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基于鸡卵清蛋白启动子的纳豆激酶慢病毒表达载体表达特性的研究
1
作者
蔡薇
吴志鹏
+2 位作者
赵俊生
徐宁迎
郭晓令
《江苏农业科学》
2019年第13期42-45,共4页
纳豆激酶(nattokinase,NK)是一种有效的抗血栓药物。基于已构建的纳豆激酶慢病毒表达载体,旨在比较其在鸡输卵管上皮细胞和鸡胚成纤维细胞中特异性表达的有效性。提取含卵清蛋白启动子(ovalbumin promoter,OV2)和雌激素反应元件(estroge...
纳豆激酶(nattokinase,NK)是一种有效的抗血栓药物。基于已构建的纳豆激酶慢病毒表达载体,旨在比较其在鸡输卵管上皮细胞和鸡胚成纤维细胞中特异性表达的有效性。提取含卵清蛋白启动子(ovalbumin promoter,OV2)和雌激素反应元件(estrogen response element,ERE)的pLV-OV2-ERE-NK-2A-EGFP重组质粒。通过PCR和双酶切进行初步鉴定,经生物公司测序、包装和滴定得转染传代培养的鸡输卵管上皮细胞和鸡胚成纤维细胞,并采用荧光显微镜和qPCR法检测细胞表达产物。结果表明,载体pLV-OV2-ERE-NK-2A-EGFP构建成功;且荧光显微镜下,鸡输卵管上皮细胞的绿色荧光多于成纤维细胞;qPCR检测发现 NK 正常表达。提示成功构建纳豆激酶慢病毒表达载体且在鸡输卵管上皮细胞中正常表达。
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关键词
纳豆激酶
卵清蛋白启动子
雌激素反应元件(ERE)
慢病毒载体
鸡输
卵
管上皮细胞
鸡胚成纤维细胞
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职称材料
静脉表型分子COUP-TFⅡ表达降低对血管内皮细胞衰老的影响
被引量:
1
2
作者
赖亚宇
周骐
+3 位作者
郑微
靳鹏
顾文竹
武晓静
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第8期1345-1352,共8页
目的:观察静脉表型分子鸡卵清蛋白上游启动子转录因子Ⅱ(COUP-TFⅡ)表达对血管内皮细胞衰老的影响和分子机制。方法:通过RT-qPCR检测比较人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中COUP-TFⅡ的表达情况。使用10^(-5)mol/L...
目的:观察静脉表型分子鸡卵清蛋白上游启动子转录因子Ⅱ(COUP-TFⅡ)表达对血管内皮细胞衰老的影响和分子机制。方法:通过RT-qPCR检测比较人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中COUP-TFⅡ的表达情况。使用10^(-5)mol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导HUVEC衰老,通过COUP-TFⅡ特异性小干扰RNA(siCOUP-TFⅡ)转染HUVEC使其COUP-TFⅡ的表达降低,利用β-半乳糖苷酶染色、Western blot、CCK-8、细胞计数等方法分别观察siCOUP-TFⅡ对AngⅡ诱导的血管内皮细胞衰老及增殖的影响,通过Western blot检测Akt信号分子的表达变化。结果:与HCAEC相比,HUVEC中COUP-TFⅡ呈显著高表达;用siCOUP-TFⅡ抑制HUVEC的COUP-TFⅡ表达时,能显著促进AngⅡ诱导的内皮细胞衰老并抑制内皮细胞增殖和p-Akt蛋白水平;加入Akt激动剂SC79(4 mg/L)能够部分逆转siCOUP-TFⅡ对AngⅡ诱导的HUVEC衰老和增殖的影响。结论:COUP-TFⅡ表达降低可促进血管内皮细胞衰老并抑制内皮细胞增殖,其机制可能与调节Akt信号有关。
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关键词
动脉粥样硬化
血管内皮细胞
细胞衰老
细胞增殖
鸡
卵
清
蛋白
上游
启动子
转录因子Ⅱ
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职称材料
碱性磷酸酯酶基因在鸡胚和人乳腺癌细胞中的表达
3
作者
刘影
陈立侨
黄伟达
《中国家禽》
北大核心
2007年第15期17-19,23,共4页
通过PCR方法从pSEAP2-control质粒获得人胎盘碱性磷酸酯酶(PLAP)基因,并克隆到鸡输卵管特异性表达载体(pAB-Sig-SV40)卵清蛋白基因调控区下游。pSEAP2-control和pAB-Sig-AP-SV40质粒转染鸡胚细胞和乳腺癌细胞(MCF-7),转染48h后以对硝基...
通过PCR方法从pSEAP2-control质粒获得人胎盘碱性磷酸酯酶(PLAP)基因,并克隆到鸡输卵管特异性表达载体(pAB-Sig-SV40)卵清蛋白基因调控区下游。pSEAP2-control和pAB-Sig-AP-SV40质粒转染鸡胚细胞和乳腺癌细胞(MCF-7),转染48h后以对硝基苯磷酸钠(pNPP)为底物检测PLAP的活性,结果pSEAP2-control在鸡胚细胞和MCF-7细胞中表达PLAP,pAB-Sig-AP-SV40在鸡胚细胞中不表达,而在MCF-7细胞中表达。说明鸡胚细胞可以表达有活性的人源糖蛋白,另外也说明在雌激素受体细胞中,鸡卵清蛋白基因启动子可启动外源基因表达。
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关键词
PLAP
卵
清
蛋白
基因
启动子
鸡胚细胞
MCF-7细胞
表达
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职称材料
COUP-TFⅡ在胃癌组织中表达及对胃癌SGC7901细胞中VEGFR3-NRP2轴转录活性的调控
被引量:
1
4
作者
李琼羽
王凯
+4 位作者
孙华波
王彩艳
许瑞雪
丛培佳
连海峰
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期230-236,共7页
目的:探讨COUP-TFⅡ在胃癌中对淋巴转移相关因子VEGFR3-NRP2轴的调控分子机制。方法:收集2015年3月至2015年8月在滨州医学院附属医院手术切除的60例胃癌组织和相应的癌旁组织及正常胃黏膜活检组织,用免疫组化和qPCR法检测COUP-TFⅡ、VEG...
目的:探讨COUP-TFⅡ在胃癌中对淋巴转移相关因子VEGFR3-NRP2轴的调控分子机制。方法:收集2015年3月至2015年8月在滨州医学院附属医院手术切除的60例胃癌组织和相应的癌旁组织及正常胃黏膜活检组织,用免疫组化和qPCR法检测COUP-TFⅡ、VEGFR3和NRP2的表达;培养胃癌细胞SGC7901和BGC823,构建过表达和siRNA-COUP-TFⅡ质粒后转染SGC7901细胞,用WB和qPCR检测转染后SGC7901细胞中COUP-TFⅡ、VEGFR3、NRP2的表达,用免疫共沉淀(CHIP)和双荧光素酶报告基因实验验证COUP-TFⅡ与VEGFR3-NRP2轴的靶向关系。结果:免疫组化检测显示,VEGFR3、NRP2、COUP-TFⅡ在胃癌组织中呈高表达(P<0.01);q PCR结果显示,与癌旁组织和正常组织相比,胃癌组织VEGFR3、NRP2和COUPTFⅡ的mRNA呈高表达(P<0.05或P<0.01);WB和qPCR法结果显示,与对照组相比,过表达COUP-TFⅡ组SGC7901细胞中COUP-TFⅡmRNA和蛋白水平表达均显著升高(均P<0.01);敲减组SGC7901细胞中COUP-TFⅡmRNA和蛋白水平均显著下降(P<0.05或P<0.01),且VEGFR3和NRP2 mRNA水平也均显著下降(均P<0.01);CHIP结果显示,SGC7901和BGC823细胞中COUP-TFⅡ抗体的免疫共沉淀物中含有VEGFR3和NRP2启动子DNA序列;双荧光素酶报告基因实验结果显示,COUP TFⅡ表达水平与VEGFR3和NRP2表达水平呈正相关。结论:COUP-TFⅡ在胃癌组织中高表达且对VEGFR3-NRP2轴存在正性调控作用,且在胃癌中高表达,COUP-TFⅡ可能为胃癌治疗的新靶点。
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关键词
胃癌
SCG7901细胞
BGC823细胞
鸡
卵
清
蛋白
上游
启动子
转录因子2
VEGFR3
神经纤毛
蛋白
2
淋巴转移
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职称材料
题名
基于鸡卵清蛋白启动子的纳豆激酶慢病毒表达载体表达特性的研究
1
作者
蔡薇
吴志鹏
赵俊生
徐宁迎
郭晓令
机构
浙江大学动物科学学院
出处
《江苏农业科学》
2019年第13期42-45,共4页
基金
浙江省自然科学基金(编号:LY13C170001)
文摘
纳豆激酶(nattokinase,NK)是一种有效的抗血栓药物。基于已构建的纳豆激酶慢病毒表达载体,旨在比较其在鸡输卵管上皮细胞和鸡胚成纤维细胞中特异性表达的有效性。提取含卵清蛋白启动子(ovalbumin promoter,OV2)和雌激素反应元件(estrogen response element,ERE)的pLV-OV2-ERE-NK-2A-EGFP重组质粒。通过PCR和双酶切进行初步鉴定,经生物公司测序、包装和滴定得转染传代培养的鸡输卵管上皮细胞和鸡胚成纤维细胞,并采用荧光显微镜和qPCR法检测细胞表达产物。结果表明,载体pLV-OV2-ERE-NK-2A-EGFP构建成功;且荧光显微镜下,鸡输卵管上皮细胞的绿色荧光多于成纤维细胞;qPCR检测发现 NK 正常表达。提示成功构建纳豆激酶慢病毒表达载体且在鸡输卵管上皮细胞中正常表达。
关键词
纳豆激酶
卵清蛋白启动子
雌激素反应元件(ERE)
慢病毒载体
鸡输
卵
管上皮细胞
鸡胚成纤维细胞
分类号
S858.31 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
静脉表型分子COUP-TFⅡ表达降低对血管内皮细胞衰老的影响
被引量:
1
2
作者
赖亚宇
周骐
郑微
靳鹏
顾文竹
武晓静
机构
第三军医大学附属新桥医院全军心血管内科中心
重庆医科大学第二附属医院心内科
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第8期1345-1352,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.81370404
No.91539104)
文摘
目的:观察静脉表型分子鸡卵清蛋白上游启动子转录因子Ⅱ(COUP-TFⅡ)表达对血管内皮细胞衰老的影响和分子机制。方法:通过RT-qPCR检测比较人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中COUP-TFⅡ的表达情况。使用10^(-5)mol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导HUVEC衰老,通过COUP-TFⅡ特异性小干扰RNA(siCOUP-TFⅡ)转染HUVEC使其COUP-TFⅡ的表达降低,利用β-半乳糖苷酶染色、Western blot、CCK-8、细胞计数等方法分别观察siCOUP-TFⅡ对AngⅡ诱导的血管内皮细胞衰老及增殖的影响,通过Western blot检测Akt信号分子的表达变化。结果:与HCAEC相比,HUVEC中COUP-TFⅡ呈显著高表达;用siCOUP-TFⅡ抑制HUVEC的COUP-TFⅡ表达时,能显著促进AngⅡ诱导的内皮细胞衰老并抑制内皮细胞增殖和p-Akt蛋白水平;加入Akt激动剂SC79(4 mg/L)能够部分逆转siCOUP-TFⅡ对AngⅡ诱导的HUVEC衰老和增殖的影响。结论:COUP-TFⅡ表达降低可促进血管内皮细胞衰老并抑制内皮细胞增殖,其机制可能与调节Akt信号有关。
关键词
动脉粥样硬化
血管内皮细胞
细胞衰老
细胞增殖
鸡
卵
清
蛋白
上游
启动子
转录因子Ⅱ
Keywords
Atherosclerosis
Vascular endothelial cells
Cell senescence
Cell proliferation
Chicken ovalbumin upstream promoter-transcription factor Ⅱ
分类号
R339.38 [医药卫生—人体生理学]
R363.21 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
碱性磷酸酯酶基因在鸡胚和人乳腺癌细胞中的表达
3
作者
刘影
陈立侨
黄伟达
机构
上海农林职业技术学院
华东师范大学生命科学学院
复旦大学生命科学学院
出处
《中国家禽》
北大核心
2007年第15期17-19,23,共4页
文摘
通过PCR方法从pSEAP2-control质粒获得人胎盘碱性磷酸酯酶(PLAP)基因,并克隆到鸡输卵管特异性表达载体(pAB-Sig-SV40)卵清蛋白基因调控区下游。pSEAP2-control和pAB-Sig-AP-SV40质粒转染鸡胚细胞和乳腺癌细胞(MCF-7),转染48h后以对硝基苯磷酸钠(pNPP)为底物检测PLAP的活性,结果pSEAP2-control在鸡胚细胞和MCF-7细胞中表达PLAP,pAB-Sig-AP-SV40在鸡胚细胞中不表达,而在MCF-7细胞中表达。说明鸡胚细胞可以表达有活性的人源糖蛋白,另外也说明在雌激素受体细胞中,鸡卵清蛋白基因启动子可启动外源基因表达。
关键词
PLAP
卵
清
蛋白
基因
启动子
鸡胚细胞
MCF-7细胞
表达
Keywords
placental alkaline phosphatase
ovalbumin gene promoter
chick embryo cell
MCF-7 cell
expression
分类号
S83 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
COUP-TFⅡ在胃癌组织中表达及对胃癌SGC7901细胞中VEGFR3-NRP2轴转录活性的调控
被引量:
1
4
作者
李琼羽
王凯
孙华波
王彩艳
许瑞雪
丛培佳
连海峰
机构
滨州医学院附属医院消化内科
滨州医学院烟台附属医院消化内科
出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期230-236,共7页
基金
山东省自然科学基金项目(No.ZR2020MH060)
2021年大学生创新创业训练计划立项项目(No.202110440120)。
文摘
目的:探讨COUP-TFⅡ在胃癌中对淋巴转移相关因子VEGFR3-NRP2轴的调控分子机制。方法:收集2015年3月至2015年8月在滨州医学院附属医院手术切除的60例胃癌组织和相应的癌旁组织及正常胃黏膜活检组织,用免疫组化和qPCR法检测COUP-TFⅡ、VEGFR3和NRP2的表达;培养胃癌细胞SGC7901和BGC823,构建过表达和siRNA-COUP-TFⅡ质粒后转染SGC7901细胞,用WB和qPCR检测转染后SGC7901细胞中COUP-TFⅡ、VEGFR3、NRP2的表达,用免疫共沉淀(CHIP)和双荧光素酶报告基因实验验证COUP-TFⅡ与VEGFR3-NRP2轴的靶向关系。结果:免疫组化检测显示,VEGFR3、NRP2、COUP-TFⅡ在胃癌组织中呈高表达(P<0.01);q PCR结果显示,与癌旁组织和正常组织相比,胃癌组织VEGFR3、NRP2和COUPTFⅡ的mRNA呈高表达(P<0.05或P<0.01);WB和qPCR法结果显示,与对照组相比,过表达COUP-TFⅡ组SGC7901细胞中COUP-TFⅡmRNA和蛋白水平表达均显著升高(均P<0.01);敲减组SGC7901细胞中COUP-TFⅡmRNA和蛋白水平均显著下降(P<0.05或P<0.01),且VEGFR3和NRP2 mRNA水平也均显著下降(均P<0.01);CHIP结果显示,SGC7901和BGC823细胞中COUP-TFⅡ抗体的免疫共沉淀物中含有VEGFR3和NRP2启动子DNA序列;双荧光素酶报告基因实验结果显示,COUP TFⅡ表达水平与VEGFR3和NRP2表达水平呈正相关。结论:COUP-TFⅡ在胃癌组织中高表达且对VEGFR3-NRP2轴存在正性调控作用,且在胃癌中高表达,COUP-TFⅡ可能为胃癌治疗的新靶点。
关键词
胃癌
SCG7901细胞
BGC823细胞
鸡
卵
清
蛋白
上游
启动子
转录因子2
VEGFR3
神经纤毛
蛋白
2
淋巴转移
Keywords
gastric cancer
SCG7901 cell
BGC823 cell
chicken ovalbumin upstream promotertranscription factorⅡ(COUP-TFⅡ)
VEGFR3
neuropilin 2(NRP2)
lymphatic metastasis
分类号
R735.2 [医药卫生—肿瘤]
R730.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于鸡卵清蛋白启动子的纳豆激酶慢病毒表达载体表达特性的研究
蔡薇
吴志鹏
赵俊生
徐宁迎
郭晓令
《江苏农业科学》
2019
0
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职称材料
2
静脉表型分子COUP-TFⅡ表达降低对血管内皮细胞衰老的影响
赖亚宇
周骐
郑微
靳鹏
顾文竹
武晓静
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017
1
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职称材料
3
碱性磷酸酯酶基因在鸡胚和人乳腺癌细胞中的表达
刘影
陈立侨
黄伟达
《中国家禽》
北大核心
2007
0
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职称材料
4
COUP-TFⅡ在胃癌组织中表达及对胃癌SGC7901细胞中VEGFR3-NRP2轴转录活性的调控
李琼羽
王凯
孙华波
王彩艳
许瑞雪
丛培佳
连海峰
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023
1
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