单核细胞性李斯特菌基因dal的敲除及其生物学特性初步分析 被引量：1

1

作者 曾海娟 刘武康 +3 位作者 谢曼曼 丁承超 董庆利 刘箐 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第22期48-53,共6页

在单核细胞性李斯特菌(Listeria monocytogenes)野生株EGDe act A及inl B双基因缺失株(EGDeΔact AΔinl B)的基础上,利用同源重组的方法进一步构建了缺失营养基因dal的菌株(EGDe Δact AΔinl BΔdal),并对该缺失菌株生长状态、毒力基... 在单核细胞性李斯特菌(Listeria monocytogenes)野生株EGDe act A及inl B双基因缺失株(EGDeΔact AΔinl B)的基础上,利用同源重组的方法进一步构建了缺失营养基因dal的菌株(EGDe Δact AΔinl BΔdal),并对该缺失菌株生长状态、毒力基因表达水平、生物被膜的形成量及细胞侵袭等方面作进一步分析。结果显示,37℃摇床培养6 h后,缺失株的菌浓度显著低于EGDe Δact AΔinl B(P<0.001),培养基中补充D-丙氨酸的缺失株生长速率与亲本株相比无显著差异;实时荧光定量聚合酶链式反应结果显示,缺失株的sig B基因表达水平变化最明显(P<0.01),约下调90%;缺失株生物被膜形成量显著增加(P<0.05),培养基补充D-丙氨酸后缺失株生物被膜的生成量与亲本株相比无差异;对Coca-2细胞的侵袭无影响,表明该基因对细菌生长能力及生物被膜形成具有重要的调控作用,并不影响菌株对细胞的侵袭力。此缺失株的构建为进一步研究基因dal的功能提供了理论支持。 展开更多

关键词 单核细胞性李斯特菌 基因敲除 生长能力 细胞侵袭 生物被膜

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生鲜畜禽肉来源单核细胞性李斯特菌的基因组特征及其菌膜形成能力分析 被引量：2

2

作者 王静 周昌艳 +2 位作者 陈秀金 索玉娟 李兆周 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第10期142-149,共8页

目的:了解生鲜畜禽肉中典型单核细胞性李斯特菌遗传特征与其菌膜形成能力间的关系,为生鲜畜禽肉中该菌的精准防控提供依据。方法:依据前期分型结果,挑选生鲜畜禽肉来源的8种序列分型(sequence typing,ST)的10株单核细胞性李斯特菌分离... 目的:了解生鲜畜禽肉中典型单核细胞性李斯特菌遗传特征与其菌膜形成能力间的关系,为生鲜畜禽肉中该菌的精准防控提供依据。方法:依据前期分型结果,挑选生鲜畜禽肉来源的8种序列分型(sequence typing,ST)的10株单核细胞性李斯特菌分离株进行全基因组测序,对其进行基因功能注释、毒力基因鉴定、可移动遗传元件(前噬菌体、基因组岛、质粒)分析、进化分析和菌膜形成相关基因分析。然后,利用结晶紫染色法对分离株进行菌膜形成能力测定,分析不同类型分离株的基因组特征与其菌膜形成能力的相关性。结果:8种ST型单核细胞性李斯特菌分离株的基因组均鉴定到毒力岛LIPI-1、LIPI-2和其他19种以上的毒力基因,以及数量不等的前噬菌体和基因组岛;仅在ST3型分离株中鉴定到毒力岛LIPI-3基因,在ST8和ST1403型分离株中鉴定到质粒。进化分支系数显示,5种ST型分离株与数据库中疾病暴发菌株有较近的亲缘关系;此外,菌膜形成相关基因luxS和sigB分别在6种和7种ST型菌株中发生了突变;菌膜形成能力显示,ST1403和ST87型分离株的菌膜形成能力较强,ST1402型分离株能力最弱。结论:生鲜畜禽肉中含有多种致病潜力的单核细胞性李斯特菌,菌株可移动遗传元件的携带率可能与菌膜的形成能力相关。 展开更多

关键词 单核细胞性李斯特菌 全基因组测序 毒力基因 菌膜

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三文鱼基质上单核细胞性李斯特菌毒力因子的表达

3

作者 朱雅慧 朱洪日 +3 位作者 王佳莹 张公亮 郝洪顺 侯红漫 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第2期138-143,共6页

为了解单核细胞性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)污染食品基质后毒力因子表达的变化,本研究以Lm标准株ATCC 19115为研究对象,将其接种于三文鱼基质及胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(tryptic soy agar-yeast extract,TSA-YE)(对照组)上,于... 为了解单核细胞性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)污染食品基质后毒力因子表达的变化,本研究以Lm标准株ATCC 19115为研究对象,将其接种于三文鱼基质及胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(tryptic soy agar-yeast extract,TSA-YE)(对照组)上,于0、4、7℃贮藏条件下分别培养24 h和48 h后,收集菌体提取总RNA,采用反转录实时定量聚合酶链式反应(reverse transcript-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)对其4个毒力因子hlyA、inlB、prfA、sigB的表达进行分析。结果表明,在0、4℃和7℃分别培养24 h和48 h后,4个主要毒力因子在三文鱼基质上的表达量均高于平板对照,其中hlyA在贮藏4℃的三文鱼基质上表达上调的最为显著。此外,prfA和sigB在4℃贮藏条件下,表达量极显著高于7℃和0℃(P<0.01);在不同的温度贮藏24 h,inlB和hlyA的表达量均表现为7℃>4℃>0℃(P<0.01);且4个主要毒力因子在三文鱼基质上的相对表达量均表现为48 h>24 h(P<0.01)。综上所述,本研究为该菌在食品基质上的风险评估和有效防控提供一定的理论依据。 展开更多

关键词 单核细胞性李斯特菌 毒力因子 三文鱼基质

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新药治疗多发性骨髓瘤过程中合并李斯特菌感染临床分析

4

作者 贾静 刘念 吴垠 《中国实验血液学杂志》 北大核心 2025年第1期157-162,共6页

目的:通过分析多发性骨髓瘤(MM)患者新药治疗过程中单核细胞性李斯特菌(LM)感染的疾病特点,提高临床医生对该病的认识。方法:回顾性分析北京朝阳医院2018年10月-2022年10月诊治的4例MM患者感染LM的临床特点、治疗及转归。结果:4例患者... 目的:通过分析多发性骨髓瘤(MM)患者新药治疗过程中单核细胞性李斯特菌(LM)感染的疾病特点,提高临床医生对该病的认识。方法:回顾性分析北京朝阳医院2018年10月-2022年10月诊治的4例MM患者感染LM的临床特点、治疗及转归。结果:4例患者平均年龄为(57.5±4.1)岁,均为诱导治疗未达深度缓解或疾病多线复发者,存在免疫球蛋白水平下降及淋巴细胞计数下降。首发症状均为发热,3例患者发病2-3 d出现神经系统症状,脑脊液检查提示合并脑膜炎。发病4-5 d后获取病原学结果调整为敏感药物抗感染方案,2例患者治疗后好转,1例放弃治疗出院后死亡,1例经敏感药物治疗后仍死亡。结论:MM患者新药治疗过程中,LM感染尤其重症风险可能增加,预防及早期敏感药物治疗可降低严重感染风险及死亡率。 展开更多

关键词 单核细胞性李斯特菌 多发性骨髓瘤 新药治疗

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单核细胞增多性李斯特菌主要毒力因子研究进展 被引量：18

5

作者 江玲丽 陈健舜 方维焕 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期733-735,F0003,共4页

关键词 单核细胞增多性李斯特菌 毒力因子 巨噬细胞 人兽共患 上皮细胞 病原菌 食源性 胃肠炎

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鲜活农产品中单核细胞增多性李斯特菌快速检测技术的研究进展 被引量：4

6

作者 关棣锴 胡文忠 +1 位作者 姜爱丽 萨仁高娃 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期361-364,368,共5页

单核细胞增多性李斯特菌是一种食源性致病菌,其引发的李斯特菌病致死率高达30%。本文综述了单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)的生物学特性和毒力因子,着重介绍了单核细胞增多性李斯特菌基于分子生物学、免疫学等技术的... 单核细胞增多性李斯特菌是一种食源性致病菌,其引发的李斯特菌病致死率高达30%。本文综述了单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)的生物学特性和毒力因子,着重介绍了单核细胞增多性李斯特菌基于分子生物学、免疫学等技术的几种快速检测方法,旨在为单核细胞增多性李斯特菌的深入研究提供参考。 展开更多

关键词 单核细胞增多性李斯特菌 快速检测 进展

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TaqMan探针法荧光定量PCR检测鲜切甜瓜中单核细胞增多性李斯特菌的研究 被引量：3

7

作者 关棣锴 胡文忠 +1 位作者 朴永哲 冯可 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第19期297-300,共4页

根据多条单核细胞增多性李斯特菌的hly基因序列,设计了1对简并引物和1条TaqMan探针,建立荧光定量PCR快速检测单核细胞增多性李斯特菌的方法,对该方法的特异性、灵敏度进行了验证,并采用该法对染菌的鲜切甜瓜进行了检测。结果表明,该方... 根据多条单核细胞增多性李斯特菌的hly基因序列,设计了1对简并引物和1条TaqMan探针,建立荧光定量PCR快速检测单核细胞增多性李斯特菌的方法,对该方法的特异性、灵敏度进行了验证,并采用该法对染菌的鲜切甜瓜进行了检测。结果表明,该方法具有较好的特异性,对质粒标准品的灵敏度为1.12×102copies/μL,对染菌的鲜切甜瓜中单核细胞增多性李斯特菌的最低检出限为6.28×102cfu/mL。该方法可为快速检测鲜切果蔬病原微生物污染度及其控制奠定技术基础。 展开更多

关键词 单核细胞增多性李斯特菌 hly基因 荧光定量PCR TAQMAN探针 鲜切甜瓜

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单核细胞增多性李斯特菌对小鼠血脑屏障通透性的影响 被引量：2

8

作者 郑德良 马勋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期449-451,共3页

为研究小鼠感染单核细胞增多性李斯特菌(LM)90SB2株后血脑屏障通透性的变化,本实验采用ELISA方法检测小鼠血清中髓鞘碱性蛋白(MBP)的水平和甲酰胺-紫外分光光度法检测脑组织中伊文思蓝(EB)的含量。结果显示:MBP于感染后4 h开始升高,10 ... 为研究小鼠感染单核细胞增多性李斯特菌(LM)90SB2株后血脑屏障通透性的变化,本实验采用ELISA方法检测小鼠血清中髓鞘碱性蛋白(MBP)的水平和甲酰胺-紫外分光光度法检测脑组织中伊文思蓝(EB)的含量。结果显示:MBP于感染后4 h开始升高,10 h后维持较高水平,10 h、24 h、48 h、120 h和144 h各时间点与对照组比较均有显著性差异(p<0.05);EB在感染后24 h之内无明显增加,24 h后有较大幅度升高,并且与对照组比较存在显著性差异(p<0.05);但72 h后开始缓慢下降。表明小鼠感染LM后会导致血脑屏障通透性一定程度的升高。 展开更多

关键词 单核细胞增多性李斯特菌 血脑屏障 髓鞘碱性蛋白 伊文思蓝

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单核细胞增多性李斯特菌LIPI-1全基因克隆与序列分析 被引量：1

9

作者 谭炳乾 何启盖 +1 位作者 肖军 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期627-633,共7页

参考GenBank中单核细胞增多性李斯特菌(LM)第I毒力岛(LIPI-1)有关基因序列设计引物,分段扩增、克隆了分离菌株XFL0605LIPI-1毒力岛全基因序列,序列全长8 558 bp,包括完整的prfA、plcA、hly、mpl、actA和plcB6个基因。对LIPI-1编码的6个... 参考GenBank中单核细胞增多性李斯特菌(LM)第I毒力岛(LIPI-1)有关基因序列设计引物,分段扩增、克隆了分离菌株XFL0605LIPI-1毒力岛全基因序列,序列全长8 558 bp,包括完整的prfA、plcA、hly、mpl、actA和plcB6个基因。对LIPI-1编码的6个毒力基因进行序列分析,各毒力基因反映的进化关系不尽一致,表明李斯特菌株在获得外源性毒力基因方面具有不同步性,各毒力基因来源也不尽相同。应用相应软件对各毒力基因编码蛋白的信号肽、跨膜区进行预测,确定了基因序列中调控蛋白PrfA结合区核苷酸序列。分析并确认了hlyA基因及推导氨基酸序列PEST基序和C端保守11肽序列。研究还发现LM菌株XFL0605actA基因编码604个氨基酸,缺失了105 bp富脯氨酸重复片段编码碱基,只有2个E/DFPPPPXD/E重复序列。 展开更多

关键词 单核细胞增多性李斯特菌 李斯特菌第I毒力岛 prfA基因簇 遗传进化分析

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单核细胞增生性李斯特氏菌hly基因的克隆表达 被引量：2

10

作者 刘海瑞 付世新 罗春海 《中国奶牛》 2008年第11期2-4,共3页

以单核细胞增多性李斯特氏菌(Listeria Monocytogengs,LMO)LMO-0586基因组DNA为模板,运用PCR扩增得到片段大小为1 646bp的致病基因李氏溶血素(hly)基因,并克隆到pMD18-T载体上,构建克隆载体pMD18-T-hly。经测序正确后,将hly基因克隆至... 以单核细胞增多性李斯特氏菌(Listeria Monocytogengs,LMO)LMO-0586基因组DNA为模板,运用PCR扩增得到片段大小为1 646bp的致病基因李氏溶血素(hly)基因,并克隆到pMD18-T载体上,构建克隆载体pMD18-T-hly。经测序正确后,将hly基因克隆至表达载体pGEX上构建表达质粒pGEX-6P-1-hly。在IPTG诱导下,携带pGEX-6P-1-hlyA的E.coli BL21(DE3)高效表达分子量约为82KDa的可溶性蛋白及包涵体形式的蛋白。为进一步研究溶血素蛋白的结构、功能,LMO的分子流行病学调查、诊断试剂盒的开发提供依据。 展开更多

关键词 单核细胞增多性李斯特氏菌 hly基因 克隆表达

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表达绿色荧光蛋白重组单核细胞增多性李斯特菌的构建(英文)

11

作者 柯春林 宋厚辉 +2 位作者 江玲丽 张桂芝 方维焕 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期638-644,共7页

将编码绿色荧光蛋白(GFP)的基因融合到单核细胞增多性李斯特菌actA基因启动子和信号肽下游,应用同源重组技术构建了含gfp的重组李斯特菌突变株.PCR扩增及其产物的酶切鉴定均证实目的基因gfp融合到李斯特菌基因组中.荧光显微镜下可见重... 将编码绿色荧光蛋白(GFP)的基因融合到单核细胞增多性李斯特菌actA基因启动子和信号肽下游,应用同源重组技术构建了含gfp的重组李斯特菌突变株.PCR扩增及其产物的酶切鉴定均证实目的基因gfp融合到李斯特菌基因组中.荧光显微镜下可见重组菌体发绿色荧光.SDS-PAGE电泳和免疫印迹结果显示重组李斯特菌表达的GFP分子量约为28 kD,与预计的分子量大小一致.重组菌对鸡胚和小鼠的毒力以及对体外培养细胞的侵袭力均低于野生型李斯特菌.该重组菌可用于研究李斯特菌的致病机理和食品加工过程中微生物污染控制的指示性细菌. 展开更多

关键词 单核细胞增多性李斯特菌 同源重组 绿色荧光蛋白 外源基因表达

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单核细胞增多性李斯特菌iap基因的克隆、表达与p60蛋白的纯化 被引量：3

12

作者 吕添 武海涛 +1 位作者 曹正茂 王小红 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第11期157-161,共5页

以单增李斯特菌基因组DNA为模板,利用自行设计的引物,通过PCR法扩增出单增李斯特菌的iap基因。在iap基因的5'端和3'端分别引入EcoRⅠ和XhoⅠ2个酶切位点将其克隆到pMD-18T载体上,构建克隆载体pMD-18T-iap。经测序正确后,将iap... 以单增李斯特菌基因组DNA为模板,利用自行设计的引物,通过PCR法扩增出单增李斯特菌的iap基因。在iap基因的5'端和3'端分别引入EcoRⅠ和XhoⅠ2个酶切位点将其克隆到pMD-18T载体上,构建克隆载体pMD-18T-iap。经测序正确后,将iap基因克隆至表达载体pET-28a上构建表达质粒pET-28a-iap。在IPTG诱导下,携带pET-28a-iap的E.coliBL21(DE3)高效表达分子质量约为60kD的可溶性蛋白及包涵体形式的蛋白,其中可溶性蛋白占总p60蛋白含量的76.3%左右。诱导表达的可溶性蛋白通过Ni2+亲和层析柱纯化得到纯度在95.6%以上的重组p60蛋白,其提取率为68.3%左右。 展开更多

关键词 单核细胞增多性李斯特菌 iap基因 克隆 表达 p60蛋白 纯化

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单核细胞增多性李斯特菌p60蛋白表达条件的优化 被引量：3

13

作者 吕添 曹正茂 +1 位作者 武海涛 王小红 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第23期160-163,共4页

在成功构建重组表达载体pET-28a-p60和获得重组宿主菌E.coliBL21(DE3)的基础上,对重组宿主菌E.coliBL21(DE3)进行表达p60蛋白条件的优化研究。结果表明:将重组大肠杆菌培养至OD600nm达0.7～0.8左右时,加入浓度为1mmol/L的异丙基-β-D-... 在成功构建重组表达载体pET-28a-p60和获得重组宿主菌E.coliBL21(DE3)的基础上,对重组宿主菌E.coliBL21(DE3)进行表达p60蛋白条件的优化研究。结果表明:将重组大肠杆菌培养至OD600nm达0.7～0.8左右时,加入浓度为1mmol/L的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),在摇床温度为25℃,转速为150r/min条件下诱导表达6h,可得到重组表达的p60蛋白占总蛋白的比例为42.32%,其中可溶性蛋白占总p60蛋白的比例为85.36%左右,为p60蛋白诱导表达的最优条件。 展开更多

关键词 单核细胞增多性李斯特菌 p60蛋白 表达条件 优化

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单核细胞增多性李斯特菌mpl全基因克隆与序列分析 被引量：1

14

作者 谭炳乾 何启盖 +1 位作者 肖军 陈焕春 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期988-992,共5页

目的克隆单核细胞增多性李斯特菌mpl全基因并进行序列比较分析。方法分别从参考菌株CCTC-CAB97021和分离菌株XFL0605中PCR扩增mpl全基因,连接到T克隆载体转化到受体菌DH5α中,经菌落PCR和提取质粒酶切鉴定,分别获得阳性克隆转化子后测序... 目的克隆单核细胞增多性李斯特菌mpl全基因并进行序列比较分析。方法分别从参考菌株CCTC-CAB97021和分离菌株XFL0605中PCR扩增mpl全基因,连接到T克隆载体转化到受体菌DH5α中,经菌落PCR和提取质粒酶切鉴定,分别获得阳性克隆转化子后测序,运用DNAStar软件对测定核苷酸及推导AA序列与GenBank中李斯特菌属的部分菌株进行分析。结果成功克隆了单核细胞增多性李斯特菌mpl全基因,所获得的mpl基因片段具有完整的ORF,均全长1533bp,编码510个氨基酸。对李斯特菌属mpl基因遗传性分析显示L.monocytogenes与L.seeligeri和L.ivanovii处于不同的分支,在L.monocytogenes种内分为两个群,表明mpl能够反应出这三种李斯特菌株的亲缘关系。结论单核细胞增多性李斯特菌mpl基因具有种的特异性。 展开更多

关键词 单核细胞增多性李斯特菌 金属蛋白酶 mpl基因 T载体

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PCR在快速检测食品单核细胞增多性李斯特菌中的应用 被引量：11

15

作者 谭炳乾 肖军 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第7期1558-1560,共3页

为应用PCR快速检测食品中的单核细胞增多性李斯特菌,设计合成了针对单核细胞增多性李斯特菌溶血素编码基因的特异性引物进行PCR扩增。结果表明,在单核细胞增多性李斯特菌中能扩增出348bp的预期片段,大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌和李斯... 为应用PCR快速检测食品中的单核细胞增多性李斯特菌,设计合成了针对单核细胞增多性李斯特菌溶血素编码基因的特异性引物进行PCR扩增。结果表明,在单核细胞增多性李斯特菌中能扩增出348bp的预期片段,大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌和李斯特属的绵羊李斯特菌、英诺克李斯特菌、威尔斯李斯特菌、西尔李斯特菌和格氏李斯特菌的扩增结果均为阴性。用该方法检测了81份食品样品,检测结果与分离鉴定方法一致,表明本方法可用于食品中单核细胞增多性李斯特菌的快速检测。检测样品中,单核细胞增多性李斯特菌污染率为8.6%,以禽肉类制品中的污染率最高。 展开更多

关键词 PCR 单核细胞增多性李斯特菌 hly 检测

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食源性单核细胞增生型李斯特菌arcD基因克隆及序列分析

16

作者 刘扬扬 马勋 +4 位作者 康立超 李红欢 钱凌霄 江婉琳 阮婷玉 《青海畜牧兽医杂志》 2019年第6期21-26,共6页

为了对食源性单核细胞增生型李斯特菌LM5567的arcD基因进行克隆和序列分析,实验利用PCR方法对arcD基因进行扩增,连接至pMD19-T载体,将连接产物转化至DH5接感受态细胞,筛选阳性菌株进行测序比对分析。结果显示:扩增获得的arcD基因序列长... 为了对食源性单核细胞增生型李斯特菌LM5567的arcD基因进行克隆和序列分析,实验利用PCR方法对arcD基因进行扩增,连接至pMD19-T载体,将连接产物转化至DH5接感受态细胞,筛选阳性菌株进行测序比对分析。结果显示:扩增获得的arcD基因序列长为915bp,克隆得到arcD基因的阳性转化子;生物信息学分析表明:arcD蛋白属于跨膜蛋白,无信号肽序列;LM5567的arcD基因核苷酸序列与02-6680株(4b,奶酪,加拿大)相似性99.9%,与10-0811株(1/2b,螃蟹,加拿大)相似性99.7%,与10-0809株(4b,粪便,加拿大)、81-0558株(4b,脑脊髓液,加拿大)、02-1103株、02-1792(4b,奶酪,加拿大)和81-0861株(4b,卷心菜,加拿大)相似性均为100%。LM5567arcD基因编码的氨基酸序列与上述菌株相似性为89.4%~89.9%。本实验成功克隆了arcD基因,为进一步探究arcD基因的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 食源性单核细胞增多性李斯特菌 arcD基因 生物信息学分析

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基质辅助激光解析飞行质谱法检测空肠弯曲菌及李斯特菌 被引量：8

17

作者 屠博文 吉俊敏 +4 位作者 杜强 黎俊宏 唐宏兵 熊吉滨 韩晓冬 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第20期262-267,共6页

目的:通过VITEK MS微生物检测系统对养殖场及市售活鸡来源的空肠弯曲菌和单核细胞性李斯特菌进行激光解析飞行质谱鉴定,建立两种致病菌的质谱鉴定方法。方法:从样品中分离获得疑似的空肠弯曲菌和单核细胞性李斯特菌,经不同配比的基质液... 目的:通过VITEK MS微生物检测系统对养殖场及市售活鸡来源的空肠弯曲菌和单核细胞性李斯特菌进行激光解析飞行质谱鉴定,建立两种致病菌的质谱鉴定方法。方法:从样品中分离获得疑似的空肠弯曲菌和单核细胞性李斯特菌,经不同配比的基质液处理后进行质谱鉴定。通过分析检出菌特征峰及相对丰度差异来评价不同配比基质液对两种致病菌检测的影响。结果:空肠弯曲菌和李斯特菌对基质液配比要求具有明显差异,前者不需要经过甲酸裂解,而对三氟乙酸含量敏感,后者鉴定结果受到甲酸裂解制约。基质液含水量控制在体积分数30%可以有效避免特征峰缺失并提高检出率。结论:控制基质液的含水量、基质浓度和三氟乙酸含量可以增加空肠弯曲菌和李斯特菌的特征峰数量,增强相对丰度,提高致病菌检出率。基质液配比优化研究有助于增强食源性致病菌快速鉴定能力,有助于提高疾病预防和食源性风险监测的时效性。 展开更多

关键词 VITEKMS微生物检测系统 空肠弯曲菌 单核细胞性李斯特菌 基质液配比 微生物质谱检测方法

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食源性单增李斯特菌14种潜在毒力基因的检测 被引量：4

18

作者 钱凌霄 康立超 +3 位作者 李红欢 张奇文 杜冬冬 马勋 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期878-882,共5页

目的了解新疆生产建设兵团食源性单核细胞增生性增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)潜在毒力基因分布情况。方法以54株食源性LM DNA为模板,针对14个潜在毒力基因设计特异性引物并利用PCR技术检测潜在毒力基因。结果 54株分离株均携... 目的了解新疆生产建设兵团食源性单核细胞增生性增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)潜在毒力基因分布情况。方法以54株食源性LM DNA为模板,针对14个潜在毒力基因设计特异性引物并利用PCR技术检测潜在毒力基因。结果 54株分离株均携带潜在毒力基因,其中5563分离株携带率最高,为57.14%(8/14),21L662分离株携带率最低,为21.43%(3/14),其余分离株携带率在28.57%(4/14)~50%(7/14)之间。潜在毒力基因检出率不同,其中寡肽转运蛋白、内化素样蛋白、细胞壁表面锚定家族蛋白、单价阳离子/H+逆向转运蛋白、肽聚糖结合蛋白、组氨酸代谢系统、合成致死KAR3样蛋白、精氨酸/鸟氨酸逆向转运蛋白、ABC转运蛋白、Ⅱ型限制酶修饰系统Sau3Al,磷酸葡萄糖转移酶系统基因的检出率分别是98.15%、81.48%、77.78%、64.81%、59.26%、53.70%、51.85%、35.19%、12.96%、9.26%、9.26%,芳香族氨基酸合成因子,EsaC蛋白类似物,差向异构酶/脱水酶家族蛋白和转录调控因子3种潜在毒力基因未检出。结论检测食品源LM分离株14种潜在毒力基因的分布,为研究LM致病性和食品LM的溯源奠定了基础。 展开更多

关键词 食源性单核细胞增多性李斯特菌 潜在毒力基因 PCR 携带率 检出率

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食源性单增李斯特菌LPXTG蛋白基因的检测 被引量：4

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作者 丁剑 马勋 +4 位作者 陈朔 曹树珠 王贝贝 杜冬冬 张奇文 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第8期17-21,25,共6页

单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)作为四大重要食源性病原菌之一,对人类及多种畜禽健康威胁极大。LM细胞胞壁表面分布多种毒力蛋白,在感染机体过程中发挥重要作用,其中有一类至关重要的表面蛋白其C末端含有保守基序LP... 单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)作为四大重要食源性病原菌之一,对人类及多种畜禽健康威胁极大。LM细胞胞壁表面分布多种毒力蛋白,在感染机体过程中发挥重要作用,其中有一类至关重要的表面蛋白其C末端含有保守基序LPXTG,分选酶A能够识别基序LPXTG,共价结合到肽聚糖上,呈现在细胞表面发挥毒力作用。本试验以不同食品中分离得到的24株单增李斯特菌为试验对象,设计合成了41对预测含LPXTG基序表面蛋白的引物,利用PCR技术进行扩增,凝胶电泳成像系统检测扩增产物片段大小,计算24株食品源单增李斯特菌LPXTG基序表面蛋白的携带。结果表明,不同LM分离株LPXTG蛋白基因的携带率不同:其中仅有12.5%(3/24)的分离株携带率在85%以上;不同LPXTG蛋白基因的检出率不同,在41个检测对象中,有8个基因的检出率100%,有3个基因的检出率不足20%,Lmo1115基因在所有分离株中均未检测到。本研究对了解食品源LM分离株的LPXTG蛋白基因的分布以及探明食品源LM的致病性具有重要意义。 展开更多

关键词 单核细胞增多性李斯特菌 LPXTG基序表面蛋白 PCR

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食源性单增李斯特菌lismff＿0038基因克隆及序列分析 被引量：1

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作者 刘扬扬 马勋 +4 位作者 康立超 李红欢 钱凌霄 江婉琳 阮婷玉 《现代畜牧兽医》 2019年第10期1-7,共7页

单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)作为四大重要食源性病原菌之一,对公共安全及畜牧业发展威胁极大.其lismff_0038是新发现的一个潜在毒力因子,与LM的神经感染和母胎感染密切相关.对食源性单核细胞增多性李斯特菌LM556... 单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)作为四大重要食源性病原菌之一,对公共安全及畜牧业发展威胁极大.其lismff_0038是新发现的一个潜在毒力因子,与LM的神经感染和母胎感染密切相关.对食源性单核细胞增多性李斯特菌LM5567的lismff_0038基因进行克隆和生物信息学分析,为功能验证提供基础.根据GenBank中收录的lismff_0038基因序列设计特异性引物,利用PCR方法对食源性单核细胞增多性李斯特菌LM5567的lismff_0038基因进行扩增,将扩增产物克隆到pMD19-T载体,进行PCR、双酶切鉴定及序列测定,并对基因核苷酸序列和蛋白序列进行分析.结果显示,食源性单核细胞增多性李斯特菌LM5567的lismff_0038基因序列全长为988 bp.LM5567的lismff_0038核苷酸序列与02-6680株(4b,奶酪,加拿大)、10-0811株(1/2b,螃蟹,加拿大)、10-0809株(4b,粪便,加拿大)、81-0558株(4b,脑脊髓液,加拿大)、02-1103株、02-1792株(4b,奶酪,加拿大)、81-0861株(4b,卷心菜,加拿大)相似性91.1%.其推导的氨基酸序列与上述菌株相似性100%.蛋白质二级结构预测表明,LM5567的lismff_0038蛋白为疏水性蛋白,无信号肽,属于跨膜蛋白.表明,克隆了LM5567的lismff_0038基因,为进一步探究lismff_0038基因的功能奠定了一定基础. 展开更多

关键词 食源性单核细胞增多性李斯特菌 lismff_0038基因 PCR 生物信息学分析

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