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PTHLH基因对水牛卵泡颗粒细胞活性的影响及其分子调控机制的初步研究
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作者 陆杏蓉 邓廷贤 +7 位作者 郑海英 杨春艳 韦科龙 钟华配 段安琴 马小娅 徐媛媛 尚江华 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2024年第6期1-10,共10页
试验旨在探讨PTHLH基因过表达对水牛卵泡颗粒细胞活性的影响,以及PTHLH基因对增殖、表观修饰和多能性相关基因表达模式的调控作用,为理解卵泡颗粒细胞和卵泡发育的分子调控机制提供新的视角。采用脂质体转染法将PTHLH基因过表达载体转... 试验旨在探讨PTHLH基因过表达对水牛卵泡颗粒细胞活性的影响,以及PTHLH基因对增殖、表观修饰和多能性相关基因表达模式的调控作用,为理解卵泡颗粒细胞和卵泡发育的分子调控机制提供新的视角。采用脂质体转染法将PTHLH基因过表达载体转染到水牛卵泡颗粒细胞中;利用MTT细胞活性检测试剂测定细胞活性;用STRING在线分析PTHLH及相关蛋白的互作网络;用qRT-PCR检测转染后水牛卵泡颗粒细胞中增殖、表观修饰和多能性相关基因的表达情况,分析PTHLH基因过表达对水牛卵泡颗粒细胞相关基因表达的影响。结果显示,PTHLH基因过表达极显著降低了水牛卵泡颗粒细胞的活性(P<0.0001);过表达组细胞中增殖相关基因(CCNB1、CCND1、CDKN1B、CDKN1A和CDK2)的表达极显著下调(P<0.0001);甲基化相关基因DNMT1和羟甲基化相关基因TET3的表达极显著下调(P<0.001或P<0.01),甲基化相关基因DNMT3B和IDH1的表达显著下调(P<0.05),而羟甲基化相关基因TET1和TET2的表达显著上调(P<0.05);乙酰化相关基因(HDAC1、HDAC2、HAT1、P300和CBP)的表达极显著下调(P<0.001或P<0.0001);与此同时,多能性相关基因OCT4和SOX2的表达极显著上调(P<0.01或P<0.001),而NANOG基因的表达极显著下调(P<0.01)。综上,PTHLH基因过表达抑制了水牛卵泡颗粒细胞的细胞活性,对增殖相关基因(CCNB1、CCND1、CDKN1B、CDKN1A和CDK2)、甲基化相关基因DNMT1与羟甲基化相关基因TET3、乙酰化相关基因(HDAC1、HDAC2、HAT1、P300和CBP)和多能性相关基因NANOG的表达具有负调控作用,而对羟甲基化相关基因TET1和TET2,以及多能性相关基因OCT4和SOX2的表达具有正调控作用。 展开更多
关键词 水牛 PTHLH基因 卵泡颗粒细胞 基因表达
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山羊FST慢病毒载体构建及其对卵巢卵泡颗粒细胞增殖的影响 被引量:7
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作者 凌英会 朱露 +5 位作者 吴昊 陈青 权青 刘勇 李文雍 张运海 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1690-1698,共9页
研究卵泡抑素(FST)对山羊卵巢卵泡颗粒细胞增殖的影响。采集山羊卵巢组织、分离培养原代卵巢卵泡颗粒细胞,RT-PCR克隆山羊FST,设计shRNA片段,构建慢病毒过表达载体和干扰载体,感染原代卵巢卵泡颗粒细胞,qPCR技术检测过表达与干扰的效果,... 研究卵泡抑素(FST)对山羊卵巢卵泡颗粒细胞增殖的影响。采集山羊卵巢组织、分离培养原代卵巢卵泡颗粒细胞,RT-PCR克隆山羊FST,设计shRNA片段,构建慢病毒过表达载体和干扰载体,感染原代卵巢卵泡颗粒细胞,qPCR技术检测过表达与干扰的效果, CCK-8检测细胞的增殖效果。结果显示:分离培养的山羊卵巢卵泡颗粒细胞经促卵泡素受体(FSHR)免疫荧光鉴定,阳性率为95%;慢病毒感染颗粒细胞时荧光蛋白的表达占比80%;qPCR验证FST过表达和干扰慢病毒载体的效果均显著(P<0.05);过表达FST显著(P<0.05)抑制卵巢卵泡颗粒细胞的增殖,干扰FST显著(P<0.05)促进卵巢卵泡颗粒细胞增殖。笔者分离出山羊卵巢卵泡颗粒细胞,成功构建FST过表达和干扰两种慢病毒载体,感染结果表明FST能够抑制山羊卵巢卵泡颗粒细胞的增殖,为进一步研究FST在哺乳动物卵泡发育调控中的作用及其机制提供了基础资料。 展开更多
关键词 FST基因 卵巢卵泡颗粒细胞 慢病毒载体 SHRNA 过表达载体 细胞增殖
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同源GnRH对无血清培养鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的作用 被引量:7
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作者 汪琳仙 刘金中 张才乔 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期330-335,共6页
选用产蛋规律的鸡,在一个产蛋序列中,排卵前1~3h剖腹收集各级卵泡,分离颗粒层建立卵泡颗粒细胞无血清单层贴壁培养模型。在此基础上,用不同剂量鸡促性腺激素释放激素(GnRH-Ⅱ)单独处理或与羊LH(oLH)协同处理,并... 选用产蛋规律的鸡,在一个产蛋序列中,排卵前1~3h剖腹收集各级卵泡,分离颗粒层建立卵泡颗粒细胞无血清单层贴壁培养模型。在此基础上,用不同剂量鸡促性腺激素释放激素(GnRH-Ⅱ)单独处理或与羊LH(oLH)协同处理,并使用GnRH-Antagonist(GA),以观察GnRH-Ⅱ对颗粒细胞孕酮分泌的影响。研究获得了以下结果:(1)GnRH-Ⅱ对鸡不同卵抱(F1、F3、F5)颗粒细胞孕酮分泌均有促进作用,并呈现剂量-反应关系;(2)GnRH-对oLH促鸡卵泡颗粒细胞孕酮的分泌有明显的协同作用;(3)GnRH拮抗物使GnRH-Ⅱ的促卵泡颗粒细胞孕酮分泌作用受到阻断。 展开更多
关键词 GnRH-Ⅱ 孕酮 卵泡颗粒细胞 无血清培养
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FSH及Wnt信号通路对绵羊卵泡颗粒细胞的增殖及雌激素分泌的影响 被引量:3
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作者 赵妙妙 姜晓龙 +5 位作者 陈建伟 黄洋 姚晓磊 曹霞 李鹏飞 吕丽华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期64-70,共7页
旨在研究Wnt信号通路对绵羊卵泡颗粒细胞增殖及雌激素分泌的影响,探究其是否与促卵泡素(Follicular stimulating hormone,FSH)有关。在添加有FSH以及不同浓度Wnt信号通路抑制剂IWR-1的培养基中培养绵羊卵巢卵泡颗粒细胞168h,利用Guava V... 旨在研究Wnt信号通路对绵羊卵泡颗粒细胞增殖及雌激素分泌的影响,探究其是否与促卵泡素(Follicular stimulating hormone,FSH)有关。在添加有FSH以及不同浓度Wnt信号通路抑制剂IWR-1的培养基中培养绵羊卵巢卵泡颗粒细胞168h,利用Guava ViaCount?Reagent测定细胞数目的变化,利用绵羊ELISA试剂盒检测雌激素浓度的变化,利用qRT-PCR检测FSH靶基因CYP19和CCND2的相对表达量差异。结果表明,无论有无FSH,抑制剂IWR-1使颗粒细胞数目显著减少(P<0.05);当有FSH时,抑制剂IWR-1的添加导致雌激素浓度显著降低(P<0.05)。IWR-1的浓度为1.0μmol·L-1时,对颗粒细胞的抑制效果最明显。IWR-1还导致CYP19和CCND2mRNA的表达量降低。综上表明,Wnt信号通路对绵羊卵泡颗粒细胞的生物学功能具有促进作用,并且这种促进作用可能与FSH有关。 展开更多
关键词 绵羊 卵泡颗粒细胞 WNT信号通路 IWR-1 细胞培养
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牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞的培养 被引量:4
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作者 郭宪 阎萍 +2 位作者 许保增 曾玉峰 裴杰 《动物医学进展》 CSCD 2007年第8期29-32,共4页
分离培养牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞的目的是克服体外受精中早期胚胎发育阻断,建立有利于牦牛早期胚胎体外发育的共培养体系。采集牦牛输卵管上皮细胞进行原代及传代培养,同时从卵泡液中获取颗粒细胞进行原代培养,培养过程中观察... 分离培养牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞的目的是克服体外受精中早期胚胎发育阻断,建立有利于牦牛早期胚胎体外发育的共培养体系。采集牦牛输卵管上皮细胞进行原代及传代培养,同时从卵泡液中获取颗粒细胞进行原代培养,培养过程中观察2种细胞的生长方式和形态特点。输卵管上皮细胞贴壁生长时,呈多边形,且呈单层成簇生长。培养144 h~216 h,可形成细胞单层。颗粒细胞贴壁生长时,呈现聚集生长特性,贴壁细胞形状不规则,呈放射状。培养72 h~96 h,形成颗粒细胞单层。 展开更多
关键词 牦牛 输卵管上皮细胞 卵泡颗粒细胞 培养
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水牛有腔卵泡颗粒细胞凋亡的生物形态学特征 被引量:2
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作者 何宝祥 郑喜邦 +3 位作者 杜玉兰 余四九 李恭贺 李彩萍 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1209-1216,共8页
为了解水牛有腔卵泡闭锁的起因和有腔卵泡中是否存在卵泡颗粒细胞凋亡,本研究选择青春期前水牛和成年(发情间期和发情期)水牛的卵巢,采用石蜡组织切片、HE染色技术进行光镜观察,并采用DNA原位末端标记(TUNEL)技术和透射电镜观察研究了... 为了解水牛有腔卵泡闭锁的起因和有腔卵泡中是否存在卵泡颗粒细胞凋亡,本研究选择青春期前水牛和成年(发情间期和发情期)水牛的卵巢,采用石蜡组织切片、HE染色技术进行光镜观察,并采用DNA原位末端标记(TUNEL)技术和透射电镜观察研究了卵泡颗粒细胞凋亡的特征。结果表明:青春期前水牛的健康有腔卵泡上无或仅有极个别凋亡的卵泡颗粒细胞(GCs),而闭锁有腔卵泡上存在有多量凋亡的GCs,凋亡的形式:GCs层内出现单个或多个凋亡细胞,卵泡腔内出现凋亡小体群。在成年水牛发情间期的闭锁大卵泡上,GCs层弯曲皱折,存在多量凋亡的GCs。发情期水牛成熟卵泡的GCs层也存在GCs凋亡,排卵前的GCs层细胞全部脱落到卵泡腔内。本研究首次在同一组织切片上先后分别应用HE染色和TUNEL检查细胞凋亡,且证实了水牛有腔卵泡GCs凋亡的存在。超微结构显示了GCs凋亡的核边集化、核浓缩及凋亡小体的形态。上述结果提示:在水牛闭锁有腔卵泡中存在着GCs凋亡,GCs凋亡是启动水牛有腔卵泡闭锁的潜在机理。 展开更多
关键词 水牛 细胞凋亡 透射电镜 卵泡颗粒细胞 TUNEL
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GnRH促鸡卵泡颗粒细胞孕酮合成功能作用机制的研究 被引量:1
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作者 汪琳仙 李莹辉 王海滨 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期200-205,共6页
本实验选用掌握产蛋规律的莱航鸡,在排卵前16~18h剖腹取卵泡(F1~F4),分离和纯化颗粒细胞(GC)。采用无血清贴壁培养法,初步探讨了鸡促性腺激素释放激素(GnRHⅡ)促颗粒细胞孕酮(P4)合成的作用机制,获得... 本实验选用掌握产蛋规律的莱航鸡,在排卵前16~18h剖腹取卵泡(F1~F4),分离和纯化颗粒细胞(GC)。采用无血清贴壁培养法,初步探讨了鸡促性腺激素释放激素(GnRHⅡ)促颗粒细胞孕酮(P4)合成的作用机制,获得以下结果:(1)PKC阻断剂H7(25~50μmol/L)能阻断GnRHⅡ促颗粒细胞P4合成作用;(2)磷酸二酯酶抑制剂MIX(10-5~10-3mol/L)能促进P4分泌,但对GnRHⅡ促P4合成效应无明显影响;(3)钙离子螯合剂EGTA(1~3mmol/L)存在时,GnRHⅡ促P4合成量明显减少;而培养液中同时加入Ca2+(15μmol/L),则EGTA对GnRHⅡ作用的影响减弱;(4)本实验条件下钙通道阻断剂Verapamil对GnRHⅡ促P4合成作用无显著影响。上述结果表明GnRHⅡ促鸡卵泡颗粒细胞P4合成作用主要是通过细胞内PKC系统来实现的,而细胞内Ca2+浓度有其重要影响。 展开更多
关键词 GNRH 孕酮合成 作用机制 卵泡颗粒细胞
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FSH和胰岛素对牛卵泡颗粒细胞长期培养的影响 被引量:12
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作者 高庆华 蒋超祥 韩春梅 《中国草食动物》 2004年第4期16-18,共3页
McCoy’s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺 ,对牛卵巢上大 (直径 >8mm)、中 (4mm <直径 <8mm)、小 (直径 <4mm)非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养 ,研究添加不同浓度的促卵泡激素和胰岛素对颗粒细胞... McCoy’s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺 ,对牛卵巢上大 (直径 >8mm)、中 (4mm <直径 <8mm)、小 (直径 <4mm)非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养 ,研究添加不同浓度的促卵泡激素和胰岛素对颗粒细胞增生、分化和激素分泌的影响。结果 :FSH可以诱导颗粒细胞增生及雌二醇合成能力 ,颗粒细胞的雌二醇合成能力与生理浓度的FSH呈剂量依赖方式。胰岛素对大、中、小卵泡颗粒细胞增生和雌二醇分泌有促进作用。 展开更多
关键词 胰岛素 FSH 卵泡颗粒细胞 细胞培养 剂量 雌二醇 培养基
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高繁殖力黄淮山羊大卵泡颗粒细胞上调表达基因的研究
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作者 庞训胜 王子玉 +6 位作者 应诗家 张艳丽 吴勇聪 闫益波 孟立 钟部帅 王锋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期955-961,共7页
旨在对山羊卵巢有腔卵泡发育中基因表达特点进行研究。本研究应用抑制消减杂交技术(SSH)对黄淮山羊卵泡期卵巢非闭锁大卵泡(6 mm)和小卵泡(4 mm)颗粒细胞内差异表达基因进行了研究,建立了消减cDNA文库,通过斑点杂交分析,从正向文库中随... 旨在对山羊卵巢有腔卵泡发育中基因表达特点进行研究。本研究应用抑制消减杂交技术(SSH)对黄淮山羊卵泡期卵巢非闭锁大卵泡(6 mm)和小卵泡(4 mm)颗粒细胞内差异表达基因进行了研究,建立了消减cDNA文库,通过斑点杂交分析,从正向文库中随机挑取96个克隆进行差异表达的筛选,结果发现,其中有8个与已知功能基因高度相似,12个全新的表达序列标签(EST)。结果显示,这些基因可能影响着山羊卵泡的发育成熟和排卵。 展开更多
关键词 黄淮山羊 卵泡颗粒细胞 抑制消减杂交 基因表达
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不同培养时间对绵羊卵泡颗粒细胞分泌雌二醇和孕酮的影响 被引量:1
10
作者 马友记 李发第 《黑龙江动物繁殖》 2002年第1期1-2,共2页
以绵羊卵泡颗粒细胞为研究对象 ,采用体外培养细胞的方法 ,分别于不同时间收集细胞培养液 ,用放射免疫法 (RIA)测定雌二醇和孕酮含量。结果表明 :不同培养时间对卵泡颗粒细胞分泌雌二醇影响显著 ,2 4h、 36h、 4 8h之间差异均极显著 (P ... 以绵羊卵泡颗粒细胞为研究对象 ,采用体外培养细胞的方法 ,分别于不同时间收集细胞培养液 ,用放射免疫法 (RIA)测定雌二醇和孕酮含量。结果表明 :不同培养时间对卵泡颗粒细胞分泌雌二醇影响显著 ,2 4h、 36h、 4 8h之间差异均极显著 (P <0 0 0 1) ,并随时间延长 ,雌二醇含量呈下降趋势 ;在不同时间收集的细胞培养液中检测不到孕酮。 展开更多
关键词 培养时间 绵羊 卵泡颗粒细胞 分泌 雌二醇 孕酮 RIA 激素
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大鼠卵泡颗粒细胞透射电镜制样的简便取材方法
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作者 项晓人 马红 陈义芳 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期129-130,共2页
近年来,在很多妇科或更年期疾病的实验研究中,实验动物大鼠卵泡中颗粒细胞的超微结构观察是一个重要指标。由于大鼠卵巢卵泡都很小,而颗粒细胞又是半游离在卵泡液中,数量更少,因此,要得到足量的颗粒细胞进行电镜制样,并及时固定... 近年来,在很多妇科或更年期疾病的实验研究中,实验动物大鼠卵泡中颗粒细胞的超微结构观察是一个重要指标。由于大鼠卵巢卵泡都很小,而颗粒细胞又是半游离在卵泡液中,数量更少,因此,要得到足量的颗粒细胞进行电镜制样,并及时固定,显然取材比较困难。本实验中,我们在取材方面进行了一些技术上的处理,防止了目标细胞的流失与混淆,可以获得足量的颗粒细胞,方便制样,提高固定效果,方法简便易行,现介绍如下。 展开更多
关键词 卵泡颗粒细胞 取材方法 电镜制样 大鼠 透射 更年期疾病 超微结构观 实验动物 目标细胞 固定效果
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牛卵泡颗粒细胞无血清培养的形态学观察
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作者 高庆华 蒋超祥 韩春梅 《中国草食动物》 2004年第3期8-9,共2页
McCoy’s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺 ,对牛卵巢上大 (直径 >8mm)、中 ( 4mm <直径 <8mm)、小 (直径 <4mm)非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养。McCoy’s5a无血清培养中的颗粒细胞形态与分化特点... McCoy’s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺 ,对牛卵巢上大 (直径 >8mm)、中 ( 4mm <直径 <8mm)、小 (直径 <4mm)非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养。McCoy’s5a无血清培养中的颗粒细胞形态与分化特点类似于体内情况 ,说明颗粒细胞在该培养条件下 。 展开更多
关键词 卵泡颗粒细胞 无血清培养 形态学 分化特点
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瘦素和FSH对绵羊卵泡颗粒细胞孕激素分泌的影响 被引量:1
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作者 贾凯琪 郭翔宇 +5 位作者 韩琦 马晓燕 党文庆 李雅婷 李鹏飞 吕丽华 《中国草食动物科学》 CAS 2021年第2期6-11,16,共7页
试验旨在探明瘦素和卵泡刺激素(FSH)对绵羊卵泡颗粒细胞孕激素分泌的影响并建立瘦素和FSH之间的相互作用。从屠宰场收集健康母羊的卵巢,机械分离卵泡,收集卵泡颗粒细胞。在细胞培养液中加入不同浓度的FSH(0 U/mL,2.5 U/mL,5 U/mL,7.5 U/... 试验旨在探明瘦素和卵泡刺激素(FSH)对绵羊卵泡颗粒细胞孕激素分泌的影响并建立瘦素和FSH之间的相互作用。从屠宰场收集健康母羊的卵巢,机械分离卵泡,收集卵泡颗粒细胞。在细胞培养液中加入不同浓度的FSH(0 U/mL,2.5 U/mL,5 U/mL,7.5 U/mL,10 U/mL)培养24 h和48 h,通过MTT检测细胞增殖,以确定后续试验FSH的使用浓度。在细胞培养液中加入瘦素(0 ng/mL,25 ng/mL,50 ng/mL)和FSH(5 U/mL)单独或联合作用48 h后,通过ELISA检测细胞培养液中孕酮(P_4)的浓度。收集细胞,通过qPCR和Western blotting检测CYP11A1、STAR、3β-HSD的表达。结果表明:5 U/mL的FSH浓度可显著促进细胞生长,使类固醇相关基因(CYP11A1、STAR、3β-HSD)的表达升高(P<0.05),但对其蛋白无显著影响,对P4分泌无刺激作用。单独添加瘦素时,25 ng/mL瘦素降低了CYP11A1、STAR、3β-HSD基因的表达(P<0.05),但相应蛋白无显著性差异,同时对P_4的分泌无影响;50 ng/mL瘦素降低了STAR、CYP11A1基因的表达,但相应蛋白表达和P4分泌未受影响。瘦素和FSH联合使用时,P4分泌显著降低,STAR表达降低(P<0.05),但对其他类固醇合成基因和蛋白(CYP11A1、3β-HSD)的表达无显著影响(P>0.05)。综上所述,FSH对绵羊卵泡颗粒细胞增殖和类固醇合成基因表达有促进作用;瘦素对FSH诱导下P_4的分泌有抑制作用,且具有剂量依赖性,提示瘦素参与卵泡的发育过程。 展开更多
关键词 瘦素 卵泡颗粒细胞 卵泡刺激素 孕酮
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猪卵泡颗粒细胞总RNA提取方法改进的探讨 被引量:4
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作者 张兆磊 朱芷薇 +1 位作者 张涛 吕丽华 《国外畜牧学(猪与禽)》 2009年第2期60-61,共2页
RNA是一类非常有用的生物大分子,在分子生物学研究领域正发挥越来越重要的作用。本文介绍一种改进过的从动物组织提取总RNA的方法,实践证明,该方法重复性好,实用性强。用此方法提取的猪卵泡颗粒细胞总RNA,无DNA污染物等问题,完全满足分... RNA是一类非常有用的生物大分子,在分子生物学研究领域正发挥越来越重要的作用。本文介绍一种改进过的从动物组织提取总RNA的方法,实践证明,该方法重复性好,实用性强。用此方法提取的猪卵泡颗粒细胞总RNA,无DNA污染物等问题,完全满足分子克隆、基因表达等分子生物学研究的需要。 展开更多
关键词 卵泡颗粒细胞 RNA 提取方法 改进
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氯化钴通过诱发DNA氧化损伤抑制猪卵泡颗粒细胞增殖的研究 被引量:1
15
作者 魏甲园 邾倩 +1 位作者 杨亚星 申明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期2982-2992,共11页
旨在探究氯化钴(CoCl_(2))诱导的DNA氧化损伤对猪卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取猪卵泡颗粒细胞作为试验材料,使用化学性低氧模型诱导剂CoCl_(2)处理猪卵泡颗粒细胞建立缺氧模型。前期研究已确定CoCl_(2)最适处理浓度,用200μmol&#... 旨在探究氯化钴(CoCl_(2))诱导的DNA氧化损伤对猪卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取猪卵泡颗粒细胞作为试验材料,使用化学性低氧模型诱导剂CoCl_(2)处理猪卵泡颗粒细胞建立缺氧模型。前期研究已确定CoCl_(2)最适处理浓度,用200μmol·L^(-1) CoCl_(2)处理猪卵泡颗粒细胞12 h,将培养出的传代细胞分成4组处理,分别为:对照组、CoCl_(2)诱导缺氧处理组、GSH处理组、GSH+CoCl_(2)联合处理组。对照组为完全培养基培养12 h,CoCl_(2)诱导缺氧处理组给予终浓度200μmol·L^(-1) CoCl_(2)的培养基培养12 h,单独GSH处理组加入浓度为2 mmol·L^(-1)的GSH处理12 h,GSH+CoCl_(2)联合处理组加入200μmol·L^(-1) CoCl_(2)和2 mmol·L^(-1)的GSH联合处理细胞后培养12 h。12 h后检测各组细胞增殖活性、ROS水平、γH2AX蛋白活性水平和Oxo-8-G水平。采用CCK-8法检测其增殖活性;采用双氯荧光素(2’,7’-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)检测ROS水平;Western blot检测γH2AX蛋白活性水平,采用FITC荧光小鼠单克隆抗体检测Oxo-8-G水平。为了进一步明确CoCl_(2)诱导的颗粒细胞增殖阻滞与DNA氧化损伤的关系,本试验在CoCl_(2)处理的基础上添加抗氧化物GSH处理12 h后检测细胞增殖、ROS水平、DNA氧化损伤等相关指标。与对照组相比,200μmol·L^(-1) CoCl_(2)处理猪卵泡颗粒细胞后,细胞增殖活力极显著降低(P<0.0001),缺氧组ROS水平极显著升高(P<0.0001),γH2AX蛋白表达极显著升高(P<0.0001),Oxo-8-G水平极显著升高(P<0.0001)。与缺氧组相比,在CoCl_(2)处理基础上添加GSH后,ROS、Oxo-8-G、γH2AX水平极显著降低(P<0.0001),并伴随细胞增殖活性的显著恢复(P<0.0001)。CoCl_(2)可抑制猪卵泡颗粒细胞增殖活性,机制与诱导DNA氧化应激损伤有关。 展开更多
关键词 氯化钴 化学缺氧 卵泡颗粒细胞 细胞增殖 DNA氧化损伤
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绵羊miR-200b启动子鉴定及其对卵泡颗粒细胞线粒体功能的影响
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作者 宋鹏琰 王思伟 +3 位作者 岳巧娴 张寅梁 陈晓勇 周荣艳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期5066-5076,共11页
旨在鉴定绵羊miR-200b的启动子区并研究其对卵泡颗粒细胞线粒体功能的影响。本研究体外分离培养绵羊卵泡颗粒细胞,通过构建包含3个不同长度启动子区重组质粒,利用生物信息软件和双荧光素酶报告试验预测并鉴定绵羊miR-200b核心启动子区;... 旨在鉴定绵羊miR-200b的启动子区并研究其对卵泡颗粒细胞线粒体功能的影响。本研究体外分离培养绵羊卵泡颗粒细胞,通过构建包含3个不同长度启动子区重组质粒,利用生物信息软件和双荧光素酶报告试验预测并鉴定绵羊miR-200b核心启动子区;利用在线工具预测转录因子NR4A1的结合位点;通过双荧光素酶报告试验和qRT-PCR检测过表达NR 4A1基因对miR-200b启动子活性和表达水平的影响;通过转染miR-200b mimic和mimic NC,分别检测颗粒细胞线粒体形态和数量、线粒体膜电位、ROS水平、ATP和线粒体呼吸链复合物Ⅰ的浓度,并检测线粒体氧化磷酸化相关基因表达水平。结果表明,miR-200b-P1(-159/+36 nt)活性最高,确定该区域为miR-200b核心启动子区;预测出核心启动子存在1个NR4A1的结合位点,且过表达NR 4A1基因显著上调miR-200b启动子活性和miR-200b的表达水平(P<0.01)。与mimic NC组相比,转染miR-200b mimic导致颗粒细胞平均光密度显著降低(P<0.01),细胞长度显著缩短(P<0.01)、线粒体膜电位下降(P<0.05)、ATP(P<0.05)和线粒体呼吸链体复合物Ⅰ(P<0.01)的浓度降低、ROS水平升高(P<0.01),同时下调ATP 6V1G1和NDUFV 1的表达(P<0.01),上调NOX 4的表达水平(P<0.01)。该研究确定了绵羊miR-200b的核心启动子区(-159/+36 nt),NR4A1正向调控miR-200b的转录,且miR-200b能够影响线粒体氧化磷酸化过程,诱导颗粒细胞线粒体损伤。该研究结果为进一步揭示miR-200b调控绵羊卵泡发育的机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 绵羊 miR-200b 启动子 卵泡颗粒细胞 线粒体
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牛卵泡颗粒细胞CART与候选受体的分子对接及其功能
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作者 郝琴琴 任静 +4 位作者 成俊丽 朱芷葳 许冬梅 贾雪纯 李鹏飞 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期461-467,共7页
通过同源建模预测牛卵泡颗粒细胞(GCs)可卡因-苯丙胺转录肽(CART)与候选受体ZMPSTE24的三维结构,运用分子对接技术分析二者的结合模式,探究其分子互作关系;选取3头健康成年母牛,分离GCs,转染TEDDM1、CMKLR1、AGTR2、ZMPSTE24沉默序列,... 通过同源建模预测牛卵泡颗粒细胞(GCs)可卡因-苯丙胺转录肽(CART)与候选受体ZMPSTE24的三维结构,运用分子对接技术分析二者的结合模式,探究其分子互作关系;选取3头健康成年母牛,分离GCs,转染TEDDM1、CMKLR1、AGTR2、ZMPSTE24沉默序列,提取总RNA,并采用q RT-PCR检测TEDDM1、AGTR2、CMKLR1、ZMPSTE24等4个候选受体沉默后m RNA的相对表达量;采用CCK-8法测定各试验组和对照组GCs增殖情况;采用ELISA法检测各组培养液中雌激素(E2)的质量浓度,研究此4个候选受体在牛卵泡GCs中的功能。结果表明:ZMPSTE24与CART存在1个结合位点、9个盐桥、17个氢键;4个候选受体试验组的m RNA相对表达量均极显著(P<0.01)低于si NC组和空白组的,表明TEDDM1、CMKLR1、AGTR2、ZMPSTE24在GCs中沉默效果良好;TEDDM1、CMKLR1、AGTR2、ZMPSTE24沉默后,各试验组的细胞增殖率和培养液中E2质量浓度均极显著(P<0.01)低于阳性对照组(不加CART)的。可见,4个候选受体基因沉默后,CART对GCs增殖和E2分泌仍具有抑制作用。 展开更多
关键词 卵泡颗粒细胞 CART候选受体 分子对接
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海兰褐壳蛋鸡小黄卵泡颗粒细胞全长转录组测序分析
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作者 片慧芳 杜旭彬 +3 位作者 李妍 张雨辰 刘斐 虞德兵 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1754-1763,共10页
【目的】获取鸡小黄卵泡颗粒细胞(granulosa cells of small yellow follicle,SYFG)全长转录组数据,为深入挖掘鸡卵泡发育内在分子调控信息提供参考。【方法】采用PacBio高通量测序平台,对海兰褐壳蛋鸡SYFG进行测序、过滤、聚类和矫正... 【目的】获取鸡小黄卵泡颗粒细胞(granulosa cells of small yellow follicle,SYFG)全长转录组数据,为深入挖掘鸡卵泡发育内在分子调控信息提供参考。【方法】采用PacBio高通量测序平台,对海兰褐壳蛋鸡SYFG进行测序、过滤、聚类和矫正原始数据,获取全长转录本序列。通过生物信息学软件对全长转录本数据进行功能注释、转录因子注释、编码区序列(coding sequence,CDS)预测、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)预测筛选、简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)检测及可变剪接(alternative splicing,AS)和选择性多聚腺苷酸化(alternative polyadenylation,APA)分析。【结果】通过测序共获得52311条海兰褐壳蛋鸡SYFG全长转录本,长度主要分布于1~3500 bp。通过与GO、KEGG、COG、NR、Swiss-Prot和Pfam数据库比对,对转录本序列进行注释,其中GO数据库注释了26525条转录本,KEGG数据库注释了25233条转录本,COG数据库注释了31303条转录本,NR数据库注释了34284条转录本,Swiss-Prot数据库注释了30701条转录本,Pfam数据库注释了24622条转录本。此外,经鉴定或预测,还获得了559个转录因子、40944个CDS、14699个lncRNAs、7种类型的SSR、28423个AS和2747个APA事件。【结论】本研究获得了鸡SYFG全长转录组测序数据,提升了转录本的数量和长度,完善了转录本的功能注释,分析了AS和APA事件的类型,揭示了转录本的复杂性,为进一步从转录组水平解析鸡卵泡发育的分子调节机制提供数据支持。 展开更多
关键词 海兰褐壳蛋鸡 小黄卵泡颗粒细胞(SYFG) 三代测序 卵泡发育
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鸭异体卵巢移植后生殖激素水平变化及卵泡颗粒细胞凋亡的研究
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作者 张玉玲 丁家桐 +3 位作者 张刻 俞凤燕 吴曼 张舒 《国外畜牧学(猪与禽)》 2009年第2期67-69,共3页
选取健康麻鸭进行同种异体卵巢移植,移植后测定45日龄、75日龄、105日龄、开产日龄、开产后30日龄和开产后60日龄时血浆促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、雌二醇(E2)水平;并且在产蛋期内不同的时间获取各个级别卵泡的颗粒细胞,检测其凋亡... 选取健康麻鸭进行同种异体卵巢移植,移植后测定45日龄、75日龄、105日龄、开产日龄、开产后30日龄和开产后60日龄时血浆促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、雌二醇(E2)水平;并且在产蛋期内不同的时间获取各个级别卵泡的颗粒细胞,检测其凋亡率。结果显示,移植后FSH、LH、E2的分泌均高于对照组,在开产30日龄时差异显著,表明移植成功并且卵巢发育良好,卵巢功能正常;移植后各级卵巢颗粒细胞凋亡率显著低于对照组,并且随着卵泡直径的增加,颗粒细胞的凋亡率呈现下降的趋势,表明卵巢移植可以降低卵泡颗粒细胞凋亡率。结论:同种异体卵巢移植卵巢发育良好,具用正常的分泌功能,可以降低卵泡颗粒细胞的凋亡率。 展开更多
关键词 鸭异 体卵巢移植 生殖激素水平 卵泡颗粒细胞 凋亡
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维生素D对牛卵巢卵泡颗粒细胞的影响 被引量:1
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作者 靳光 张元庆 +4 位作者 张喜忠 王曦 王栋材 李博 薛艳蓉 《中国草食动物科学》 CAS 2015年第3期19-22,共4页
试验旨在探寻具有生物活性的维生素D(1α,25-(OH)2D3)对体外培养的牛卵巢卵泡颗粒细胞的活力、增殖及雌激素分泌的影响。在体外培养的牛卵巢卵泡颗粒细胞中加入不同梯度的1α,25-(OH)2D3(0,1,10,100 n M),用CCK-8检测细胞活力,细胞计数... 试验旨在探寻具有生物活性的维生素D(1α,25-(OH)2D3)对体外培养的牛卵巢卵泡颗粒细胞的活力、增殖及雌激素分泌的影响。在体外培养的牛卵巢卵泡颗粒细胞中加入不同梯度的1α,25-(OH)2D3(0,1,10,100 n M),用CCK-8检测细胞活力,细胞计数检测增殖,ELISA法检测雌二醇浓度。结果表明:1、10、100 n M的1α,25-(OH)2D3均能提高卵泡颗粒细胞的活性,1α,25-(OH)2D3为100 n M时其刺激作用最强;10、100 n M的1α,25-(OH)2D3能刺激卵泡颗粒细胞增殖与雌二醇分泌,100 n M的1α,25-(OH)2D3刺激增殖作用最强,10 n M的1α,25-(OH)2D3刺激雌二醇分泌的能力最强。 展开更多
关键词 维生素D 卵泡颗粒细胞 细胞活力 增殖 雌二醇
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