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联合应用全反式维甲酸与单纯疱疹病毒腺苷激酶基因对髓母细胞瘤的协同杀伤作用研究
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作者 蒲珂 李少一 +2 位作者 马丽 高芸 刘云会 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期596-598,602,共4页
目的评估全反式维甲酸(ATRA)联合单纯疱疹病毒腺苷激酶(HSV-tk)基因对髓母细胞瘤细胞系Daoy的杀伤作用。方法观察不同浓度ATRA对Daoy细胞生长的抑制作用;HSV-tk基因稳定转染人的髓母细胞瘤细胞系Daoy,获得Daoy-tk细胞;Daoy-tk细胞与Dao... 目的评估全反式维甲酸(ATRA)联合单纯疱疹病毒腺苷激酶(HSV-tk)基因对髓母细胞瘤细胞系Daoy的杀伤作用。方法观察不同浓度ATRA对Daoy细胞生长的抑制作用;HSV-tk基因稳定转染人的髓母细胞瘤细胞系Daoy,获得Daoy-tk细胞;Daoy-tk细胞与Daoy细胞按不同比例混合,给予不同浓度的更昔洛韦(GCV)和一定浓度的ATRA,7d后应用噻唑蓝(MTT)法测定细胞生存率。结果 ATRA在0.5~1μmol/L时即可对Daoy细胞生长产生抑制作用;Daoy-tk与Daoy细胞比例达到1:4时仍有明显的抗肿瘤作用,联合应用1μmol/L的ATRA后能显著提高HSV-tk基因对Daoy细胞的杀伤率。结论 ATRA与HSV-tk/GCV系统联合应用,能增强对人的髓母细胞瘤的杀伤作用。 展开更多
关键词 全反式维甲酸 单纯疱疹病毒腺苷激酶 更昔洛韦 髓母细胞瘤
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全反式维甲酸增强携单纯疱疹病毒胸苷酸激酶基因的超声微泡对SMMC-7721细胞的旁观者效应 被引量:2
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作者 廖伟 李生伟 +4 位作者 刘长安 龚建平 丁雄 蔡宇 周世骥 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第15期1582-1585,共4页
目的观察经全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导后,单纯疱疹病毒胸苷酸激酶/丙氧鸟苷系统(HSV-TK/GCV)对人肝癌细胞SMMC-7721旁观者效应的影响。方法免疫组化法观察经全反式维甲酸诱导前后SMMC-7721细胞连接蛋白Cx32的表达... 目的观察经全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导后,单纯疱疹病毒胸苷酸激酶/丙氧鸟苷系统(HSV-TK/GCV)对人肝癌细胞SMMC-7721旁观者效应的影响。方法免疫组化法观察经全反式维甲酸诱导前后SMMC-7721细胞连接蛋白Cx32的表达;将含有HSV-TK基因的质粒通过静电吸附在脂质微泡表面上,采用超声辐照转染并用倒置显微荧光镜及RT-PCR观察TK基因的转入及表达;MTT法观察经全反式维甲酸诱导后HSV-TK/GCV对肝癌细胞SMMC-7721的旁观者效应。结果经全反式维甲酸诱导后SMMC-7721细胞膜上Cx32表达明显增加,而胞质内仅少量表达;通过超声辐照后HSV-TK基因可顺利转入SMMC-7721细胞中并稳定表达;与对照组相比,经全反式维甲酸诱导组可明显提高HSV-TK/GCV对肝癌细胞SMMC-7721的旁观者效应(P<0.05)。结论全反式维甲酸可提高SMMC-7721细胞中连接蛋白Cx32的表达且能正确定位于细胞膜上,这可能与其能增强HSV-TK/GCV系统对肝癌细胞SMMC-7721的旁观者效应有关。 展开更多
关键词 维甲酸 肝癌 超声微泡 连接蛋白32 单纯疱疹病毒激酶/丙氧鸟
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人端粒酶逆转录酶启动子调控腺病毒介导胸苷激酶基因治疗人膀胱癌的动物实验研究 被引量:5
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作者 连文峰 林向阳 +6 位作者 张素英 王春仙 杨永安 于洋 宫香宇 陈艳军 张敏 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第18期1058-1061,共4页
目的:探讨带有人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(HSV-tk)基因的重组腺病毒Ad-hTERT-HSV-tk结合无毒的环氧鸟苷(GCV)对人膀胱癌的治疗作用。方法:建立人膀胱癌细胞株253JBALB/C裸小鼠移植瘤模型,采用Ad-hTERT-... 目的:探讨带有人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(HSV-tk)基因的重组腺病毒Ad-hTERT-HSV-tk结合无毒的环氧鸟苷(GCV)对人膀胱癌的治疗作用。方法:建立人膀胱癌细胞株253JBALB/C裸小鼠移植瘤模型,采用Ad-hTERT-HSV-tk裸鼠尾静脉注射,腹腔注射GCV治疗并观察结果。通过常规病理切片观察肿瘤破坏情况及安全性;通过TUNEL染色进一步观察肿瘤的凋亡情况,免疫组化法测定增值细胞核抗原(PCNA)。结果:Ad-hTERT-HSV-tk/GCV治疗组,显示出明显的肿瘤抑制作用,其肿瘤体积、重量显著低于各对照组(P<0.05),抑瘤率明显。Ad-hTERT-HSV-tk/GCV治疗组凋亡指数高于其它各组,而增殖指数却明显低于其它各组。结论:Ad-hTERT-HSV-tk/GCV系统对裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用,可以靶向性转入人膀胱癌细胞,治疗效果显著。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 单纯疱疹病毒嘧啶激酶基因 病毒 人端粒酶逆转录酶启动子
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HSV对Carbocyclic Oxetanocin G的耐药性及耐药病毒的胸腺嘧啶核苷激酶的活性研究
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作者 胡楠 龚启荣 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2005年第5期498-500,共3页
目的探讨治疗疱疹病毒性角膜炎的新药CarbocyclicoxetanocinG(C.OXTG)耐药性的产生情况及产生耐药性的机制。方法将1型单纯疱疹病毒(HSV1)接种于非洲绿猴肾细胞,在含10μmol/LC.OXTG的环境中连续培养20代,通过空斑抑制试验测定各代病毒... 目的探讨治疗疱疹病毒性角膜炎的新药CarbocyclicoxetanocinG(C.OXTG)耐药性的产生情况及产生耐药性的机制。方法将1型单纯疱疹病毒(HSV1)接种于非洲绿猴肾细胞,在含10μmol/LC.OXTG的环境中连续培养20代,通过空斑抑制试验测定各代病毒株对C.OXTG的敏感性,测定野生HSV1、培养20代后的HSV1的耐药性及其生物克隆株的胸腺嘧啶核苷激酶的活性。结果HSV1在含C.OXTG的环境中连续传代培养4代后,便出现了耐药性。培养20代后的病毒株及其克隆株的ED50为野生株的10倍,且病毒的TK酶活性远远低于野生病毒株。结论HSV1在含C.OXTG的环境中很快产生耐药性且耐药病毒株缺乏TK酶活性。 展开更多
关键词 Carbocyclic Oxetanocin G 耐药性 单纯疱疹病毒 嘧啶核侍激酶
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AFP启动子介导胸苷激酶表达载体的构建及其特异性表达 被引量:1
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作者 岳殿超 李宝金 +3 位作者 徐辉雄 张泷涓 王瑛 吕明德 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期591-594,共4页
【目的】构建AFP启动子介导HSV-TK基因表达载体,并对其在肝癌细胞中特异性表达进行分析。【方法】采用PCR法扩增人AFP基因启动子。回收纯化后克隆入pBluescript Ⅱ KDR-TK相同克隆位点,切取AFP-TK片段,然后通过酶联反应插入到pEGFP-C1中... 【目的】构建AFP启动子介导HSV-TK基因表达载体,并对其在肝癌细胞中特异性表达进行分析。【方法】采用PCR法扩增人AFP基因启动子。回收纯化后克隆入pBluescript Ⅱ KDR-TK相同克隆位点,切取AFP-TK片段,然后通过酶联反应插入到pEGFP-C1中,构建成pEGFP-C1-AFP-TK。对获得的片段进行鉴定、细胞靶向和外源基因表达的鉴定。【结果】序列分析表明,该启动子含300bp核苷酸,与已报道的序列比较,100%相符。限制性酶切分析,重组质粒pEGFP-C1-AFP-TK已经克隆AFP启动子。RT-PCR及Western blotting分析pEGFP-C1-AFP-TK转染后的HepG2细胞后,表明TK基因在mRNA水平上能有效的表达,裂解后的HepG2细胞膜蛋白中有相对分子质量约61~83ku大小的特异性条带。【结论】人肝细胞癌(HepG2)靶向性质粒pEGFP-C1-AFP-TK构建成功。 展开更多
关键词 AFP启动子 HEPG2细胞 靶向表达 单纯疱疹病毒-胸嘧啶激酶1
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腺相关病毒介导HSV-tk/GCV系统对晶状体上皮细胞的旁观者效应及机制 被引量:1
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作者 丁芝祥 彭燕一 +2 位作者 邱梅园 张玉明 曾新生 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2012年第8期708-711,共4页
目的研究2型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus2,rAAV2)载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-tk/GCV)系统对体外培养兔晶状体上皮细胞(N/N1003A)的旁观者效应,并初步探讨其机制。方法 rAAV2载体介导增强... 目的研究2型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus2,rAAV2)载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-tk/GCV)系统对体外培养兔晶状体上皮细胞(N/N1003A)的旁观者效应,并初步探讨其机制。方法 rAAV2载体介导增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent,EGFP)转染体外培养N/N1003A细胞,倒置荧光显微镜观察细胞中EGFP的表达,流式细胞仪检测病毒的转染效率。重组病毒rAAV2/HSV-tk转染体外培养的N/N1003A细胞(N/N1003A-tk),以不同比例与没有转染的细胞混合,MTT法观察旁观者效应;MTT法检测N/N1003A-tk/GCV处理的条件培养液(CM)对N/N1003A细胞的作用。应用相差显微镜、透射电镜观察条件培养液对N/N1003A细胞形态学和超微结构的影响。结果 rAAV2载体能介导EGFP基因稳定转染N/N1003A细胞,转染效率最高达81.12%。当N/N1003A-tk细胞以不同比例(10%、20%、40%、80%、100%)与N/N1003A混合时,细胞抑制率分别为49.00%±0.49%、54.71%±1.41%、59.26%±1.13%、68.20%±0.76%、73.44%±1.26%,与对照组(1.68%±0.45%)比较,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。N/N1003A-tk/GCV处理的条件培养液可明显杀伤N/N1003A细胞,但将其用0.22μm滤膜过滤后,对细胞的杀伤作用消失。条件培养液处理的N/N1003A细胞出现凋亡征象。结论 rAAV2介导的HSV-tk/GCV系统对兔晶状体上皮细胞有较强的旁观者效应,通过非细胞接触方式诱导旁观者细胞凋亡可能是其机制之一。 展开更多
关键词 旁观者效应 单纯疱疹病毒激酶 晶状体上皮细胞 相关病毒
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一种嵌合型调控元件在肿瘤靶向基因治疗中的应用
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作者 周培杰 高维强 方煜翔 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期255-262,共8页
肿瘤靶向基因治疗成功的关键是调控治疗基因在肿瘤细胞中特异、高效地表达。首次构建一种嵌合型表达调控元件,旨在转录水平、转录后水平和翻译水平上实现联合调控目的基因在肿瘤细胞中特异性表达。体外实验表明,在前列腺癌细胞系LNCa P... 肿瘤靶向基因治疗成功的关键是调控治疗基因在肿瘤细胞中特异、高效地表达。首次构建一种嵌合型表达调控元件,旨在转录水平、转录后水平和翻译水平上实现联合调控目的基因在肿瘤细胞中特异性表达。体外实验表明,在前列腺癌细胞系LNCa P中,该调控元件可将报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和荧光素酶(luciferase)的肿瘤表达特异性分别提高420%和480%。体外细胞存活实验表明,运用该元件调控单纯疱疹病毒-1胸腺激酶(HSV-1 TK)的表达能特异性杀伤LNCa P细胞,验证了该元件可成功用于治疗基因的肿瘤靶向表达。 展开更多
关键词 肿瘤靶向基因治疗 嵌合型表达调控条件 绿色荧光蛋白 单纯疱疹病毒-1胸激酶 前列
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