单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录子蛋白读码框2真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达 被引量：4

1

作者 杨慧兰 赵举峰 +3 位作者 樊建勇 周翠 黄小晏 齐维 《医学研究生学报》 CAS 2008年第9期899-903,I0001,共6页

目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录子蛋白读码框2(LAT ORF2)基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达,用于进一步研究LAT介导的HSV-2潜伏及激活感染机制。方法:以构建成功的pVAX-LAT重组质粒为模板,根据GenBank中HSV-2LATO... 目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录子蛋白读码框2(LAT ORF2)基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达,用于进一步研究LAT介导的HSV-2潜伏及激活感染机制。方法:以构建成功的pVAX-LAT重组质粒为模板,根据GenBank中HSV-2LATORF2基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5′端分别引入KpnⅠ和PstⅠ酶切位点。用PCR特异性扩增LAT基因ORF2片段,PCR产物纯化回收后经KpnⅠ、PstⅠ双酶切,再次回收后产物与同样经双酶切的pcDNA 6/myc-His B质粒进行连接,Amp抗性筛选阳性重组子,双酶切及测序鉴定连接产物。在脂质体介导下瞬时转染Vero细胞,用RT-PCR及SDS-PAGE检测其在Vero细胞中的表达。结果:重组质粒经KpnⅠ和PstⅠ双酶切获得预期大小的两条片段,测序表明ORF2正确,RT-PCR及SDS-PAGE显示转染了重组质粒的Vero细胞内有目的基因及其编码蛋白的表达。结论:成功构建了ORF2-pcDNA6/myc-His B重组质粒,并可在Vero细胞内有效表达。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒2型 潜伏相关转录子 开放读码框 重组载体

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单纯疱疹病毒2型与细菌性阴道病关系的Meta分析 被引量：4

2

作者 马晓梅 魏林珍 甄洁玉 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期380-383,共4页

目的：探讨单纯疱疹病毒2型（HSV-2）与细菌性阴道病（BV）发生的相关性。方法：通过检索中国知网、CBM、Medline、Springer Link、Elsevier Science、PubMed、Cochrane Library database等数据库,收集自1990年1月到2014年12月公开发表... 目的：探讨单纯疱疹病毒2型（HSV-2）与细菌性阴道病（BV）发生的相关性。方法：通过检索中国知网、CBM、Medline、Springer Link、Elsevier Science、PubMed、Cochrane Library database等数据库,收集自1990年1月到2014年12月公开发表的关于HSV-2与BV病例对照研究的文献,选择OR值及其95%CI作为Meta分析指标。利用Stata 11.0软件对各研究结果进行异质性检验和效应值合并计算。结果：根据统一的纳入和剔除标准,纳入11篇文献,研究表明HSV-2与BV的发生有明显的关系（Z=18.46,P=0.000）,合并计算的OR值为1.40,OR的95%Cl为1.25~1.54。结论：HSV-2感染是BV发生的一个危险因素。 展开更多

关键词 细菌性阴道病 单纯疱疹病毒2型 META分析

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单纯疱疹病毒2型与宫颈癌相关性的研究进展 被引量：4

3

作者 毕建军 杨慧兰 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第3期530-532,共3页

宫颈癌的病因迄今尚无定论．但多数学者认为宫颈癌的发生与性生活、内分泌和感染等多种因素有关，其中病毒感染近年来成为研究的热点。研究显示单纯疱疹病毒2型（herpessimplevirus-2，HSV-2）、人乳头状瘤病毒（humanpalilomavirus．HP... 宫颈癌的病因迄今尚无定论．但多数学者认为宫颈癌的发生与性生活、内分泌和感染等多种因素有关，其中病毒感染近年来成为研究的热点。研究显示单纯疱疹病毒2型（herpessimplevirus-2，HSV-2）、人乳头状瘤病毒（humanpalilomavirus．HPV）和人巨细胞病毒（humancytomegalovirus，HCMV）可能与宫颈癌的发生有关。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒2型 宫颈癌 癌相关性 人乳头状瘤病毒 人巨细胞病毒 病毒感染 性生活 内分泌

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单纯疱疹病毒2型感染细胞蛋白27重组真核表达质粒的构建及表达 被引量：1

4

作者 李慎秋 梁宁 +3 位作者 赵红磊 邹婕 谢春丽 蒋思 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期719-723,共5页

目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染细胞蛋白27(ICP27)基因与pcDNA3.1(+)真核表达质粒的重组质粒pcDNA3.1(+)/ICP27。方法通过RT-PCR方法从HSV-2培养物中提取RNA制备ICP27的编码基因UL54DNA,将其与载体pcDNA3.1(+)连接。通过双酶切和... 目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染细胞蛋白27(ICP27)基因与pcDNA3.1(+)真核表达质粒的重组质粒pcDNA3.1(+)/ICP27。方法通过RT-PCR方法从HSV-2培养物中提取RNA制备ICP27的编码基因UL54DNA,将其与载体pcDNA3.1(+)连接。通过双酶切和测序鉴定重组质粒是否构建成功,Western blot法鉴定重组质粒在真核细胞COS-7中表达。结果重组质粒pcDNA3.1(+)/ICP27构建成功,可在COS-7中表达。结论成功构建了可在真核细胞内表达的pcDNA3.1(+)/ICP27重组质粒,为下一步研究该重组质粒作为DNA疫苗的免疫学效应奠定了基础。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒2型 感染细胞蛋白27 重组质粒 DNA疫苗

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单纯疱疹病毒2型感染与非淋菌性尿道炎的病因关系 被引量：1

5

作者 王万卷 王颖娟 +3 位作者 王秀莹 李红敏 王晓鹏 陈丽 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期469-470,共2页

目的探讨非淋菌性尿道炎(NGU)患者单纯疱疹病毒2型(HSV2)感染的流行病学状况及实验室诊断方法。方法实验分为NGU患者组和健康对照组。免疫快速测定法(C-C快速法)检测沙眼衣原体(CT),培养法检测解脲支原体(UU),血清酶联免疫吸附法(ELISA... 目的探讨非淋菌性尿道炎(NGU)患者单纯疱疹病毒2型(HSV2)感染的流行病学状况及实验室诊断方法。方法实验分为NGU患者组和健康对照组。免疫快速测定法(C-C快速法)检测沙眼衣原体(CT),培养法检测解脲支原体(UU),血清酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清HSV2抗体,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测尿道分泌物HSV2。结果NGU患者组的CT、UU感染率分别为23.27%和30.91%。NGU患者组和健康对照组的HSV2IgGI、gM、HSV2DNA阳性率分别为38.18%/18.03%、10.91%/1.64%、19.63%/4.92%,两组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。NGU患者组无CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌感染的HSV2阳性率为33.33%,与对照组相比差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论HSV2是NGU的重要病原体之一。FQ-PCR法作为HSV感染的实验室诊断技术具有很好的临床应用价值。 展开更多

关键词 非淋菌性尿道炎 单纯疱疹病毒2型 血清学酶联免疫吸附实验 荧光定量聚合酶链反应

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单纯疱疹病毒2型30kD糖蛋白的鉴定及其编码基因的定位 被引量：2

6

作者 秦克锋 喻启桂 +1 位作者 汪美先 姜绍谆 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第4期1-6,共6页

用放射免疫沉淀试验和单纯疱疹病毒1型与2型(HSV-1/HSV-2)型间重组株作物理图谱的方法,鉴定出单克隆抗体(McAb)CH-A9靶抗原是一分子量约为30kD的糖蛋白,存在于HSV-2感染的BHK细胞膜上,其编码基因定位于长单一序列(UL)上,在0.490～0.564... 用放射免疫沉淀试验和单纯疱疹病毒1型与2型(HSV-1/HSV-2)型间重组株作物理图谱的方法,鉴定出单克隆抗体(McAb)CH-A9靶抗原是一分子量约为30kD的糖蛋白,存在于HSV-2感染的BHK细胞膜上,其编码基因定位于长单一序列(UL)上,在0.490～0.564遗传单位之间,与已报道的HSV-2蛋白编码基因无重叠,因此g30kD可能是一种新的HSV-2糖蛋白。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒2型 糖蛋白 鉴定 单纯疱疹病毒1型 放射免疫沉淀试验 HSV-2感染 蛋白编码基因 单克隆抗体 BHK细胞 物理图谱 基因定位 重组株 分子量 靶抗原

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单纯疱疹病毒2型感染细胞多肽27真核表达质粒的构建及表达

7

作者 张发洲 杨慧兰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期208-212,共5页

为了构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染细胞多肽27(ICP27)真核表达质粒,应用PCR技术从HSV-2 333株的基因组中扩增ICP27基因,并连接至真核表达载体pEGFPC2,对阳性克隆进行菌落PCR、酶切和测序鉴定后,成功构建了重组质粒pEGFPC2-ICP27。用X ... 为了构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染细胞多肽27(ICP27)真核表达质粒,应用PCR技术从HSV-2 333株的基因组中扩增ICP27基因,并连接至真核表达载体pEGFPC2,对阳性克隆进行菌落PCR、酶切和测序鉴定后,成功构建了重组质粒pEGFPC2-ICP27。用X fect转染试剂盒将重组质粒pEGFPC2-ICP27转染至Vero细胞中,并用RT-PCR及W estern b lot-ting检测其表达情况。结果显示,ICP27基因在Vero细胞中得到正确表达。真核表达质粒pEGFPC2-ICP27的构建成功,为进一步研究ICP27对宿主细胞的影响奠定了基础。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒2型 感染细胞多肽27 真核表达载体 转染

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钝顶螺旋藻多糖抗单纯疱疹病毒2型的作用 被引量：5

8

作者 朱萧 于红 张文卿 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期72-76,共5页

【目的】探讨钝顶螺旋藻多糖(PSP)抗单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的作用及可能机制,为进一步开发该药提供理论依据。【方法】实验选用HSV-2标准株(333株),以不同剂量的PSP作用于HSV-2复制周期的不同阶段,终点以病毒半数感染量(TCID50)、细胞... 【目的】探讨钝顶螺旋藻多糖(PSP)抗单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的作用及可能机制,为进一步开发该药提供理论依据。【方法】实验选用HSV-2标准株(333株),以不同剂量的PSP作用于HSV-2复制周期的不同阶段,终点以病毒半数感染量(TCID50)、细胞病变效应(CPE)、MTT染色细胞保护率(MTT法)及荧光定量PCR(FQ-PCR)作为评价手段,判断PSP的抗病毒效果。【结果】PSP对Vero细胞毒性极低(TC50为1750μg/mL),对HSV-2无直接灭活作用,可抑制病毒吸附和感染细胞内病毒的复制,其中50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL浓度的PSP对病毒复制的抑制率分别为63.94%、81.41%、85.63%;FQ-PCR结果显示随着PSP浓度及作用时间的增加,PSP对HSV-2DNA的抑制作用明显增强,具有良好的剂量和时效关系。【结论】PSP在体外具显著的抗HSV-2病毒作用,此作用发生在病毒吸附、病毒基因复制等多个环节上。 展开更多

关键词 钝顶螺旋藻 多糖 单纯疱疹病毒2型 抗病毒作用

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McAb夹心法ELISA检测血清单纯疱疹病毒2型糖蛋白gC型特异性抗体 被引量：1

9

作者 王丽莉 李贵容 +2 位作者 秦克锋 高谦 喻启桂 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第4期7-11,共5页

建立了检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gC型特异性抗体的方法。用本法同免疫荧光血清分型,抗原竞争ELISA和微量中和实验(MNT)进行了比较,检测HSV-2抗体的感度均优于后3种方法。实验结果表明:本法特异、敏感、简便。不仅可用于区分人群... 建立了检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gC型特异性抗体的方法。用本法同免疫荧光血清分型,抗原竞争ELISA和微量中和实验(MNT)进行了比较,检测HSV-2抗体的感度均优于后3种方法。实验结果表明:本法特异、敏感、简便。不仅可用于区分人群中HSV感染型别的流行病学调查,也适用于HSV-2糖蛋白gC的特异性研究。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒2型 型特异性抗体 ELISA检测 McAb夹心法 糖蛋白 gC 竞争ELISA HSV-2抗体 流行病学调查 HSV感染 特异性研究 血清分型 免疫荧光 中和实验

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WONCA研究论文摘要汇编(五十七)——有症状及无症状2型单纯疱疹病毒感染者生殖器单纯疱疹病毒脱落

10

作者 周淑新 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第25期2946-2946,共1页

背景自商业提供了2型单纯疱疹病毒(HSV-2)抗体检测以来,经血清学检测所了解的患有生殖器疱疹的人数有所增多。血清阳性无症状者的HSV-2自然史病程尚不清楚。目的评估有症状及无症状HSV-2感染者生殖器HSV病毒脱落及临床过程。设计、设施... 背景自商业提供了2型单纯疱疹病毒(HSV-2)抗体检测以来,经血清学检测所了解的患有生殖器疱疹的人数有所增多。血清阳性无症状者的HSV-2自然史病程尚不清楚。目的评估有症状及无症状HSV-2感染者生殖器HSV病毒脱落及临床过程。设计、设施和受试者将1992年3月至2008年4月,美国华盛顿大学西雅图病毒研究诊所及奥勒冈州波特兰韦斯托弗高地诊所,498例免疫活性HSV-2血清阳性者纳入前瞻性研究。每位参试者自用拭子采集生殖器分泌物至少30 d。主要结果测量对生殖器拭子HSV-DNA做实时荧光定量聚合酶链反应检测病毒脱落率。结果 将410例有症状HSV-2感染者生殖器4 753/23 683 d检出HSV-2[20.1%,95%CI(18.3%,22.0%)]与88例无症状感染者519/5 070 d进行比较(P<0.001)。临床症状不明显者比无症状感染者病毒脱落率要高,2 708/20 735 d[13.1%,95%CI(11.5%,14.6%)]对434/4 929 d[8.8%,95%CI(6.3%,11.5%)](P<0.001)。然而,亚临床症状脱落发生时HSV检出量相似,有症状感染组中位数4.3(四分位间距,3.1～5.6)log10 copies对无症状感染组4.2(四分位间距,2.9～5.5)(P=0.27)。有生殖器病毒脱落计算病变天数,有症状生殖器HSV-2感染者为2 045/4 753 d[43.0%,95%CI(39.8%,46.5%)]与无症状感染者85/519 d[16.4%,95%CI(11.2%,23.9%)]相比(P<0.001)。结论 与有症状感染者相比,无症状HSV-2感染者生殖道内病毒脱落频次要少,但由于病毒脱落伴发于病变,所致差异大部分可归因于生殖器发生的病变少所致。 展开更多

关键词 2型单纯疱疹病毒 病毒感染者 生殖器疱疹 无症状者 WONCA 论文摘要 荧光定量聚合酶链反应检测 HSV-2

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人单纯疱疹病毒加强型绿色荧光蛋白真核表达系统的构建及表达 被引量：6

11

作者 李雷生 于红 张文卿 《医学研究生学报》 CAS 2006年第7期583-585,i0010,共4页

目的:构建人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)加强型绿色荧光蛋白(EGFP)真核表达系统,用于HSV感染的快速诊断。方法:通过PCR扩增HSV-2启动子ICP10目的基因片段,克隆至真核表达载体pEGFP-1,构建重组质粒pICP10-EGFP,脂质体法转染Vero细胞,经G418... 目的:构建人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)加强型绿色荧光蛋白(EGFP)真核表达系统,用于HSV感染的快速诊断。方法:通过PCR扩增HSV-2启动子ICP10目的基因片段,克隆至真核表达载体pEGFP-1,构建重组质粒pICP10-EGFP,脂质体法转染Vero细胞,经G418筛选获得稳定转染细胞株Vero-ICP10-EGFP。以不同量的HSV-2感染Vero-ICP10-EGFP细胞,分别于感染后6、8和10 h,于倒置荧光显微镜下检测EGFP荧光。同时以人巨细胞病毒和柯萨奇病毒感染Vero-ICP10-EGFP细胞,检测其特异性。结果:构建的重组质粒pICP10-EGFP经DNA测序鉴定,表明重组正确。重组质粒pICP10-EGFP转染Vero细胞后,经G418长期筛选建立稳定转染细胞株Vero-ICP10-EGFP,感染HSV-2后6 h,倒置荧光显微镜下即可检测到EGFP荧光。人巨细胞病毒和柯萨奇病毒感染Vero-ICP10-EGFP细胞后6、10和24 h,均未检测到特异性荧光。结论:成功构建了HSV-EGFP真核表达系统,其具有早期、快速、灵敏等优点,特异性较高,可望用于HSV感染的快速诊断。 展开更多

关键词 人单纯疱疹病毒2型 绿色荧光蛋白 启动子ICP10

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邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的活性研究

12

作者 何丽丽 段江曼 +3 位作者 裘佳寅 于飞 刘叔文 李琳 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1175-1178,共4页

目的研究邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白(3-Hydroxyphthalic anhydride-modified ovalbumin,HP-OVA)体外对抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)的活性。方法采用化学修饰的方法将3-羟基-邻苯二甲酸酐(HP)修饰卵清蛋白(OVA),合成酸酐修饰蛋白HP-OVA;选... 目的研究邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白(3-Hydroxyphthalic anhydride-modified ovalbumin,HP-OVA)体外对抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)的活性。方法采用化学修饰的方法将3-羟基-邻苯二甲酸酐(HP)修饰卵清蛋白(OVA),合成酸酐修饰蛋白HP-OVA;选用HSV-2333病毒株及非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)靶细胞,采用MTT比色法检测HP-OVA的体外抗HSV-2病毒活性及其对Vero细胞的体外细胞毒性;镜检观察HP-OVA对17株阴道收集的乳酸杆菌的抑菌作用。结果酸酐修饰卵清蛋白HP-OVA对HSV-2病毒具有明显抑制作用,其IC50为23.56±8.33μg/ml,且其对病毒作用靶细胞毒性较低,CC50>1mg/ml,对17株阴道乳酸杆菌均无明显抑制作用,MIC>1mg/ml。结论酸酐修饰蛋白HP-OVA体外有较好的抗HSV-2病毒的活性,有望被开发为预防性传播性疾病的候选杀微生物剂。 展开更多

关键词 酸酐修饰卵清蛋白HP-OVA 单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2) 抗病毒活性 乳酸杆菌 杀微生物剂

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巢式PCR方法检测长春地区单纯疱疹病毒感染状况 被引量：2

13

作者 于海滨 陈世义 +1 位作者 徐斌 郑华 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1130-1133,共4页

目的:探讨巢式PCR方法检测单纯疱疹病毒(HSV)的临床应用价值,同时对HSV-1、HSV-2在生殖器疱疹(GH)、梅毒(syphilis)、念珠菌病(candidiasis)、非淋菌性尿道炎(NGU)、淋病(gonorrhea)、尖锐湿疣(CA)6种性病患者(STD)及其性伴和健康人群... 目的:探讨巢式PCR方法检测单纯疱疹病毒(HSV)的临床应用价值,同时对HSV-1、HSV-2在生殖器疱疹(GH)、梅毒(syphilis)、念珠菌病(candidiasis)、非淋菌性尿道炎(NGU)、淋病(gonorrhea)、尖锐湿疣(CA)6种性病患者(STD)及其性伴和健康人群中的感染情况及分布特点进行对比研究。方法:应用HSV-1糖蛋白D(gpD)基因序列和HSV-2糖蛋白G(gpG)基因序列为靶基因,设计了普通PCR和巢氏PCR方法,检测6种STD患者及其性伴和健康人群中HSV的感染情况。结果:6种STD患者共1223人,HSV-1阳性率15.70%(192/1223),HSV-2阳性率28.29%(346/1223),HSV总阳性率43.41%(538/1223);检测性伴153例,HSV-1阳性率12.42%(19/153),HSV-2阳性率21.57%(33/153),HSV总阳性率34.0%(52/153);检测健康人群263例,HSV-1阳性率3.42%(9/263),HSV-2阳性率6.08%(16/263),HSV总阳性率9.51%(25/263)。结论:STD患者中HSV-2感染率高于HSV-1感染率;STD患者及其性伴中HSV-1、HSV-2感染率均高于健康人群。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒1型 人 单纯疱疹病毒2型 聚合酶链反应 疱疹病毒科感染

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PCR检测生殖器疱疹患者HSV-2 被引量：2

14

作者 吴晓芝 范宾 +2 位作者 楼慧泉 尚红 宋芳吉 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期300-301,共2页

目的：用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ， Ｐ Ｃ Ｒ）检测生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍ ｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ２， Ｈ Ｓ Ｖ２）。方法：对１０１ 例生殖器疱疹和糜烂患者及... 目的：用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ， Ｐ Ｃ Ｒ）检测生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍ ｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ２， Ｈ Ｓ Ｖ２）。方法：对１０１ 例生殖器疱疹和糜烂患者及２０ 例对照组用 Ｐ Ｃ Ｒ法检测 Ｈ Ｓ Ｖ１、 Ｈ Ｓ Ｖ２。结果： Ｈ Ｓ Ｖ２ 检出阳性率占 ６０４％ （６１／１０１）， Ｈ Ｓ Ｖ２ 和 Ｈ Ｓ Ｖ１ 双重感染占４％ （４／１０１）。对照组均为阴性，并且年龄轻者感染阳性率高于年龄长者。结论： Ｐ Ｃ Ｒ 具有操作较易、快速、敏感的特点，为临床对生殖疱疹的诊断和鉴别诊断提供了理想的新方法。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 2型单纯疱疹病毒 生殖器疱疹

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HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体构建及其在Vero细胞中的表达 被引量：2

15

作者 龙朝钦 杨慧兰 +1 位作者 张发洲 薛礼长 《中国感染控制杂志》 CAS 2011年第2期81-85,共5页

目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)多功能蛋白感染细胞多肽27(ICP27)真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并检测其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达。方法提取病毒株HSV-2333 DNA,用高保真DNA聚合酶对多功能蛋白ICP27基因进行高保真扩增,用双酶切... 目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)多功能蛋白感染细胞多肽27(ICP27)真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并检测其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达。方法提取病毒株HSV-2333 DNA,用高保真DNA聚合酶对多功能蛋白ICP27基因进行高保真扩增,用双酶切连接至真核表达载体pCDNA3.0中。pCDNA3.0-ICP27经双酶切、测序验证,并通过脂质体介导质粒瞬时转染Vero细胞,经RT-PCR和Western blot检测ICP27蛋白的表达。结果 pCDNA3.0-ICP27经双酶切可切出目的片段,测序结果经比对,与基因库中的序列完全一致。转染后经RT-PCR和Western blot检测,证实转染重组质粒组有ICP27蛋白表达,而转染空质粒组及未转染组没有检测到ICP27的表达。结论成功构建了HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并能在Vero细胞中表达。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒2型 疱疹 单纯 感染细胞多肽27 真核表达载体 质粒 疱疹 生殖器

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HSV-2感染ECV304的形态学变化 被引量：1

16

作者 赵海全 马文丽 +4 位作者 张亚莉 莫小阳 柯昌文 郑焕英 郑文岭 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期445-447,共3页

目的观察人脐静脉内皮细胞(ECV304)受到单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染后的连续病变过程及形态学特征。方法采用ECV304传代培养,接种HSV-2后用相差显微镜、组织染色观察贴壁生长细胞的病变全过程。结果接种 HSV-2后,ECV304于1 d逐渐出现细... 目的观察人脐静脉内皮细胞(ECV304)受到单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染后的连续病变过程及形态学特征。方法采用ECV304传代培养,接种HSV-2后用相差显微镜、组织染色观察贴壁生长细胞的病变全过程。结果接种 HSV-2后,ECV304于1 d逐渐出现细胞肿胀、变圆、胞浆颗粒增多粗大;2 d逐渐出现细胞融合,细胞核着色变浅。结论 HSV-2接种后在ECV304出现的形态学变化,造成细胞死亡的主要形式是细胞坏死,未见明显的细胞凋亡现象。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒2型 脐静脉内皮细胞304 形态学变化

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HSV-2对血管内皮样细胞ECV304的致病特性

17

作者 赵海全 马文丽 +3 位作者 危敏 柯昌文 郑焕英 郑文岭 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期267-272,共6页

为了探讨HSV-2对血管内皮样细胞ECV304的致病特性,通过体外培养血管内皮样细胞ECV304并感染HSV-2后,采用RT-PCR和间接免疫荧光法检测HSV-2病毒的潜伏相关转录体基因的表达,并利用相差显微镜及电子显微镜观察ECV304感染HSV-2后的细胞形... 为了探讨HSV-2对血管内皮样细胞ECV304的致病特性,通过体外培养血管内皮样细胞ECV304并感染HSV-2后,采用RT-PCR和间接免疫荧光法检测HSV-2病毒的潜伏相关转录体基因的表达,并利用相差显微镜及电子显微镜观察ECV304感染HSV-2后的细胞形态变化。结果表明,血管内皮样细胞ECV304感染HSV-2后12～24h即可检测到潜伏相关转录体基因表达;感染后1～2d即可出现明显的细胞病变,提示HSV-2可感染ECV304细胞,并在其中活化复制,诱导ECV304细胞出现细胞融合和破裂死亡。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒2型 血管内皮样细胞ECV304 细胞病变 细胞融合

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上海市静安区性病门诊50岁以上男性就诊者HSV-2感染率及其影响因素研究 被引量：2

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作者 周艳秋 陆小年 +5 位作者 顾立国 朱小珍 顾凯侃 鲍燕 孙丽敏 何纳 《中国健康教育》 2013年第5期437-440,共4页

目的调查研究上海市静安区50岁及以上男性性病门诊患者2型单纯疱疹病毒(HSV-2)感染率及其影响因素。方法连续入选2011年3—9月首次到华山医院及其分院静安区中心医院性病门诊50岁及以上男性就诊者作为研究对象,在其知情同意的情况下进... 目的调查研究上海市静安区50岁及以上男性性病门诊患者2型单纯疱疹病毒(HSV-2)感染率及其影响因素。方法连续入选2011年3—9月首次到华山医院及其分院静安区中心医院性病门诊50岁及以上男性就诊者作为研究对象,在其知情同意的情况下进行问卷调查,并采集血液标本进行HSV-2 IgG抗体和人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体检测。结果共157人首次前来就诊并知情同意接受本调查,平均年龄(60.1±7.7)岁。HIV阳性1人(0.6%),HSV-2阳性52人(33.1%)。多因素Logistic回归分析显示:婚姻状况(OR=0.27,95%CI:0.10～0.73)、文化程度(小学及以下OR=0.23,95%CI:0.07～0.77;初中OR=0.47,95%CI:0.21～1.04)、是否退休(OR=2.68,95%CI:1.23～5.85)以及有无子女(OR=0.08,95%CI:0.01～0.88)是50岁及以上男性HSV-2感染的影响因素。结论上海市静安区50岁及以上性病门诊男性就诊者中HSV-2感染率高,有必要加强该人群HSV-2防治工作。 展开更多

关键词 老年男性 2型单纯疱疹病毒 影响因素 性病门诊

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HSV-2miR-H4-5p负调节CDKL2基因表达并抑制ActD引起的Vero细胞凋亡 被引量：1

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作者 刘岩 郑新瑶 +1 位作者 樊建勇 杨慧兰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期308-314,共7页

单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virusⅡ,HSV-2)编码的microRNA-H4-5p(miR-H4-5p)可与病毒神经毒力蛋白ICP34.5mRNA互补结合并抑制其表达,从而降低病毒感染对细胞的毒力作用,以减弱细胞对病毒的免疫作用.但miR-H4-5p是否可靶向作用于... 单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virusⅡ,HSV-2)编码的microRNA-H4-5p(miR-H4-5p)可与病毒神经毒力蛋白ICP34.5mRNA互补结合并抑制其表达,从而降低病毒感染对细胞的毒力作用,以减弱细胞对病毒的免疫作用.但miR-H4-5p是否可靶向作用于宿主细胞基因目前仍不十分清楚.本研究证明,miR-H4-5p可通过靶向细胞周期依赖性激酶(cyclin-dependent kinase-like 2,CDKL2)基因表达抗防线菌素D(actinomycin D,Act D)诱导的非洲绿猴肾上皮细胞(African green monkey kidney cells,Vero)细胞凋亡.生物信息学方法在线预测miR-H4-5p潜在靶基因CDKL2的结合位点,并构建双萤光素酶报告系统检测miR-H4-5p靶向作用.数据表明,miR-H4-5p可有效抑制萤光素酶的表达.q PCR和Western印迹数据表明,miR-H4-5p可在mRNA水平和蛋白水平抑制CDKL2表达.构建过表达载体pmR-mcherry/miR-H4-5p(cherry/H4-5p),将cherry/H4-5p与pmRmcherry空质粒转染至Vero细胞,转染24 h后加入终浓度为1μg/m L放线菌素D诱导细胞凋亡.MTT法、流式细胞术和Western印迹检测Bax、Bcl-2表达.数据表明,miR-H4-5p可抑制Act D诱导的Vero细胞活性降低.本实验提示,miR-H4-5p可通过靶向调节宿主细胞基因抑制细胞凋亡,可能以此方式共同参与HSV-2潜伏感染的建立.但是这种抑制凋亡作用的通路及其机制目前仍不清楚,miR-H4-5p是否可靶向更多的宿主基因仍需要进一步实验验证. 展开更多

关键词 细胞周期依赖性激酶2 抗细胞凋亡 单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)编码的miR-H4-5p

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shRNA靶向沉默HSV-2 UL54基因在HEK293细胞内的表达 被引量：1

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作者 吕延成 潘晓瑜 +2 位作者 黄畅 兰小淞 仵立佳 《湖北农业科学》 2015年第15期3779-3783,共5页

根据乙型单纯疱疹病毒(HSV-2)UL54基因序列,设计并合成特异性的小干扰片段,将其定向克隆至真核表达载体p GPU6/GFP/Neo中,经脂质体介导转染HEK293细胞,倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率,MTT法检测HEK293细胞的存活率,RT-PCR检测U... 根据乙型单纯疱疹病毒(HSV-2)UL54基因序列,设计并合成特异性的小干扰片段,将其定向克隆至真核表达载体p GPU6/GFP/Neo中,经脂质体介导转染HEK293细胞,倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率,MTT法检测HEK293细胞的存活率,RT-PCR检测UL54基因m RNA的表达,Western blot检测UL54基因编码蛋白质的表达,终点滴定法测定细胞上清液中的病毒感染滴度。结果显示,sh RNA1081能抑制UL54基因m RNA和蛋白质的表达,能显著降低子代病毒滴度,提高细胞的存活率。表明本研究构建的重组表达载体p GPU6/GFP/Neo-UL54 sh RNA能在HEK293细胞中表达,并抑制HSV-2复制。 展开更多

关键词 UL54基因 RNA干扰 短发夹RNA 真核表达载体 2型单纯疱疹病毒

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