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棉花单脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆及原核表达 被引量:6
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作者 钱雯婕 王斐 +2 位作者 石峰 葛娟 李鸿彬 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期118-122,共5页
以棉花纤维组织为材料,根据NCBI棉花EST数据库中MDAR基因序列的已知信息,利用5′-RACE获得GhMDAR基因全长。结果显示,该基因开放读码框为1 305bp,编码包含435个氨基酸的蛋白质,分子质量约为52ku。构建原核表达载体pET28a-GhMDAR并转化... 以棉花纤维组织为材料,根据NCBI棉花EST数据库中MDAR基因序列的已知信息,利用5′-RACE获得GhMDAR基因全长。结果显示,该基因开放读码框为1 305bp,编码包含435个氨基酸的蛋白质,分子质量约为52ku。构建原核表达载体pET28a-GhMDAR并转化大肠杆菌,经过测序和酶切鉴定后,成功构建重组体pET28a-GhMDAR;将重组体导入大肠杆菌BL21诱导表达,经过SDS-PAGE分析,显示成功获得分子质量为52ku左右的诱导表达蛋白GhMDAR。 展开更多
关键词 棉花纤维 单脱氢抗坏血酸还原酶基因 5′-RACE克隆 原核表达
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大豆脱氢抗坏血酸还原酶基因的电子克隆及进化分析 被引量:13
2
作者 李晓晓 李蕊 +2 位作者 李雅轩 蔡民华 胡英考 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期45-50,共6页
利用生物信息学和实验验证的技术路线,以拟南芥脱氢抗坏血酸还原酶基因cDNA序列为信息探针,对大豆EST数据库进行同源搜索,经同源性比对和序列组装,获得全长为955bp的大豆脱氢抗坏血酸还原酶基因的cDNA序列(GenBank登录号为DQ006810),经R... 利用生物信息学和实验验证的技术路线,以拟南芥脱氢抗坏血酸还原酶基因cDNA序列为信息探针,对大豆EST数据库进行同源搜索,经同源性比对和序列组装,获得全长为955bp的大豆脱氢抗坏血酸还原酶基因的cDNA序列(GenBank登录号为DQ006810),经RT-PCR扩增,分子克隆和序列分析验证,结果表明与电子克隆完全一致。该cDNA序列具有完整的开放阅读框架(ORF,36bp-815bp),推测编码蛋白为259个氨基酸。通过与几种植物脱氢抗坏血酸还原酶蛋白序列的比较,发现该基因具有较高的保守性。结果表明根据物种间同源基因序列,对跨物种间EST数据库进行同源检索筛选,拼接,是新基因克隆的一条有效途径。 展开更多
关键词 大豆 电子克隆 RT-PCR抗坏血酸还原酶(DHAR) EST
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棉花脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆、原核表达与纯化 被引量:14
3
作者 李学宁 杜军伟 李鸿彬 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2010年第5期542-545,共4页
为进一步探讨脱氢抗坏血酸还原酶的生物学功能,克隆棉花的脱氢抗坏血酸还原酶基因,对该基因进行了原核表达,并对重组蛋白进行纯化和分析。通过RT-PCR方法扩增脱氢抗坏血酸还原酶基因全长,利用BamH I和Xhol I酶切位点将其克隆至组氨酸(hi... 为进一步探讨脱氢抗坏血酸还原酶的生物学功能,克隆棉花的脱氢抗坏血酸还原酶基因,对该基因进行了原核表达,并对重组蛋白进行纯化和分析。通过RT-PCR方法扩增脱氢抗坏血酸还原酶基因全长,利用BamH I和Xhol I酶切位点将其克隆至组氨酸(histidine,His)融合蛋白表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经异丙基硫代--βD-半乳糖苷(isopropy--βD-5-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,用SDS-PAGE鉴定表达产物,并用亲和层析柱纯化重组表达的pET28a-DHAR蛋白。结果表明:重组体PET28a-DHAR经测序和酶切鉴定证实构建成功。导入大肠杆菌BL21进行表达,SDS-PAGE分析目的蛋白高效表达,相对分子量为26 kD左右,并获得了纯化的His-DHAR融合蛋白。 展开更多
关键词 棉花 抗坏血酸还原酶基因 克隆 原核表达
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苹果脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因cDNA片段的克隆及序列分析 被引量:3
4
作者 张燕子 马锋旺 +1 位作者 张军科 梁东 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第1期179-183,共5页
以皇家嘎拉苹果叶片为材料提取总RNA,合成cDNA第一链后,先利用巢式PCR获得苹果脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因中间片段,再利用3-′RACE方法进一步获得3′末端核酸序列,共得到840 bp包含完整3′末端的DHAR基因cDNA片段,其序列与烟草、水... 以皇家嘎拉苹果叶片为材料提取总RNA,合成cDNA第一链后,先利用巢式PCR获得苹果脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因中间片段,再利用3-′RACE方法进一步获得3′末端核酸序列,共得到840 bp包含完整3′末端的DHAR基因cDNA片段,其序列与烟草、水稻、番茄中DHAR基因序列的同源性均大于70%,证明所克隆到的核苷酸片段确为苹果DHAR基因cDNA片段。 展开更多
关键词 苹果 抗坏血酸还原酶 克隆 3'-RACE 序列分析
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哈密瓜脱氢抗坏血酸还原酶基因的鉴定及冷胁迫表达分析 被引量:4
5
作者 宋文 张琴 +4 位作者 宁明 周发科 杨新泉 单春会 唐凤仙 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第2期117-125,共9页
为阐明哈密瓜脱氢抗坏血酸还原酶(dehydroascorbate reductase,DHAR)基因的基本性质及在响应冷胁迫过程中的表达水平,基于生物信息学对2个哈密瓜DHAR基因(CmDHAR)的基本信息、多序列比对、系统进化关系、共线性关系、基因结构域特征、... 为阐明哈密瓜脱氢抗坏血酸还原酶(dehydroascorbate reductase,DHAR)基因的基本性质及在响应冷胁迫过程中的表达水平,基于生物信息学对2个哈密瓜DHAR基因(CmDHAR)的基本信息、多序列比对、系统进化关系、共线性关系、基因结构域特征、蛋白质三级结构、蛋白质-蛋白质相互作用及冷胁迫下的抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)含量、DHAR活力、DHAR基因的表达水平及其基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)进行研究。结果表明,2个CmDHAR编码蛋白氨基酸的长度分别为297 aa与206 aa,等电点分别为8.67与5.99,分子质量为33 082.9 Da与22 891.6 Da。多序列比对结果表明CmDHAR基因具有保守性较高的谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)-N端功能结构域。基因结构分析结果表明CmDHAR包含6个外显子、6个保守基序、3类顺式作用元件。共线性分析表明哈密瓜与西葫芦、笋瓜和南瓜在物种进化过程中更为接近。蛋白质三级结构预测CmDHAR2主要包含α-螺旋、无规卷曲、延伸链和β-转角等。蛋白互作分析表明CmDHAR家族蛋白与哈密瓜其他GST家族蛋白之间联系紧密。冷胁迫下耐冷型哈密瓜"伽师瓜-310"中的AsA含量、DHAR活力及CmDHAR基因表达量明显高于不耐冷型的"金皇后-308"。GSEA结果表明CmDHAR基因参与结构分子活性、大分子复合物、细胞膜封闭内腔以及抗氧化活性等生物过程。本研究阐明了CmDHAR的生物信息学特点,证明了DHAR基因在哈密瓜抵御冷胁迫过程中的重要性。 展开更多
关键词 哈密瓜 谷胱甘肽-S-转移酶 抗坏血酸还原酶 冷胁迫
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猕猴桃果实L-半乳糖内酯脱氢酶和脱氢抗坏血酸还原酶cDNA片段的克隆与序列分析 被引量:11
6
作者 牛歆雨 雷玉山 +2 位作者 梁东 马锋旺 王西锐 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第12期57-62,共6页
克隆猕猴桃果实L-半乳糖内酯脱氢酶(GalLDH)和脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因,可为揭示猕猴桃高抗坏血酸(AsA)含量的分子机制奠定基础。研究以猕猴桃果实为材料提取总RNA,采用RT-PCR法,克隆出L-GalLDH基因的cDNA片段857 bp和DHAR基因的c... 克隆猕猴桃果实L-半乳糖内酯脱氢酶(GalLDH)和脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因,可为揭示猕猴桃高抗坏血酸(AsA)含量的分子机制奠定基础。研究以猕猴桃果实为材料提取总RNA,采用RT-PCR法,克隆出L-GalLDH基因的cDNA片段857 bp和DHAR基因的cDNA片段594 bp并测序,根据测序结果推测其氨基酸序列,并与刺梨、拟南芥、花椰菜、甘薯和草莓等植物的GalLDH基因和DHAR基因氨基酸序列进行亲缘分析。结果表明,猕猴桃GalLDH基因氨基酸序列和核苷酸序列与刺梨的相似性高达88%,其在同源基因进化关系树中单独聚为一类;DHAR基因氨基酸序列和核苷酸序列与苹果的相似性高达98%和99%,两者在进化关系上聚为一类。可知克隆到的2个核苷酸片段确为猕猴桃L-GalLDH和DHAR基因cDNA片段,同源基因植物亲缘关系聚类与传统的形态分类有一定的差异。 展开更多
关键词 猕猴桃 L-半乳糖内酯酶(GalLDH) 抗坏血酸还原酶(DHAR) 维生素C 基因克隆
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植物脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)研究进展 被引量:8
7
作者 侯艳霞 张文鑫 +2 位作者 杨婧 李小艳 郭艳 《农业技术与装备》 2017年第2期28-29,32,共3页
脱氢抗坏血酸还原酶是AsA-GSH循环中能够促进抗坏血酸再生的关键酶。文章从植物脱氢抗坏血酸还原酶的发现、功能及分子生物学等方面的研究进展作一综述,以期为该酶的深入研究及其合理利用提供参考。
关键词 植物 抗坏血酸还原酶 研究
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7-脱氢胆固醇还原酶基因沉默对体外培养小鼠腭突融合的影响
8
作者 肖文林 庄翠竹 +2 位作者 时艳 许尧祥 薛令法 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期29-34,共6页
目的通过RNA干扰抑制7-脱氢胆固醇还原酶(Dhcr7)基因在培养腭突中的表达,研究Dhcr7基因对腭突融合的影响。方法根据C57BL/6J小鼠Dhcr7基因特异性的siRNA序列构建pAdTrack-CMV-siDhcr7,阳性克隆的pAdTrack-CMV-siDhcr7质粒进行体外重组,... 目的通过RNA干扰抑制7-脱氢胆固醇还原酶(Dhcr7)基因在培养腭突中的表达,研究Dhcr7基因对腭突融合的影响。方法根据C57BL/6J小鼠Dhcr7基因特异性的siRNA序列构建pAdTrack-CMV-siDhcr7,阳性克隆的pAdTrack-CMV-siDhcr7质粒进行体外重组,筛选出抗卡那霉素的重组腺病毒p Ad Easy-1-siDhcr7质粒,酶切后制备腺病毒载体DNA转染胚胎腭突。取妊娠13.5 d的小鼠胚胎腭突共30对随机分为3组,每组10对。正常对照组、空白腺病毒对照组和实验组均用不含胆固醇培养基培养腭突,其中空白腺病毒对照组加入空白腺病毒,实验组加入Dhcr7siRNA腺病毒。培养48 h后固定腭突并提取Dhcr7 mRNA和蛋白,采用扫描电子显微镜(SEM)观察腭突融合情况,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分析Dhcr7 mRNA和蛋白的含量。结果 SEM检测显示,正常对照组和空白腺病毒对照组在培养48 h时两侧腭突融合,形成连续的上腭;而实验组几乎没有生长,两侧腭突之间有很宽的裂隙。RT-PCR和Western blot检测显示,实验组Dhcr7 mRNA和蛋白表达与正常对照组和空白腺病毒对照组相比均明显减少,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Dhcr7基因在腭突中的表达下调后,腭突融合失败,说明Dhcr7基因在腭突正常发育融合中起一定的作用。 展开更多
关键词 7-胆固醇还原酶 小鼠 腭突 器官培养 基因沉默
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24-脱氢胆固醇还原酶基因转基因小鼠血生化指标分析
9
作者 全雄志 董伟 +1 位作者 曹兴水 张连峰 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第1期36-40,共5页
目的建立全身表达24-脱氢胆固醇还原酶基因(Dhcr24)转基因小鼠动物模型,研究该基因过表达对小鼠代谢的影响。方法RT-PCR法克隆小鼠Dhcr24基因,把该基因插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立Dhcr24转基因小鼠。PCR鉴... 目的建立全身表达24-脱氢胆固醇还原酶基因(Dhcr24)转基因小鼠动物模型,研究该基因过表达对小鼠代谢的影响。方法RT-PCR法克隆小鼠Dhcr24基因,把该基因插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立Dhcr24转基因小鼠。PCR鉴定Dhcr24转基因小鼠的基因型,RT-PCR和Western Blot检测基因表达水平,血生化检测仪检测转基因小鼠血生化指标的改变。结果建立了2个不同表达水平的Dhcr24转基因小鼠品系,转入的Dhcr24基因在肝和脾组织中的表达高于内源的Dhcr24。血生化检测证实:乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)和血肌酐(SCr)较野生型小鼠明显降低,而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)和碱性磷酸酶(ALP)较野生型小鼠明显增加,并且Dhcr24转基因雌鼠的体重比野生型小鼠明显降低,均有显著差异。但Dhcr24转基因雄鼠各项指标与野生型小鼠相比没有显著差异。结论成功建立了全身表达Dhcr24转基因小鼠,并证实Dhcr24基因对雌性小鼠的体重和血生化指标,包括LDH,TP,Alb,SCr,HDL-c and ALP具有明显的影响。 展开更多
关键词 24-胆固醇还原酶 基因小鼠 血生化指标
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辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的表达与多克隆抗体制备 被引量:1
10
作者 刘戈飞 宋旭红 +2 位作者 梁斌 杜昆 黄东阳 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期227-229,共3页
目的制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)多克隆抗体。方法应用大肠杆菌BL21-AI表达NRDR,制备NRDR包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的重组NRDR作为免疫原,采用肩胛骨下注射作为免疫途径免疫兔。斑点杂交测定抗血清效价,HiTrapProte... 目的制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)多克隆抗体。方法应用大肠杆菌BL21-AI表达NRDR,制备NRDR包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的重组NRDR作为免疫原,采用肩胛骨下注射作为免疫途径免疫兔。斑点杂交测定抗血清效价,HiTrapProteinG柱纯化兔IgG,免疫印迹鉴定抗体特异性。结果BL21-AI对NRDR进行了高效表达。回收的NRDR蛋白溶液的浓度为0.36mg/ml,回收率为48.5%。所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清,血清的效价是1∶500,检测极限是8ngNRDR蛋白。纯化后的NRDR抗体具有较高的免疫活性和特异性。结论建立了高效制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶多克隆抗体的方法。 展开更多
关键词 辅酶Ⅱ依赖性视黄醇/还原酶 基因表达 多克隆抗体 免疫
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人宫颈癌细胞辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶选择性剪接新亚型的表达及多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 宋旭红 梁斌 +3 位作者 刘戈飞 谢健平 李蕊 黄东阳 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期983-986,共4页
目的制备宫颈鳞癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)选择性剪接新亚型NRDRB1多克隆抗体,为NRDRB1的功能研究奠定基础。方法扩增NRDRB1开放阅读框,重组入Gateway原核表达系统pDEST14,并在大肠杆菌BL21-AI中诱导表达,制备NRDRB1... 目的制备宫颈鳞癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)选择性剪接新亚型NRDRB1多克隆抗体,为NRDRB1的功能研究奠定基础。方法扩增NRDRB1开放阅读框,重组入Gateway原核表达系统pDEST14,并在大肠杆菌BL21-AI中诱导表达,制备NRDRB1包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的NRDRB1重组蛋白作为免疫原,经肩胛骨下注射免疫新西兰白兔。斑点杂交测定抗血清效价,HiTrapProteinG柱纯化兔IgG,免疫印迹和免疫组织化学鉴定抗体特异性。结果NRDRB1在大肠杆菌BL21-AI中高效表达,回收的NRDRB1蛋白溶液浓度为0.42mg/ml。所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清。血清效价为l∶2000,对NRDRB1蛋白的检测极限是6.4ng。纯化后的NRDRB1抗体具有较高的免疫活性和特异性。结论NRDRB1原核表达载体的构建、蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备为今后研究该蛋白的功能奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 辅酶Ⅱ依赖性视黄醇/还原酶B1 基因表达 宫颈肿瘤
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亚甲基四氢叶酸还原酶基因遗传变异与肺癌 被引量:5
12
作者 张雪梅 缪小平 +4 位作者 谭文 曲世宁 孙瞳 周翊峰 林东昕 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期700-703,共4页
目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态与肺癌风险的关系。方法以聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析方法检测505例肺癌患者和500名正常对照者MTHFRC677T和A1298C基因型;用EH软件构建了这两个多态的单体型;以比值比(OR)及其... 目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态与肺癌风险的关系。方法以聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析方法检测505例肺癌患者和500名正常对照者MTHFRC677T和A1298C基因型;用EH软件构建了这两个多态的单体型;以比值比(OR)及其95%可信区间(CI)比较不同基因型的肺癌相对风险度。结果C677T突变等位基因频率在肺癌患者和正常对照者中的分布差异具有显著性(53.5%vs44.9%,P<0.001)。与MTHFR677CC基因型比较,677CT和TT基因型患肺癌的风险分别增加1.43(95%CI?1.04~1.95)和2.40(95%CI?1.61~3.59)倍。MTHFR基因677T-1298A单体型频率在病例组和对照组中分布差异具有显著性(P<0.05)。未发现MTHFRA1298C基因多态与肺癌风险相关。结论MTHFR基因变异可增加患肺癌的风险。 展开更多
关键词 肺癌 亚甲基四叶酸还原酶 基因多态 体型 叶酸
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氮素形态对菠菜体内抗坏血酸含量及其代谢的影响 被引量:21
13
作者 孙园园 林咸永 +2 位作者 金崇伟 章永松 方萍 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期292-298,共7页
采用基质培养试验,研究营养液不同铵硝配比(0:100,25:75,50:50,75:25,100:0)对菠菜叶片抗坏血酸含量及其代谢相关酶活性的影响.结果表明,菠菜植株鲜重和干重以铵硝比为25:75处理最高,铵硝比超过50:50时则显著下降.菠菜叶片抗坏血酸(AsA... 采用基质培养试验,研究营养液不同铵硝配比(0:100,25:75,50:50,75:25,100:0)对菠菜叶片抗坏血酸含量及其代谢相关酶活性的影响.结果表明,菠菜植株鲜重和干重以铵硝比为25:75处理最高,铵硝比超过50:50时则显著下降.菠菜叶片抗坏血酸(AsA)、总抗坏血酸(AsA+DHA)含量随着铵硝比的提高逐渐增加.菠菜叶片L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(GalLDH)活性在铵硝比小于50%时没有显著变化,进一步提高铵硝比则显著降低;铵硝比不影响抗坏血酸氧化酶(AAO)的活性.脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)和单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)的活性均随着供铵比例提高而逐渐提高,且与AsA含量的变化趋势相似.表明提高营养液中铵硝比增加菠菜叶片AsA含量,与其提高MDHAR、DHAR活性和加快AsA的再生循环有关,而与其对GalLDH和AAO酶活性的影响没有明显的相关. 展开更多
关键词 氮形态 抗坏血酸 菠菜 L-半乳糖酸-1 4-内酯 抗坏血酸还原酶 抗坏血酸还原酶 抗坏血酸过氧化物酶
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不同蔬菜产品器官抗坏血酸含量与其相关酶活性的关系 被引量:3
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作者 李坤 韩道杰 +2 位作者 许贞杭 王英华 于贤昌 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期257-262,共6页
以抗坏血酸(AsA)含量差异较大的甜椒、番茄、马铃薯、萝卜和黄瓜的产品器官为试材,研究不同发育期产品器官AsA含量与其相关酶活性的关系。结果表明,5种蔬菜不同发育期产品器官AsA含量与DHAR和GalLDH活性变化趋势基本一致。以5种蔬菜产... 以抗坏血酸(AsA)含量差异较大的甜椒、番茄、马铃薯、萝卜和黄瓜的产品器官为试材,研究不同发育期产品器官AsA含量与其相关酶活性的关系。结果表明,5种蔬菜不同发育期产品器官AsA含量与DHAR和GalLDH活性变化趋势基本一致。以5种蔬菜产品器官形成末期AsA含量与其相关酶活性的相关性分析得知,AsA含量与DHAR活性呈显著正相关(r=0.9423,P<0.05),与GalLDH活性的相关性也较显著(r=0.8597,P<0.10);AsA+DHA含量与GalLDH活性相关性明显(r=0.7904,P<0.15)。AsA含量与MDHAR、AAO和APX活性无显著相关性。这说明不同物种蔬菜产品器官AsA含量存在较大差异的原因与其GalLDH和DHAR活性存在较大差异密切相关,MDHAR、AAO和APX活性不是影响AsA含量的主要因素。 展开更多
关键词 蔬菜 产品器官 抗坏血酸含量 半乳糖内酯 抗坏血酸还原酶
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5龄期和吐丝期家蚕丝腺中的抗坏血酸含量及抗氧化作用变化 被引量:3
15
作者 成中芹 牛盼盼 +2 位作者 万华星 司马杨虎 赵林川 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期555-558,共4页
抗坏血酸(AsA)是家蚕生长发育的必需维生素之一,具有抗氧化的生理功能。用分光光度法测定5龄期至吐丝期家蚕丝腺中的抗坏血酸含量、脱氢抗坏血酸(DHA)含量、抗坏血酸氧化酶(AAO)活性、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性和脱氢抗坏血酸还原酶(... 抗坏血酸(AsA)是家蚕生长发育的必需维生素之一,具有抗氧化的生理功能。用分光光度法测定5龄期至吐丝期家蚕丝腺中的抗坏血酸含量、脱氢抗坏血酸(DHA)含量、抗坏血酸氧化酶(AAO)活性、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性和脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)活性,分析丝蛋白合成和分泌期间丝腺中抗坏血酸的抗氧化作用变化。结果显示在此期间丝腺中的AsA含量、总抗坏血酸(AsA和DHA)含量和AsA/DHA比值持续下降,DHA含量变化不显著,而没有检测到AAO和APX的活性,并且DHAR的活性在5龄期变化不显著,但在吐丝期持续下降。检测结果表明,伴随着丝蛋白的合成和分泌,家蚕丝腺中的抗坏血酸含量及抗氧化作用显著下降。 展开更多
关键词 家蚕 丝腺 抗坏血酸 抗坏血酸还原酶 抗氧化能力
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箭舌豌豆根系抗坏血酸及相关酶对镉胁迫的响应 被引量:2
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作者 芮海云 张兴兴 +2 位作者 庄凯 沈振国 张芬琴 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1391-1398,共8页
以箭舌豌豆(Vicia sativa L.)品种L3(耐镉)和ZM(镉敏感)为材料,研究了不同程度镉胁迫下箭舌豌豆幼苗根系抗坏血酸(AsA)含量、脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)同工酶活性、抗坏血酸过氧化物酶(APX)同工酶活性以及APX基因表达的变化。结果显示:(... 以箭舌豌豆(Vicia sativa L.)品种L3(耐镉)和ZM(镉敏感)为材料,研究了不同程度镉胁迫下箭舌豌豆幼苗根系抗坏血酸(AsA)含量、脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)同工酶活性、抗坏血酸过氧化物酶(APX)同工酶活性以及APX基因表达的变化。结果显示:(1)2个箭舌豌豆品种根系AsA和脱氢抗坏血酸(DHA)含量在镉胁迫下显著升高;AsA/DHA比值在镉耐性品种L3中显著升高,在敏感品种ZM中显著下降;相同镉处理浓度下,L3根系AsA含量和AsA/DHA比值显著大于ZM。(2)2个品种根系DHAR的活性电泳共显示4条同工酶条带,它们的活性均随镉处理浓度的升高而升高;其中DHAR1只在L3显示,DHAR4只在ZM显示;相同镉处理浓度下,品种L3的DHAR的总活性大于品种ZM。(3)2个品种根系APX的活性电泳共显示11条同工酶条带,其中的APX1、2、4仅在敏感品种ZM中受镉胁迫诱导,APX 8在耐性品种L3中受到比敏感品种ZM更显著的诱导;克隆得到1个箭舌豌豆APX基因,荧光定量RT-PCR结果显示该基因的转录在L3和ZM根系均受镉处理诱导。研究表明,镉胁迫下2个箭舌豌豆品种根系AsA含量,AsA代谢相关酶DHAR和APX的活性以及APX的转录水平均显著升高;镉耐性品种L3较敏感品种ZM能更有效地促进AsA循环,维持更高的AsA水平,从而更有效地缓解镉胁迫诱导产生的氧化胁迫,这可能是L3较ZM具有更高镉耐性的重要机制之一。 展开更多
关键词 箭舌豌豆 镉耐性 抗坏血酸 抗坏血酸过氧化物酶 抗坏血酸还原酶
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毛花猕猴桃果实L-半乳糖内酯脱氢酶基因cDNA片段的克隆与序列分析 被引量:3
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作者 燕标 吴延军 +1 位作者 谢鸣 叶爱华 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期523-527,共5页
毛花猕猴桃果实中Vc含量极高,为了揭示毛花猕猴桃Vc形成规律,根据已知植物的L-半乳糖内酯脱氢酶(GalLDH)基因,设计简并引物,以毛花猕猴桃新品种‘华特’果实为材料提取总RNA,采用RT-PCR法,克隆出一条长661 bp的cDNA片段,根据测序结果推... 毛花猕猴桃果实中Vc含量极高,为了揭示毛花猕猴桃Vc形成规律,根据已知植物的L-半乳糖内酯脱氢酶(GalLDH)基因,设计简并引物,以毛花猕猴桃新品种‘华特’果实为材料提取总RNA,采用RT-PCR法,克隆出一条长661 bp的cDNA片段,根据测序结果推测其氨基酸序列,并与刺梨、拟南芥、甘薯和草莓等植物的GalLDH基因编码的氨基酸序列进行亲缘分析。结果表明,所克隆片段编码氨基酸序列与美味猕猴桃GalLDH相似度高达99%,其在同源基因进化关系上聚为一类,与葡萄的GalLDH相似性高达91%,与草莓、刺梨、甘薯、温州蜜柑、拟南芥、甜瓜等植物的GalLDH同源性均在80%以上,可知克隆到的核苷酸片段确为毛花猕猴桃GalLDH基因的cDNA片段。 展开更多
关键词 毛花猕猴桃 L-半乳糖内酯 抗坏血酸 基因克隆
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外源抗坏血酸对姜离体叶片光抑制和抗氧化酶活性的影响 被引量:2
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作者 黄金丽 王绍辉 张振贤 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期2041-2046,共6页
以莱芜生姜(Zingiber of ficinale Rosc.)离体叶片为试验材料,研究了不同浓度抗坏血酸(AsA)对强光照射下姜离体叶片光抑制及抗氧化酶活性的影响。结果显示,在强光条件下,姜离体叶片的Fv/Fm、qP和qN随强光照射时间增加呈下降趋势。... 以莱芜生姜(Zingiber of ficinale Rosc.)离体叶片为试验材料,研究了不同浓度抗坏血酸(AsA)对强光照射下姜离体叶片光抑制及抗氧化酶活性的影响。结果显示,在强光条件下,姜离体叶片的Fv/Fm、qP和qN随强光照射时间增加呈下降趋势。在照光10~30min,较低浓度AsA(10、50、100mmol·L-1)处理的Fv/Fm高于CK和150mmol·L-1AsA处理。10mmol·L-1AsA处理的叶片qP值始终高于对照,所有AsA处理qN都高于对照。AsA处理叶片的超氧化物岐化酶(SOD)和脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)活性高于对照。强光照射30min时,10、50、100mmol·L-1AsA处理的过氧化物酶(POD)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性高于对照和高浓度的AsA处理(150mmol·L-1),尤以10mmol·L-1AsA处理最佳,Fv/Fm和qP分别比对照高7.22%、15.88%,qN和抗氧化酶活性也维持较高水平。研究表明外源AsA对强光引起的姜叶片光抑制有一定的保护作用。 展开更多
关键词 姜离体叶片 抗坏血酸 光抑制 FV/FM 光化学荧光猝灭系数 非光化学猝灭系数 超氧化物岐化酶 抗坏血酸还原酶
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枸杞L-半乳糖酸内酯脱氢酶基因的克隆及表达分析 被引量:2
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作者 乔枫 耿贵工 陈志 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2141-2147,共7页
以青海枸杞(Lycium barbarum L.)为模板,采用RT-PCR和RACE技术,克隆枸杞L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(GLDH)基因序列,命名为LbGLDH。LbGLDH基因全长为2 114bp,包含一个开放读码框1 767bp(编码588个氨基酸)、5′末端序列57bp、3′末... 以青海枸杞(Lycium barbarum L.)为模板,采用RT-PCR和RACE技术,克隆枸杞L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(GLDH)基因序列,命名为LbGLDH。LbGLDH基因全长为2 114bp,包含一个开放读码框1 767bp(编码588个氨基酸)、5′末端序列57bp、3′末端序列290bp。LbGLDH基因核苷酸序列与番茄、马铃薯、烟草GLDH基因具有88%~90%的一致性。LbGLDH编码氨基酸序列包含GLDH蛋白酶具备的FAD-binding-4和ALO结构域。qRT-PCR分析结果显示,在枸杞不同组织中LbGLDH基因的表达、抗坏血酸含量和GLDH活性变化趋势相同,表现为在枸杞的花和果实中表达量最高,成熟叶中表达量最少。推测LbGLDH基因表达促进枸杞果实中抗环血酸含量的积累。 展开更多
关键词 枸杞 L-半乳糖酸-1 4-内酯酶(GLDH) 基因克隆 抗坏血酸
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水稻L-半乳糖脱氢酶基因的克隆与序列分析
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作者 邹礼平 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第7期2886-2887,2919,共3页
[目的]对水稻L-半乳糖脱氢酶(L-GalDH)基因进行克隆与序列分析。[方法]通过RT-PCR从水稻中克隆了L-GalDH基因,采用GenBank的BLAST程序进行序列分析。[结果]水稻L-GalDH基因的cDNA全长1 340 bp,包含一个长为951 bp的完整开放读码框,推导... [目的]对水稻L-半乳糖脱氢酶(L-GalDH)基因进行克隆与序列分析。[方法]通过RT-PCR从水稻中克隆了L-GalDH基因,采用GenBank的BLAST程序进行序列分析。[结果]水稻L-GalDH基因的cDNA全长1 340 bp,包含一个长为951 bp的完整开放读码框,推导的氨基酸序列与其他植物的L-半乳糖脱氢酶基因的同源性较高,其中与大麦的同源性最高,序列一致率为92%,与菠菜的序列同源性稍低,一致率为71%。系统进化分析结果表明不同来源的L-GalDH基因聚为3类。[结论]该研究为L-GalDH基因的功能研究打下了基础。 展开更多
关键词 水稻 L-半乳糖 抗坏血酸 生物合成 基因克隆
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