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人端粒酶逆转录酶启动子调控腺病毒介导胸苷激酶基因治疗人膀胱癌的动物实验研究 被引量:5
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作者 连文峰 林向阳 +6 位作者 张素英 王春仙 杨永安 于洋 宫香宇 陈艳军 张敏 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第18期1058-1061,共4页
目的:探讨带有人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(HSV-tk)基因的重组腺病毒Ad-hTERT-HSV-tk结合无毒的环氧鸟苷(GCV)对人膀胱癌的治疗作用。方法:建立人膀胱癌细胞株253JBALB/C裸小鼠移植瘤模型,采用Ad-hTERT-... 目的:探讨带有人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(HSV-tk)基因的重组腺病毒Ad-hTERT-HSV-tk结合无毒的环氧鸟苷(GCV)对人膀胱癌的治疗作用。方法:建立人膀胱癌细胞株253JBALB/C裸小鼠移植瘤模型,采用Ad-hTERT-HSV-tk裸鼠尾静脉注射,腹腔注射GCV治疗并观察结果。通过常规病理切片观察肿瘤破坏情况及安全性;通过TUNEL染色进一步观察肿瘤的凋亡情况,免疫组化法测定增值细胞核抗原(PCNA)。结果:Ad-hTERT-HSV-tk/GCV治疗组,显示出明显的肿瘤抑制作用,其肿瘤体积、重量显著低于各对照组(P<0.05),抑瘤率明显。Ad-hTERT-HSV-tk/GCV治疗组凋亡指数高于其它各组,而增殖指数却明显低于其它各组。结论:Ad-hTERT-HSV-tk/GCV系统对裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用,可以靶向性转入人膀胱癌细胞,治疗效果显著。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 单纯疱疹病毒嘧啶激酶基因 病毒 人端粒酶逆转录酶启动子
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HSV对Carbocyclic Oxetanocin G的耐药性及耐药病毒的胸腺嘧啶核苷激酶的活性研究
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作者 胡楠 龚启荣 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2005年第5期498-500,共3页
目的探讨治疗疱疹病毒性角膜炎的新药CarbocyclicoxetanocinG(C.OXTG)耐药性的产生情况及产生耐药性的机制。方法将1型单纯疱疹病毒(HSV1)接种于非洲绿猴肾细胞,在含10μmol/LC.OXTG的环境中连续培养20代,通过空斑抑制试验测定各代病毒... 目的探讨治疗疱疹病毒性角膜炎的新药CarbocyclicoxetanocinG(C.OXTG)耐药性的产生情况及产生耐药性的机制。方法将1型单纯疱疹病毒(HSV1)接种于非洲绿猴肾细胞,在含10μmol/LC.OXTG的环境中连续培养20代,通过空斑抑制试验测定各代病毒株对C.OXTG的敏感性,测定野生HSV1、培养20代后的HSV1的耐药性及其生物克隆株的胸腺嘧啶核苷激酶的活性。结果HSV1在含C.OXTG的环境中连续传代培养4代后,便出现了耐药性。培养20代后的病毒株及其克隆株的ED50为野生株的10倍,且病毒的TK酶活性远远低于野生病毒株。结论HSV1在含C.OXTG的环境中很快产生耐药性且耐药病毒株缺乏TK酶活性。 展开更多
关键词 Carbocyclic Oxetanocin G 耐药性 单纯疱疹病毒 嘧啶核侍激酶
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HSV-1感染后认知功能障碍小鼠海马组织细胞周期素依赖性蛋白激酶5mRNA的表达 被引量:2
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作者 赵春梅 刘强 +1 位作者 惠晶 王振海 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期208-210,219,共4页
目的探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)在单纯疱疹病毒-1型(HSV-1)感染后认知功能障碍小鼠海马组织中的表达变化及其作用。方法将雄性C57BL/6小鼠100只随机分为模型组、假手术组及正常组。采用颅内注射法建立单纯疱疹病毒性脑炎(HSE... 目的探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)在单纯疱疹病毒-1型(HSV-1)感染后认知功能障碍小鼠海马组织中的表达变化及其作用。方法将雄性C57BL/6小鼠100只随机分为模型组、假手术组及正常组。采用颅内注射法建立单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)动物模型,感染后20 d进行水迷宫实验评价认知功能,应用RT-qPCR方法检测小鼠海马组织CDK5 mRNA的相对表达量。结果与正常组及假手术组比较,模型组小鼠学习、记忆能力受损明显,模型组小鼠海马组织CDK5的表达水平明显升高(P<0.05)。结论 CDK5有可能参与了HSV-1感染后小鼠认知功能障碍的发生。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒-1型 认知功能障碍 细胞周期素依赖性蛋白激酶5
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AFP启动子介导胸苷激酶表达载体的构建及其特异性表达 被引量:1
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作者 岳殿超 李宝金 +3 位作者 徐辉雄 张泷涓 王瑛 吕明德 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期591-594,共4页
【目的】构建AFP启动子介导HSV-TK基因表达载体,并对其在肝癌细胞中特异性表达进行分析。【方法】采用PCR法扩增人AFP基因启动子。回收纯化后克隆入pBluescript Ⅱ KDR-TK相同克隆位点,切取AFP-TK片段,然后通过酶联反应插入到pEGFP-C1中... 【目的】构建AFP启动子介导HSV-TK基因表达载体,并对其在肝癌细胞中特异性表达进行分析。【方法】采用PCR法扩增人AFP基因启动子。回收纯化后克隆入pBluescript Ⅱ KDR-TK相同克隆位点,切取AFP-TK片段,然后通过酶联反应插入到pEGFP-C1中,构建成pEGFP-C1-AFP-TK。对获得的片段进行鉴定、细胞靶向和外源基因表达的鉴定。【结果】序列分析表明,该启动子含300bp核苷酸,与已报道的序列比较,100%相符。限制性酶切分析,重组质粒pEGFP-C1-AFP-TK已经克隆AFP启动子。RT-PCR及Western blotting分析pEGFP-C1-AFP-TK转染后的HepG2细胞后,表明TK基因在mRNA水平上能有效的表达,裂解后的HepG2细胞膜蛋白中有相对分子质量约61~83ku大小的特异性条带。【结论】人肝细胞癌(HepG2)靶向性质粒pEGFP-C1-AFP-TK构建成功。 展开更多
关键词 AFP启动子 HEPG2细胞 靶向表达 单纯疱疹病毒-嘧啶激酶1
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AdCMV-TK和AdCMV-p53联合治疗胶质瘤的体外实验 被引量:4
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作者 王金环 房欣 +1 位作者 史国利 蔡宝立 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期169-172,共4页
目的 为了探讨联合应用单纯疱疹病毒 胸苷激酶和野生型p5 3两种基因治疗胶质瘤的可能性。方法 构建了含CMV启动子和单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV TK)的重组腺病毒AdCMV TK和含CMV启动子及野生型p5 3的重组腺病毒AdCMV p5 3。以感... 目的 为了探讨联合应用单纯疱疹病毒 胸苷激酶和野生型p5 3两种基因治疗胶质瘤的可能性。方法 构建了含CMV启动子和单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV TK)的重组腺病毒AdCMV TK和含CMV启动子及野生型p5 3的重组腺病毒AdCMV p5 3。以感染复数 (MOI)为 1 0 0的病毒剂量 ,用AdCMV TK和AdCMV p5 3同时感染人胶质母细胞瘤细胞系TJ90 5 ,并以 1 0 0MOI的AdCMV TK和AdCMV p5 3分别感染另外两组TJ90 5细胞。除感染AdCMV p5 3的细胞外 ,其他两组均于感染后加入 1 0 0 μmol/LGCV。 结果 感染AdCMV p5 3的TJ90 5细胞 ,其生长受到抑制 ,于感染后第 5d,细胞存活率下降为 3 6 9% ,感染AdCMV TK的细胞 ,其生长抑制程度与感染AdCMV p5 3的TJ90 5细胞相似 ,用药后第 5d ,细胞存活率为 3 0 1 % ,而同时感染两种重组腺病毒的细胞 ,细胞生长的抑制程度更明显 ,应用 1 0 0μmol/LGCV后第 5d,细胞存活率仅为 8 8%。结论 联合应用AdCMV TK和AdCMV p5 展开更多
关键词 体外实验 单纯疱疹病毒-激酶 野生型P53基因 重组病毒 pACCMV AdCMV-p53 胶质瘤 脑肿瘤 基因治疗
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一种嵌合型调控元件在肿瘤靶向基因治疗中的应用
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作者 周培杰 高维强 方煜翔 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期255-262,共8页
肿瘤靶向基因治疗成功的关键是调控治疗基因在肿瘤细胞中特异、高效地表达。首次构建一种嵌合型表达调控元件,旨在转录水平、转录后水平和翻译水平上实现联合调控目的基因在肿瘤细胞中特异性表达。体外实验表明,在前列腺癌细胞系LNCa P... 肿瘤靶向基因治疗成功的关键是调控治疗基因在肿瘤细胞中特异、高效地表达。首次构建一种嵌合型表达调控元件,旨在转录水平、转录后水平和翻译水平上实现联合调控目的基因在肿瘤细胞中特异性表达。体外实验表明,在前列腺癌细胞系LNCa P中,该调控元件可将报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和荧光素酶(luciferase)的肿瘤表达特异性分别提高420%和480%。体外细胞存活实验表明,运用该元件调控单纯疱疹病毒-1胸腺激酶(HSV-1 TK)的表达能特异性杀伤LNCa P细胞,验证了该元件可成功用于治疗基因的肿瘤靶向表达。 展开更多
关键词 肿瘤靶向基因治疗 嵌合型表达调控条件 绿色荧光蛋白 单纯疱疹病毒-1胸腺激酶 前列
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