南极假丝酵母脂肪酶B在黑曲霉中的表达及酶学性质研究

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作者 邵志伟 马佳欣 +4 位作者 李柱 栾贺然 张会 杜兴 李杰 《饲料博览》 2025年第2期27-34,共8页

为实现南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)在黑曲霉(Aspergillus niger)中的表达,研究选用黑曲霉高效分泌信号肽SglaA、SpepB和融合蛋白XynB分别构建3个CALB的表达载体,并转入黑曲霉TH-2(ΔasaA::pyrG)、TH-2(Δasa... 为实现南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)在黑曲霉(Aspergillus niger)中的表达,研究选用黑曲霉高效分泌信号肽SglaA、SpepB和融合蛋白XynB分别构建3个CALB的表达载体,并转入黑曲霉TH-2(ΔasaA::pyrG)、TH-2(ΔasaA::scerv29ΔprtT::pyrG)中,得到6株黑曲霉重组菌株。摇瓶发酵重组菌株并进行酶活力检测,发现以SglaA为信号肽的CALB酶活是以SpepB为信号肽酶活的105%和108%;以XynB为融合蛋白的CALB酶活是未融合XynB的114%~123%;敲除prtT的CALB重组菌株酶活是未敲除菌株酶活的102%~105%。以SglaA为信号肽,XynB为融合蛋白并转入TH-2(ΔasaA::scerv29ΔprtT::pyrG)的重组菌株酶活力较高,发酵至第12天为21.78±0.77 U·mL^(-1)。对重组CALB进行酶学性质分析,其最适温度为50℃,在30~50℃范围内温度能保持70%以上的相对酶活力;最适pH为8.0,在p H 6.0~8.0时较为稳定并且能保持80%左右的相对酶活力,Na^(+)、K^(+)和甘氨酸对CALB的酶活性产生了增强效果。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶B 黑曲霉 信号肽 酶活力

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南极假丝酵母脂肪酶B在毕赤酵母的表达及酶学性质研究 被引量：7

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作者 孙金鹏 钱圣一 +1 位作者 敬科举 卢英华 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期765-771,共7页

为提高南极假丝酵母脂肪酶B（Candida antarcticalipase B,CALB）的表达量,根据毕赤酵母（Pichia pastoris）密码子偏好性设计合成CALB基因,插入表达载体pPIC9K构建重组质粒pPIC9K-CALB.重组质粒转化毕赤酵母GS115,经过G418抗性筛选得... 为提高南极假丝酵母脂肪酶B（Candida antarcticalipase B,CALB）的表达量,根据毕赤酵母（Pichia pastoris）密码子偏好性设计合成CALB基因,插入表达载体pPIC9K构建重组质粒pPIC9K-CALB.重组质粒转化毕赤酵母GS115,经过G418抗性筛选得到多拷贝转化子.摇瓶发酵120 h后上清液酶活力达到46 U/mL,通过金属螯合层析纯化发酵液将CALB纯化了5.23倍,比活力达到856.7 U/mg,去糖基化实验显示重组CALB比野生型CALB大5 ku.实验考察了不同反应温度、pH值和金属离子对重组CALB活性和稳定性的影响,发现重组CALB最适反应温度和pH分别为30℃和6.5,在pH 5.0~8.0之间以及40℃以下有较好稳定性,金属离子（10 mmol/L）Ca2＋,Zn2＋,Mn2＋有助于CALB酶活力的提高,而Cu2＋,Ag＋,Fe3＋强烈抑制酶催化反应. 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶B 毕赤酵母 分泌表达 酶学性质

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表面展示南极假丝酵母脂肪酶B的毕赤酵母FM22发酵培养基响应面优化 被引量：3

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作者 陈明祥 谢万勇 +3 位作者 廖锡豪 陈家驹 韩双艳 林影 《中国酿造》 CAS 2012年第10期52-56,共5页

FM22培养基以丰富的氮源、较强的适应性等优势,适用于毕赤酵母发酵。为进一步对毕赤酵母发酵表达南极假丝酵母脂肪酶B进行优化,选取培养基中对其影响较大的CaSO4、KH2PO4、(NH4)2SO4、PTM4为自变量,酶活力为响应值。通过单因素试验得自... FM22培养基以丰富的氮源、较强的适应性等优势,适用于毕赤酵母发酵。为进一步对毕赤酵母发酵表达南极假丝酵母脂肪酶B进行优化,选取培养基中对其影响较大的CaSO4、KH2PO4、(NH4)2SO4、PTM4为自变量,酶活力为响应值。通过单因素试验得自变量最佳值及高低水平,再采用Box-Behnken组合设计方法,模拟二次多项式回归方程的预测模型,研究各自变量及其交互作用对酶活力的影响。最终得到自变量最佳值:KH2PO445.02g/L、(NH4)2SO45.63g/L、CaSO40.46g/L、PTM4 1.63mL/L,酶活力为3214.7U/gDCW,较优化前提高约40%。 展开更多

关键词 毕赤酵母表面展示系统 南极假丝酵母脂肪酶B FM22培养基 响应面优化

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南极假丝酵母Pseudozyma sp.JCC207的培养及其海藻糖提取工艺优化 被引量：2

4

作者 王帅 尹花 +3 位作者 任红霞 侯旭光 缪锦来 郑洲 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期206-211,共6页

本文研究了南极假丝酵母Pseudozyma sp.JCC207的培养条件,对其海藻糖的提取工艺进行优化。利用单因素实验研究了培养温度和初始p H对南极假丝酵母生长的影响,采用RSM分析法确定了三氯乙酸（TCA）法提取南极假丝酵母海藻糖的最优工艺。... 本文研究了南极假丝酵母Pseudozyma sp.JCC207的培养条件,对其海藻糖的提取工艺进行优化。利用单因素实验研究了培养温度和初始p H对南极假丝酵母生长的影响,采用RSM分析法确定了三氯乙酸（TCA）法提取南极假丝酵母海藻糖的最优工艺。结果表明其最适培养温度为25℃,起始p H为5-9范围内酵母生长情况差别不大;最优提取条件为：三氯乙酸浓度0.6 mol/L、体积15.20 mL、提取时间29 min;每克南极假丝酵母湿菌体中海藻糖的提取量为17.72 mg;功能实验表明,与甘油（20%）和二甲基亚砜（10%）等传统保种试剂相比,0.5%海藻糖溶液在短期内（5 d）对酵母具有更好的保种能力。 展开更多

关键词 南极假丝酵母 培养条件 海藻糖 提取工艺 优化

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南极假丝酵母产脂肪酶在15L发酵罐中培养条件的研究 被引量：4

5

作者 李燕妮 衣婷婷 李龙森 《化学与生物工程》 CAS 2007年第7期43-44,48,共3页

对15 L发酵罐中南极假丝酵母(C.antarctica DSM3855)的发酵工艺条件进行了研究,确定了最适的产酶工艺条件:搅拌速度为300 r.min-1,通气量为10 L.min-1,接种量为10%,添加GPE作为消泡剂。在此培养条件下,培养54 h产酶达到高峰值,最高酶活... 对15 L发酵罐中南极假丝酵母(C.antarctica DSM3855)的发酵工艺条件进行了研究,确定了最适的产酶工艺条件:搅拌速度为300 r.min-1,通气量为10 L.min-1,接种量为10%,添加GPE作为消泡剂。在此培养条件下,培养54 h产酶达到高峰值,最高酶活力达到19.3 U.mL-1。 展开更多

关键词 发酵 南极假丝酵母 发酵罐

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硫酸铵-丙酮协同沉淀法纯化南极假丝酵母产脂肪酶 被引量：3

6

作者 李燕妮 曹红光 《化学与生物工程》 CAS 2006年第5期36-37,48,共3页

采用硫酸铵-丙酮协同沉淀法,对南极假丝酵母产脂肪酶(CALB)进行了分离纯化研究。经正交实验确定纯化工艺为:向酶液中加入硫酸铵至饱和度45%的同时加入0.3倍酶液体积的丙酮;离心后再向上清液中加入硫酸铵至饱和度75%,分相后,相界面处沉... 采用硫酸铵-丙酮协同沉淀法,对南极假丝酵母产脂肪酶(CALB)进行了分离纯化研究。经正交实验确定纯化工艺为:向酶液中加入硫酸铵至饱和度45%的同时加入0.3倍酶液体积的丙酮;离心后再向上清液中加入硫酸铵至饱和度75%,分相后,相界面处沉淀即为脂肪酶粗品。经分离纯化后,酶活回收率为54%、纯化倍数为2.72。 展开更多

关键词 南极假丝酵母产脂肪酶 纯化 协同沉淀

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表面展示南极假丝酵母脂肪酶B的重组毕赤酵母高密度发酵条件优化 被引量：3

7

作者 冯琮 林影 +2 位作者 梁书利 苏国栋 韩双艳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期29-34,共6页

以Invitrogen公司提供的毕赤酵母发酵工艺手册为依据,先用摇瓶模拟甘油分批发酵,确定了表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarcticlipase B,CALB)的毕赤酵母在BSM培养基中生长所需几种重要配方的最佳浓度为:甘油含量40g/L、硫酸铵4... 以Invitrogen公司提供的毕赤酵母发酵工艺手册为依据,先用摇瓶模拟甘油分批发酵,确定了表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarcticlipase B,CALB)的毕赤酵母在BSM培养基中生长所需几种重要配方的最佳浓度为:甘油含量40g/L、硫酸铵4g/L、PTM14mL/L和CaSO410mmol/L;然后利用多功能补料摇床确定了菌株最适生长和产酶的pH分别为5.5和7.0,最适生长和产酶温度为30℃;再在2L发酵罐上放大,并对甘油流加模式和甲醇流加模式进行了优化筛选,确定了以9.6mL/(L.h)的流速流加甘油12h能有效提高菌体密度;以6.4mL/(L.h)的流速恒速流加甲醇比恒定溶氧流加甲醇诱导产酶更佳。最终单位菌体酶活力可达348.4U/g,比甘油含量40g/L、硫酸铵10g/L、PTM14.35mL/L、CaSO40.93g/L,以6.4mL/(L.h)的流速流加甘油4h和以恒定溶氧流加甲醇的未优化条件下提高34.8%。最后通过细胞表面荧光强度检测和全细胞催化合成活力对比,发现优化后单位菌体展示的蛋白表达量得到提高。 展开更多

关键词 发酵优化 酵母表面展示 南极假丝酵母脂肪酶B 高密度

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南极假丝酵母脂肪酶B在黑曲霉中的分泌表达及其硅藻土固定化应用 被引量：6

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作者 张玲敏 王斌 潘力 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第14期107-114,共8页

为提高南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)表达量,根据黑曲霉(Aspergillus niger)密码子偏好性设计合成CALB基因,以PnaII/tpi为启动子构建CALB表达载体并转化到黑曲霉HL-1中表达,摇瓶发酵120 h后上清液中重组CALB... 为提高南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)表达量,根据黑曲霉(Aspergillus niger)密码子偏好性设计合成CALB基因,以PnaII/tpi为启动子构建CALB表达载体并转化到黑曲霉HL-1中表达,摇瓶发酵120 h后上清液中重组CALB活力为171 U/mL。研究重组CALB的酶学性质,最适反应温度和pH值分别为50℃和8.0,在pH 6.0~9.0和45℃以下具有较高的稳定性,10 mmol/L Cu2+、Zn2+和0.1 g/100 mL十二烷基硫酸钠强烈抑制酶活力,而1 mmol/L Ca2+、0.1 g/100 mL山梨醇对酶活力具有非常明显的激活作用。此外,以硅藻土为载体固定CALB,固定化酶活力为187 U/g。将制备的硅藻土-CALB固定化酶用于生物合成己酸乙酯,经反应条件优化后在无溶剂体系中己酸乙酯产率达91%。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶B 黑曲霉 分泌表达 酶学性质 固定化 酯化

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黑曲霉表面展示南极假丝酵母脂肪酶B催化仲醇动力学拆分 被引量：2

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作者 李远锋 张锟 +3 位作者 韩双艳 郑穗平 梁书利 林影 《化学与生物工程》 CAS 2018年第5期53-58,共6页

光学活性仲醇是合成多种生物活性化合物的原料和关键中间体,微生物细胞表面展示酶在生物催化和生物转化制备生化产品等方面表现出良好的应用性。研究了黑曲霉表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)制备的全细... 光学活性仲醇是合成多种生物活性化合物的原料和关键中间体,微生物细胞表面展示酶在生物催化和生物转化制备生化产品等方面表现出良好的应用性。研究了黑曲霉表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)制备的全细胞催化剂(AN-CALB)动力学拆分仲醇的催化性能。以2-辛醇作为反应底物,研究了酰基供体、2-辛醇与乙酸异丙烯酯物质的量比、AN-CALB添加量、水活度、温度及溶剂对AN-CALB催化2-辛醇拆分的影响,确定最优反应条件为:以乙酸异丙烯酯为酰基供体、2-辛醇与乙酸异丙烯酯物质的量比1∶1、AN-CALB添加量50 g·L-1、水活度0.11、温度45℃、以甲苯为溶剂,在此条件下,反应12 h的底物转化率达47.4%,eep值为99.6%,E值大于600。在最优反应条件下,AN-CALB对8种仲醇均表现出较好的拆分效果,底物转化率最高接近50%。该研究为仲醇动力学拆分提供了新的催化剂选择。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶B 细胞表面展示 黑曲霉 全细胞催化剂 仲醇 动力学拆分

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南极假丝酵母脂肪酶B基因在大肠杆菌中的表达和发酵优化 被引量：7

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作者 吴蓉 曹佳睿 +3 位作者 曹君 刘飞翔 杨猛 苏二正 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期138-148,共11页

旨在利用大肠杆菌实现南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因的高效可溶性表达,并降低生产成本。构建带有不同信号肽的CALB基因表达质粒,转化至不同大肠杆菌宿主中,在摇瓶中进行基础培养基、诱导条件、培养基组成成分和进程曲线的优化。结果显... 旨在利用大肠杆菌实现南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因的高效可溶性表达,并降低生产成本。构建带有不同信号肽的CALB基因表达质粒,转化至不同大肠杆菌宿主中,在摇瓶中进行基础培养基、诱导条件、培养基组成成分和进程曲线的优化。结果显示,带有PelB信号肽的重组菌pET25b-CALB-1/Rosetta(DE3)在20℃下使用0.5%(W/V)乳糖在TY培养基中诱导表达效果最好,优化后的合成培养基成分为1.75%(W/V)山梨醇、2.25%(W/V)鱼蛋白胨、1%(W/V)安琪酵母提取物、0.75%(W/V)Na2HPO4。在摇瓶中诱导60 h后,CALB酶活力最高达到35.67 U/mL,相比于初始发酵酶活力提高了17.77倍,是目前大肠杆菌生产CALB的最高水平。成功地构建了大肠杆菌表达系统,经过系统优化后,CALB的高水平可溶性表达得以实现。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶B 大肠杆菌 可溶性表达 发酵优化

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用蛋白质工程技术提取和修饰南极假丝酵母脂肪酶B

11

作者 于丰海 李丽杰 杨丰科 《化学与生物工程》 CAS 2005年第12期5-7,共3页

从南极假丝酵母中提取的脂肪酶B,具有较高的对应异构体选择性,广泛应用在培养基中,作为不对称有机化学的生物催化剂。近年来,一系列组合蛋白质工程研究和扩展了南极假丝酵母脂肪酶的催化和物理特性。这些工程不但生产出了指定的催化剂,... 从南极假丝酵母中提取的脂肪酶B,具有较高的对应异构体选择性,广泛应用在培养基中,作为不对称有机化学的生物催化剂。近年来,一系列组合蛋白质工程研究和扩展了南极假丝酵母脂肪酶的催化和物理特性。这些工程不但生产出了指定的催化剂,还有助于阐明酶的结构-作用关系,并且有助于说明这些酶的对应异构体选择性。进一步的研究将在工程与酶的关系方面展开讨论。 展开更多

关键词 南极假丝酵母 脂肪酶B 蛋白质工程

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南极假丝酵母脂肪酶B在离子液体/超临界流体体系中的稳定性模拟

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作者 张静晓 张丽雷 +2 位作者 刘晓洁 吴小亮 徐璐 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期902-907,共6页

脂肪酶在离子液体/超临界流体体系中的结构稳定性是影响其活性的重要因素。本文采用分子动力学方法分别研究了南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)在离子液体CYPHOS IL-201/极性超临界流体CHF_3两相体系和离子液体CYPHOS IL-201/非极性超临界流体... 脂肪酶在离子液体/超临界流体体系中的结构稳定性是影响其活性的重要因素。本文采用分子动力学方法分别研究了南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)在离子液体CYPHOS IL-201/极性超临界流体CHF_3两相体系和离子液体CYPHOS IL-201/非极性超临界流体CO_2两相体系中的结构稳定性,揭示影响CALB结构稳定性的因素。研究结果表明,在超临界CHF_3中,CHF_3破坏蛋白维持α螺旋结构的氢键是蛋白结构不稳定的主要原因;在超临界CO_2中,CALB蛋白的结构紧密性降低,有序二级结构发生了变化,导致稳定性下降。离子液体和两种超临界流体均形成了两相体系,蛋白处于离子液体相中,离子液体不溶于超临界流体,但超临界流体部分进入离子液体相,降低了离子液体相的黏度。其中,相比于CYPHOS IL-201/CO_2体系,CYPHOS IL-201/CHF_3体系的黏度降低多。在离子液体CYPHOS IL-201与超临界流体(CHF_3、CO_2)形成的两相体系中,离子液体CYPHOS IL-201具有保护蛋白结构的作用,使CALB蛋白结构更加稳定。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶B 离子液体 超临界流体 分子模拟

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南极假丝酵母脂肪酶B的催化机理及应用前景 被引量：21

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作者 赵天涛 高静 李伟杰 《分子催化》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期155-160,共6页

关键词 南极假丝酵母脂肪酶 催化机理 影响因素 双底物抑制 应用

原文传递

CALA在毕赤酵母中的表达、纯化及酶学特性研究

14

作者 严慧玲 蓝东明 +1 位作者 王永华 杨博 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期175-181,共7页

将南极假丝酵母脂肪酶A(cala)基因克隆至组成型表达载体pGAPZαA中,电激转入X-33,获得高效表达的CALA酵母工程菌株。发酵液上清经超滤浓缩、硫酸铵沉淀和阴离子交换层析等步骤,获得纯化的重组CALA,其比酶活达384.90 U/mg。该酶最适温度... 将南极假丝酵母脂肪酶A(cala)基因克隆至组成型表达载体pGAPZαA中,电激转入X-33,获得高效表达的CALA酵母工程菌株。发酵液上清经超滤浓缩、硫酸铵沉淀和阴离子交换层析等步骤,获得纯化的重组CALA,其比酶活达384.90 U/mg。该酶最适温度为70℃,最适pH值为8.0。经50℃保温2 h,仍含有60%水解酶活力;在pH7.0和8.0溶液中比较稳定。经DMSO处理1 h,仍保持90%的活性;非离子型表面活性剂能提高CALA的酶活,金属离子在不同程度上抑制CA-LA的酶活。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶A 毕赤酵母 组成型表达 纯化 酶学性质

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毕赤酵母新启动子GCW14在细胞表面展示CALB中的应用 被引量：6

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作者 张轩薇 叶燕锐 +2 位作者 刘晓肖 鲁柳柳 林影 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期129-135,共7页

以毕赤酵母内源壁蛋白Gcwl4p为锚定蛋白,分别以新的内源组成型启动子P_(GCW14)与诱导型启动子P_(AOXI)、组成型启动子P_(GAP)和P_(TEF1)4种启动子将南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)展示于毕赤酵母细胞表面,通过检测4种重组细胞的CALB酶活比较... 以毕赤酵母内源壁蛋白Gcwl4p为锚定蛋白,分别以新的内源组成型启动子P_(GCW14)与诱导型启动子P_(AOXI)、组成型启动子P_(GAP)和P_(TEF1)4种启动子将南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)展示于毕赤酵母细胞表面,通过检测4种重组细胞的CALB酶活比较这4个启动子在毕赤酵母中的转录活性。结果显示,P_(GCW14)的启动子活性与P_(AOX1)相当,最高菌体酶活力分别在发酵48 h和168h时达到694.8 U/g(Dry cell weight)和684.3 U/g(Dry cell weight),以P_(GCW14)为启动子的重组菌产酶周期大大缩短;组成型启动子P_(GAP)和P_(TEF1)的最高菌体酶活分别在发酵24 h和168 h达到266.7 U/g(Dry cell weight)和449.2 U/g(Dry cell weight),可见P_(GCW14)的启动子活力性要高于P_(GAP)和P_(TEF1)。此外,以P_(GCW14)为启动子,利用壁蛋白Gcw14p自身的信号肽代替载体上的α-信号肽使重组菌的菌体酶活力提高了约4%。 展开更多

关键词 巴斯德毕赤酵母 启动子 南极假丝酵母脂肪酶B 酵母表面展示

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具协同催化效应的毕赤酵母全细胞催化生物柴油制备 被引量：1

16

作者 李锚 贺珧珈 +2 位作者 徐莉 张后今 闫云君 《应用化工》 CAS CSCD 2014年第8期1403-1407,共5页

以表面共展示具协同催化效应的南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)与嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)重组毕赤酵母全细胞作为催化剂催化生物柴油制备,考察了生物柴油制备条件,并进行了初步... 以表面共展示具协同催化效应的南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)与嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)重组毕赤酵母全细胞作为催化剂催化生物柴油制备,考察了生物柴油制备条件,并进行了初步优化。结果表明,共展示CALB与TLL脂肪酶毕赤酵母全细胞在叔丁醇介质体系中可有效催化生物柴油制备。冻干酵母细胞量0.31 g/g油,醇油摩尔比4∶1,温度35℃,反应36 h,生物柴油得率达86.25%。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶B 嗜热丝孢菌脂肪酶 表面展示 全细胞催化剂 生物柴油制备

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丙酮酸野生酵母菌的筛选及其生理生化特性研究 被引量：4

17

作者 袁辉 华子春 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第3期12-14,共3页

利用各种方法从来自苏锡地区的多种样品中广泛分离出 2 0 0种野生酵母 ,然后借助纸上层析 ,获得 13株具有纯丙酮酸生产能力的菌株。对其中 2株的生理生化特性展开了进一步研究 ,初步认为其中 1株性状类似南极洲假丝酵母 (Candidaantarct... 利用各种方法从来自苏锡地区的多种样品中广泛分离出 2 0 0种野生酵母 ,然后借助纸上层析 ,获得 13株具有纯丙酮酸生产能力的菌株。对其中 2株的生理生化特性展开了进一步研究 ,初步认为其中 1株性状类似南极洲假丝酵母 (Candidaantarctica) ,另 1株属光滑球拟酵母 (Torulopsisglabrata) 展开更多

关键词 丙酮酸 酵母 纸上层析 球拟酵母 南极注假丝酵母 生理生化特性 筛选

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MXR1基因对毕赤酵母工程菌代谢调控的影响

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作者 袁围 叶燕锐 林影 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期187-191,共5页

为了研究毕赤酵母中转录因子Mxr1p在毕赤酵母代谢调控中所起的作用,构建一株以南极假丝酵母脂肪酶B基因(CALB)作为报告基因,MXR1基因完全缺失的毕赤酵母基因工程菌株。将重组质粒pPIC9K-CALB转化毕赤酵母GS115,利用三丁酸甘油酯平板筛... 为了研究毕赤酵母中转录因子Mxr1p在毕赤酵母代谢调控中所起的作用,构建一株以南极假丝酵母脂肪酶B基因(CALB)作为报告基因,MXR1基因完全缺失的毕赤酵母基因工程菌株。将重组质粒pPIC9K-CALB转化毕赤酵母GS115,利用三丁酸甘油酯平板筛选得到分泌表达CALB的重组菌GS115/pPIC9K-CALB。通过重叠延伸PCR方法获得一段中间含有博来霉素抗性基因sh b le,两翼大约各有1 200 bp与毕赤酵母MXR1基因上下游同源的基因片段,将此片段用氯化锂法转化毕赤酵母细胞GS115/pPIC9K-CALB后,利用博来霉素抗性及CALB酶活力丧失双重筛选的方法得到一株MXR1基因完全缺失的毕赤酵母基因工程菌株。该菌株在以甲醇为唯一碳源的培养基中不生长,在以乙醇、葡萄糖或者甘油为唯一碳源的培养基中生长缓慢。结果表明转录Mxr1p因子在毕赤酵母中的多条代谢途径中起着关键性的作用,主要涉及甲醇、乙醇、甘油和葡萄糖等代谢途径。 展开更多

关键词 毕赤酵母 代谢调控 基因敲除 转录因子Mxr1p 南极假丝酵母 脂肪酶B

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PBS基共聚酯P(BS-co-PeD)和P(BS-co-GA)的降解差异性研究 被引量：3

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作者 张敏 马晓宁 +1 位作者 李成涛 赵冬 《陕西科技大学学报》 CAS 2018年第2期63-67,92,共6页

通过熔融缩聚法合成了PBS基共聚酯,即聚(丁二酸丁二醇-co-丁二酸戊二醇酯)(PBS-co-PeD)和聚(丁二酸丁二醇-co-戊二酸丁二醇酯)(PBS-co-GA).其热性能,结晶性能采用热重分析仪(TGA),示差扫描量热仪(DSC)和广角X射线衍射光谱仪(WAXD)测试.... 通过熔融缩聚法合成了PBS基共聚酯,即聚(丁二酸丁二醇-co-丁二酸戊二醇酯)(PBS-co-PeD)和聚(丁二酸丁二醇-co-戊二酸丁二醇酯)(PBS-co-GA).其热性能,结晶性能采用热重分析仪(TGA),示差扫描量热仪(DSC)和广角X射线衍射光谱仪(WAXD)测试.以南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarcticalipase B,CALB)为酶催化剂,在水相体系中研究了(PBS-co-PeD)和(PBS-co-GA)的降解差异性.研究结果表明,两种共聚酯的热稳定性优良,热分解温度均在300℃以上,但结晶度和玻璃化转变温度(Tg)均下降,24h后(PBS-co-30PeD)和(PBS-co-30GA)均可达到完全降解,5d后(PBS-co-20PeD)和(PBS-co-20GA)的质量损失率分别为85%和93%,表明(PBS-co-GA)的降解性能优于(PBS-co-PeD). 展开更多

关键词 聚丁二酸丁二醇酯 南极假丝酵母脂肪酶B 酶降解 降解差异性

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CALB与不同PBS基共聚酯P(BS-co-PeD)、P(BS-co-GA)的相互作用研究

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作者 张敏 马晓宁 +1 位作者 李成涛 赵冬 《陕西科技大学学报》 CAS 2018年第3期86-90,97,共6页

以南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)为酶催化剂,在水相体系中研究了自主合成的聚(丁二酸丁二醇-co-丁二酸戊二醇酯)(PBS-co-PeD)和聚(丁二酸丁二醇-co-戊二酸丁二醇酯)(PBS-co-GA)的降解性能的差异.酶降解实验表... 以南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)为酶催化剂,在水相体系中研究了自主合成的聚(丁二酸丁二醇-co-丁二酸戊二醇酯)(PBS-co-PeD)和聚(丁二酸丁二醇-co-戊二酸丁二醇酯)(PBS-co-GA)的降解性能的差异.酶降解实验表明,(PBS-co-GA)具有较优的降解性能,结合分子动力学模拟和分子对接模拟,探讨了脂肪酶对底物的容纳性以及结合自由能.分子模拟结果表明,BGAB-CALB氨基酸残基(140~148)处的RMSD值9.6明显高于PeDSPeD-CALB体系的7.3,结合自由能大小为BGAB-CALB>PeDSPeD-CALB>BSB-CALB,表明CALB均可有效催化两种共聚酯,且对(PBS-co-GA)具有更好的催化活性,与酶降解实验结论一致,说明分子模拟可有效辅助证明基础实验. 展开更多

关键词 聚丁二酸丁二醇酯 南极假丝酵母脂肪酶B 相互作用 分子模拟

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