不同等级牛卵丘-卵母细胞复合体体外成熟后卵母细胞发育能力差异的机制分析

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作者 王蕊 衡诺 +10 位作者 胡樱凡 王欢 朱妮 何维 轩秀丽 胡智辉 熊铿 巩建飞 郝海生 朱化彬 赵善江 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4432-4451,共20页

旨在探究不同等级牛卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)体外成熟后卵母细胞发育能力差异的分子机制。本试验以屠宰场卵巢来源的牛COCs为研究对象,参照国际胚胎技术学会手册根据卵丘细胞层数、卵丘细胞紧密程度和卵母... 旨在探究不同等级牛卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)体外成熟后卵母细胞发育能力差异的分子机制。本试验以屠宰场卵巢来源的牛COCs为研究对象,参照国际胚胎技术学会手册根据卵丘细胞层数、卵丘细胞紧密程度和卵母细胞细胞质外观将牛COCs分为一二级(较好)和三四级(较差)两组,每组3次重复,每个重复组含100枚以上COCs,进行体外成熟培养。本研究通过Smart-seq2技术对成熟前后的一二级和三四级COCs的卵母细胞进行了转录组测序并对差异基因进行了分析验证,利用非靶向代谢组学技术对不同级别COCs的培养液进行了差异代谢物分析。结果显示:1)三四级COCs的卵母细胞体外成熟、受精后的卵裂率和囊胚率(60.59%±6.54%,22.11%±2.79%)显著低于一二级(78.09%±3.01%,32.56%±4.33%,P<0.05);2)Smart-seq测序结果显示,体外成熟前一二级和三四级COCs的卵母细胞中共筛选出541个显著差异表达基因(DEGs),体外成熟22~24 h(体外成熟后)一二级和三四级卵母细胞中共筛选出860个显著DEGs,GO和KEGG富集分析结果显示,这些DEGs主要与糖代谢、氧化磷酸化信号通路相关;3)数字PCR结果显示,体外成熟前后三四级COCs的卵母细胞中糖酵解相关基因PKM和电子传递链复合物I相关抑制基因NDUFA4L2的拷贝数水平均显著低于一二级(P<0.01),体外成熟后三四级卵母细胞中电子供体生成相关基因IDH3α的拷贝数水平显著低于一二级(P<0.05);同样体外成熟前后三四级COCs的卵丘细胞中NDUFA4L2 mRNA表达水平显著低于一二级(P<0.05),但是PKM和IDH3αmRNA表达水平却显著高于一二级(P<0.05,P<0.01);4)代谢物分析结果显示,不同级别COCs的培养液中共鉴定出69种显著上调差异代谢物,71种显著下调差异代谢物,功能富集分析发现差异代谢物主要富集在三羧酸循环(TCA)、糖酵解/糖异生等代谢通路上,进一步对差异代谢物(α-D-葡萄糖、丙酮酸、乳酸)进行相对丰度分析发现三四级COCs成熟液中α-D-葡萄糖含量显著高于一二级(P<0.01)。5)在三四级COCs体外成熟液中添加糖酵解产物丙酮酸钠能够显著提高三四级COCs体外成熟、受精后的卵裂率(72.54%±4.79%vs.61.71%±4.75%)和囊胚率(30.63%±4.15%vs.22.72%±2.39%,P<0.05)。综上,本研究表明三四级COCs的卵母细胞体外成熟后发育能力差可能是由于其本身糖酵解活性较弱,加之其外围卵丘细胞能量底物供给不足,导致卵母细胞成熟时能量不足,发育能力受限;通过添加丙酮酸钠能够明显改善三四级COCs的卵母细胞体外成熟后发育能力,研究结果为提高COCs利用率和胚胎生产效率提供了理论依据。 展开更多

关键词 牛 卵丘卵母细胞复合体 体外成熟 糖代谢 丙酮酸钠

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生长分化因子9在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中的表达 被引量：6

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作者 欧阳效晴 杨淑青 +3 位作者 张春强 栗瑞兰 张通 张家新 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1569-1575,共7页

旨在探讨牛卵丘卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complex,COCs)体外成熟过程中生长分化因子9(Growth differentiation factor 9,GDF-9)基因表达和卵丘细胞扩展的关系。运用实时荧光定量PCR技术检测GDF-9基因在牛卵丘卵母细胞复合体体外... 旨在探讨牛卵丘卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complex,COCs)体外成熟过程中生长分化因子9(Growth differentiation factor 9,GDF-9)基因表达和卵丘细胞扩展的关系。运用实时荧光定量PCR技术检测GDF-9基因在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中(0、6、12、18、24和28h)的相对表达变化,同时观察了卵丘细胞扩展情况。结果表明,GDF-9mRNA的表达量在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中呈现一定的规律性变化,随着成熟培养的进行,其表达量逐渐增加,在成熟培养12h时表达量最高,但随后又逐渐降低,在成熟培养24h表达量最低;卵丘细胞在IVM 12h开始出现明显的扩散,而且随着成熟时间的延长,卵丘细胞的扩散程度在不断增加。研究结果表明:高水平的GDF-9mRNA表达与卵丘细胞开始扩散的时间一致,揭示GDF-9基因可能在牛卵丘细胞扩散和卵母细胞体外成熟过程中起着重要的作用。 展开更多

关键词 牛 卵丘卵母细胞复合体 GDF-9 体外成熟

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山羊GDF9基因在卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中的表达 被引量：7

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作者 郑爱燕 吴曼 +1 位作者 尚利青 丁家桐 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期671-677,共7页

本研究采用实时荧光定量PCR技术,从mRNA水平探讨了山羊卵丘卵母细胞复合体体外成熟(IVM)过程中(0、6、12、18、24和27h)GDF9基因的相对表达变化,分析其与卵丘细胞扩散之间的关系。结果表明,GDF9 mRNA在山羊卵丘卵母细胞复合体体外成熟... 本研究采用实时荧光定量PCR技术,从mRNA水平探讨了山羊卵丘卵母细胞复合体体外成熟(IVM)过程中(0、6、12、18、24和27h)GDF9基因的相对表达变化,分析其与卵丘细胞扩散之间的关系。结果表明,GDF9 mRNA在山羊卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中均有表达,且在成熟培养初期表达量较低,其表达峰值出现在IVM12h,与卵丘细胞开始扩散的时间一致,之后又有所下降。由此推测,GDF9基因在山羊卵丘扩散和卵母细胞体外成熟过程中起着重要的作用。 展开更多

关键词 山羊 GDF9 卵丘卵母细胞复合体 体外成熟 实时荧光定量PCR

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猪卵母细胞体外成熟的影响因素 被引量：2

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作者 华再东 郑新民 +3 位作者 魏庆信 许厚强 刘西梅 李莉 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期280-284,共5页

通过采集屠宰场废弃猪卵巢，体外分离和培养猪卵母细胞，探讨基础培养基、激素、卵泡直径大小及卵丘细胞层数对猪卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：改良TCM199（mTCM199）较NCSU-23培养猪卵母细胞成熟率显著提高（P〈0．05）；基础培... 通过采集屠宰场废弃猪卵巢，体外分离和培养猪卵母细胞，探讨基础培养基、激素、卵泡直径大小及卵丘细胞层数对猪卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：改良TCM199（mTCM199）较NCSU-23培养猪卵母细胞成熟率显著提高（P〈0．05）；基础培养基中添加PMSG、hcG和pFF，卵母细胞体外成熟率（80．63％）显著高于仅添加其中一种；从卵泡直径3～6mm和大于6mm卵泡获得的卵丘卵母细胞复合体（COCs），其体外培养成熟率（83．33％和76．43％）极显著高于卵泡直径在3mm以下获得的COCs成熟率（30．94％）；根据卵丘细胞层数把COCs分为A、B、C3级，其中A级和B级卵母细胞成熟率差异不显著，但都极显著高于C级卵母细胞的成熟率。 展开更多

关键词 猪 卵母细胞 体外成熟 卵丘卵母细胞复合体

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猪分级卵母细胞体外成熟时间规律的研究 被引量：2

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作者 华再东 郑新民 +6 位作者 魏庆信 许厚强 乔宪凤 刘西梅 李莉 肖红卫 王亚刚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第3期155-159,共5页

试验根据猪卵丘-卵母细胞复合体（COCs）的颗粒细胞层数,把COCs分成A、B、C和D级,A、B级用于体外分别培养24、32、38、44、48和54 h,C级用于体外分别培养24、32、38、44、48、54和60 h,观察它们不同时间排出极体数,然后将排出极体的卵... 试验根据猪卵丘-卵母细胞复合体（COCs）的颗粒细胞层数,把COCs分成A、B、C和D级,A、B级用于体外分别培养24、32、38、44、48和54 h,C级用于体外分别培养24、32、38、44、48、54和60 h,观察它们不同时间排出极体数,然后将排出极体的卵母细胞孤雌激活。结果发现,A和B级COCs培养48 h时成熟率最高（83.2%和78.0%）,明显高于同级水平培养24、32和38 h的成熟率;不同级别COCs体外培养相同时间,A与B级成熟率差异不显著（P〉0.05）,但二者与C级的成熟率差异显著（P〈0.05）;体外培养48 h COCs卵裂率最高（81.7%）,与培养38 h前的卵裂率差异显著（P〈0.05）。结果表明,A、B级卵母细胞更适于体外培养,能获得高的成熟率和卵裂率,COCs周围颗粒细胞对卵母细胞的成熟有显著影响;COCs培养38 h之前,部分虽能看到极体,但激活后卵裂率极低,说明卵母细胞并未真正成熟,通常通过排出极体判断卵母细胞成熟是不够准确的,COCs体外培养44~48 h是成熟的最佳时期,能为体细胞核移植提供大量优质的MⅡ期卵母细胞。 展开更多

关键词 卵丘-卵母细胞复合体 体外成熟 极体 孤雌激活

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猪卵母细胞极体排出的规律 被引量：1

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作者 刘西梅 华再东 +3 位作者 魏庆信 乔宪凤 李莉 肖红卫 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第24期5172-5174,5190,共4页

试验把猪卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complexes,COCs)于体外分别培养24、32、38、44、48和54 h,观察它们在不同时间排出的极体数,以研究体外卵母细胞排出极体的规律。结果表明,A级和B级的COCs培养48 h的极体排出率最高(83.2%和... 试验把猪卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complexes,COCs)于体外分别培养24、32、38、44、48和54 h,观察它们在不同时间排出的极体数,以研究体外卵母细胞排出极体的规律。结果表明,A级和B级的COCs培养48 h的极体排出率最高(83.2%和65.7%),明显高于同级水平培养24、32和38 h的;不同级别COCs体外培养相同时间后,A级与B级的极体排出率差异不显著(P﹥0.05),但两者与C级的差异显著(P﹤0.05)。由此可见,A级、B级COCs能获得高的极体排出率,培养48 h的极体排出达到高峰,排出过程呈现前期上升快、后期下降慢的变化趋势。 展开更多

关键词 猪 卵丘-卵母细胞复合体 体外成熟 极体

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孕晚期人未成熟卵母细胞的体外成熟:一种新的卵母细胞来源

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作者 石宇 龙晓林 +6 位作者 杜红姿 黄玉玲 黄青 杨建华 张伟良 刘见桥 许海燕 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1367-1371,共5页

目的探讨来源于孕晚期、自然周期及Gn刺激周期(包括超促排周期及IVM周期)的人未成熟卵母细胞体外成熟的差异及颗粒细胞对孕晚期卵母细胞体外成熟的影响。方法共获得未成熟卵母细胞1076枚,包括OCC633枚和DO453枚。其中OCC分为孕晚期组、... 目的探讨来源于孕晚期、自然周期及Gn刺激周期(包括超促排周期及IVM周期)的人未成熟卵母细胞体外成熟的差异及颗粒细胞对孕晚期卵母细胞体外成熟的影响。方法共获得未成熟卵母细胞1076枚,包括OCC633枚和DO453枚。其中OCC分为孕晚期组、自然周期组和IVM周期组;DO分为孕晚期组、自然周期组和超促排卵周期组;孕晚期来源的未成熟卵母细胞分为OCC组和DO组。所有未成熟卵母细胞体外成熟后,ICSI受精序贯培养,除IVM周期组行胚胎移植外,其余均培养至囊胚阶段。分别比较OCC和DO各组未成熟卵母细胞的成熟率、受精率、卵裂率和孕晚期组、自然周期组和超促排卵周期组的囊胚形成率,统计IVM周期组的移植周期妊娠率;比较孕晚期OCC组与DO组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率。结果OCC:孕晚期组、自然周期组及IVM周期组的体外成熟率分别为74.3%、76.9%和82.2%,孕晚期组与IVM周期组相比具有统计学差异;三组受精率、卵裂率相比,孕晚期组和自然周期组囊胚形成率相比均未见统计学差异,IVM周期组移植周期妊娠率为20%。DO:超促排卵周期组体外成熟率最高(86.0%),明显高于自然周期组(72.5%)和孕晚期组(72.7%),P<0.01;孕晚期组受精率、卵裂率、囊胚形成率分别为65.0%、83.3%和38.5%,与其他两组相比均亦未见统计学差异。孕晚期OCC组与DO组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率无差别。结论孕晚期来源的未成熟卵母细胞在体外具有同样的发育潜能,孕晚期捐献的卵母细胞可作为一种供卵来源;有无颗粒细胞并不影响孕晚期卵母细胞的发育能力。 展开更多

关键词 孕晚期 卵母细胞 体外成熟 精子注射 卵母细胞-卵丘复合体

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绵羊卵母细胞体外培养实验研究

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作者 左勇 朱欢 《新疆畜牧业》 2006年第6期24-26,共3页

本实验采集的屠宰绵羊卵母细胞分两批。一批分别以10～15℃,20～25℃,30～35℃运输;另一批分别采用16～18h,20～22h,24～26h,28～30h的体外成熟时间进行实验。卵母细胞由长距离运输运回实验室,经体外受精观察其体外培养发育情况,从而为... 本实验采集的屠宰绵羊卵母细胞分两批。一批分别以10～15℃,20～25℃,30～35℃运输;另一批分别采用16～18h,20～22h,24～26h,28～30h的体外成熟时间进行实验。卵母细胞由长距离运输运回实验室,经体外受精观察其体外培养发育情况,从而为确立长途运输卵巢体外培养的条件提供必要的实验依据。实验结果显示:在不同运输温度的卵母细胞中,温度为20～25℃时卵母细胞能够进行较好的发育,卵母细胞的成熟率为64.86%,囊胚率为34.58%;在不同体外成熟时间的卵母细胞中,时间为20～22h时卵母细胞能够较好的发育,卵母细胞的成熟率为62.79%,囊胚率为31.70%。 展开更多

关键词 羊 卵巢 卵丘-卵母细胞复合体 体外成熟 体外受精 体外培养

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ICR小鼠卵母细胞通过旁分泌机制促进排卵关键过程

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作者 杨光平 张心悦 +1 位作者 时兰英 苏友强 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1055-1059,共5页

目的:利用国内医学研究常用ICR品系小鼠,在构建用于研究卵母细胞-卵丘细胞交互作用培养模型的基础上,研究卵母细胞及其产生的旁分泌因子生长分化因子9(GDF9)和骨形态发生蛋白15(BMP15)对排卵过程中的关键事件——卵丘扩展的调控作用。方... 目的:利用国内医学研究常用ICR品系小鼠,在构建用于研究卵母细胞-卵丘细胞交互作用培养模型的基础上,研究卵母细胞及其产生的旁分泌因子生长分化因子9(GDF9)和骨形态发生蛋白15(BMP15)对排卵过程中的关键事件——卵丘扩展的调控作用。方法:通过显微手术制备摘除卵母细胞后的卵丘细胞复合体(OOX),并通过与卵母细胞共培养或GDF9和BMP15处理研究卵母细胞及其特异释放的旁分泌因子对表皮生长因子(EGF)诱导卵丘扩展过程的调控。结果 :成功构建了ICR小鼠OOX培养模型,发现卵母细胞及其释放的旁分泌因子GDF9和BMP15为EGF诱导卵丘扩展所必需。结论:ICR小鼠卵母细胞通过旁分泌机制促进排卵关键过程。 展开更多

关键词 卵丘细胞复合体 卵母细胞 排卵 ICR小鼠 女性生殖

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miRNA-205在猪卵母细胞成熟过程中表达规律及其调控作用的研究

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作者 陈超 李万宏 +4 位作者 孙丽娜 陈树雄 陈璐 李纯锦 周虚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期18-22,共5页

本试验旨在探索miRNA-205在猪卵母细胞成熟过程中表达规律及其调控功能。应用生物学软件TargetScan和microRNA.org对miRNA-205靶基因进行预测,利用实时荧光定量PCR方法分别检测miRNA-205及其靶基因在猪卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyt... 本试验旨在探索miRNA-205在猪卵母细胞成熟过程中表达规律及其调控功能。应用生物学软件TargetScan和microRNA.org对miRNA-205靶基因进行预测,利用实时荧光定量PCR方法分别检测miRNA-205及其靶基因在猪卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)成熟过程中0、24和48h表达量。结果表明,miRNA-205在猪COCs成熟过程中表达呈上升趋势,0h表达量最低,48h表达量最高。添加FSH、LH和EGF的成熟液组与成熟基液组相比,miRNA-205表达量显著下调,长正五聚蛋白(PTX3)表达量极显著上调(P<0.01),PTX3与miRNA-205的表达量呈负相关,卵丘细胞扩散标记基因肿瘤致死因子(TNFAIP6)和透明质酸合成酶(HAS2)的表达量极显著上调(P<0.01)。由此推断,miRNA-205保守序列可能与PTX3基因3′-UTR区特异性结合参与卵丘细胞扩散的调控。 展开更多

关键词 MIRNA 205 卵丘卵母细胞复合体 实时荧光定量PCR 卵母细胞成熟

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CYP11A1在牦牛不同级别卵泡及卵母细胞成熟过程中的表达 被引量：1

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作者 孙莹 王萌 +4 位作者 王靖雷 孙晓军 马睿 余四九 潘阳阳 《甘肃畜牧兽医》 2021年第4期42-47,共6页

目的:本研究旨在探索CYP11A1在牦牛卵泡发育过程及不同成熟阶段卵母细胞中的表达情况。方法:采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测CYP11A1在不同级别卵泡(0~3 mm、3~5 mm... 目的:本研究旨在探索CYP11A1在牦牛卵泡发育过程及不同成熟阶段卵母细胞中的表达情况。方法:采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测CYP11A1在不同级别卵泡(0~3 mm、3~5 mm、5~8 mm及大于8 mm)和不同阶段(未成熟、成熟12 h、成熟18 h及成熟24 h)体外成熟卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complex,COCs)中的表达定位。结果:CYP11A1基因在不同级别的卵泡中均有表达,卵泡大小为3~5 mm时,表达量最高,随卵泡不断扩张呈低水平表达,卵泡大小大于8 mm时,基因的表达量降为最低;在未成熟的COCs中相对表达量最低,成熟12 h的COCs中表达水平达到最高值,之后又呈现先下降后升高的趋势。IF检测结果显示CYP11A1在卵丘、卵母细胞中均有表达。结论:CYP11A1参与牦牛卵泡的扩张和卵母细胞的成熟过程,该结果有助于进一步研究CYP11A1在牦牛雌性生殖中的作用机制。 展开更多

关键词 牦牛 CYP11A1 卵泡液 卵丘-卵母细胞复合体 激素

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牛体外胚胎培养技术研究进展 被引量：1

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作者 许红喜 于治国 孙晓玉 《中国牛业科学》 2018年第2期64-66,共3页

为提高优秀淘汰牛的利用价值,国内外对牛体外胚胎培养技术做了大量研究,本文针对牛体外卵子获得方式、卵子体外成熟培养、成熟卵母细胞与冻精或性控冻精体外受精及受精卵体外培养发育到囊胚等关键技术的研究进展做一综述。

关键词 活体采卵 卵丘细胞卵母细胞复合体 体外受精 囊胚

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雪龙黑牛试管胚胎产业化生产培养方法的建立 被引量：2

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作者 许红喜 邢雪森 +3 位作者 王秀利 仇雪梅 刘雪江 吴蒙 《中国奶牛》 2012年第4期32-34,共3页

为充分利用雪龙兼松屠宰场废弃的优秀母牛卵巢,加速雪龙黑牛培育进程,满足高档牛肉市场需求,本文对胚胎生产体外受精3个关键技术环节进行了试验研究,共做了15批次试验,包括卵母细胞体外成熟培养的试验研究,卵母细胞体外受精试验研究以... 为充分利用雪龙兼松屠宰场废弃的优秀母牛卵巢,加速雪龙黑牛培育进程,满足高档牛肉市场需求,本文对胚胎生产体外受精3个关键技术环节进行了试验研究,共做了15批次试验,包括卵母细胞体外成熟培养的试验研究,卵母细胞体外受精试验研究以及受精卵体外培养试验研究。结果显示,卵母细胞的成熟率达98.6%,卵裂率为86.5%,囊胚发育率为36.8%。初步建立了一整套雪龙黑牛试管胚胎产业化生产培养方法和技术。 展开更多

关键词 卵母细胞卵丘细胞复合体 卵裂率 囊胚发育率:体外受精技术

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