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苦味受体T2R38激活对香烟烟雾暴露诱导人气道上皮NuLi-1细胞铁死亡的影响及其机制
1
作者 李亮 周向东 +4 位作者 王杰 徐超群 朱梦霞 余善君 李琪 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期333-340,共8页
目的:探讨苦味受体2型味觉受体(T2R)38激活对香烟烟雾暴露诱导人气道上皮NuLi-1细胞铁死亡的影响,并阐明其可能的机制。方法:人气道上皮NuLi-1细胞分为对照组(不进行任何处理)、香烟提取物(CSE)组(5%CSE处理细胞24 h)和CSE+T2R38特异性... 目的:探讨苦味受体2型味觉受体(T2R)38激活对香烟烟雾暴露诱导人气道上皮NuLi-1细胞铁死亡的影响,并阐明其可能的机制。方法:人气道上皮NuLi-1细胞分为对照组(不进行任何处理)、香烟提取物(CSE)组(5%CSE处理细胞24 h)和CSE+T2R38特异性激动剂苯基硫脲(PTC)组(CSE+PTC组)(5%CSE和1 mmo·l L-1 PTC处理细胞24 h)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组NuLi-1细胞中T2R38的mRNA及蛋白表达水平,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测各组细胞活性,试剂盒检测各组细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型NOS(eNOS)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,DAX-J2红色荧光探针法检测各组细胞中一氧化氮(NO)水平,荧光探针试剂盒检测各组细胞中ROS水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞中丙二醛(MDA)、Fe2+和还原型谷胱甘肽(GSH)水平,Western blotting法检测各组细胞中核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,CSE组NuLi-1细胞中T2R38 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,CSE组NuLi-1细胞活性降低(P<0.05),细胞中iNOS和SOD活性升高(P<0.05),NO和ROS水平升高(P<0.05),MDA和Fe2+水平升高(P<0.05),细胞中GSH水平降低(P<0.05),Nrf2和GPx4蛋白表达水平降低(P<0.05)。与CSE组比较,CSE+PTC组NuLi-1细胞活性升高(P<0.05),细胞中SOD活性升高(P<0.05),GSH水平升高(P<0.05),细胞中iNOS活性降低(P<0.05),NO和ROS水平降低(P<0.05),MDA和Fe2+水平降低(P<0.05),细胞中Nrf2和GPx4蛋白表达水平升高(P<0.05)。对照组、CSE组和CSE+PTC组细胞中eNOS活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:激活苦味受体T2R38可抑制香烟烟雾暴露诱导人气道上皮NuLi-1细胞铁死亡,其主要机制可能与降低细胞中iNOS活性有关。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 人气道上皮细胞 苦味受体 2型味觉受体38 诱导型一氧化氮合酶 铁死亡
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清肺方上调PPARγ/NF-κB通路抑制人气道上皮细胞炎症氧化应激反应的机制研究
2
作者 折哲 孙永宁 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2025年第8期2119-2131,共13页
目的 探讨清肺方(Qingfei Fang,QF)保护人气道上皮细胞(Human bronchial epithelial cell line16,16HBE)损伤的机制研究。方法 网药学分析联合分子对接验证QF与细胞炎症、氧化应激反应的潜在作用靶点;CCK8法评估QF对脂多糖(Lipopolysacc... 目的 探讨清肺方(Qingfei Fang,QF)保护人气道上皮细胞(Human bronchial epithelial cell line16,16HBE)损伤的机制研究。方法 网药学分析联合分子对接验证QF与细胞炎症、氧化应激反应的潜在作用靶点;CCK8法评估QF对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导16HBE细胞活力的影响;将16HBE分为空白组、模型组、清肺方组和shPPARγ组,即空白组不做特殊处理,模型组加入200 ng·mL^(-1)-LPS干预24 h,清肺方组加入200 ng·mL^(-1)-LPS和40 ng·mL^(-1)-QF药液干预24 h,shPPARγ组在经慢病毒转染shPPARγ的16HBE-M4组细胞株中加入40 ng·mL^(-1)-QF药液干预4 h再加入200 ng·mL^(-1)-LPS干预24 h;ELISA法检测细胞上清白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白介素-10(Interleukin-10,IL^(-1)0)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD);PCR法分析细胞上清NF-κB p50、p65 mRNA表达;WB法评估细胞胞质NF-κB p65蛋白表达。结果 QF活性成分桑辛素D(Moracin D)、黄连碱(coptisine)可与靶点PPARγ稳定结合。以浓度为40 ng·mL^(-1)-QF开展后续实验。与空白组比较,模型组细胞活力显著下降,其IL-6、TNF-α、MDA水平上升,而IL^(-1)0、SOD水平下降,其NF-κB p50/p65 mRNA含量显著增加(P<0.05),即成功模拟了细胞炎症表型和氧化应激状态;与模型组相比,QF降低IL-6、TNF-α、NF-κB水平并显著提升IL^(-1)0、SOD水平(P<0.05);经慢病毒转染shPPARγ后,QF在降低IL-6、TNF-α、NF-κB p65及提升IL^(-1)0、SOD水平方面受到显著抑制(P<0.05)。结论 QF可上调PPARγ抑制NF-κB p65通路炎症反应和氧化应激以保护16HBE细胞损伤。 展开更多
关键词 清肺方 PPARγ/NF-κB通路 人气道上皮细胞 炎症反应 氧化应激
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核转录因子κB在TNF-α诱导人气道上皮细胞hBD-2表达中的作用 被引量：2
3
作者 廖伟 钱桂生 +2 位作者 雷撼 黄桂君 张方 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期491-493,共3页
目的观察肿瘤坏死因子-α(TNFα-)诱导人气道上皮细胞人β防御素-2(hBD-2)的表达及核转录因子κB(NFκ-B)在hBD-2表达中的作用。方法用TNFα-和或NFκ-B抑制剂PDTC处理体外培养人气道原代上皮细胞,RT-PCR法检测hBD-2 mRNA的表达,W ester... 目的观察肿瘤坏死因子-α(TNFα-)诱导人气道上皮细胞人β防御素-2(hBD-2)的表达及核转录因子κB(NFκ-B)在hBD-2表达中的作用。方法用TNFα-和或NFκ-B抑制剂PDTC处理体外培养人气道原代上皮细胞,RT-PCR法检测hBD-2 mRNA的表达,W estern b lot检测细胞质IκBα-蛋白活性变化,凝胶迁移试验(EMSA)检测不同时相NFκ-B活性的变化。结果TNFα-刺激0.5 h后可见人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达,并呈时间依赖性;PDTC可抑制hBD-2mRNA表达;NFκ-B在TNFα-刺激1 h后明显活化,抗体超迁移率实验结果显示p65-p50异型二聚体NFκ-B参与了NFκ-B的活化。结论一定剂量的TNFα-可诱导人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达,NFκ-B在TNFα-诱导气道上皮细胞hBD-2mRNA起重要的调控作用。 展开更多
关键词 人气道上皮细胞 人Β防御素-2 肿瘤坏死因子-Α 核转录因子ΚB
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分枝杆菌噬菌体Chy3对人气道上皮细胞16HBE生长及功能的影响
4
作者 熊欣 甘易玲 +3 位作者 徐莉 江莉莎 张莉 郭述良 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1202-1206,共5页
目的:探讨不同滴度的分枝杆菌噬菌体Chy3对人气道上皮细胞16HBE生长及功能的影响。方法:不同滴度噬菌体Chy3作用于人气道上皮细胞后,采用倒置显微镜观察细胞生长形态变化,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测... 目的:探讨不同滴度的分枝杆菌噬菌体Chy3对人气道上皮细胞16HBE生长及功能的影响。方法:不同滴度噬菌体Chy3作用于人气道上皮细胞后,采用倒置显微镜观察细胞生长形态变化,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测细胞上清液中细胞因子分泌水平,RT-PCR和Western blot分别检测上皮细胞黏蛋白MUC5AC mRNA和蛋白表达水平。结果:不同滴度噬菌体Chy3作用于人气道上皮细胞一段时候后,细胞的生长形态、存活率、凋亡率、细胞因子分泌水平以及黏蛋白MUC5AC表达与正常组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:分枝杆菌噬菌体Chy3无论高低滴度对体外培养人气道上皮细胞生长和功能均无明显影响,有较好的安全性。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体 人气道上皮细胞 安全性 白细胞介素-6/白细胞介素-8 MUC5AC
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白三烯诱导人呼吸道上皮细胞氧化应激及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的作用研究 被引量：5
5
作者 牛磊 汪隽瑛 蒋瑾瑾 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期66-69,共4页
目的研究白三烯诱导人呼吸道上皮细胞内谷胱甘肽氧化还原状态变化及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的作用。方法将人气道上皮细胞分为对照组和暴露组。暴露组的人气道上皮细胞暴露于白三烯2、4、6、12 h。检测对照组及暴露组在2、4、6... 目的研究白三烯诱导人呼吸道上皮细胞内谷胱甘肽氧化还原状态变化及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的作用。方法将人气道上皮细胞分为对照组和暴露组。暴露组的人气道上皮细胞暴露于白三烯2、4、6、12 h。检测对照组及暴露组在2、4、6、12 h相应指标。测定气道上皮细胞内谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量;双酶法测定γ-GCS活性;RT-PCR检测气道上皮细胞中γ-GCS-mRNA表达;Western-blot检测气道上皮细胞核和细胞质中γ-GCS蛋白表达;细胞免疫荧光法检测气道上皮细胞γ-GCS蛋白表达。结果暴露组细胞2、4、6、12 h的GSH含量、GSH/GSSG比值先减少后逐渐增加,4 h最低,6 h达最高,12 h恢复正常;而GSSG含量则呈现相反趋势,与对照组之间差异有统计学意义。暴露组细胞2、4、6 h,γ-GCS活性增强,与对照组比较差异有统计学意义。细胞免疫荧光法检测气道上皮细胞γ-GCS蛋白阳性信号主要分布在胞质中,暴露组呈强阳性表达,而对照组表达较弱,暴露组2、4、6 h时与对照组比较,差异有统计学意义。Western-blot检测结果相似。RT-PCR检测气道上皮细胞中γ-GCS-mRNA表达,暴露组2、4、6 h时较对照组增加,差异有统计学意义。结论白三烯诱导氧化应激影响呼吸道上皮细胞谷胱甘肽氧化还原状态,而呼吸道上皮细胞通过提高γ-GCS活性对抗氧化应激,保持氧化还原稳定的状态。 展开更多
关键词 支气管哮喘 白三烯 氧化应激 Γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 人气道上皮细胞
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25羟维生素D_3对支气管上皮细胞维生素D受体表达及分布的影响 被引量：1
6
作者 董航明 赵海金 +3 位作者 刘来昱 梁振宇 吕燕华 蔡绍曦 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期28-31,共4页
目的探讨25羟维生素D3对人正常气道上皮维生素D受体表达及分布的影响。方法选取正常人支气管上皮细胞系16HBE为研究对象,MTT法分别检测不同浓度25羟维生素D3对细胞活力的影响;实验组分为对照组和不同浓度25羟维生素D3处理组。各处理因... 目的探讨25羟维生素D3对人正常气道上皮维生素D受体表达及分布的影响。方法选取正常人支气管上皮细胞系16HBE为研究对象,MTT法分别检测不同浓度25羟维生素D3对细胞活力的影响;实验组分为对照组和不同浓度25羟维生素D3处理组。各处理因素作用细胞时间为24 h。用实时荧光定量PCR、Western blot、免疫荧光法观测各处理组维生素D受体(VDR)mRNA及蛋白表达、分布的情况。结果与对照组相比,各个不同处理浓度的25羟维生素D3对VDR的表达量及分布均无显著增加(P>0.05)。结论 25羟维生素D3对支气管上皮细胞的影响可能并不依赖于VDR的表达及转位。 展开更多
关键词 人气道上皮细胞 25羟维生素D3 维生素D受体
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抑癌基因WWOX在肺腺癌细胞株A549中表达的研究 被引量：10
7
作者 周玉龙 徐永健 张珍祥 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2005年第3期234-237,共4页
目的:检测WWOX(WW domain containing oxidoreductase)基因在肺腺癌细胞株A549中的变化及其意义.方法:用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术、聚合酶链反应结合二核苷酸重复序列多态性方法、免疫印迹分析(Western blot)方法分别对WWOX基因... 目的:检测WWOX(WW domain containing oxidoreductase)基因在肺腺癌细胞株A549中的变化及其意义.方法:用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术、聚合酶链反应结合二核苷酸重复序列多态性方法、免疫印迹分析(Western blot)方法分别对WWOX基因6～8外显子在A549细胞转录本丢失、杂和性丢失(LOH)和WWOX蛋白表达异常进行检测.结果:A549细胞样本为WWOX基因6～8外显子转录本的丢失,而在对照的原代培养人气道上皮细胞样本(简称原代培养)未发现WWOX基因的6～8外显子的丢失(P<0.05);A549细胞样本中存在D16S3029及D16S3096两个微卫星位点的LOH 而对照的原代培养中无WWOX基因的杂合性丢失(P<0.05);Western blot结果显示WWOX基因在A549细胞的蛋白表达(A值为817464.90±64916.64)明显低于在原代培养中的蛋白表达(A值为2150142.00±64916.64)(P<0.01).结论:WWOX基因可能在肺腺癌的发生发展中起重要作用;转录本丢失、LOH及蛋白低表达均可能是WWOX基因在肺腺癌中的失活方式. 展开更多
关键词 WWOX基因 杂合性丢失 逆转录-聚合酶链反应 免疫印迹分析 培养的肿瘤细胞 原代培养人气道上皮细胞
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基于NF-κB信号通路探讨芍药苷对黏蛋白5AC分泌的调控作用 被引量：6
8
作者 张艳 桑亚洲 +4 位作者 彭梦薇 陈玉龙 刘燕 张文娴 吴耀松(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1653-1659,共7页
目的:基于NF-κB信号通路探讨芍药苷调控气道黏蛋白5AC(MUC5AC)合成与分泌的影响及作用机制。方法:体内通过烟熏和慢性感染相结合的方法复制慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期大鼠模型,体外通过IL-1β诱导人气道上皮H292细胞建立炎症模... 目的:基于NF-κB信号通路探讨芍药苷调控气道黏蛋白5AC(MUC5AC)合成与分泌的影响及作用机制。方法:体内通过烟熏和慢性感染相结合的方法复制慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期大鼠模型,体外通过IL-1β诱导人气道上皮H292细胞建立炎症模型,设置空白组、模型对照组、NF-κB通路抑制剂组(PDTC组)、芍药苷组。采用动物肺功能测量仪检测大鼠肺功能;ELISA检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)、血清以及细胞上清中MUC5AC以及炎症因子IL-8、TNF-α表达水平;免疫印迹试验检测细胞P65、核因子κB抑制蛋白(IκB)蛋白表达水平;反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组细胞MUC5AC mRNA、囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)mRNA表达水平。结果:与空白组比较,模型对照组大鼠呼吸频率(f)、呼气峰流值(PEF)、潮气量(VT)、呼吸阻力(Rin)均显示有明显差异有统计学意义(P<0.05);与模型对照组比较,PDTC组、芍药苷组大鼠PEF、VT、Rin有明显改善(P<0.05),PDTC组呼吸频率(f)明显降低(P<0.05);与空白组比较,模型对照组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)、血清以及细胞上清中MUC5AC、IL-8、TNF-α含量均明显增加(P<0.05),体外模型组细胞中P65蛋白和MUC5AC mRNA表达升高(P<0.05),IκB蛋白降低(P<0.05);与模型组比较,PDTC组、芍药苷组大鼠中BALF、血清及细胞上清中MUC5AC、IL-8、TNF-α含量均明显降低(P<0.05),且PDTC组、芍药苷高低剂量组的细胞中IκB蛋白和MUC5AC mRNA表达升高(P<0.05),P65蛋白和CFTR mRNA表达降低(P<0.05)。结论:芍药苷可改善COPD急性加重期大鼠模型的肺功能,减轻气道炎症反应,其机制与抑制NF-κB信号通路活性,降低气道细胞炎症因子分泌量以及调控MUC5AC mRNA、CTFR mRNA和相关蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 芍药苷 MUC5AC 炎症因子 人气道上皮H292细胞 NF-ΚB
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反义硫代修饰寡核苷酸体外抗呼吸道合胞病毒感染的研究
9
作者 俞海国 廉国利 +2 位作者 杨锡强 赵晓东 赵长安 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第3期264-266,共3页
目的 :在感染呼吸道合胞病毒 (RSV)的 9HTE细胞中观察与RSVNS1基因和M2基因互补的反义硫代寡核苷酸的抗病毒活性。方法 :直接观察RSV的致细胞病变作用 ,用MTT方法测定细胞存活率。结果 :1.RSV感染复数 (moi)在 0 .1以上时 ,培养 5天后RS... 目的 :在感染呼吸道合胞病毒 (RSV)的 9HTE细胞中观察与RSVNS1基因和M2基因互补的反义硫代寡核苷酸的抗病毒活性。方法 :直接观察RSV的致细胞病变作用 ,用MTT方法测定细胞存活率。结果 :1.RSV感染复数 (moi)在 0 .1以上时 ,培养 5天后RSV感染的 9HTE细胞全部死亡。 2 .我们设计的反义核酸能够提高感染细胞的存活率 ,且呈量效依赖关系。结论 :反义硫代寡核苷酸具有较明显的抗病毒活性 ,为进一步研究新型抗RSV药物奠定了基础。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 反义核酸 人气道上皮细胞
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