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基于生物质谱的蛋白质定量技术及其在药代动力学研究中的应用 被引量:3
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作者 吴梦秋 陆高远 +5 位作者 邵畅 王单单 孙迪 郝海平 王广基 叶慧 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期129-140,共12页
蛋白质定量技术是指对细胞、组织以至整体生物体内的蛋白质表达水平进行全谱定量分析的手段,其在生物过程机制的探索、生物标志物和药物作用靶标的发现及验证等过程中发挥着重要作用。新兴生物质谱技术和数据采集方法的发展为蛋白质定... 蛋白质定量技术是指对细胞、组织以至整体生物体内的蛋白质表达水平进行全谱定量分析的手段,其在生物过程机制的探索、生物标志物和药物作用靶标的发现及验证等过程中发挥着重要作用。新兴生物质谱技术和数据采集方法的发展为蛋白质定量提供了先进的技术平台,促使了蛋白质研究逐渐从简单定性转变为精确定量。本文综述了基于生物质谱的蛋白分子定量策略及方法,评述了不同方法的特点和适用范围,并阐述了其在药物代谢动力学研究领域,如药物转运体、药物代谢酶的定量和多肽及蛋白类药物的药代动力学研究等方面的应用,为传统的药代动力学研究提供了新的思路与方法。 展开更多
关键词 生物质谱 蛋白质定量技术 药物转运 代谢酶 蛋白与多肽药物
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大剂量维生素C通过减少糖酵解和蛋白质合成抑制乳腺癌细胞增殖 被引量:2
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作者 王青梅 徐千姿 +3 位作者 魏安怡 陈世硕 张翀 曾玲晖 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期296-302,共7页
目的:观察大剂量维生素C对乳腺癌细胞增殖及荷瘤小鼠肿瘤生长的影响,并探索其中的机制。方法:以乳腺癌细胞Bcap37和MDA-MB- 453为体外研究对象,分别给予小(0.01 mmol/L)、中(0.10 mmol/L)、大(2.00 mmol/L)剂量的维生素C。采用CCK-8试... 目的:观察大剂量维生素C对乳腺癌细胞增殖及荷瘤小鼠肿瘤生长的影响,并探索其中的机制。方法:以乳腺癌细胞Bcap37和MDA-MB- 453为体外研究对象,分别给予小(0.01 mmol/L)、中(0.10 mmol/L)、大(2.00 mmol/L)剂量的维生素C。采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖;蛋白质印迹法检测葡萄糖转运蛋白1(Glut1)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达;乳酸脱氢酶比色法测定乳酸含量。同时,取10只6周龄雌性BALB/c裸鼠,采用皮下接种乳腺癌Bcap37细胞建立荷瘤小鼠移植瘤模型,取5只小鼠腹腔注射维生素C( 4 g/kg ),观察肿瘤重量和小鼠体质量的变化。结果:体外细胞学实验结果显示,与空白对照组比较,大剂量维生素C作用下Bcap37和MDA-MB- 453细胞增殖受到抑制(均 P < 0.01 ),Glut1转运蛋白表达减少(均 P <0.05),乳酸分泌量减少(均 P < 0.01 ),mTOR信号通路相关蛋白表达水平下调(均 P < 0.05 )。体内实验结果显示,与对照组比较,大剂量维生素C组肿瘤重量明显减小( P <0.05),但体质量增长无明显变化。结论:大剂量维生素C可抑制乳腺癌细胞增殖,这一效果可能与大剂量维生素C抑制乳腺癌细胞能量摄取和下调mTOR信号通路有关。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤/病理生理学 抗坏血酸/投药和剂量 葡萄糖转运体1型/代谢 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶/生物合成 信号传导 乳酸/代谢 细胞增殖
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17β羟基类固醇脱氢酶13和线粒体融合蛋白2在肝细胞癌组织中的表达变化及生物信息学分析 被引量:4
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作者 曾钗明 严茂林 +5 位作者 石益海 郭太林 梅爱农 陈建康 许桂平 何晓红 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2019年第12期2736-2740,共5页
目的探索17β羟基类固醇脱氢酶13(HSD17B13)和线粒体融合蛋白2(MFN2)在临床肝细胞癌(以下简称肝癌)组织样本中的表达变化及临床意义;同时采用生物信息学方法,进行目标基因分析。方法选取2017年9月-2018年3月于福建省立医院接受手术治疗... 目的探索17β羟基类固醇脱氢酶13(HSD17B13)和线粒体融合蛋白2(MFN2)在临床肝细胞癌(以下简称肝癌)组织样本中的表达变化及临床意义;同时采用生物信息学方法,进行目标基因分析。方法选取2017年9月-2018年3月于福建省立医院接受手术治疗的15例肝癌患者,手术后获取肝癌及其周围癌组织进行实验研究。通过实时荧光定量PCR及Western Blot法检测HSD17B13和MFN2基因在肝癌组织和癌旁组织中的表达变化情况,并分析其临床意义。采用单细胞测序数据库、GTEx数据库及TCGA数据库分析HSD17B13和MFN2在肝癌组织中的表达量、肝癌不同分期的表达水平及与肝癌总体生存的关系,并分析二者之间的相关性。符合正态分布的计量资料两组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析;非正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验,多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验。采用log-rank检验变量对生存率的影响,Kaplan-Meier法绘制生存曲线。采用Pearson相关分析检验两个变量之间的关系。结果实时荧光定量PCR及Western Blot检测结果显示,相对于癌旁组织,HSD17B13和MFN2基因在肝癌组织中的表达明显下调(PCR检测t值分别为-2.467、-3.933,P值分别为0.020、0.001;Western Blot检测t值分别为-5.357、-5.771,P值分别为0.006、0.026)。生物信息学分析结果表明,肝癌组织中HSD17B13表达明显下调(P<0.05);随着肝癌分期越高,HSD17B13表达水平越低(F=3.220,P=0.023);低HSD17B13表达与不良生存相关(风险比=0.630,P=0.011);在肝癌组织中,MFN2与HSD17B13表达呈显著正相关(r=0.190,P<0.001)。结论MFN2与HSD17B13在肝癌中表达下调,是潜在的具有临床相关性的抑癌基因,可能参与肝癌发生发展过程中的生物学行为,也可成为肝癌筛查、临床分级、预后评估的分子标志物及有效的肝癌治疗靶点。 展开更多
关键词 肝细胞 孕酮还原酶 线粒体膜转运蛋白质 基因 肿瘤抑制 计算生物
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葡萄糖转运蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义 被引量:6
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作者 陆国华 钟秀君 +1 位作者 丁伟 周建英 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2008年第2期176-181,192,共7页
目的:探讨葡萄糖转运蛋白(Glucose transporter,Glut)的两种异构体Glut1、Glut3及缺氧诱导因子-1(Hypoxia inducible factor-1,HIF-1)的亚基HIF-1α,在非小细胞肺癌中的表达及临床意义。方法:选取34例手术切除非小细胞肺癌(包括癌组织... 目的:探讨葡萄糖转运蛋白(Glucose transporter,Glut)的两种异构体Glut1、Glut3及缺氧诱导因子-1(Hypoxia inducible factor-1,HIF-1)的亚基HIF-1α,在非小细胞肺癌中的表达及临床意义。方法:选取34例手术切除非小细胞肺癌(包括癌组织和癌旁组织)和17例肺良性病变标本,用免疫组织化学法测定Glut1、Glut3及HIF-1α在肺组织中的表达;用RT-PCR半定量检测Glut1、Glut3及HIF-1α的mRNA表达;用Western Blot检测Glut1、Glut3及HIF-1α蛋白的表达,并测两者相关性。结果:Glut1、Glut3及HIF-1α在肺癌组织中mRNA相对含量为0.689±0.245、0.506±0.246、0.693±0.248,对应癌旁组织为0.338±0.157、0.482±0.238、0.351±0.184,Glut1和HIF-1α在肺癌组织中显著升高(P<0.001),而Glut3差别无显著性(P>0.05)。Glut1、Glut3、HIF-1α在癌组织中蛋白相对含量为0.582±0.247、0.551±0.251、0.525±0.246,癌旁组织为0.288±0.151、0.436±0.224、0.261±0.135,在肺良性病变中为0.291±0.142、0.402±0.206、0.271±0.176,Glut1和HIF-1α在癌组织中的表达均明显高于癌旁组织(P<0.001)和肺良性病变组织(P<0.001);而Glut3差别无显著性(P>0.05)。Glut1和HIF-1α在低分化组明显高于中高分化组(P<0.05),期明显高于和期(P<0.05),且HIF-1α的表达与Glut1明显相关(r=0.854,P<0.01)。结论:在非小细胞肺癌中,Glut1和HIF-1α存在高表达,其表达与细胞分化程度、TNM分期密切相关,且Glut1和HIF-1α具有相关性。 展开更多
关键词 非小细胞肺/病理学 单糖转运蛋白质类/生物合成 葡萄糖转运蛋白 缺氧诱导因子
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老龄大鼠脑组织内不同部位葡萄糖转运蛋白3的表达 被引量:2
5
作者 吴海琴 沙娟娟 +3 位作者 王虎清 任蓓 张桂莲 李明 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期43-48,共6页
目的:观察老龄大鼠的脑组织内不同部位的葡萄糖转运蛋白3(GLUT 3)的表达情况,探讨GLUT 3在神经系统衰老过程中的作用。方法:用免疫组织化学染色方法,测定3月龄、18月龄及30月龄大鼠(各10只)脑组织内不同部位GLUT 3的表达强弱。结果:各... 目的:观察老龄大鼠的脑组织内不同部位的葡萄糖转运蛋白3(GLUT 3)的表达情况,探讨GLUT 3在神经系统衰老过程中的作用。方法:用免疫组织化学染色方法,测定3月龄、18月龄及30月龄大鼠(各10只)脑组织内不同部位GLUT 3的表达强弱。结果:各月龄组大鼠脑组织内不同部位阳性细胞数均有显著差异(P<0.01),其中海马区,尤其是海马CA1区阳性细胞数最多,而运动皮质区及第1小脑小叶阳性细胞数相对较少。结论:在老龄大鼠脑组织中GLUT 3的表达减弱,提示GLUT 3在神经系统衰老过程中发挥一定作用。 展开更多
关键词 代谢 单糖转运蛋白质 衰老 海马 大脑皮质 小脑
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非小细胞肺癌中缺氧诱导因子1α、葡萄糖转运蛋白1和Glypican-3的表达及临床意义研究 被引量:6
6
作者 范大平 陈艳昕 张一梅 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第21期2342-2344,2348,共4页
目的探讨肺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(Glut1)、Glypican-3的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测52例(男35例,女17例;鳞癌32例,腺癌20例)肺癌组织中HIF-1α、Glut1、Glypican-3的表达。结果 52... 目的探讨肺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(Glut1)、Glypican-3的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测52例(男35例,女17例;鳞癌32例,腺癌20例)肺癌组织中HIF-1α、Glut1、Glypican-3的表达。结果 52例肺癌组织中HIF-1α阳性表达36例(69.2%);Glut1阳性表达38例(73.1%);Glypican-3阳性表达7例(13.5%)。肺癌组织Ⅲ~Ⅳ期与Ⅰ~Ⅱ期中高度分化与低分化组比较,HIF-1α、Glut1阳性表达率均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。肺癌组织有淋巴结转移组与无淋巴结转移组比较,HIF-1α、Glut1阳性表达率均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。肺癌组织中不同年龄组及不同性别组比较,HIF-1α、Glut1阳性表达差异无统计学意义(P>0.05)。Glypican-3在肺癌组织中与在癌旁组织中阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。结论肺癌组织中HIF-1α与Glut1蛋白阳性表达,HIF-1α与Glut1阳性表达与肺癌的病理分期、分化程度和淋巴结转移有关,与年龄、性别等无关。Glypican-3在肺癌中表达较低,与癌旁组织中的表达无差异。 展开更多
关键词 肺肿瘤 单糖转运蛋白质 免疫组织化学
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葡萄糖转运蛋白1在肝癌组织中的表达与缺氧诱导因子1α表达的关系及临床意义 被引量:2
7
作者 梁辉 窦科峰 《实用医学杂志》 CAS 2008年第10期1741-1744,共4页
目的:探讨肝细胞癌组织中葡萄糖转运蛋白1(Glut1)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达情况及其临床意义,并分析两者的相关性。方法:用免疫组织化学Envision法检测45例肝细胞癌、11例肝正常组织中Glut1和HIF-1α的表达。结果:Glut1和HIF-1... 目的:探讨肝细胞癌组织中葡萄糖转运蛋白1(Glut1)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达情况及其临床意义,并分析两者的相关性。方法:用免疫组织化学Envision法检测45例肝细胞癌、11例肝正常组织中Glut1和HIF-1α的表达。结果:Glut1和HIF-1α在肝癌组织中的阳性率明显高于正常肝组织(P<0.05)。在肝癌组织中Glut1和HIF-1α的表达均与肿瘤大小、病理分级、临床分期、有无淋巴结转移、有无门静脉癌栓有关(P<0.05)。肝癌组织中Glut1表达越强,HIF-1α表达也越强,两者的表达呈正相关(r=0.583,P<0.01)。结论:Glut1和HIF-1α的异常表达与肝癌的发生、发展有一定的关系。可能存在HIF-1α通过上调Glut1的表达促进肝细胞癌发生的机制。 展开更多
关键词 肝细胞 单糖转运蛋白质 DNA结合蛋白质 免疫组织化学 预后
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人类pygo1基因的生物信息学分析
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作者 郝爱平 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期453-457,共5页
目的:对人类pygo1基因编码蛋白质进行结构和功能预测。方法:利用生物信息学方法和工具对PYGO1蛋白质理化性质、跨膜区域、二级结构、亲(疏)水性进行分析。结果:PYGO1蛋白氨基酸残基组成中脯氨酸含量最高,分子式C1943H2937N577O635... 目的:对人类pygo1基因编码蛋白质进行结构和功能预测。方法:利用生物信息学方法和工具对PYGO1蛋白质理化性质、跨膜区域、二级结构、亲(疏)水性进行分析。结果:PYGO1蛋白氨基酸残基组成中脯氨酸含量最高,分子式C1943H2937N577O635S18,相对分子质量45,等电点6.38;可能为非跨膜的亲水性蛋白;α-螺旋和无规卷曲为其主要结构元件,含有一个植物同源结构域。结论:人类pygo1基因可能作为转录因子与其他蛋白共同作用调节心脏发育及心脏病的发生过程。 展开更多
关键词 pygo1基因 生物信息学 氨基酸/生物合成 蛋白质类/生理学 蛋白质类/化学 蛋白质结构 二级 基因 计算生物 序列分析
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PML蛋白参与三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病的分子生物学机制研究 被引量:3
9
作者 郝睿 苏力德 +3 位作者 邵一鸣 部娜 马丽亚 那仁满都拉 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期541-551,共11页
PML蛋白作为一种肿瘤抑制因子,在三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的过程中发挥重要作用。绝大多数APL患者的典型特征是细胞内PML基因和RARα基因发生融合,该融合基因所表达的PML-RARα融合蛋白是APL发病的主要原因。三氧化二... PML蛋白作为一种肿瘤抑制因子,在三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的过程中发挥重要作用。绝大多数APL患者的典型特征是细胞内PML基因和RARα基因发生融合,该融合基因所表达的PML-RARα融合蛋白是APL发病的主要原因。三氧化二砷作为临床治疗APL的一线药物,通过直接作用于PML-RARα融合蛋白的PML部分,诱导相关蛋白多聚化,并招募多种功能蛋白,促进PML核小体重构,使PML-RARα蛋白发生小泛素修饰蛋白(SUMO)化和泛素化,最终经蛋白酶体途径降解,达到治疗APL的目的。PML蛋白发生点突变会导致APL复发及三氧化二砷耐药。本文阐述了PML蛋白的结构和功能、PMLRARα融合蛋白诱导APL发病的机制、PML蛋白参与三氧化二砷治疗APL的分子机制以及PML蛋白发生突变导致APL患者发生三氧化二砷耐药的现象,以期为目前治疗方案的优化及针对耐药患者有效治疗手段的开发提供理论指导。 展开更多
关键词 白血病 早幼粒细胞 急性/药物疗法 砷剂/治疗应用 肿瘤蛋白质/生物合成 小泛素相关修饰蛋白质类/遗传学
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HSA/IL1ra融合蛋白的纯化及生物学活性研究
10
作者 沈其 陈枢青 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期260-264,共5页
目的:纯化HSA/IL1ra融合蛋白并对其生物学活性进行检测。方法:采用亲和层析及离子交换层析分离纯化HSA/IL1ra融合蛋白,检测其对IL1引起的对A375 S2的杀伤保护作用。结果:获得的HSA/IL1ra融合蛋白HPLC纯度在98%以上,并且具有与天然IL1ra... 目的:纯化HSA/IL1ra融合蛋白并对其生物学活性进行检测。方法:采用亲和层析及离子交换层析分离纯化HSA/IL1ra融合蛋白,检测其对IL1引起的对A375 S2的杀伤保护作用。结果:获得的HSA/IL1ra融合蛋白HPLC纯度在98%以上,并且具有与天然IL1ra相似的、对IL1杀伤A375 S2细胞的保护作用。结论:获得高纯度的HSA/IL1ra融合蛋白并且具有相应的生物学活性。 展开更多
关键词 受体 白细胞介素1/拮抗剂和抑制剂 血清白蛋白 重组融合蛋白质类/分离和提纯 重组融合蛋白质/生物合成 黑色素瘤
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从脆性X染色体痴呆症的分子机制展望蛋白合成在学习记忆过程中的功能(英文)
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作者 冯越 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期630-635,共6页
外界环境所激发的学习与记忆是由繁复的分子机制所调控的。关于脆性X染色体综合征蛋白 (FMRP)的研究表明 ,蛋白合成的调节在学习记忆过程中起着重要的作用。脆性X染色体综合征是世界上最常见的遗传性痴呆病。这种疾病起源于FMRP缺失所... 外界环境所激发的学习与记忆是由繁复的分子机制所调控的。关于脆性X染色体综合征蛋白 (FMRP)的研究表明 ,蛋白合成的调节在学习记忆过程中起着重要的作用。脆性X染色体综合征是世界上最常见的遗传性痴呆病。这种疾病起源于FMRP缺失所导致的大脑神经元突触发育障碍 ,从而造成学习记忆能力低下。体外实验结果表明 ,FMRP是蛋白翻译的抑制因子。在大脑神经元中 ,FMRP高度表达 ,并选择性作用于其靶基因的信使核糖核酸 (mRNA) ,从而进一步与执行翻译功能的核糖体结合 ,对其靶基因的蛋白合成起调控作用。近期研究使用基因芯片技术鉴定了小鼠脑中FMRP的靶基因mRNA ,并进一步证实这些mRNA在患者细胞中呈现翻译功能失调。以上研究提示FMRP是影响学习记忆过程中调控蛋白合成的关键因子 。 展开更多
关键词 精神发育迟滞 遗传学 脆性X染色体综合征 病因学 学习 记忆 突触发育 RNA结合蛋白质 生物合成
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大鼠脑缺血/再灌注过程中葡萄糖转运体1在缺血半影区的表达 被引量:14
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作者 李方成 陶宗玉 +3 位作者 刘安民 李军亮 吴中华 林吉惠 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1878-1881,共4页
目的 :研究局灶性脑缺血大鼠在不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗塞体积比、皮质半影区葡萄糖转运体 1(GLUT1)转录水平和蛋白水平的表达。方法 :用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型 ,用KontronIBAS2 5全自动图像分析系统进行图像分析... 目的 :研究局灶性脑缺血大鼠在不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗塞体积比、皮质半影区葡萄糖转运体 1(GLUT1)转录水平和蛋白水平的表达。方法 :用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型 ,用KontronIBAS2 5全自动图像分析系统进行图像分析脑梗塞体积比 ;剥取缺血半影区皮质组织 ,采用反转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR) ,测定GLUT1mRNA水平的变化 ;用免疫组织化学半定量测定GLUT1蛋白水平的变化。结果 :脑缺血 1h后再灌注脑梗塞体积明显小于缺血 3h再灌注。GLUT1mRNA自 1h即开始升高 ,2 4h到达高峰 ,1周时仍高于假手术对照组 ;缺血 3h再灌注组在 3h开始升高 ,2 4h到高峰 ,1周后仍高于正常 ,但升高幅度不及MCAO 1h/R组。MCAO 1h/R组GLUT1蛋白水平自 3h开始升高 ,2 4h达到高峰 ,1周时接近正常 ;MCAO 3h/R组GLUT1在 3h下降 ,继之升高 ,2 4h到高峰 ,1周时接近正常。结论 :GLUT1在缺血半影区的表达上调 。 展开更多
关键词 脑缺血 再灌注 单糖转运蛋白质 免疫组织化学
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蛾类性信息素研究进展 被引量:55
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作者 韦卫 赵莉蔺 孙江华 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期850-858,共9页
蛾类是昆虫性信息素中研究较多的类群,已有565种的性信息素成份被鉴定,其相关研究在害虫监测和防治上得到实际应用的同时,已涉及到生态、生化、遗传等诸多方面,特别是在物种多样性的化学表达及物种的生殖隔离现象的分子水平的表达上,提... 蛾类是昆虫性信息素中研究较多的类群,已有565种的性信息素成份被鉴定,其相关研究在害虫监测和防治上得到实际应用的同时,已涉及到生态、生化、遗传等诸多方面,特别是在物种多样性的化学表达及物种的生殖隔离现象的分子水平的表达上,提供了研究的典范。本文将介绍蛾类性信息素的多样性、性信息素化学结构鉴定、微量成分的作用、合成性信息素的利用、性信息素生物合成酶、性信息素生产的调节机制及性信息素的感受机制等方面的研究现状和存在的问题。 展开更多
关键词 昆虫性信息素 生物合成 生殖隔离 性信息素生物合成激肽 性信息素结合蛋白质
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葡萄糖转运体3在脑缺血/再灌注后半影区表达的变化及意义 被引量:5
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作者 李方成 陶宗玉 +4 位作者 刘安民 李军亮 张蕲 吴中华 林吉惠 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期2276-2279,共4页
目的研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗塞体积比、皮质半影区葡萄糖转运体3(GLUT3)转录水平和蛋白水平的表达。方法用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用KontronIBAS25全自动图像分析系统检测脑梗塞体积比;剥取... 目的研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗塞体积比、皮质半影区葡萄糖转运体3(GLUT3)转录水平和蛋白水平的表达。方法用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用KontronIBAS25全自动图像分析系统检测脑梗塞体积比;剥取缺血半影区皮质组织,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定GLUT3mRNA水平的变化;用免疫组织化学方法半定量测定GLUT3蛋白水平的变化。结果脑缺血1h后再灌注组的脑梗塞体积明显小于缺血3h再灌注组梗塞体积。GLUT3自3h即开始升高,24h到达高峰,1周时仍高于假手术对照组;缺血3h再灌注组在3h有一下降点,然后升高,24h到高峰,1周时接近正常水平。GLUT3蛋白水平的表达与mRNA相符合。结论GLUT3在缺血半影区的表达上调,可能是机体对缺血/再灌注的保护性反应。 展开更多
关键词 脑缺血 再灌注 半影区 单糖转运蛋白质 免疫组织化学
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辛伐他汀对糖尿病大鼠肾间质结缔组织生长因子和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响 被引量:3
15
作者 林斐莉 沈汉超 +1 位作者 朱斌 林开清 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期511-516,共6页
目的:探讨非降脂剂量的辛伐他汀对糖尿病大鼠肾间质结缔组织生长因子(CTGF)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法:60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(C组),糖尿病组(D组),糖尿病辛伐他汀干预组(DS组)。模型建立后,第6周及第12... 目的:探讨非降脂剂量的辛伐他汀对糖尿病大鼠肾间质结缔组织生长因子(CTGF)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法:60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(C组),糖尿病组(D组),糖尿病辛伐他汀干预组(DS组)。模型建立后,第6周及第12周时各组处死大鼠10只,称取体重、肾重,测定血糖(Glu)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、甘油三酯(TG)、肌酐(SCr),留取尿液测定24 h尿白蛋白排泄量(UAE),并用免疫组化方法检测肾间质结缔组织CTGF、α-SMA。结果:6周及12周时各组间SCr、LDL、HDL及TG相比无显著性差异(P>0.05);6周时DS组的肾间质CTGF、α-SMA表达水平明显少于D组(P<0.05),但与C组相比无显著性差异(P>0.05)。12周时DS组的肾间质CTGF、α-SMA表达水平明显少于D组(P<0.05),但高于C组(P<0.05)。结论:非降脂剂量的辛伐他汀可能通过抑制CTGF的表达和减少肾间质肌成纤维细胞的数量延缓肾小管间质纤维化进展。 展开更多
关键词 糖尿病 实验性 斯伐他汀/药理学 肌动蛋白类/代谢 胞间信号肽蛋白质/生物合成 即早蛋白质/生物合成 肾小球硬化症 病灶性/药物疗法
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hBMP_7基因转染对兔骨髓间充质干细胞增殖及胶原合成的影响 被引量:5
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作者 金丹 裴国献 +4 位作者 齐凤菊 胡罢生 魏宽海 王珂 陈滨 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期475-476,共2页
使用含hBMP7基因的重组逆转录病毒液感染兔骨髓间充质干细胞 (BMSc) ,MTT法检测细胞增殖能力 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,3 H脯氨酸掺入法检测Ⅰ型胶原合成和表达情况。结果显示 ,经hBMP7基因转染的BMSc与空载体转染及未转染的BMSc在细... 使用含hBMP7基因的重组逆转录病毒液感染兔骨髓间充质干细胞 (BMSc) ,MTT法检测细胞增殖能力 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,3 H脯氨酸掺入法检测Ⅰ型胶原合成和表达情况。结果显示 ,经hBMP7基因转染的BMSc与空载体转染及未转染的BMSc在细胞增殖、细胞周期表现方面无显著性差异 ,经转染的BMSc合成胶原显著高于空载体转染和未转染者。提示采用逆转录病毒介导转染BMSc后能促进细胞的胶原合成 ,对BMSc增殖和细胞周期无显著影响 。 展开更多
关键词 hBMP7基因转染 骨髓间充质干细胞 胶原合成 影响 骨形态发生蛋白质 生物医学工程 细胞增殖 成骨细胞
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重组Klenow-HSA融合蛋白的构建、纯化及其稳定性 被引量:2
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作者 曾令娥 黄晶 +3 位作者 白惠卿 范慧 黄大无 王露 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期684-687,共4页
目的 :提高Klenow酶的热稳定性和储藏稳定性。方法 :利用PCR的方法扩增DH5α染色体DNA ,构建编码Klenow和人血清白蛋白第三功能区 (HSA D3)的融合蛋白表达质粒 ,并在大肠杆菌中获得高效表达。分别对Klenow酶和Klenow HSA融合蛋白进行纯... 目的 :提高Klenow酶的热稳定性和储藏稳定性。方法 :利用PCR的方法扩增DH5α染色体DNA ,构建编码Klenow和人血清白蛋白第三功能区 (HSA D3)的融合蛋白表达质粒 ,并在大肠杆菌中获得高效表达。分别对Klenow酶和Klenow HSA融合蛋白进行纯化 ,并进行活性及稳定性的研究。结果 :发现Klenow HSA融合蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达。体外实验证实这种融合蛋白具有与Klenow聚合酶相同的活性 ,其稳定性明显提高。结论 :融合蛋白确实能增加Klenow酶的热稳定性和储存稳定性 。 展开更多
关键词 DNA聚合酶 I/生物合成 人血清白蛋白 重组融合蛋白质/生物合成 DNA聚合酶 I Klenow片段
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热休克蛋白融合蛋白对人树突状细胞分化成熟的刺激作用 被引量:1
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作者 万敏 张培因 +7 位作者 王宣军 吴秀丽 卫红飞 王燕媚 于永利 王丽颖 邓平 张慧杰 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期835-838,874,共5页
目的 :研究热休克蛋白融合蛋白对人树突状细胞分化成熟的刺激作用。方法 :采用 GM- CSF和 IL- 4将人外周血单核细胞诱导成未成熟树突状细胞 ,然后用热休克蛋白融合蛋白刺激其分化成熟 ,以单核细胞条件培养液 (MCM)和模拟的单核细胞条件... 目的 :研究热休克蛋白融合蛋白对人树突状细胞分化成熟的刺激作用。方法 :采用 GM- CSF和 IL- 4将人外周血单核细胞诱导成未成熟树突状细胞 ,然后用热休克蛋白融合蛋白刺激其分化成熟 ,以单核细胞条件培养液 (MCM)和模拟的单核细胞条件培养液 (MCM m imic)为对照。以流式细胞仪检测树突状细胞表面分子的表达情况。结果 :热休克蛋白融合蛋白可以刺激树突状细胞表面表达 CD4 0、CD80、CD86和 HL A- A2分子。结论 :热休克蛋白融合蛋白可诱导人树突状细胞分化成熟。 展开更多
关键词 树突细胞 热休克蛋白质 重组融合蛋白质/生物合成
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分泌型卷曲相关蛋白1、β联蛋白、上皮钙黏着蛋白在结直肠癌中的表达及意义 被引量:2
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作者 欧玉荣 刘娟 +3 位作者 高杉 景桂英 承泽农 董修琴 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期397-405,共9页
目的:探讨Wnt信号通路抑制因子分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)在结直肠癌组织中的表达,及其与β联蛋白(β—catenin)和上皮钙黏着蛋白(E-cadherin)蛋白表达的关系,并探讨其临床意义。方法:应用逆转录PCR检测60份结直肠癌及其癌... 目的:探讨Wnt信号通路抑制因子分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)在结直肠癌组织中的表达,及其与β联蛋白(β—catenin)和上皮钙黏着蛋白(E-cadherin)蛋白表达的关系,并探讨其临床意义。方法:应用逆转录PCR检测60份结直肠癌及其癌旁正常黏膜中SFRP1、β—catenin和E-cadherin基因mRNA表达水平;同时应用免疫组织化学染色法(Elivision法)检测相同组织中SFRP1、β—catenin和E—cadherin蛋白的表达,并探讨其相关性及与临床病理因素的关系。结果:60份组织中,52份结直肠癌组织及其癌旁正常黏膜中RNA提取成功;SFRP1 mRNA相对表达量分别为0.4837±0.1532和0.7170±0.1830;B-catenin mRNA相对表达量分别为0.9293±0.3705和0.6469±0.3166;E—cadherin mRNA相对表达量分别为0.5556±0.2535和0.9422±0.2372,两组比较差异均有统计学意义(均P〈0.01);SFRP1 mRNA表达与肿瘤淋巴结转移有关(P〈0.05)。SFRP1蛋白在结直肠癌中的阳性表达率为31.67%(19/60),显著低于癌旁正常结直肠黏膜组织75.00%(45/60)的阳性表达率;SFRP1蛋白表达与临床病理各因素无关。β—catenin、E-cadherin在结直肠癌中的异常表达率分别为75.00%(45/60)、58.33%(35/60),显著高于癌旁正常结直肠黏膜组织1.67%(1/60)、6.67%(4/60)的异常表达率;β—catenin和E—cadherin异常表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移和Dukes分类有关。结直肠癌中SFRP1蛋白的表达与β—catenin和E—cadherin的异常表达呈负相关(r=-0.517,r=-0.442,均P〈0.01)。结论:结直肠癌中SFRP1的表达下调导致Wnt信号通路出现异常活化,并引起β-catenin和E-cadherin异常表达增加。提示SFRP1失活及水平下调是结直肠癌启动及促进的重要因素。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤/代谢 结直肠肿瘤/病理学 蛋白质 钙黏着糖蛋白/生物合成 基因表达 免疫组织化学
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5-脂氧酶/绿荧光蛋白转染评价PC12细胞损伤后5-脂氧酶核膜移位 被引量:4
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作者 袁玉梅 李成檀 +3 位作者 马振秋 彭芳 张纬萍 魏尔清 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2007年第2期111-116,共6页
目的:通过绿荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)/5-脂氧酶(5-lipoxygenase,5-LOX)稳定转染PC12细胞,以可视化方法观察5-LOX在不同损伤后的变化。方法:将带有5-LOX基因的pEGFP-C2质粒及pEGFP-C2质粒(对照),稳定转染至PC12细胞;在... 目的:通过绿荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)/5-脂氧酶(5-lipoxygenase,5-LOX)稳定转染PC12细胞,以可视化方法观察5-LOX在不同损伤后的变化。方法:将带有5-LOX基因的pEGFP-C2质粒及pEGFP-C2质粒(对照),稳定转染至PC12细胞;在缺糖缺氧(oxygen-glucose deprivation,OGD)、H2O2和NMDA处理后,荧光显微镜下观察GFP/5-LOX在细胞内的定位;同时,以免疫细胞化学方法观察野生型5-LOX分布及其变化。结果:转染GFP/5-LOX的细胞内,GFP/5-LOX主要均匀表达于细胞核内;仅转染GFP的细胞GFP表达于胞核和胞浆。OGD和H2O2处理后,分别有50.6%和57.7%细胞的GFP/5-LOX移位到核膜;NMDA处理或仅转染GFP的细胞,未见核膜移位现象。野生型5-LOX分布在细胞核和细胞浆内,3种损伤处理均诱导核膜移位。结论:稳定转染GFP/5-LOX的PC12细胞,GFP/5-LOX主要分布在细胞核;不同损伤处理诱导的5-LOX核膜移位,有不同的特点。 展开更多
关键词 花生四烯酸盐5-脂氧合酶/生物合成 PC12细胞 发光蛋白质 转染 缺糖缺氧 N-甲基-D-门冬氨酸 过氧化氢
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