目的:建立一种用于单核细胞增生李斯特菌的实时荧光赖解旋酶恒温核酸扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测方法。方法:针对单核细胞增生李斯特菌hly基因序列设计引物对,基于荧光定量聚合酶链式反应(polym...目的:建立一种用于单核细胞增生李斯特菌的实时荧光赖解旋酶恒温核酸扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测方法。方法:针对单核细胞增生李斯特菌hly基因序列设计引物对,基于荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)仪的平台,提取单核细胞增生李斯特菌基因组DNA,以此作为模板,优化反应温度、反应时间及引物浓度。利用单核细胞增生李斯特菌及10株对照菌株,并与实时荧光PCR对比,来验证实时荧光HDA方法的特异性和灵敏度,并初步用于样品检测。结果:实时荧光HDA体系的最适引物浓度为0.075μmol/L,反应温度及反应时间为65℃、80 min(40个循环),具有良好的特异性和灵敏度。结论:建立了一种特异性强、灵敏度高的实时荧光HDA检测单核细胞增生李斯特菌的方法。展开更多
目的:准确分离鉴定复杂样品基质中的单核细胞增生李斯特氏菌及李斯特菌属。方法:依据《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌》(GB 4789.30—2016)进行检测,利用病原微生物快速检测系统(BAX System Q7)对能力验证...目的:准确分离鉴定复杂样品基质中的单核细胞增生李斯特氏菌及李斯特菌属。方法:依据《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌》(GB 4789.30—2016)进行检测,利用病原微生物快速检测系统(BAX System Q7)对能力验证中的两份样品进行快速筛选,采用全自动微生物鉴定仪(Phoenix M50)分析鉴定可疑菌株。结果:BAX System Q7法与国标法检测结果一致,编号为A的样品检出伊氏李斯特氏菌,编号为B的样品检出单核细胞增生李斯特氏菌。结论:BAX System Q7法简便快速,Phoenix M50系统操作简单、自动化程度高,因此在检测复杂样品基质时,可以先用国标法检测单核细胞增生李斯特氏菌,再采用BAX System Q7系统和Phoenix M50系统进行双向验证,以确保检测结果的准确性。展开更多
文摘目的:准确分离鉴定复杂样品基质中的单核细胞增生李斯特氏菌及李斯特菌属。方法:依据《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌》(GB 4789.30—2016)进行检测,利用病原微生物快速检测系统(BAX System Q7)对能力验证中的两份样品进行快速筛选,采用全自动微生物鉴定仪(Phoenix M50)分析鉴定可疑菌株。结果:BAX System Q7法与国标法检测结果一致,编号为A的样品检出伊氏李斯特氏菌,编号为B的样品检出单核细胞增生李斯特氏菌。结论:BAX System Q7法简便快速,Phoenix M50系统操作简单、自动化程度高,因此在检测复杂样品基质时,可以先用国标法检测单核细胞增生李斯特氏菌,再采用BAX System Q7系统和Phoenix M50系统进行双向验证,以确保检测结果的准确性。
