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白细胞介素18、单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因联合修饰骨髓间充质干细胞治疗脑胶质瘤 被引量：4
1
作者 李春晖 焦保华 +3 位作者 康春生 史彦芳 郭毅 崔凯 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期325-330,共6页
目的了解骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)联合转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因(HSV-tk)和白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)后在荷瘤大鼠体内的治疗作用。方法提取1周龄大鼠骨髓培养大鼠骨髓间充质干细胞。骨髓间... 目的了解骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)联合转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因(HSV-tk)和白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)后在荷瘤大鼠体内的治疗作用。方法提取1周龄大鼠骨髓培养大鼠骨髓间充质干细胞。骨髓间充质干细胞转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因(BMSCs/tk)或白细胞介素18(BMSCs/IL-18)或联合转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因、白细胞介素18(BMSCs/tk/IL-18),而后进行体内外试验检测其抗肿瘤作用。检测荷瘤鼠脾脏淋巴细胞免疫活性,采用TUNEL方法检测胶质瘤内的凋亡细胞,抗-CD34染色检测微血管密度(MVD),检测淋巴细胞的浸润,记录试验大鼠的生存期。结果骨髓间充质干细胞可稳定转染IL-18及tk基因,BMSCs/tk和BMSCs/IL-18/tk均显示了明显的旁观者效应,荷瘤鼠移植BMSCs/IL-18或BMSCs/IL-18/tk后,血清白细胞介素2和干扰素-γ浓度明显增高,并且接受移植的荷瘤鼠再次受到C6细胞冲击后可诱导快速的抗肿瘤免疫反应。微血管密度检测显示,BMSCs/IL-18(4.50±2.19)、BMSCs/tk/IL-18(3.65±2.13)与对照组(7.15±2.11)、PBS组(7.55±1.64)、BMSCs组(7.80±2.28)、BMSCs/tk组(7.65±1.84)比较有明显低的微血管密度(P<0.05),通过TUNEL检测、浸润淋巴细胞计数、细胞因子浓度及荷瘤鼠生存期比较,BMSCs/IL-18/tk比BMSCs/IL-18或BMSCs/tk显示了更加明显的抗肿瘤作用,BMSCs/IL-18/tk组生存期明显延长。结论联合转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因和白细胞介素18的骨髓间充质干细胞显示了明显的抗恶性胶质瘤作用,骨髓间充质干细胞可能成为一种理想的治疗颅内胶质瘤的基因治疗载体。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 白细胞介素18 胶质瘤 单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因
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全反式维甲酸增强超声微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶自杀基因治疗荷肝癌裸鼠的效果 被引量：3
2
作者 蔡宇 廖伟 +4 位作者 周世骥 唐勇 龚建平 刘长安 李生伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第20期2112-2115,共4页
目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能否提高微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)自杀基因对肝癌的体内治疗作用。方法用人肝癌SMMC-7721细胞建立皮下裸鼠移植瘤模型,先检... 目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能否提高微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)自杀基因对肝癌的体内治疗作用。方法用人肝癌SMMC-7721细胞建立皮下裸鼠移植瘤模型,先检测不同剂量ATRA的抗肿瘤效应;再用ATRA联合基因治疗,实验分4组:磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组、联合治疗组,各组测量肿瘤体积,计算抑瘤率,Western blot检测输注的目的基因质粒的表达,HE染色行病理学观察,免疫组化法检测连接蛋白Cx32的表达。结果 ATRA在1 mg/kg下无抗肝癌作用,但≥4 mg/kg即具有明显抗肝癌效应;抑瘤率在磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组、联合治疗组分别为0、(7.46±7.25)%、(37.65±3.87)%、(59.04±3.08)%,联合治疗组分别与磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HE结果显示:采用ATRA联合基因治疗后,肿瘤坏死细胞明显较对照组多,免疫组化结果显示:ATRA处理过的组织中,Cx32蛋白表达增加,且以胞膜表达为主。结论 ATRA具有抗肝癌作用;ATRA能增强超声微泡包裹的HSV-TK自杀基因杀伤肝癌的效果,其可能机制与ATRA促进了Cx32蛋白的正常表达有关。 展开更多
关键词 肝肿瘤 全反式维甲酸 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 超声微泡 连接蛋白32
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腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦系统联合光动力治疗口腔恶性肿瘤的初步观察 被引量：3
3
作者 陈世璋 张燕升 +5 位作者 范忠 李维弟 郭莹 王潇 陈剑飞 李宁 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期610-613,617,共5页
目的应用腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶(ADV-TK)/更昔洛韦(GCV)系统联合光动力疗法对口腔恶性肿瘤复发患者进行治疗,探讨此法治疗口腔恶性肿瘤的临床效果。方法选取10名口腔不同部位的恶性肿瘤复发患者,用光敏剂——血卟啉衍生物(... 目的应用腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶(ADV-TK)/更昔洛韦(GCV)系统联合光动力疗法对口腔恶性肿瘤复发患者进行治疗,探讨此法治疗口腔恶性肿瘤的临床效果。方法选取10名口腔不同部位的恶性肿瘤复发患者,用光敏剂——血卟啉衍生物(HPD)静脉给药,选择相应激光输出功率定时照射,以ADV-TK基因行瘤体及周边注射,经GCV静脉输入治疗后,通过影像学及瘤体血流动力学分析进行临床疗效评估。结果经联合法治疗后,患者肿瘤明显缩小(甚至完全消失),瘤体内血流量降低,影像结果对比改变明显,治疗效果理想。结论将ADV-TK/GCV系统联合光动力治疗口腔恶性肿瘤具有显著的抗肿瘤效应,具备副作用轻微、临床安全性高的特点,为系统性治疗相关肿瘤提供了一种安全可靠的治疗手段。 展开更多
关键词 腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦系统 光动力 血卟啉衍生物 恶性肿瘤
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单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因在大肠杆菌中的融合表达 被引量：1
4
作者 陈伟 喻启桂 +2 位作者 薛采芳 甄荣芬 樊荣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期91-93,共3页
用ＥｃｏＲ Ⅰ和Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切已构建的含单纯疱疹病毒Ｉ 型胸苷激酶（ ＨＳＶ１ ＴＫ） 基因的ｐ ＵＣ１８／ＴＫ 质粒，将切出的ＴＫ 基因片段克隆入原核表达载体ｐ ＷＲ４５０１ 中，构建成ＨＳＶ１ ＴＫ 基因重组表达质粒... 用ＥｃｏＲ Ⅰ和Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切已构建的含单纯疱疹病毒Ｉ 型胸苷激酶（ ＨＳＶ１ ＴＫ） 基因的ｐ ＵＣ１８／ＴＫ 质粒，将切出的ＴＫ 基因片段克隆入原核表达载体ｐ ＷＲ４５０１ 中，构建成ＨＳＶ１ ＴＫ 基因重组表达质粒ｐ ＷＲ４５０１／ＴＫ。以ＨＳＶ１ ＴＫ 特异性引物ＴＫ１ Ｆｏｒ 和ＴＫ２ Ｒｅｖ 进行ＰＣＲ 鉴定可扩增出预期的５０３ ｂｐ 的ＴＫ 基因编码区部分序列；ＥｃｏＲ Ⅰ和Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切质粒ｐ ＷＲ４５０１／ ＴＫ， 可切出约１１５０ｂｐ 的ＤＮＡ 片段， 表明重组质粒中已插入ＨＳＶ１ ＴＫ基因片段。用ＩＰＴＧ 诱导ｐ ＷＲ４５０１／ＴＫ／ＪＭ１０９ ，表达出相对分子质量（ Ｍｒ） 约为９７ ０００ 的ＴＫ 和β半乳糖苷酶（ Ｍｒ５５ ０００） 融合蛋白。薄层扫描显示，该融合蛋白含量占菌体蛋白总量的２７ ．４７ ％ 。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 融合表达 大肠杆菌
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I型单纯疱疹病毒感染对人角膜上皮细胞基质金属蛋白酶-2和黏着斑激酶表达的影响 被引量：3
5
作者 曹婷 邢怡桥 +1 位作者 杨燕宁 梅海峰 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1050-1054,共5页
背景研究表明，I型单纯疱疹病毒（HSV-1）感染可导致角膜上皮细胞（CECs）基质金属蛋白酶（MMPs）表达、分泌和活性改变。黏着斑激酶（FAK）对MMPs的表达、释放和激活起着重要的调节作用。人角膜上皮感染HSV-1后FAK的表达变化鲜有报道... 背景研究表明，I型单纯疱疹病毒（HSV-1）感染可导致角膜上皮细胞（CECs）基质金属蛋白酶（MMPs）表达、分泌和活性改变。黏着斑激酶（FAK）对MMPs的表达、释放和激活起着重要的调节作用。人角膜上皮感染HSV-1后FAK的表达变化鲜有报道。目的探讨HSV-1感染对体外培养的人CECsMMP-2和FAK表达的影响。方法以HSV-1（F株）感染体外培养的人CECs，应用逆转录PCR（RT—PCR）、免疫印迹法、免疫组织化学法分别于感染后2、20、40h检测人CECsMMP-2、FAK及磷酸化黏着斑激酶（p-FAK）的表达情况。结果RT．PCR法检测结果显示，感染细胞的MMP-2mRNA、FAKmRNA较非感染细胞（即加入无病毒无血清培养液的阴性对照组）的表达明显增强，不同时间点间比较差异无统计学意义，组别与时间点间不存在交互作用（MMP-2mRNA：F目目=0．968，P=0．436；F蚴I=47．649，P=0．000；F女Ⅱ#目=0．757，P=0．536．FAKmRNA：F时间=0．658，P=0．631；F组别=35．182，P=0．000；F交互作用=1．386，P=0．137）。Westernblot法检测结果显示，感染后2h时p-FAK、FAK、MMP-2在感染细胞与非感染细胞间差异均无统计学意义（P’0．05），感染后20h、40h感染细胞的蛋白表达较非感染细胞均明显增强（P〈0．05）。免疫组织化学染色检测结果显示，随着感染时间的延长，MMP-2、FAK、p-FAK蛋白染色阳性细胞数目增多。结论在HSV-1感染早期，FAK的激活可刺激MMPs活性增强，从而加速角膜溃疡及坏死性病变的形成。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶-2 黏着斑激酶 I型单纯疱疹病毒 角膜炎
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单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因融合表达产物的免疫学特性研究 被引量：2
6
作者 陈伟 薛采芳 +1 位作者 甄荣芬 樊荣 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 2000年第4期305-307,共3页
目的研究TK基因在真核细胞中的表达。方法应用已构建和表达的单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV 1TK)融合蛋白免疫兔制备抗HSV 1TK血清 ,并以免疫印迹法鉴定其特异性 ,以免疫荧光法检测HSV 1TK基因在转染人肝癌细胞系中的表达。结果免疫印迹... 目的研究TK基因在真核细胞中的表达。方法应用已构建和表达的单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV 1TK)融合蛋白免疫兔制备抗HSV 1TK血清 ,并以免疫印迹法鉴定其特异性 ,以免疫荧光法检测HSV 1TK基因在转染人肝癌细胞系中的表达。结果免疫印迹显示 ,自制和国外提供的抗TK兔血清 ,均能特异性地识别Mr 约为97000的TK融合蛋白。免疫荧光染色得到的结果满意 ,而且自制抗血清的效价和染色强度均优于国外提供的免疫血清。结论原核表达的HSV 1TK融合蛋白具有较好的免疫学活性 ;自制抗HSV 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 基因治疗 基因表达
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全反式维A酸对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因结合更昔洛韦旁观者效应增强作用及其机制 被引量：1
7
作者 黄光琦 宋毅 +3 位作者 陆燕蓉 张洁 肖林 杨元 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期432-437,共6页
目的　通过研究全反式维A酸 (ATRA )对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因结合更昔洛韦 (HSV tk/GCV)旁观者效应的增强作用及与Cx4 3表达的关系 ,为提高TK自杀基因的疗效及探索增强作用机制提供实验基础。方法　应用Polybrene转染、荧光定量RT PC... 目的　通过研究全反式维A酸 (ATRA )对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因结合更昔洛韦 (HSV tk/GCV)旁观者效应的增强作用及与Cx4 3表达的关系 ,为提高TK自杀基因的疗效及探索增强作用机制提供实验基础。方法　应用Polybrene转染、荧光定量RT PCR等技术 ,观察ATRA对宫颈癌细胞ME180 ,ME180 /TK转化细胞旁观者效应及诱导Cx4 3mRNA表达的作用。结果　ME180 ,ME180 /TK不同比例的混合细胞随ATRA浓度的增加而存活率降低。ME180 +ME180 /TK混合细胞的存活率随ME180 /TK细胞比例的增加而降低。在 2mg·L- 1更昔洛韦 (GCV)作用下 ,以 10 - 8mol·L- 1ATRA与不加ATRA (0mol·L- 1)的作用相比较 ,在ME180与ME180 /TK不同比例混合的各组中 ,细胞的存活率明显降低 (P <0 .0 5 )。并观察到10 - 8及 10 - 10 mol·L- 1ATRA对GCV旁观者效应的增强作用。RT PCR结果表明 ,经ATRA处理的ME180细胞 ,其Cx4 3mRNA的相对拷贝数比值增高约 1.84倍及 2 .6 5倍。结论　宫颈癌ME180细胞中 ,ATRA在10 - 8～ 10 - 10 mol·L- 1范围内 ,具有明显增强HSV tk/GCV旁观者效应的作用。其主要机制是通过ATRA在转录水平诱导Cx4 3mRNA表达上调 ,导致旁观者效应的增强。 展开更多
关键词 维A酸 基因 单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦 旁观者效应 细胞缝隙连接通讯 基因表达 细胞 ME180
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单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因部分缺失重组质粒的构建及序列分析
8
作者 甄荣芬 喻启桂 +2 位作者 陈伟 樊荣 薛采芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期88-90,共3页
目的：构建ＨＳＶ１ 型胸苷激酶基因部分缺失的重组质粒并进行序列测定。方法：以ｐ ＵＣ１８／ ＴＫ 重组质粒ＤＮＡ 为模板，用ＰＣＲ 方法扩增ＴＫ５′端５０３ｂｐ 基因片段，并将扩增的片段克隆入载体ｐ ＵＣ１８ 中（ｐ ＵＣ１... 目的：构建ＨＳＶ１ 型胸苷激酶基因部分缺失的重组质粒并进行序列测定。方法：以ｐ ＵＣ１８／ ＴＫ 重组质粒ＤＮＡ 为模板，用ＰＣＲ 方法扩增ＴＫ５′端５０３ｂｐ 基因片段，并将扩增的片段克隆入载体ｐ ＵＣ１８ 中（ｐ ＵＣ１８／ＴＫ１） ；用Ｐｓｔ Ｉ 和Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切ｐＵＣ１８／ ＴＫ， 获得ＴＫ３′端３８３ｂｐ 片段， 将此酶切片段克隆入ｐＵＣ１８／ ＴＫ１ 中， 并进行测序。结果： 构建成重组质粒ｐＵＣ１８／ ＴＫ－ 。经酶切鉴定获得１ 条约９００ ｂｐ 的基因片段； 序列测定证实， ＨＳＶ１１７ｓｙｎ ＋ ＴＫ 基因缺失了第４９３ ～７４４ 位２５１ 对碱基。结论：成功地构建了部分缺失的ＨＳＶ１／ＴＫ－ 基因重组质粒，为研制其突变株奠定了基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 基因缺失 序列分析
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单纯疱疹病毒胸苷激酶多克隆抗体的制备
9
作者 张煜 于湘辉 +2 位作者 查晓 王安荣 孔维 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1089-1091,共3页
目的:克隆单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因,并在大肠杆菌中表达,通过免疫家兔,获得HSV-TK多克隆抗体,为进一步研究HSV-TK的功能奠定基础。方法:从纯化的单纯疱疹病毒(HSV)中提取病毒基因组,用PCR特异性扩增HSV-TK全长基因,克隆入表达... 目的:克隆单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因,并在大肠杆菌中表达,通过免疫家兔,获得HSV-TK多克隆抗体,为进一步研究HSV-TK的功能奠定基础。方法:从纯化的单纯疱疹病毒(HSV)中提取病毒基因组,用PCR特异性扩增HSV-TK全长基因,克隆入表达载体pRSETB中进行表达,以纯化的表达产物免疫家兔制备多克隆抗血清,进行Western blotting鉴定。结果:用IPTG诱导后,表达出相对分子质量(Mr)约43000的融合蛋白,免疫家兔制备的兔血清,第2～5周每周采血1次,Western blotting检测均获得特异性蛋白带;最后一次样品3个稀释度(1∶1000、1∶3000、1∶5000)的Western blotting分析仍可以检出蛋白质带。结论:成功获得了特异性强和滴度高的HSV-TK多克隆抗体。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒属 胸苷激酶 基因表达 多克隆抗体
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单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)治疗大鼠9L胶质肉瘤的疗效
10
作者 洪波 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1996年第2期134-134,共1页
<正>为了评价HSV-tk基因转染加GCV治疗方案的效果,本研究采用Fischer 344大鼠9L胶质肉瘤模型,所使用的物品和实验的条件尽量同NIH研究组相同,包装细胞为G1TkSvNa 53,立体定向脑内接种4×10~4肿瘤细胞,第5天同样接种包装细胞1.... <正>为了评价HSV-tk基因转染加GCV治疗方案的效果,本研究采用Fischer 344大鼠9L胶质肉瘤模型,所使用的物品和实验的条件尽量同NIH研究组相同,包装细胞为G1TkSvNa 53,立体定向脑内接种4×10~4肿瘤细胞,第5天同样接种包装细胞1.5～6×10,第10～24天,腹腔注射GCV,15mg/kg。另外本研究还观察了体外转染tk基因后用GCV治疗的效果。结果:HSV-tk+GCV组的生存期是23.90±0.90天,HSV-tk+生理盐水组是24.0±0.4天,βgal+GCV组是24.7±1.8天,各组之间的存活期无显著差异,增加包装细胞的浓度也不能延长存活期。而体外转染tk基因(肿瘤细胞100％转染)接种于脑内后用GCV治疗可以治愈约1/4的大鼠,而同样皮下接种脑瘤模型却有约2/3的大鼠得到治愈。本研究还对“旁观者效应”(bystander effect)和GCV治疗浓度的问题进行了研究和探讨。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶基因 HSV-TK 治疗 大鼠 9L胶质肉瘤
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单纯疱疹病毒胸苷激酶基因在骨肉瘤细胞中的表达和作用
11
作者 乔慧 丘钜世 +1 位作者 李扬 张惠忠 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2001年第2期143-145,共3页
目的 :观察单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV TK)及其底物丙氧鸟苷 (GCV)的基因治疗系统对骨肉瘤细胞株SAOS 2的杀伤作用。方法 :用DOTAP将含有HSV TK基因的真核表达质粒tgCMV HyTK导入骨肉瘤细胞株SAOS 2 ;提取阳性转染细胞 (SAOS 2TK)的... 目的 :观察单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV TK)及其底物丙氧鸟苷 (GCV)的基因治疗系统对骨肉瘤细胞株SAOS 2的杀伤作用。方法 :用DOTAP将含有HSV TK基因的真核表达质粒tgCMV HyTK导入骨肉瘤细胞株SAOS 2 ;提取阳性转染细胞 (SAOS 2TK)的总RNA ,用斑点杂交的方法检测HSV TK基因的表达 ;用MTT比色法测定SAOS 2TK细胞对GCV的敏感性及“旁观者效应”。结果 :SAOS 2TK细胞能产生稳定的TK基因的转录产物 ;SAOS 2TK细胞在GCV的作用下呈现明显的生长抑制效应 ,且观察到强效的“旁观者效应”。结论 :HSV 展开更多
关键词 骨肿瘤 骨肉瘤 基因治疗 单纯疱疹病毒胸苷激酶
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外泌体与疱疹病毒感染介导疼痛发生的研究进展
12
作者 李陈广 高翔宇 +3 位作者 白雨婷 许晨亮 樊碧发 肖礼祖 《中国疼痛医学杂志》 北大核心 2025年第2期85-92,共8页
外泌体是一类由多种细胞分泌的磷脂双分子层包裹的囊状结构,内含多种蛋白质、脂类和核酸等。外泌体不仅参与正常的免疫调节和细胞间的信息传递,还参与各种疾病的发生和发展。单纯疱疹病毒和水痘-带状疱疹病毒属于人类α疱疹病毒,感染后... 外泌体是一类由多种细胞分泌的磷脂双分子层包裹的囊状结构,内含多种蛋白质、脂类和核酸等。外泌体不仅参与正常的免疫调节和细胞间的信息传递,还参与各种疾病的发生和发展。单纯疱疹病毒和水痘-带状疱疹病毒属于人类α疱疹病毒,感染后可引发皮肤病变和神经病理性疼痛等症状。本文将重点综述外泌体在疱疹病毒感染过程及其相关疾病中的作用,特别是在病毒感染和带状疱疹后神经痛方面的机制研究。疱疹病毒感染中的外泌体有望成为疱疹性相关疾病预防、诊断和治疗的新策略。 展开更多
关键词 外泌体 疱疹病毒 单纯疱疹病毒 水痘-带状疱疹病毒 疼痛
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单纯疱疹病毒胸苷激酶基因真核表达载体的构建及其在食管癌细胞中的表达 被引量：3
13
作者 李杰 郭玉忠 +1 位作者 谢华 薛乐勋 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第1期47-50,共4页
目的 :构建含单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV -tk)基因的真核表达载体 (pcDNA3-tk) ,并观察能否在食管癌细胞株中表达。方法 :将HSV -tk的cDNA亚克隆于真核表达载体pcDNA3上 ,构建pcDNA3-tk。后者经脂质体介导转染食管癌细胞株Eca - 1 0 9,... 目的 :构建含单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV -tk)基因的真核表达载体 (pcDNA3-tk) ,并观察能否在食管癌细胞株中表达。方法 :将HSV -tk的cDNA亚克隆于真核表达载体pcDNA3上 ,构建pcDNA3-tk。后者经脂质体介导转染食管癌细胞株Eca - 1 0 9,通过高剂量的G4 1 8选择培养 ,筛选出抗性克隆。经RT -PCR检测确定HSV -tk基因是否能在转染细胞内转录。结果 :成功地构建了真核表达载体pcDNA3-tk ,并且在pcDNA3-tk转染的食管癌细胞内发现tk基因的mRNA。结论 :含HSV 展开更多
关键词 食管肿瘤 基因治疗 TK基因 单纯疱疹病毒胸苷激酶 真核表达载体
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单纯疱疹病毒胸苷激酶丙氧鸟苷自杀基因系统对宫颈癌Hela细胞系体外杀伤作用的研究 被引量：2
14
作者 薛文群 詹惠英 +5 位作者 陈道桢 赵琪 朱云霞 杨幼易 鲁晓萱 樊启英 《医学研究生学报》 CAS 2005年第1期4-7,共4页
目的 :观察单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK)丙氧鸟苷 (GCV)自杀基因系统对人宫颈癌Hela细胞系体外杀伤作用及其旁观效应。　方法 :采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317。取病毒上清液感染Hela细胞 ,得到带有HSV TK基因的Hela... 目的 :观察单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK)丙氧鸟苷 (GCV)自杀基因系统对人宫颈癌Hela细胞系体外杀伤作用及其旁观效应。　方法 :采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317。取病毒上清液感染Hela细胞 ,得到带有HSV TK基因的Hela/TK细胞 ,并将其用于体外实验。　结果 :载体HSV TK导入了PA317细胞。体外实验结果显示 ,当Hela/TK细胞数占混合细胞 10 %时 ,低浓度 (10mg/L)的GCV就可将 5 0 %左右的肿瘤细胞杀死。GCV作用后的实验组Hela /TK细胞基因组经琼脂糖凝胶电泳后可观察到典型的DNA梯状条带。　结论 :逆转录病毒可介导HSV TK基因转入人宫颈癌Hela细胞并获稳定表达 ,HSV TK/GCV自杀基因系统在体外对宫颈癌细胞有杀伤作用 ,且存在明显的旁观效应。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒胸苷激酶 旁观效应 逆转录病毒载体 人宫颈癌 自杀基因治疗
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单纯疱疹病毒胸苷激酶基因表达对人肝癌细胞的生长抑制
15
作者 李旭 陈葳 +1 位作者 杨兆瑞 施新猷 《西安医科大学学报》 CSCD 1996年第3期279-281,共3页
使用转导有单纯疱疹Ⅰ型病毒胸苷激酶（ＨＳＶ１－ＴＫ）基因的人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞株建立了裸鼠移植瘤模型，并进行了在体和体外试验性无环鸟苷（ＡＣＶ）治疗。结果发现基因转导后的肝癌细胞表现出对ＡＣＶ的敏感性，肝癌细... 使用转导有单纯疱疹Ⅰ型病毒胸苷激酶（ＨＳＶ１－ＴＫ）基因的人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞株建立了裸鼠移植瘤模型，并进行了在体和体外试验性无环鸟苷（ＡＣＶ）治疗。结果发现基因转导后的肝癌细胞表现出对ＡＣＶ的敏感性，肝癌细胞生长抑制与ＡＣＶ的剂量有关；用药组裸鼠除平均瘤重明显低于对照组外，还可见细胞核分裂指数降低，伴有细胞变性和坏死。结果表明：ＨＳＶ１－ＴＫ基因经逆转录病毒转导后，用ＡＣＶ诱导表达明显抑制了人肝癌细胞的生长。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 基因表达 肝肿瘤
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小檗碱衍生物HB-13抗单纯疱疹病毒-2作用机制的研究 被引量：7
16
作者 吴建兵 李新宇 +2 位作者 林麟 崔盘根 郑家润 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期376-379,共4页
目的探讨小檗碱衍生物HB-13抗单纯疱疹病毒-2(HSV-2)的作用机制。方法采用细胞病变法检测HB-13是否对HSV-2有直接作用;空斑法检测HB-13是否抑制HSV-2的吸附和释放;荧光定量PCR检测HB-13是否影响HSV-2 DNA复制以及蛋白免疫印迹方法检测HB... 目的探讨小檗碱衍生物HB-13抗单纯疱疹病毒-2(HSV-2)的作用机制。方法采用细胞病变法检测HB-13是否对HSV-2有直接作用;空斑法检测HB-13是否抑制HSV-2的吸附和释放;荧光定量PCR检测HB-13是否影响HSV-2 DNA复制以及蛋白免疫印迹方法检测HB-13是否影响HSV-2蛋白质合成。结果HB-13在细胞外无直接杀灭HSV-2作用;对HSV-2的吸附和释放亦无影响;不抑制HSV-2 DNA复制;但HB-13浓度依赖性地抑制HSV-2蛋白质合成。结论HB-13可抑制HSV-2蛋白质合成,其抗HSV-2作用机制与ACV等核苷类药物不同。 展开更多
关键词 小檗碱衍生物HB-13 单纯疱疹病毒-2 抗病毒 作用机制
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灰树花β-葡聚糖体外抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的试验 被引量：7
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作者 王文秀 孙红武 徐泽平 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2012年第9期10-13,共4页
本研究通过观察细胞病变效应对其细胞毒性、病毒灭活、吸附和增殖等进行体外抗病毒研究,从而研究其抗病毒效应。结果显示,β-葡聚糖对Ⅰ型单纯疱疹病毒在Vero E6细胞上的增殖有明显的抑制作用,测定其IC50为5.18mg/mL,TI为34.1。结果表明... 本研究通过观察细胞病变效应对其细胞毒性、病毒灭活、吸附和增殖等进行体外抗病毒研究,从而研究其抗病毒效应。结果显示,β-葡聚糖对Ⅰ型单纯疱疹病毒在Vero E6细胞上的增殖有明显的抑制作用,测定其IC50为5.18mg/mL,TI为34.1。结果表明,灰树花β-葡聚糖能明显抑制Ⅰ型单纯疱疹病毒引起的CPE效应,具有较好的抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的作用。 展开更多
关键词 灰树花 Β-葡聚糖 抗病毒 Ⅰ型单纯疱疹病毒
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核转录因子-κB与1型单纯疱疹病毒的免疫逃避机制 被引量：1
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作者 尹婕 黄振平 车敦发 《实用医学杂志》 CAS 2007年第9期1428-1430,共3页
1型单纯疱疹病毒（HSV-1）的成人感染率高达60%～90%,引起疱疹、特应性湿疹、致盲性的角膜基质炎,对免疫缺陷、免疫抑制等易感人群甚至造成致死性脑炎或肝炎。HSV-1最显著的生物学特性是能在原发感染后在体内潜伏，并持续存在。高热、... 1型单纯疱疹病毒（HSV-1）的成人感染率高达60%～90%,引起疱疹、特应性湿疹、致盲性的角膜基质炎,对免疫缺陷、免疫抑制等易感人群甚至造成致死性脑炎或肝炎。HSV-1最显著的生物学特性是能在原发感染后在体内潜伏，并持续存在。高热、免疫抑制、手术可激活潜伏的HSV-1，引起症状性发作，或无症状性的病毒播散，广泛地累及人群。 展开更多
关键词 1型单纯疱疹病毒 核转录因子-ΚB 免疫逃避机制 HSV-1 易感人群 免疫抑制 无症状性 成人感染率
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腺病毒介导的VEGF启动子-胸苷激酶表达系统对肝癌细胞的选择性杀伤作用 被引量：4
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作者 王孟龙 殷正丰 +2 位作者 吴宗娣 王率 吴孟超 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期12-14,共3页
目的 :构建携带受血管内皮生长因子 (VEGF)启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV- tk)的重组腺病毒载体 ,并探讨该重组腺病毒对体外培养的肝癌细胞的特异性杀伤活性。方法 :采用 Ad Easy System构建携带受 VEGF启动子或巨细胞病毒... 目的 :构建携带受血管内皮生长因子 (VEGF)启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV- tk)的重组腺病毒载体 ,并探讨该重组腺病毒对体外培养的肝癌细胞的特异性杀伤活性。方法 :采用 Ad Easy System构建携带受 VEGF启动子或巨细胞病毒 (CMV)启动子调控 tk基因表达的 Ad VEGF- tk和 Ad CMV- tk,这两种重组腺病毒载体在 2 93细胞中包装、扩增后 ,体外感染正常肝细胞系 L 0 2和肝癌细胞系 Hep G2 ,并用不同浓度的丙氧鸟苷 (GCV)处理后以 MTT法检测受染细胞的增殖情况。 结果 :Ad VEGF- tk的病毒滴度为 1× 10 1 0 pfu/ ml,Ad CMV- tk为 5× 10 1 0 pfu/ ml。 L 0 2细胞感染 Ad VEGF- tk后对GCV的敏感性无明显改变 ,而 Hep G2细胞感染 Ad VEGF- tk后对 GCV的敏感性明显增加 ,在感染复数 (MOI)为 10 0并用 5 0μg/ m l GCV处理时 ,则有 90 %以上 Hep G2细胞被杀死 ;而 Ad CMV- tk可杀死 95 %Hep G2细胞和 80 %以上 L 0 2细胞。 结论 :VEGF启动子调控的 HSV- tk基因表达可特异性地杀死肝癌细胞 ,同时对正常肝细胞几无影响。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 单纯疱疹病毒胸苷激酶 腺病毒 肝癌 细胞 VEGF 启动子
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κ-卡拉胶寡糖硫酸基含量与其抗疱疹病毒活性的关系 被引量：14
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作者 栾晖 牟海津 +1 位作者 罗兵 江晓路 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2010年第1期110-116,共7页
利用酶解法降解κ-卡拉胶,得到κ-卡拉胶寡糖(KOS)。利用甲酰胺-氯磺酸和二甲基亚砜-甲醇-吡啶方法,分别得到κ-卡拉胶寡糖磺化衍生物(SKO)和κ-卡拉胶寡糖脱硫酸基衍生物(DSK)。利用单纯疱疹病毒HSV-1研究了κ-卡拉胶寡糖硫酸基含量与... 利用酶解法降解κ-卡拉胶,得到κ-卡拉胶寡糖(KOS)。利用甲酰胺-氯磺酸和二甲基亚砜-甲醇-吡啶方法,分别得到κ-卡拉胶寡糖磺化衍生物(SKO)和κ-卡拉胶寡糖脱硫酸基衍生物(DSK)。利用单纯疱疹病毒HSV-1研究了κ-卡拉胶寡糖硫酸基含量与抗病毒活性之间的关系,同时从对病毒的直接作用、阻止病毒对细胞的吸附和影响病毒复制与释放3个途径初步探讨了κ-卡拉胶寡糖抗疱疹病毒的机理。结果表明,KOS及SKO对Vero细胞毒性极低,对单纯疱疹病毒HSV-1无直接灭活作用,也不影响病毒的复制和释放,但是能够阻止病毒对细胞的吸附。相同浓度下,SKO对病毒吸附的抑制率要明显高于KOS,DSK对病毒则无明显作用。实验说明,κ-卡拉胶寡糖硫酸基含量与其抗疱疹病毒活性二者呈正相关,而且κ-卡拉胶寡糖及其磺化衍生物的抗病毒活性主要是通过阻止病毒对细胞的吸附而实现。 展开更多
关键词 κ-卡拉胶寡糖 酶解 磺化 脱硫酸基 单纯疱疹病毒
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