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基于单B细胞筛选技术制备PRRSV N蛋白单克隆抗体
1
作者
李钰婷
王衡平
+2 位作者
李芳
周昕
王会岩
《中国兽医杂志》
北大核心
2025年第9期63-70,共8页
为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳(N)蛋白的单克隆抗体。本试验构建和鉴定重组表达质粒pET28a(+)-sumo-N,以原核表达并纯化的N蛋白免疫BALB/c小鼠,应用单B细胞筛选技术获得分泌针对N蛋白的特异性抗体的单B细胞,再经单细胞测...
为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳(N)蛋白的单克隆抗体。本试验构建和鉴定重组表达质粒pET28a(+)-sumo-N,以原核表达并纯化的N蛋白免疫BALB/c小鼠,应用单B细胞筛选技术获得分泌针对N蛋白的特异性抗体的单B细胞,再经单细胞测序获得抗体基因序列并构建真核表达质粒,利用中华仓鼠卵巢(CHO)细胞瞬时转染表达并筛选和纯化单克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其效价,蛋白质免疫印迹(WB)鉴定其特异性,生物膜干涉(BLI)技术测定其亲和力和表位分组。结果显示,N蛋白呈可溶性表达,分子量约34 kDa。基于单B细胞筛选技术筛选出5株单克隆抗体。5株单克隆抗体效价均大于10~5,均可与PRRSV N蛋白产生特异性反应,亲和力解离常数(Kd)分别为8.72×10^(-9)、1.41×10^(-8)、1.14×10^(-10)、1.00×10^(-12)和1.54×10^(-11)mol/L,且表位均不相同。本试验应用单B细胞筛选技术成功制备出抗PRRSV N蛋白的特异性单克隆抗体,为进一步研究PRRSV N蛋白的结构特性、功能作用以及建立高效且快速的PRRSV抗体检测方法提供参考。
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关键词
猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)
N蛋白
单
克隆抗体
单b细胞
筛选技术
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职称材料
利用单B细胞分选技术制备猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体及其在ELISA中的应用
被引量：
1
2
作者
马中元
郑君佐
+2 位作者
梁志博
潘丽
曾巧英
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第10期4579-4589,共11页
本研究旨在建立一种猪瘟病毒E2单抗竞争ELISA检测方法,用于评价猪瘟C株弱毒苗和E2亚单位疫苗的免疫效果。首先,构建猪瘟E2杆状病毒表达载体pFastBAC,通过悬浮培养SF9细胞高效表达E2蛋白;其次,用纯化的E2蛋白免疫BABL/c小鼠,通过流式分选...
本研究旨在建立一种猪瘟病毒E2单抗竞争ELISA检测方法,用于评价猪瘟C株弱毒苗和E2亚单位疫苗的免疫效果。首先,构建猪瘟E2杆状病毒表达载体pFastBAC,通过悬浮培养SF9细胞高效表达E2蛋白;其次,用纯化的E2蛋白免疫BABL/c小鼠,通过流式分选IgM-PE-/E2-APC+型单个B细胞。然后,利用半巢式PCR分别扩增E2特异性IgG抗体的重链和轻链,测序后将抗体重链及轻链构建到pCDNA3.1载体,再将构建好的质粒共转染至HEK-293细胞,制备猪瘟E2单克隆抗体。结果表明,本研究通过单B细胞分选技术获得的两株单克隆抗体,即mAb3A9(IgG1,kappa)和mAb4F7(IgG2a,lambda),分别识别猪瘟E2蛋白B细胞线性表位25GLTTTWKEYSHDLQL^(39)和259GNTTVKVHASDERGP^(273)。此外,用上述两株单克隆抗体及E2蛋白建立的单抗竞争ELISA检测方法,在血清样本检测过程中,均展现出优异的诊断敏感性(97.49%,95.97%)及特异性(96.08%,94.38%),该研究为我国猪瘟的逐步净化提供了有利的技术支撑。
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关键词
猪瘟
E2
单b细胞
表位
ELISA
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职称材料
基于单B细胞分选技术的单克隆抗体制备研究进展
3
作者
孙旭阳
《畜禽业》
2025年第9期12-15,共4页
针对抗体筛选效率低、表达系统依赖强等问题,结合现有研究,探讨单B细胞分选技术在抗体制备中的核心应用。在此基础上,提出推动单B细胞分选和人工智能技术深度融合、加强不同动物物种间分选体系的标准化研究、构建规模化的抗体制备产业...
针对抗体筛选效率低、表达系统依赖强等问题,结合现有研究,探讨单B细胞分选技术在抗体制备中的核心应用。在此基础上,提出推动单B细胞分选和人工智能技术深度融合、加强不同动物物种间分选体系的标准化研究、构建规模化的抗体制备产业链平台等建议,为提升兽医领域抗体研发效率和应用水平提供理论支持。
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关键词
单b细胞
分选技术
单
克隆抗体
中和抗体
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职称材料
题名
基于单B细胞筛选技术制备PRRSV N蛋白单克隆抗体
1
作者
李钰婷
王衡平
李芳
周昕
王会岩
机构
扬州大学兽医学院
吉林医药学院吉林省抗体工程科技协同创新中心
出处
《中国兽医杂志》
北大核心
2025年第9期63-70,共8页
基金
吉林省科技发展计划项目(20240404022ZP)。
文摘
为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳(N)蛋白的单克隆抗体。本试验构建和鉴定重组表达质粒pET28a(+)-sumo-N,以原核表达并纯化的N蛋白免疫BALB/c小鼠,应用单B细胞筛选技术获得分泌针对N蛋白的特异性抗体的单B细胞,再经单细胞测序获得抗体基因序列并构建真核表达质粒,利用中华仓鼠卵巢(CHO)细胞瞬时转染表达并筛选和纯化单克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其效价,蛋白质免疫印迹(WB)鉴定其特异性,生物膜干涉(BLI)技术测定其亲和力和表位分组。结果显示,N蛋白呈可溶性表达,分子量约34 kDa。基于单B细胞筛选技术筛选出5株单克隆抗体。5株单克隆抗体效价均大于10~5,均可与PRRSV N蛋白产生特异性反应,亲和力解离常数(Kd)分别为8.72×10^(-9)、1.41×10^(-8)、1.14×10^(-10)、1.00×10^(-12)和1.54×10^(-11)mol/L,且表位均不相同。本试验应用单B细胞筛选技术成功制备出抗PRRSV N蛋白的特异性单克隆抗体,为进一步研究PRRSV N蛋白的结构特性、功能作用以及建立高效且快速的PRRSV抗体检测方法提供参考。
关键词
猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)
N蛋白
单
克隆抗体
单b细胞
筛选技术
Keywords
porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRSV)
N protein
monoclonal anti
b
ody
single
b
cell screen⁃ing technology
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
利用单B细胞分选技术制备猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体及其在ELISA中的应用
被引量：
1
2
作者
马中元
郑君佐
梁志博
潘丽
曾巧英
机构
甘肃农业大学动物医学院
中国农业科学院兰州兽医研究所
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第10期4579-4589,共11页
基金
国家生猪技术创新中心战略重点研究项目(NCTIP-XD/C03)。
文摘
本研究旨在建立一种猪瘟病毒E2单抗竞争ELISA检测方法,用于评价猪瘟C株弱毒苗和E2亚单位疫苗的免疫效果。首先,构建猪瘟E2杆状病毒表达载体pFastBAC,通过悬浮培养SF9细胞高效表达E2蛋白;其次,用纯化的E2蛋白免疫BABL/c小鼠,通过流式分选IgM-PE-/E2-APC+型单个B细胞。然后,利用半巢式PCR分别扩增E2特异性IgG抗体的重链和轻链,测序后将抗体重链及轻链构建到pCDNA3.1载体,再将构建好的质粒共转染至HEK-293细胞,制备猪瘟E2单克隆抗体。结果表明,本研究通过单B细胞分选技术获得的两株单克隆抗体,即mAb3A9(IgG1,kappa)和mAb4F7(IgG2a,lambda),分别识别猪瘟E2蛋白B细胞线性表位25GLTTTWKEYSHDLQL^(39)和259GNTTVKVHASDERGP^(273)。此外,用上述两株单克隆抗体及E2蛋白建立的单抗竞争ELISA检测方法,在血清样本检测过程中,均展现出优异的诊断敏感性(97.49%,95.97%)及特异性(96.08%,94.38%),该研究为我国猪瘟的逐步净化提供了有利的技术支撑。
关键词
猪瘟
E2
单b细胞
表位
ELISA
Keywords
classic swine fever
E2
single
b
cells
epitopes
ELISA
分类号
S858.285.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
基于单B细胞分选技术的单克隆抗体制备研究进展
3
作者
孙旭阳
机构
天津农学院
出处
《畜禽业》
2025年第9期12-15,共4页
文摘
针对抗体筛选效率低、表达系统依赖强等问题,结合现有研究,探讨单B细胞分选技术在抗体制备中的核心应用。在此基础上,提出推动单B细胞分选和人工智能技术深度融合、加强不同动物物种间分选体系的标准化研究、构建规模化的抗体制备产业链平台等建议,为提升兽医领域抗体研发效率和应用水平提供理论支持。
关键词
单b细胞
分选技术
单
克隆抗体
中和抗体
分类号
S852.4 [农业科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于单B细胞筛选技术制备PRRSV N蛋白单克隆抗体
李钰婷
王衡平
李芳
周昕
王会岩
《中国兽医杂志》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
利用单B细胞分选技术制备猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体及其在ELISA中的应用
马中元
郑君佐
梁志博
潘丽
曾巧英
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
基于单B细胞分选技术的单克隆抗体制备研究进展
孙旭阳
《畜禽业》
2025
在线阅读
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职称材料
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