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单纯疱疹病毒Ⅱ型细胞毒性T淋巴细胞表位重组DNA疫苗的构建表达及鉴定 被引量:3
1
作者 关蕾 杨慧兰 樊建勇 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期351-353,共3页
目的:针对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)包膜糖蛋白gD和gB的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)表位,构建重组真核表达质粒pVAX-gD-CTL。方法:用PCR方法从已构建好的pc-gD真核表达质粒中扩增gD片段,将其与CTL表位共同连接到pVAX1载... 目的:针对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)包膜糖蛋白gD和gB的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)表位,构建重组真核表达质粒pVAX-gD-CTL。方法:用PCR方法从已构建好的pc-gD真核表达质粒中扩增gD片段,将其与CTL表位共同连接到pVAX1载体,构建重组真核表达质粒pVAX-gD-CTL。采用免疫组化和Western-blotting法鉴定重组质粒的表达情况,免疫BALB/c小鼠,进行CTL活性鉴定。结果:构建的重组质粒能在非洲绿猴肾细胞(COS-7细胞)内表达。该重组DNA疫苗免疫接种BALB/c小鼠后,其CTL活性增高。结论:成功构建HSV-2pVAX-gD-CTL重组真核表达质粒,并能在真核细胞内表达,该DNA疫苗对细胞免疫有明显的促进作用。 展开更多
关键词 疱疹病毒 蛋白质gD T淋巴细胞 细胞毒性 疫苗 dna
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单纯疱疹病毒Ⅱ型抗原优势表位与乙肝核心蛋白融合DNA疫苗的构建 被引量:2
2
作者 周朋 刘坤 +1 位作者 王希良 于三科 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第5期58-61,共4页
提取HSV-2333株的DNA作为模板,用PCR方法扩增编码HSV-2糖蛋白D抗原优势表位的基因(gDt)和乙肝核心蛋白(HbcAg)的基因序列(HBc),再用重叠PCR方法将gDt插入到HBc编码Hb-cAg刺突部的第81和82位的氨基酸的基因之间,获得融合基因gDt-HBc,将gD... 提取HSV-2333株的DNA作为模板,用PCR方法扩增编码HSV-2糖蛋白D抗原优势表位的基因(gDt)和乙肝核心蛋白(HbcAg)的基因序列(HBc),再用重叠PCR方法将gDt插入到HBc编码Hb-cAg刺突部的第81和82位的氨基酸的基因之间,获得融合基因gDt-HBc,将gDt-HBc插入真核表达质粒pcDNA3.1中,构建出真核表达质粒gDt-HBc-pcDNA3.1,转化DH5a感受态细胞后,通过菌落PCR和双酶切鉴定后进行测序鉴定,测序结果与预期结果完全一致,成功构建单纯疱疹病毒Ⅱ型抗原优势表位与乙肝核心蛋白融合DNA疫苗,为下一步的评价工作奠定了基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 抗原优势表位 乙肝核心蛋白 dna疫苗
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邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的活性研究
3
作者 何丽丽 段江曼 +3 位作者 裘佳寅 于飞 刘叔文 李琳 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1175-1178,共4页
目的研究邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白(3-Hydroxyphthalic anhydride-modified ovalbumin,HP-OVA)体外对抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)的活性。方法采用化学修饰的方法将3-羟基-邻苯二甲酸酐(HP)修饰卵清蛋白(OVA),合成酸酐修饰蛋白HP-OVA;选... 目的研究邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白(3-Hydroxyphthalic anhydride-modified ovalbumin,HP-OVA)体外对抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)的活性。方法采用化学修饰的方法将3-羟基-邻苯二甲酸酐(HP)修饰卵清蛋白(OVA),合成酸酐修饰蛋白HP-OVA;选用HSV-2333病毒株及非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)靶细胞,采用MTT比色法检测HP-OVA的体外抗HSV-2病毒活性及其对Vero细胞的体外细胞毒性;镜检观察HP-OVA对17株阴道收集的乳酸杆菌的抑菌作用。结果酸酐修饰卵清蛋白HP-OVA对HSV-2病毒具有明显抑制作用,其IC50为23.56±8.33μg/ml,且其对病毒作用靶细胞毒性较低,CC50>1mg/ml,对17株阴道乳酸杆菌均无明显抑制作用,MIC>1mg/ml。结论酸酐修饰蛋白HP-OVA体外有较好的抗HSV-2病毒的活性,有望被开发为预防性传播性疾病的候选杀微生物剂。 展开更多
关键词 酸酐修饰卵清蛋白HP-OVA 单纯疱疹病毒(hsv-2) 病毒活性 乳酸杆菌 杀微生物剂
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几种肽丁安类似物对单纯疱疹病毒DNA合成的抑制效应 被引量:3
4
作者 尹明标 陈明 +4 位作者 叶群瑞 杨惠民 高雅君 王琳 柳元元 《中国医学科学院学报》 CAS 1987年第2期79-83,共5页
放射性标记的HSV-1与HSV-2 DNAs作为探针,与单纯疱疹病毒感染的原代兔肾细胞DNA点杂交,籍助放射自显影术和液体闪烁计数测定杂交程度,用以检测酞丁安类似物对HSV DNA合成的影响。对5种酞丁安类似物:V8501、V8519、V8502、V8512和V8540... 放射性标记的HSV-1与HSV-2 DNAs作为探针,与单纯疱疹病毒感染的原代兔肾细胞DNA点杂交,籍助放射自显影术和液体闪烁计数测定杂交程度,用以检测酞丁安类似物对HSV DNA合成的影响。对5种酞丁安类似物:V8501、V8519、V8502、V8512和V8540进行了比较,V8540抑制作用最强,其对HSV-1和HSV-2的IC_(50)值分别为1.4μmol/L与2.3μmol/L。V8501、V8519、V8502与V8512对HSV-1的IC_(50)值分别为251μmol/L、225μmol/L、13.6μmol/L与6.3μmol/L、而对HSV-2的IC_(50)值分别为257μmol/L、163μmol/L、12.3μmol/L与5.1μmol/L。HSV DNA合成的抑制与空斑抑制程度近似,因此可以认为,单纯疱疹病毒DNA合成可能是酞丁安类似物抗病毒活性的作用位点之一。 展开更多
关键词 核酸杂交 单纯疱疹病毒 dna合成 酞丁安
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IL-18与HSV-2gD模拟抗原表位DNA疫苗的免疫效果观察 被引量:3
5
作者 焦凤萍 刘莉 +2 位作者 于爱莲 王玉 于广福 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期654-656,共3页
目的:研究串联重组核酸疫苗pcDNA3.1-IL-18-HSVP6和pcDNA3.1-IL-18-HSVNP6对机体的免疫效果。NP6为与HSV-2gD模拟抗原P6最相似的天然抗原表位序列(Accession Number:E00394)。方法:将构建的真核表达质粒pcDNA3.1-IL-18、pcDNA3.1-IL-18-... 目的:研究串联重组核酸疫苗pcDNA3.1-IL-18-HSVP6和pcDNA3.1-IL-18-HSVNP6对机体的免疫效果。NP6为与HSV-2gD模拟抗原P6最相似的天然抗原表位序列(Accession Number:E00394)。方法:将构建的真核表达质粒pcDNA3.1-IL-18、pcDNA3.1-IL-18-HSVP6和pcDNA3.1-IL-18-HSVNP6肌内注射免疫接种BALB/c小鼠3次,每次间隔1周。末次免疫后1周眼眶静脉采血,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体滴度、IFN-γ及IL-18含量;末次免疫后一月,处死小鼠,无菌分离脾脏,MTT法测定脾淋巴细胞增殖率。结果:重组核酸疫苗pcDNA3.1-IL-18-HSVP6免疫小鼠后可刺激血清特异性抗体的产生,诱导分泌较高水平的IFN-γ和IL-18。可促进小鼠脾淋巴细胞的增殖。结论:重组核酸疫苗pcDNA3.1-IL-18-HSVP6能诱导较强的细胞免疫和体液免疫,从而为构建更加有效的HSV-2DNA疫苗奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 dna疫苗 IL-18 单纯疱疹病毒 模拟抗原表位
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HSV-2gD模拟抗原表位、HBsAg与IL-18融合蛋白DNA疫苗的免疫效果观察
6
作者 焦凤萍 郑绮菡 +2 位作者 于爱莲 王玉 于广福 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期305-307,311,共4页
目的:研究串联重组核酸疫苗pc(pcDNA3.1)-S(HBsAg)-P6-IL18和pc(pcDNA3.1)-S(HBsAg)-NP6-IL18对机体的免疫效果,P6是我们前期采用噬菌体展示技术筛选出的HSV-2gD的模拟抗原表位,NP6为与HSV-2gD模拟抗原表位P6最相似的天然抗原表位序列... 目的:研究串联重组核酸疫苗pc(pcDNA3.1)-S(HBsAg)-P6-IL18和pc(pcDNA3.1)-S(HBsAg)-NP6-IL18对机体的免疫效果,P6是我们前期采用噬菌体展示技术筛选出的HSV-2gD的模拟抗原表位,NP6为与HSV-2gD模拟抗原表位P6最相似的天然抗原表位序列。方法:分别将空质粒pcDNA3.1(阴性对照组)和构建的真核表达质粒pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18肌内注射免疫接种BALB/c小鼠3次,每次间隔2周。末次免疫后2周眼眶静脉采血,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体滴度、IFN-γ及IL-18含量;末次免疫后一月,处死小鼠,无菌分离脾脏,用刀豆蛋白A刺激淋巴细胞,采用MTT法测定脾淋巴细胞增殖率。结果:重组核酸疫苗pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18免疫小鼠后可刺激血清特异性抗体(抗HBsAg抗体和抗HSV-2gD模拟表位抗体)的产生,与阴性对照组相比可诱导分泌较高水平的IFN-γ和IL-18,可促进小鼠脾淋巴细胞的增殖。结论:重组核酸疫苗pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18能诱导较强的细胞免疫和体液免疫,可用于今后预防HBV和HSV-2感染的研究。 展开更多
关键词 dna疫苗 IL-18 单纯疱疹病毒 HBSAG
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小鼠MIP-1α真核表达质粒的构建及在HSV-II核酸疫苗中的应用 被引量:4
7
作者 邵文爱 李晓眠 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期286-289,共4页
目的构建小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)的真核表达质粒,观察其作为分子佐剂对单纯疱疹病毒II型(HSV-II)DNA疫苗免疫效果的影响。方法以LPS刺激RAW264.7细胞提取总RNA。采用RT-PCR扩增出MIP-1α基因的全部编码序列,利用克隆载体pUCm... 目的构建小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)的真核表达质粒,观察其作为分子佐剂对单纯疱疹病毒II型(HSV-II)DNA疫苗免疫效果的影响。方法以LPS刺激RAW264.7细胞提取总RNA。采用RT-PCR扩增出MIP-1α基因的全部编码序列,利用克隆载体pUCm-T,将其亚克隆入pcDNA3中,构建出小鼠MIP-1α的真核表达质粒Pm;将其转染COS-7细胞,并用Boyden趋化小室法检测MIP-1α的生物学活性。然后用其与HSV-IIgD的DNA疫苗一起免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠的特异性抗体、脾T细胞增殖反应及病毒攻击小鼠后对小鼠的保护率,观察MIP-1α对HSV-IIDNA疫苗免疫效果的影响。结果成功构建了小鼠MIP-1α的重组真核表达质粒;免疫BALB/c小鼠发现,其作为分子佐剂可加强HSV-IIgDDNA疫苗的免疫效果。结论小鼠MIP-1α可作为HSV-IIgDDNA疫苗的分子佐剂,为研制新型有效的HSV-IIDNA疫苗提供一定的依据。 展开更多
关键词 小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α) 单纯疱疹病毒(hsv-)dna疫苗 分子佐剂
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HSV-2miR-H4-5p负调节CDKL2基因表达并抑制ActD引起的Vero细胞凋亡 被引量:1
8
作者 刘岩 郑新瑶 +1 位作者 樊建勇 杨慧兰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期308-314,共7页
单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virusⅡ,HSV-2)编码的microRNA-H4-5p(miR-H4-5p)可与病毒神经毒力蛋白ICP34.5mRNA互补结合并抑制其表达,从而降低病毒感染对细胞的毒力作用,以减弱细胞对病毒的免疫作用.但miR-H4-5p是否可靶向作用于... 单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virusⅡ,HSV-2)编码的microRNA-H4-5p(miR-H4-5p)可与病毒神经毒力蛋白ICP34.5mRNA互补结合并抑制其表达,从而降低病毒感染对细胞的毒力作用,以减弱细胞对病毒的免疫作用.但miR-H4-5p是否可靶向作用于宿主细胞基因目前仍不十分清楚.本研究证明,miR-H4-5p可通过靶向细胞周期依赖性激酶(cyclin-dependent kinase-like 2,CDKL2)基因表达抗防线菌素D(actinomycin D,Act D)诱导的非洲绿猴肾上皮细胞(African green monkey kidney cells,Vero)细胞凋亡.生物信息学方法在线预测miR-H4-5p潜在靶基因CDKL2的结合位点,并构建双萤光素酶报告系统检测miR-H4-5p靶向作用.数据表明,miR-H4-5p可有效抑制萤光素酶的表达.q PCR和Western印迹数据表明,miR-H4-5p可在mRNA水平和蛋白水平抑制CDKL2表达.构建过表达载体pmR-mcherry/miR-H4-5p(cherry/H4-5p),将cherry/H4-5p与pmRmcherry空质粒转染至Vero细胞,转染24 h后加入终浓度为1μg/m L放线菌素D诱导细胞凋亡.MTT法、流式细胞术和Western印迹检测Bax、Bcl-2表达.数据表明,miR-H4-5p可抑制Act D诱导的Vero细胞活性降低.本实验提示,miR-H4-5p可通过靶向调节宿主细胞基因抑制细胞凋亡,可能以此方式共同参与HSV-2潜伏感染的建立.但是这种抑制凋亡作用的通路及其机制目前仍不清楚,miR-H4-5p是否可靶向更多的宿主基因仍需要进一步实验验证. 展开更多
关键词 细胞周期依赖性激酶2 抗细胞凋亡 单纯疱疹病毒(hsv-2)编码的miR-H4-5p
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