目的观察完全弗氏佐剂(complete Freund′s adjuvant,CFA)诱导的小鼠慢性炎症性疼痛模型中,单核细胞趋化因子(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)及其受体CCR2在杏仁核脑区(the central nucleus of the amygdala,CeA)中的表达...目的观察完全弗氏佐剂(complete Freund′s adjuvant,CFA)诱导的小鼠慢性炎症性疼痛模型中,单核细胞趋化因子(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)及其受体CCR2在杏仁核脑区(the central nucleus of the amygdala,CeA)中的表达变化以及细胞定位情况。方法足底皮下注射CFA 20μL,制作慢性炎症性疼痛模型,用行为学方法检测小鼠的机械性刺激缩爪阈值和热刺激缩爪潜伏期的变化;用real-time PCR法检测造模后不同时间点CeA中MCP-1/CCR2mRNA的表达变化;用Western blot法检测造模后不同时间点CeA中CCR2蛋白的表达变化;选择CFA 7天组,用免疫荧光染色来观察CeA中MCP-1/CCR2蛋白的表达情况,并用双标染色来定位表达MCP-1/CCR2的细胞类型。结果造模1h后小鼠同侧后爪机械性缩爪阈值和热缩爪潜伏期显著降低(P<0.001),并能维持7天以上;造模1天后,CeA中MCP-1mRNA表达量增加(P<0.05),7天达高峰(P<0.01),一直持续到14天(P<0.05);CCR2mRNA从造模6h起表达增加(P<0.05);Western blot结果显示CeA中CCR2蛋白在造模后各个时间点均有表达上调,7天达高峰(P<0.01),一直持续到14天(P<0.01);免疫荧光染色显示,CFA 7天组CeA中MCP-1/CCR2蛋白的表达与生理盐水对照组相比均有增加,而且荧光双标染色显示MCP-1/CCR2蛋白主要与神经元核标记物(NeuN)共标。结论足底皮下注射CFA能诱导小鼠产生机械性触诱发痛和热痛觉过敏,CeA中MCP-1/CCR2mRNA和蛋白表达均增加,且均在神经元表达,提示该部位表达增加的MCP-1/CCR2可能参与炎症性疼痛的维持过程。展开更多
目的通过软骨细胞体外固态培养研究机械压力和维拉帕米对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞释放单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)的影响。方法选择12例膝OA患者行膝关节置换后的胫骨平台软骨,分离软骨细胞...目的通过软骨细胞体外固态培养研究机械压力和维拉帕米对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞释放单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)的影响。方法选择12例膝OA患者行膝关节置换后的胫骨平台软骨,分离软骨细胞并扩增,分别加入到低熔点琼脂糖培养基中进行固态培养,制作成软骨细胞-琼脂糖凝胶三维模型。随机分为维拉帕米组(40μmol/L)和空白对照组,每组6例。在15、30、45 kPa的压力下,对照组分别施压0.5、1、2 h,实验组仅施压2h。两组施压后均继续培养24 h,收集模型周围上清液,采用ELISA法检测上清液中MCP-1的浓度,对数据进行析因分析。结果随着机械压力增加和施压时间延长,细胞培养液中MCP-1浓度无显著变化(P=0.88,0.31)。与空白对照组比较,维拉帕米组的MCP-1浓度显著降低(P=0.05)。结论维拉帕米可抑制三维固态培养的OA软骨细胞释放MCP-1,可能为维拉帕米应用于OA的治疗提供理论依据。展开更多
