烟草粉螟卵黄原蛋白基因鉴定及其对X射线胁迫的响应

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作者 赵钧 徐鹿 +3 位作者 苗圃 李成军 吴孔明 李淑君 《中国烟草学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期132-138,共7页

【背景和目的】卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)是昆虫卵黄发生的关键物质,为探索X射线辐照胁迫对烟草粉螟Vg基因转录表达和雌成虫繁殖力的影响。【方法】采用RT-PCR技术克隆烟草粉螟Vg基因的全长并进行生物信息学分析,利用qPCR技术检测在... 【背景和目的】卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)是昆虫卵黄发生的关键物质,为探索X射线辐照胁迫对烟草粉螟Vg基因转录表达和雌成虫繁殖力的影响。【方法】采用RT-PCR技术克隆烟草粉螟Vg基因的全长并进行生物信息学分析,利用qPCR技术检测在烟草粉螟雌成虫不同组织(足、头、中肠、脂肪体、卵巢和表皮)的表达量和雌成虫在不同X射线辐照剂量(50,100和150 Gy)胁迫下该基因的相对表达量以及对其蛹羽化率、成虫寿命、产卵量、卵孵化率的影响。【结果】(1)克隆获得烟草粉螟卵黄原蛋白基因,命名为EeVg(GenBank登录号:OM804251),开放阅读框(ORF)长度为5337bp,编码1778个氨基酸。(2)EeVg基因在雌成虫的脂肪体中相对表达量最高,为头部表达量的17.96倍。(3)100和150 Gy的X射线辐照雌蛹极显著地降低EeVg在烟草粉螟羽化后的表达量,分别为对照的0.34倍和0.09倍。(4)剂量为50、100和150 Gy的X射线辐照降低烟草粉螟雌蛹羽化率和成虫寿命(87.78%~75.56%和6.40~4.17d),显著降低雌蛾的产卵量和卵孵化率(55.27~20.37粒和76.67%~72.22%)。【结论】高剂量的X射线辐照胁迫可使EeVg基因表达量显著下调,显著降低烟草粉螟繁殖力,为深入研究X射线影响烟草粉螟繁殖力的分子机制奠定了基础。 展开更多

关键词 烟草粉螟 卵黄原蛋白基因 X射线辐照 表达量 繁殖力

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大草蛉雄虫卵黄原蛋白基因的鉴定和表达特征 被引量：4

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作者 冯彦姣 刘小平 +6 位作者 张婷婷 陈红印 王孟卿 刘晨曦 李玉艳 张礼生 毛建军 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2021年第1期77-85,共9页

为探索卵黄原蛋白基因对大草蛉雄虫生殖生理等活动的调节作用,利用PCR技术克隆了大草蛉卵黄原蛋白基因部分cDNA序列,采用生物信息学方法分析其序列特征,通过实时荧光定量PCR技术检测了该基因在不同发育阶段和不同组织的表达特征。结果表... 为探索卵黄原蛋白基因对大草蛉雄虫生殖生理等活动的调节作用,利用PCR技术克隆了大草蛉卵黄原蛋白基因部分cDNA序列,采用生物信息学方法分析其序列特征,通过实时荧光定量PCR技术检测了该基因在不同发育阶段和不同组织的表达特征。结果表明,克隆到的卵黄原蛋白基因的cDNA长度为1501 bp,编码501个氨基酸,其预测的蛋白质分子量为206 kD,等电点8.11,具有vitellogenin保守的半胱氨基酸残基、GL/ICG、RXXR等结构域。序列分析表明大草蛉vitellogenin与其他昆虫同源蛋白的氨基酸序列一致性不太高,在29.46%~36.43%,与骚扰锥蝽在系统进化上关系最近。荧光定量PCR结果显示vitellogenin在不同日龄的成虫中表达量没有显著差异;在雄虫的腹部表达量较高,均高于头部和胸部,且头部和胸部的表达量之间没有显著差异,表达量均较低。结果表明vitellogenin基因在大草蛉中的表达具有组织的特异性,推测其可能参与大草蛉雄虫生殖调控。 展开更多

关键词 大草蛉 卵黄原蛋白基因 克隆 表达

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中华鳖卵黄蛋白原基因克隆与表达及外源E2的影响

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作者 姚苗 韦智梅 +6 位作者 BIZOZA 周针宇 李虹 王波 熊银林 刁晓明 翟旭亮 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2024年第4期102-112,共11页

为探究中华鳖(Pelodiscus sinensis)卵黄蛋白原Vtg基因的生物学信息与表达及其作为生理与毒理研究标志物的可行性,本实验克隆获得VtgAB1、VtgAB2、VtgAB3(GenBank登录号OK287927、OK287929、OK287928)基因序列,其cDNA长分别为5055、5537... 为探究中华鳖(Pelodiscus sinensis)卵黄蛋白原Vtg基因的生物学信息与表达及其作为生理与毒理研究标志物的可行性,本实验克隆获得VtgAB1、VtgAB2、VtgAB3(GenBank登录号OK287927、OK287929、OK287928)基因序列,其cDNA长分别为5055、5537、5306 bp,分别编码了1684、1760、1725个氨基酸。三种亚型Vtg蛋白均由脂蛋白N-末端(Vitellogenin_N)、1943DUF、1944DUF、PV、D型血管血友病因子(VWD)5个保守结构域构成,为完整型Vtg。同源性分析发现皆与龟鳖目具有更近的亲缘关系,同时在3种亚型中VtgAB2与VtgAB3更相似。荧光定量PCR显示,3种亚型Vtg只在雌性肝脏中强烈表达。在60日龄、2龄、4龄雌性个体肝脏中,Vtg表达量随年龄呈上升趋势,VtgAB1、VtgAB2为主要表达亚型。原位杂交结果显示,3种亚型Vtg在卵原细胞内未发现杂交信号;在生长期卵母细胞胞质和滤泡细胞中发现杂交信号;成熟期卵母细胞胞质中未发现杂交信号,在滤泡细胞和周围的网状组织中发现杂交信号。信号在初级卵母细胞的细胞质中分布较为均匀且表达最强,随着卵母细胞的发育信号聚集在核周区且信号逐渐减弱。以雄性中华鳖为对象,注射雌激素E2,3种亚型Vtg表达量表现出明显的时间和剂量相关性。研究结果表明,在中华鳖卵黄积累过程中Vtg发挥重要作用,首次证实其Vtg存在内源性合成,并发现其可以作为雌激素暴露的生物标志物。 展开更多

关键词 中华鳖(Pelodiscus sinensis) 卵黄蛋白原基因 克隆与表达 外源E2

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家蚕卵黄原蛋白(BmVg)基因启动子的克隆与活性鉴定

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作者 杨从文 沈关望 +6 位作者 张海燕 彭芷昕 陈恩祥 邢润苗 刘红玲 韩超珊 林英 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期382-388,共7页

卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)在家蚕蛹期脂肪体高量表达,研究家蚕卵黄原蛋白基因(BmVg)的转录调控机制及启动子活性,将有助于利用家蚕蛹生物反应器高效表达外源蛋白。设计特异引物,以家蚕蛹基因组DNA为模板PCR扩增得到BmVg长约1.5 kb的... 卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)在家蚕蛹期脂肪体高量表达,研究家蚕卵黄原蛋白基因(BmVg)的转录调控机制及启动子活性,将有助于利用家蚕蛹生物反应器高效表达外源蛋白。设计特异引物,以家蚕蛹基因组DNA为模板PCR扩增得到BmVg长约1.5 kb的启动子片段。构建由不同长度截短BmVg启动子片段驱动荧光素酶报告基因表达的细胞转染载体pGL3-Vg Promoter,分析转染家蚕胚胎培养细胞BmE-SWU1中的BmVg启动子片段活性,结果显示最低截短至BmVg基因翻译起始位点上游90 bp的启动子片段具有转录活性。进一步用截短法分析不同长度启动子的活性,当启动子-752^-952 bp、-42^-152 bp区域被截掉后,启动子的转录活性明显降低,暗示这2个区域内可能存在与启动子启动效率相关的重要调控元件。 展开更多

关键词 卵黄原蛋白基因 启动子 克隆 活性区域 家蚕蛹

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96孔板-PCR排除法筛选猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因 被引量：1

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作者 魏冬霞 邓艳 +3 位作者 吴绍强 林瑞庆 宋慧群 朱兴全 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期731-733,共3页

为了从猪蛔虫雌虫cDNA文库中筛选出猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因,本研究根据猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因的EST序列为模板设计引物,采用96孔板-PCR排除法对猪蛔虫雌虫cDNA文库进行筛选,并筛选出阳性克隆F993-G10-A10。测序结果表明,该基因序列... 为了从猪蛔虫雌虫cDNA文库中筛选出猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因,本研究根据猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因的EST序列为模板设计引物,采用96孔板-PCR排除法对猪蛔虫雌虫cDNA文库进行筛选,并筛选出阳性克隆F993-G10-A10。测序结果表明,该基因序列长621bp,有完整的3'端。经BLAST分析,其推导的氨基酸序列与秀丽隐杆线虫(C.elegans)的卵黄蛋白原基因(Vit1、Vit2、Vit3、Vit4和Vit5)的氨基酸序列的一致性分别为35%、35%、34%、34%和35%,核苷酸序列相似性分别为55%、57%、54%、54%和53%。该阳性克隆的获得为该基因的深入研究奠定了基础。同时也证明了96孔-PCR排除法是一种高效、简便、低成本的筛选文库方法。 展开更多

关键词 旋猪蛔虫 卵黄蛋白原基因 96孔板-PCR排除法 文库筛选

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大劣按蚊卵黄蛋白原基因cDNA全长序列扩增及功能域蛋白的表达与纯化研究 被引量：1

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作者 于莎莎 胡辉 +4 位作者 秦杰 王静 刘婷 刘婷婷 王英 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1140-1145,共6页

目的对大劣按蚊卵黄蛋白原(Anopheles dirus vitellogenin, AdVg)基因cDNA的全长序列进行扩增和分析,并对其功能域蛋白进行表达与纯化。方法基于前期克隆的AdVg基因cDNA片段,利用RACE PCR技术,扩增AdVg基因的5′末端及3′末端序列。用Ve... 目的对大劣按蚊卵黄蛋白原(Anopheles dirus vitellogenin, AdVg)基因cDNA的全长序列进行扩增和分析,并对其功能域蛋白进行表达与纯化。方法基于前期克隆的AdVg基因cDNA片段,利用RACE PCR技术,扩增AdVg基因的5′末端及3′末端序列。用Vector NTI软件将测序得到的AdVg cDNA片段、5′末端序列、3′末端序列进行校正,拼接得到完整的AdVg cDNA全长序列。对AdVg全长序列进行功能域预测。利用pet28a(+)构建重组质粒进行AdVg功能域蛋白的表达与纯化。结果成功获得AdVg基因全长cDNA序列,包括117 bp的5′UTR序列、192 bp的3′UTR序列和6 186 bp的ORF序列。AdVg蛋白主要包含Vit N、DUF1943及vWD 3个结构域。通过构建重组质粒,成功表达和纯化了AdVg Vit N功能域蛋白。结论成功克隆了大劣按蚊卵黄蛋白原基因的全长序列,并获得了重组蛋白。 展开更多

关键词 大劣按蚊 卵黄蛋白原基因 RACE扩增 蛋白表达与纯化

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广聚萤叶甲Vg基因的鉴定及表达分析

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作者 周永平 黄玉锋 +4 位作者 张燕 马超 陈红松 桂富荣 周忠实 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期278-286,共9页

卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)作为雌性多功能生殖蛋白,为卵黄发生提供所需的储备能源。为明确Vg基因在广聚萤叶甲Ophraella communa生殖过程中的潜在作用,本研究通过RT-PCR技术克隆得到广聚萤叶甲的3个Vg基因,其OcVg1,OcVg2和OcVg3开放... 卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)作为雌性多功能生殖蛋白,为卵黄发生提供所需的储备能源。为明确Vg基因在广聚萤叶甲Ophraella communa生殖过程中的潜在作用,本研究通过RT-PCR技术克隆得到广聚萤叶甲的3个Vg基因,其OcVg1,OcVg2和OcVg3开放阅读框(ORF)分别为5310、5322 bp和5298 bp,对应编码1768、1772和1764个氨基酸。其OcVgs蛋白具有LLTP超家族的保守结构域:LPD_N、DUF1943和VWD结构域;多位于N-端的多聚丝氨酸区(polyserine domains),保守的GL/ICG、R/KXXR/K、DGXR基序和C-端半胱氨酸残基等。构建系统进化树发现,OcVgs与鞘翅目昆虫聚为一支。时空表达分析发现,OcVgs基因在不同组织及发育阶段的表达动态相似,在脂肪体中特异性高表达(P<0.05);在成虫羽化后的性成熟阶段的表达量最高,幼虫期的表达水平可以忽略不计(P<0.05)。研究结果为深入理解广聚萤叶甲生殖作用的分子机制奠定基础。 展开更多

关键词 广聚萤叶甲 卵黄原蛋白基因 克隆 序列分析 表达水平

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人工饲养条件下意大利蜜蜂幼虫饲粮的适宜粗蛋白质水平 被引量：3

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作者 张怡丁 张卫星 +1 位作者 胥保华 刘锋 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期2722-2729,共8页

本试验以酶水解酪蛋白为外源粗蛋白质,探究人工饲养条件下意大利蜜蜂幼虫饲粮的适宜粗蛋白质水平。移取1日龄幼虫960只,平均分为5组：对照组饲喂幼虫基础饲粮,粗蛋白质水平为8%,试验组在其基础上分别添加不同剂量的酶水解酪蛋白,使各组... 本试验以酶水解酪蛋白为外源粗蛋白质,探究人工饲养条件下意大利蜜蜂幼虫饲粮的适宜粗蛋白质水平。移取1日龄幼虫960只,平均分为5组：对照组饲喂幼虫基础饲粮,粗蛋白质水平为8%,试验组在其基础上分别添加不同剂量的酶水解酪蛋白,使各组粗蛋白质水平分别为9%、10%、11%和12%。采用人工饲养蜜蜂幼虫技术饲养幼虫直至羽化出房。结果表明：1）幼虫饲粮粗蛋白质水平9%、10%组的化蛹率和羽化率与对照组差异不显著（P〉0.05）,但显著高于其他试验组（P〈0.05）;粗蛋白质水平12%组只能少数化蛹,不能成功羽化。2）与对照组相比,粗蛋白质水平为9%～11%时,幼虫和蛹的体重显著升高（P〈0.05）;粗蛋白质水平对新出房工蜂的体重影响不显著（P〉0.05）。3）粗蛋白质水平显著影响蜂体各发育阶段的抗氧化能力（P〈0.05）,且对蛹和新出房工蜂而言,均表现粗蛋白质水平为8%时超氧化物歧化酶活性最强,9%时总抗氧化能力最大。4）与对照组相比,粗蛋白质水平为9%～10%时,幼虫和蛹的卵黄原蛋白基因相对表达量显著升高（P〈0.05）,但对新出房工蜂影响不显著（P〉0.05）。由此推断,人工饲养条件下意大利蜜蜂幼虫饲粮的适宜粗蛋白质水平为8%～10%。 展开更多

关键词 蜜蜂幼虫 粗蛋白质水平 人工饲养 抗氧化活性 卵黄原蛋白基因表达

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利用食蚊鱼目标基因转录水平评价东莞寒溪河雌/雄激素物质污染现状 被引量：7

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作者 谢勇平 方展强 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期691-697,共7页

应用食蚊鱼(Gambusia affinis)的卵黄蛋白原(VTGα)基因和雌/雄激素受体(ERα/ARα)基因转录水平为指标,评价广东东莞寒溪河受雌/雄激素物质污染的现状。结果显示,与对照点从化流溪河(LX)相比,寒溪河松山湖(SM)、杨屋村(YW)、横沥镇(HL... 应用食蚊鱼(Gambusia affinis)的卵黄蛋白原(VTGα)基因和雌/雄激素受体(ERα/ARα)基因转录水平为指标,评价广东东莞寒溪河受雌/雄激素物质污染的现状。结果显示,与对照点从化流溪河(LX)相比,寒溪河松山湖(SM)、杨屋村(YW)、横沥镇(HL)、樟村污水处理厂上游(ZU)和樟村污水处理厂下游(ZC)各采样点雄性成年食蚊鱼肝脏中的VTGα转录水平都具有显著或极显著水平的升高(P<0.05和P<0.001),分别为7.67、169.43、148.69、152.01和98.12倍;而较之对照点,雄鱼臀鳍的雌激素受体ERα转录水平仅HL位点有显著性升高(P<0.05),其余位点则不明显(P>0.05)。此外,寒溪河SM、YW、HL、ZU和ZC各采样点雌鱼臀鳍雄激素受体ARα转录水平分别是对照点从化流溪河(LX)的1.21、0.82、0.34、0.41和0.89倍,但是只有HL和ZU点有显著性减小(P<0.05),其余各点的变化差异不显著(P>0.05)。研究结果显示,生活在东莞寒溪河中的食蚊鱼受雌/雄激素物质干扰明显,普遍出现显著的雌激素效应,表明寒溪河水体受雌激素物质污染更严重。此外证明,鱼类肝脏VTGα基因相对于臀鳍ERα/ARα基因转录水平更适合作为监测水体环境雌/雄激素物质的生物标志物。 展开更多

关键词 卵黄蛋白原基因 雌 雄激素受体基因 mRNA转录水平 环境雌 雄激素物质 食蚊鱼 寒溪河

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红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)Vtg基因实时荧光定量PCR分析的引物设计与评估 被引量：2

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作者 藏林 封岩 +2 位作者 门磊 仇雪梅 王秀利 《河北渔业》 2019年第3期1-6,共6页

为应用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vtg)基因的组织表达谱,利用Primer5.0软件设计了扩增红鳍东方鲀Vtg基因片段的引物并进行了qPCR评估。结果显示:引物对VtgF-VtgR在qPCR扩增时... 为应用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vtg)基因的组织表达谱,利用Primer5.0软件设计了扩增红鳍东方鲀Vtg基因片段的引物并进行了qPCR评估。结果显示:引物对VtgF-VtgR在qPCR扩增时,熔解曲线为单一尖锐峰;标准曲线分析显示:引物的扩增效率为105.32%,R^2值为0.999。上述结果说明该对引物具有良好的扩增特异性和扩增效率,满足了qPCR扩增的要求。 展开更多

关键词 红鳍东方鲀(Takifugu rubripes) 卵黄蛋白原(Vtg)基因 实时荧光定量 PCR

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幼虫信息素酯类混合物对中华蜜蜂育王质量的影响 被引量：3

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作者 胡景华 张丽珍 +3 位作者 廖春华 江武军 曾志将 颜伟玉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期300-307,共8页

【目的】基于免移虫育王技术,探究幼虫信息素酯类混合物在育王中对中华蜜蜂Apis cerana cerana蜂王质量的影响,为优质蜂王的培育奠定基础。【方法】利用中华蜜蜂免移虫育王生产器培育蜂王,在幼虫60-64 h时向王台内注入1μL不同酯类组成... 【目的】基于免移虫育王技术,探究幼虫信息素酯类混合物在育王中对中华蜜蜂Apis cerana cerana蜂王质量的影响,为优质蜂王的培育奠定基础。【方法】利用中华蜜蜂免移虫育王生产器培育蜂王,在幼虫60-64 h时向王台内注入1μL不同酯类组成的混合物(酯类混和物的浓度梯度分别为0,0.1%,1.0%和10.0%),待蜂王出房后测定蜂王初生重、胸重、胸宽以及单侧卵巢管数量;并利用荧光定量PCR测定蜂王卵巢卵黄原蛋白基因Vitellogenin(Vg),昆虫储存蛋白基因hexamerin70b(hex70b)和hexamerin110(hex110)的表达量。【结果】免移虫育王过程中添加3种信息素酯类混合物3E(1.0%甲基亚油酸酯、16.0%甲基亚麻酸酯和35.0%甲基油酸酯),不同浓度处理时蜂王的初生重较对照(石蜡油)均显著增加,但蜂王胸宽和胸重均无显著变化;0.1%和1.0%浓度处理组蜂王单侧卵巢管数显著增加;不同浓度处理组Vg和hex70b的表达量均无显著变化,但1.0%和10.0%浓度处理组蜂王卵巢的hex110表达量显著升高。4种信息素酯类混合物4E(4.5%甲基棕榈酸酯、1.0%甲基亚油酸酯、16.0%甲基亚麻酸酯和35.0%甲基油酸酯)试验组只有10.0%浓度处理组蜂王的初生重和单侧卵巢管数较对照显著上升(P<0.05),0.1%和1.0%浓度处理对蜂王的个体发育指标均无显著影响(P>0.05);0.1%和1.0%浓度处理组Vg的表达量、10.0%浓度处理组hex70b的表达量以及1.0%和10.0%浓度处理组hex110的表达量均显著上升(P<0.05)。10种信息素酯类混合物10E(4.5%甲基棕榈酸酯、2.5%甲基硬脂酸、35.0%甲基油酸酯、1.0%甲基亚油酸酯、16.0%甲基亚麻酸酯、3.5%乙基棕榈酸酯、1.5%乙基硬脂酸酯、18.0%乙基油酸酯、0.5%乙基亚油酸酯和17.5%乙基亚麻酸酯)试验组,各个浓度处理蜂王的初生重以及Vg和hex110的表达量均显著下降(P<0.05),但蜂王的单侧卵巢管数和胸部指标无显著变化(P>0.05),10.0%浓度处理时hex70b的表达量也显著降低(P<0.05)。【结论】中华蜜蜂育王过程中添加1.0%的3E和10.0%的4E幼虫信息素酯类可以在一定程度上提高蜂王质量。 展开更多

关键词 中华蜜蜂 幼虫信息素 卵黄原蛋白基因 昆虫储存蛋白基因 育王质量

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