9

作者 袁颖 张沛云 +3 位作者 金淑仪 陈宏山 王晓冬 陈罡 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期465-468,共4页

目的 :观察银杏内酯 (ginkgolide ,Gin)对缺氧诱导的大鼠皮层神经元凋亡的保护作用。方法 :选用胎龄 14～ 16d的SD胎鼠的大脑皮层细胞进行原代培养 ,建立缺氧神经元损伤模型。实验分为药物实验组 (Gin组 )、空白对照组、阳性对照组 (MK ... 目的 :观察银杏内酯 (ginkgolide ,Gin)对缺氧诱导的大鼠皮层神经元凋亡的保护作用。方法 :选用胎龄 14～ 16d的SD胎鼠的大脑皮层细胞进行原代培养 ,建立缺氧神经元损伤模型。实验分为药物实验组 (Gin组 )、空白对照组、阳性对照组 (MK 80 1) ,每组均进行有糖和无糖培养两种处理。应用MTT法分析细胞存活率、AnnexinV PE双标流式细胞仪法定量分析细胞早期凋亡。结果 :MTT结果显示 ,Gin使皮层神经元存活率明显增加 ,且有糖的缺氧组皮层神经元存活率优于无糖组 ;流式细胞仪测定结果显示 ,预先加入Gin(终浓度 37 5 μg/ml)的一组神经元的凋亡峰明显低于空白组 ,而无糖处理组凋亡峰均高于有糖处理组。结论 :银杏内酯 (37 5 μg/ml)对缺氧损伤的皮层神经元具有保护作用 ,可拮抗缺氧条件下体外培养的皮层神经元的早期凋亡。 展开更多

关键词 原代培养 皮层神经元 缺氧复氧 银杏内酯 细胞凋亡

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神经酰胺诱导小鼠皮层神经元凋亡 被引量：3

10

作者 脱厚珍 王天佑 +1 位作者 薛启蓂 王德新 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 1999年第1期16-22,共7页

本实验以原代培养的小鼠大脑皮层神经元为模型，观察了天然神经酰胺在神经元凋亡中的作用。从测定ＬＤＨ漏出率、ＭＴＴ代谢率、ＤＮＡ凝胶电泳，Ｇｉｅｍｓａ染色以及电镜观察等各个方面，探讨了神经酰胺对神经元的作用模式。研究发现... 本实验以原代培养的小鼠大脑皮层神经元为模型，观察了天然神经酰胺在神经元凋亡中的作用。从测定ＬＤＨ漏出率、ＭＴＴ代谢率、ＤＮＡ凝胶电泳，Ｇｉｅｍｓａ染色以及电镜观察等各个方面，探讨了神经酰胺对神经元的作用模式。研究发现，神经酰胺在５００～１０００ｎＭ浓度范围内，作用１２ｈ以上，即可诱导原代培养的皮层神经元凋亡，而且此作用具有时间依赖性和剂量依赖性。表明神经酰胺不仅对ＨＬ－６０细胞有促凋亡的作用，对大脑皮层神经元同样具有促凋亡的作用。 展开更多

关键词 神经酰胺 皮层神经元 促凋亡 小鼠 诱导 大脑皮层 原代培养 凝胶电泳 代谢率 DNA

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17β雌二醇对丙泊酚诱导皮层神经元凋亡的影响 被引量：1

11

作者 李建立 郭洪霞 +2 位作者 梁巍 吴红海 侯艳宁 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第12期32-36,I0002,共6页

目的探讨17β雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法原代培养7d的大鼠皮层神经元,随机分为三组:溶剂对照组(给予等溶剂20%脂肪乳),丙泊酚组(丙泊酚终浓度为500μmol/L),17β雌二醇+丙泊酚组(17β雌二醇终浓度为0.... 目的探讨17β雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法原代培养7d的大鼠皮层神经元,随机分为三组:溶剂对照组(给予等溶剂20%脂肪乳),丙泊酚组(丙泊酚终浓度为500μmol/L),17β雌二醇+丙泊酚组(17β雌二醇终浓度为0.1μmol/L,丙泊酚终浓度为500μmol/L)。上述药物处理皮层神经元12 h后,用Hoechst 33258核染色法和TUNEL法检测皮层神经元调亡,Western-blot法测定神经元Bcl-2,Bax和cleaved caspase-3蛋白的水平。结果与溶剂对照组比较,丙泊酚组神经元凋亡率显著性增加(P<0.01),Bcl-2蛋白水平显著性下降(P<0.01),Bax蛋白水平显著性增加(P<0.01),Bcl-2/Bax显著性降低(P<0.01),cleaved caspase-3蛋白水平显著性增加(P<0.01)。与丙泊酚组比较,17β雌二醇+丙泊酚组神经元凋亡率显著性下降(P<0.01),Bcl-2蛋白水平显著性增加(P<0.01),Bax蛋白水平显著性下降(P<0.01),Bcl-2/Bax显著性增加(P<0.01),cleaved caspase-3蛋白水平显著性下降(P<0.01)。结论 17β雌二醇可通过影响Bc1-2和Bax蛋白水平抑制皮层神经元凋亡,产生保护作用。 展开更多

关键词 丙泊酚 17Β雌二醇 原代培养皮层神经元 凋亡

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缺氧复氧时体外培养的神经细胞一氧化氮合酶的动态表达及银杏叶提取物的调节作用 被引量：13

12

作者 季凤清 岳旭 +3 位作者 郭艳茹 孙海梅 郭崇洁 赵天德 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期315-318,T053,共5页

本文研究了缺氧复氧时原代培养的大鼠神经细胞 NOS的动态表达及银杏叶提取物的调节作用 ,藉以探讨 NO在缺血缺氧导致神经细胞损伤时的作用以及银杏叶提取物的保护机制。实验使用胎龄 15～ 17d大鼠的大脑皮层神经细胞进行原代分离培养 ,... 本文研究了缺氧复氧时原代培养的大鼠神经细胞 NOS的动态表达及银杏叶提取物的调节作用 ,藉以探讨 NO在缺血缺氧导致神经细胞损伤时的作用以及银杏叶提取物的保护机制。实验使用胎龄 15～ 17d大鼠的大脑皮层神经细胞进行原代分离培养 ,建立缺氧复氧神经元损伤模型。实验分为正常对照组、单纯缺氧组、缺氧复氧组和银杏叶提取物处理组。应用 NADPH-d组织化学方法观察神经细胞 NOS的动态表达 ,并用图象分析仪进行定量检测。结果 :缺氧复氧可以使神经细胞的 NOS呈双时相的升高 :在单纯缺氧 2、4、6、8h组及缺氧加复氧 18h组中 ,缺氧 2 h组及缺氧 8h复氧 18h组与对照组相比 NOS阳性细胞数量增多 ,染色加深 ,酶活性增强 ,经统计差异具有显著性 (P<0 .0 1)。其它组与对照组比较无明显差异。中药银杏叶提取物可以抑制上述两组的NOS活性增强。本文结果提示 :缺氧及缺氧复氧可以使神经细胞 NOS活性呈双时相增强 ,NO的升高可能是缺氧复氧导致神经细胞损伤的原因之一 ;银杏叶提取物对缺氧复氧导致的神经细胞损伤的保护作用可能是通过下调 展开更多

关键词 一氧化氮合酶 银杏叶提取物 缺氧复氧 原代培养 神经元 大鼠 大脑皮层 脑缺血缺氧损伤 脑保护

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NMDA受体激活引起的突触活动对Wnt非经典通路的影响 被引量：2

13

作者 李屹晨 万仙子 +3 位作者 杨湘玲 杨成 张薇 钟翎 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2011年第3期181-187,275,共8页

目的探讨NMDA受体激活引起的突触活动诱导Wnt非经典通路的活化。方法构建C57BL/6J胎鼠大脑皮层神经元原代培养体系,用NMDA处理神经元细胞,并结合Western blotting、双免疫荧光染色等技术,检测神经元细胞内Wnt非经典通路的相关蛋白的变... 目的探讨NMDA受体激活引起的突触活动诱导Wnt非经典通路的活化。方法构建C57BL/6J胎鼠大脑皮层神经元原代培养体系,用NMDA处理神经元细胞,并结合Western blotting、双免疫荧光染色等技术,检测神经元细胞内Wnt非经典通路的相关蛋白的变化。结果免疫荧光染色显示成功建立了C57BL/6J胎鼠大脑皮层神经元体外培养体系,原代神经元细胞在体外培养10d生长良好,且纯度达90%;体外培养的神经元细胞内存在Wnt5a神经递质,经NMDA的刺激,发现Wnt非经典通路的两个标志性蛋白CaMKII和JNK的磷酸化水平显著增加,且Wnt非经典通路的一种受体Frizzled-5的蛋白表达水平也显著增加。进一步的研究显示,用NMDA竞争性抑制剂DAP5能够阻断NMDA引起的CaMKII和JNK蛋白的磷酸化水平的提高。结论 NMDA受体的激活会诱导Wnt非经典通路的活化。 展开更多

关键词 小鼠 皮层神经元 原代培养 NMDA受体 Wnt非经典通路

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