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抗人HBsAg单链抗体基因的构建及其在COS-7细胞中的表达被引量：5: 1; 作者温伟红赵晶 +4 位作者于翠娟许彦鸣金明王成济杨安钢《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期163-167,共5页; 目的 :构建抗人HBsAg单链抗体基因 ,并分析其在COS 7细胞中的表达。方法 :以从噬菌体抗体库中筛选的抗HBsAg的Fab抗体基因为模板 ,分别扩增其轻、重链可变区 (VL、VH)基因 ,通过重组PCR方法将轻、重链可变区基因用连接肽(Gly4Ser) 3的... 展开更多; 关键词乙型肝炎 HBSAG 单链抗体基因 COS-7细胞基因表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

优化重叠PCR法进行单链抗体基因扩增和点突变被引量：4: 2; 作者符勇耀李正国 +3 位作者李泮志邓伟杨迎伍王中康《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期150-155,共6页; 利用重叠PCR技术扩增单链抗体基因或位点突变是抗体文库构建或稳定表达的关键和难点，国内外文献未见其方法学的系统报道。以不同VH、VL和Linker基因为拼接模板进行重叠PCR，针对影响重叠PCR扩增的拼接类型，引物设计，反应条件等进行... 展开更多; 关键词重叠PCR 优化单链抗体基因点突变; 在线阅读下载PDF 职称材料

抗人红细胞单链抗体基因的构建及表达: 3; 作者操敏唐家琪 +3 位作者李光富王长军潘秀珍李先富《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2000年第2期81-85,共5页; 从分泌抗人红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞 3F5中提取总 RNA,逆转录成 c DNA,用合成的寡核苷酸引物通过 PCR扩增和克隆单抗的轻、重链可变区基因 ,用双脱氧核苷酸链终止法分析核苷酸序列 ,采用 PCR拼接法构建单链抗体基因 ,并插入原核表... 展开更多; 关键词 3F5单克隆抗体单链抗体基因基因工程 RBC; 在线阅读下载PDF 职称材料

抗牛精子sp18蛋白单链抗体基因的克隆及表达: 4; 作者杨树洪杨兴元 +2 位作者侯健安晓荣陈永福《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第8期37-40,共4页; 应用重组噬菌体抗体技术，从小鼠抗牛精子sp18蛋白的A5杂交瘤细胞系中分离总RNA，构建重组噬菌体抗体库。以牛精子作为包被抗原，经过三轮“亲和吸附-洗脱-扩增”淘选后，用phage-ELISA筛选出特异性阳性克隆。取其中特异结合牛精子细胞... 展开更多; 关键词抗牛精子 sp18 单链抗体基因克隆基因表达噬菌体展示; 在线阅读下载PDF 职称材料

抗HBs Ag单链Fab抗体基因酵母表达载体的构建被引量：3: 5; 作者邓宁粟宽源 +2 位作者王珣章杨林龙綮新《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期67-69,共3页; 采用重叠PCR技术 ,以抗乙肝表面抗原 (HBsAg)IgG铰链区基因为Linker将Fab抗体基因的重链和轻链连接起来 ,构成单链Fab基因。通过测序鉴定 ,克隆的单链Fab基因与理论上的完全一致 ,并成功构建含完整单链Fab基因的毕赤酵母 (P pastoris)... 展开更多; 关键词 HBsAg 单链Fab抗体基因重叠PCR 酵母表达载体载体构建人源性抗体乙肝表面抗原乙型肝炎病毒; 在线阅读下载PDF 职称材料

人源抗HBsAg单链抗体与干扰素嵌合基因的构建及表达被引量：1: 6; 作者周世水粟宽源 +2 位作者朱明军姚汝华余宙耀《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第8期27-30,41,共5页; 采用重叠PCR技术 ,将人源性抗HBsAg单链抗体基因与干扰素 γ 基因用柔性肽段碱基连接成单一基因 .序列测定结果表明 ,克隆的基因与理论上的一致 ,并将此基因成功构建到酵母表达载体pPICZαA上 ,进而转化到巴斯德毕赤酵母 (PichiaPastori... 展开更多; 关键词重叠PCR 人源抗HBsAg单链抗体-干扰素γ嵌合基因巴斯德毕赤酵母分泌表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名抗人HBsAg单链抗体基因的构建及其在COS-7细胞中的表达被引量：5: 1; 作者温伟红赵晶于翠娟许彦鸣金明王成济杨安钢; 机构第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期163-167,共5页; 基金国家杰出青年科学基金资助项目 (No.3992 50 36) 军队杰出中青年人才科研基金资助项目 (No .98J0 0 9) 国家高技术发展计划 (863)资助项目 (No.2 0 0 1AA2 1 71 0 1 ); 文摘目的 :构建抗人HBsAg单链抗体基因 ,并分析其在COS 7细胞中的表达。方法 :以从噬菌体抗体库中筛选的抗HBsAg的Fab抗体基因为模板 ,分别扩增其轻、重链可变区 (VL、VH)基因 ,通过重组PCR方法将轻、重链可变区基因用连接肽(Gly4Ser) 3的编码序列连接 ,并引入前导肽编码序列 ,构建具有L VH Linker VL 结构的单链抗体基因。将所构建的单链抗体基因克隆入绿色荧光蛋白 (GFP)融合表达载体pEGFP N3,并转染COS 7细胞进行表达。结果 :经测序表明 ,前导肽、连接肽、VL 及VH 的序列正确。酶切鉴定证实 ,成功地构建了GFP基因融合表达载体。瞬时转染COS 7细胞后 ,通过荧光显微镜观察证实有ScFv融合蛋白的表达。转染细胞的培养上清浓缩后 ,进行SDS PAGE及Westernblot分析 ,可检出ScFv融合蛋白的分泌性表达。培养上清的间接ELISA检测证实 ,所表达的单链抗体具有与HBsAg结合的特异性。结论 :成功地构建了抗人HBsAg单链抗体基因 ,并可在COS; 关键词乙型肝炎 HBSAG 单链抗体基因 COS-7细胞基因表达; Keywords single chain antibody expression hepatitis B HBsAg; 分类号 R512.62 [医药卫生—内科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名优化重叠PCR法进行单链抗体基因扩增和点突变被引量：4: 2; 作者符勇耀李正国李泮志邓伟杨迎伍王中康; 机构重庆大学生物工程学院基因工程研究中心重庆市高校功能基因与调控新技术重点实验室重庆市杀虫真菌农药工程技术研究中心; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期150-155,共6页; 基金重庆市科委自然基金重点项目(2007BA1005); 文摘利用重叠PCR技术扩增单链抗体基因或位点突变是抗体文库构建或稳定表达的关键和难点，国内外文献未见其方法学的系统报道。以不同VH、VL和Linker基因为拼接模板进行重叠PCR，针对影响重叠PCR扩增的拼接类型，引物设计，反应条件等进行优化。结果表明两段重叠连接比三段更容易实现，且扩增效果好；引物的互补序列长度一般应大于15bp，且在18—24bp时扩增效果最好；退火温度在52—600C，Mg^2＋浓度在1．5—2．5mM时对拼接的效果影响较小；直接或间接使用拼接模板均可以实现重叠PCR的扩增。利用优化策略，首次构建了抗除虫菊酯的scFv基因文库并引入抗XAC糖蛋白scFv基因的点突变，为除虫菊酯抗体文库构建和抗XAC重组抗体的稳定表达奠定了基础。; 关键词重叠PCR 优化单链抗体基因点突变; Keywords Overlap PCR Optimization Single chain Fvsgene Site-directed mutagenesis; 分类号 Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名抗人红细胞单链抗体基因的构建及表达: 3; 作者操敏唐家琪李光富王长军潘秀珍李先富; 机构南京军区军事医学研究所; 出处《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2000年第2期81-85,共5页; 基金国家自然科学基金!资助项目 (396 70 6 45 ); 文摘从分泌抗人红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞 3F5中提取总 RNA,逆转录成 c DNA,用合成的寡核苷酸引物通过 PCR扩增和克隆单抗的轻、重链可变区基因 ,用双脱氧核苷酸链终止法分析核苷酸序列 ,采用 PCR拼接法构建单链抗体基因 ,并插入原核表达载体 PEt- 2 8a,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经 IPTG诱导后表达 .序列分析表明所克隆的 VL、VH分别属于鼠 Ig Kappa轻链 IV亚组和 Ig重链亚组 .VH、VL基因均含正确的框架结构 ,构建的单链抗体基因全长 750 bp,在原核系统中的表达产物经 SDS- PAGE分析相对分子量约为 2 80 0 0 .; 关键词 3F5单克隆抗体单链抗体基因基因工程 RBC; Keywords anti humun RBC monoclonal antibody variable gene sequence analysis ScFv gene expression; 分类号 R392.11 [医药卫生—免疫学] Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名抗牛精子sp18蛋白单链抗体基因的克隆及表达: 4; 作者杨树洪杨兴元侯健安晓荣陈永福; 机构中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京; 出处《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第8期37-40,共4页; 文摘应用重组噬菌体抗体技术，从小鼠抗牛精子sp18蛋白的A5杂交瘤细胞系中分离总RNA，构建重组噬菌体抗体库。以牛精子作为包被抗原，经过三轮“亲和吸附-洗脱-扩增”淘选后，用phage-ELISA筛选出特异性阳性克隆。取其中特异结合牛精子细胞的重组噬菌体抗体pCSA1克隆进行序列测定。将其ScFv(single chain fragment variable)因克隆到pET-30a(+)上，用IPTG进行诱导表达，成功得到了抗sp18单链抗体基因蛋白。; 关键词抗牛精子 sp18 单链抗体基因克隆基因表达噬菌体展示; 分类号 Q954.434 [生物学—动物学] Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名抗HBs Ag单链Fab抗体基因酵母表达载体的构建被引量：3: 5; 作者邓宁粟宽源王珣章杨林龙綮新; 机构中山大学生物医药中心∥生物防治国家重点实验室空军广州医院传染病研究中心; 出处《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期67-69,共3页; 基金广州市科委重点攻关资助项目 (97-Z - 6 5 - 0 5 ); 文摘采用重叠PCR技术 ,以抗乙肝表面抗原 (HBsAg)IgG铰链区基因为Linker将Fab抗体基因的重链和轻链连接起来 ,构成单链Fab基因。通过测序鉴定 ,克隆的单链Fab基因与理论上的完全一致 ,并成功构建含完整单链Fab基因的毕赤酵母 (P pastoris)表达载体。; 关键词 HBsAg 单链Fab抗体基因重叠PCR 酵母表达载体载体构建人源性抗体乙肝表面抗原乙型肝炎病毒; Keywords overlap PCR single chain Fab yeast vector system construction of vector; 分类号 Q782 [生物学—分子生物学] R373.2 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人源抗HBsAg单链抗体与干扰素嵌合基因的构建及表达被引量：1: 6; 作者周世水粟宽源朱明军姚汝华余宙耀; 机构华南理工大学食品与生物工程学院空军广州医院传染病研究中心; 出处《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第8期27-30,41,共5页; 基金广州市科委重点攻关项目 (97 Z 6 5 0 5 ); 文摘采用重叠PCR技术 ,将人源性抗HBsAg单链抗体基因与干扰素 γ 基因用柔性肽段碱基连接成单一基因 .序列测定结果表明 ,克隆的基因与理论上的一致 ,并将此基因成功构建到酵母表达载体pPICZαA上 ,进而转化到巴斯德毕赤酵母 (PichiaPastoris)X33中 .筛选出的菌落经甲醇诱导培养 ,对上清液进行SDS PAGE和WESTERNBLOT分析 ,在 4 20 0 0处可见蛋白表达带。; 关键词重叠PCR 人源抗HBsAg单链抗体-干扰素γ嵌合基因巴斯德毕赤酵母分泌表达; Keywords overlap PCR HBscFv-IFNγ Pichia pastoris secretory expression; 分类号 R392.1 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	抗人HBsAg单链抗体基因的构建及其在COS-7细胞中的表达	温伟红赵晶于翠娟许彦鸣金明王成济杨安钢	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2003	5	在线阅读下载PDF 职称材料
2	优化重叠PCR法进行单链抗体基因扩增和点突变	符勇耀李正国李泮志邓伟杨迎伍王中康	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2009	4	在线阅读下载PDF 职称材料
3	抗人红细胞单链抗体基因的构建及表达	操敏唐家琪李光富王长军潘秀珍李先富	《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD	2000	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	抗牛精子sp18蛋白单链抗体基因的克隆及表达	杨树洪杨兴元侯健安晓荣陈永福	《高技术通讯》 EI CAS CSCD	2004	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	抗HBs Ag单链Fab抗体基因酵母表达载体的构建	邓宁粟宽源王珣章杨林龙綮新	《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2002	3	在线阅读下载PDF 职称材料
6	人源抗HBsAg单链抗体与干扰素嵌合基因的构建及表达	周世水粟宽源朱明军姚汝华余宙耀	《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心	2003	1	在线阅读下载PDF 职称材料