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抑制和激活Wnt信号通路对甾醇类新药NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化的影响
被引量:
1
1
作者
王伟佳
张秀明
+1 位作者
张彦
王晋蜀
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期341-346,共6页
目的:探讨抑制和激活Wnt信号通路在甾醇类新药NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化中的作用和可能机制。方法:用5、10和20μmol/L的Wnt信号通路抑制剂XAV-939作用于HL-60细胞3 d,用10、20和30mmol/L的Wnt信号通路激活剂Li Cl作用于HL-60细...
目的:探讨抑制和激活Wnt信号通路在甾醇类新药NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化中的作用和可能机制。方法:用5、10和20μmol/L的Wnt信号通路抑制剂XAV-939作用于HL-60细胞3 d,用10、20和30mmol/L的Wnt信号通路激活剂Li Cl作用于HL-60细胞1 d,应用RT-RCR和Western blot检测Wnt信号通路的下游靶点基因和蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD14的表达和细胞早期凋亡,筛选最佳抑制浓度和激活浓度。然后用10μmol/L NSC67657分别对已经抑制及激活了的Wnt通路的HL-60细胞作用3 d。分析比较空白对照组、NSC67657单独处理组和激活/抑制剂作用后NSC67657处理组的细胞表面抗原CD14和Wnt下游靶点蛋白的表达水平。结果:20μmol/L XAV-939和20 mmol/L Li Cl能分别有效抑制和激活HL-60细胞Wnt信号通路,分别显著下调和上调cyclin D1,TCF1,c-Jun基因(P<0.05)和蛋白(P<0.05)的表达,且在该条件下CD14^+HL-60细胞不超过1%,没有早期凋亡发生;NSC67657单独作用HL-60细胞能下调Wnt通路下游靶点cyclin D1、TCF1和c-Jun的蛋白表达(P<0.05),CD14^+细胞占(62.13±9.44)%;NSC67657作用于经XAV-939预处理的细胞,可使CD14^+细胞达到(84.17±5.39)%,cyclin D1,TCF1和c-Jun蛋白表达比单独NSC67657处理组降低更显著(P<0.01);而NSC67657作用经Li Cl预处理的细胞,可使CD14^+细胞减少至(33.99±8.37)%,cyclin D1,TCF1和c-Jun蛋白表达较非处理组下降明显较低(P<0.05),但高于单独使用NSC67657处理组(P<0.05)。结论:20μmol/L XAV-939和20 mmol/L Li Cl作为HL-60细胞Wnt信号通路的有效抑制剂和激活剂能够分别显著下调和上调Wnt下游通路靶点基因和蛋白表达,其干预后对NSC67657诱导细胞分化的影响提示Wnt信号通路可能在NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化中起到关键作用。
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关键词
信号通路激活
信号通路抑制
NSC67657
单核系分化
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职称材料
甾醇类新药NSC67657诱导的HL60细胞单核系分化中β-catenin/ICAT蛋白差异表达及相互作用研究
2
作者
王伟佳
张秀明
胡红霞
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第11期1547-1552,共6页
目的分析甾醇类新药NSC67657诱导HL60细胞单核系分化中,β-catenin/ICAT蛋白的差异表达及相互作用,探讨NSC67657诱导细胞分化的作用机制。方法应用10μmol·L^(-1)NSC67657诱导HL60细胞分化,采用细胞化学染色和流式细胞技术评估细...
目的分析甾醇类新药NSC67657诱导HL60细胞单核系分化中,β-catenin/ICAT蛋白的差异表达及相互作用,探讨NSC67657诱导细胞分化的作用机制。方法应用10μmol·L^(-1)NSC67657诱导HL60细胞分化,采用细胞化学染色和流式细胞技术评估细胞的分化方向和分化程度;通过RT-PCR和Western blot方法验证药物作用细胞前后β-catenin和ICAT基因和蛋白的表达差异;采用免疫共沉淀技术分析β-catenin与ICAT蛋白的相互作用情况;采用激光共聚焦技术协同分析目的蛋白的差异表达及细胞内定位。结果NSC67657可诱导HL60细胞向单核系分化。在10μmol·L^(-1)NSC67657作用5d后,CD14的表达可达到90%以上,细胞化学染色支持细胞单核系分化结论。分化后ICAT基因和蛋白表达明显升高(P<0.01),而β-catenin基因和蛋白表达明显下降(P<0.05)。免疫共沉淀结果显示,ICAT与β-catenin蛋白在细胞分化前后都存在相互作用,药物诱导细胞分化后两者蛋白相互作用条带吸光度明显增加。激光共聚焦结果显示,ICAT蛋白和β-catenin蛋白在胞质和胞核均有荧光,药物诱导HL60细胞分化后,ICAT蛋白胞质和胞核荧光均明显增加,β-catenin蛋白在核内荧光明显减弱,但胞质荧光强度增加,有蛋白胞质转位现象。结论 NSC67657能够诱导HL60细胞向单核系分化,且引起ICAT蛋白和β-catenin蛋白的表达差异;ICAT蛋白与β-catenin蛋白的相互作用增强及β-catenin蛋白从胞核向胞质的转位现象,提示NSC67657可能通过下调并阻止β-catenin蛋白入核,从而导致HL60细胞单核系分化。
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关键词
NSC67657
分化
单核
系
β-catenin/ICAT蛋白
表达差异
相互作用
HL60细胞
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职称材料
题名
抑制和激活Wnt信号通路对甾醇类新药NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化的影响
被引量:
1
1
作者
王伟佳
张秀明
张彦
王晋蜀
机构
中山大学附属中山医院检验医学中心
重庆医科大学检验系省部共建重点实验室
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期341-346,共6页
文摘
目的:探讨抑制和激活Wnt信号通路在甾醇类新药NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化中的作用和可能机制。方法:用5、10和20μmol/L的Wnt信号通路抑制剂XAV-939作用于HL-60细胞3 d,用10、20和30mmol/L的Wnt信号通路激活剂Li Cl作用于HL-60细胞1 d,应用RT-RCR和Western blot检测Wnt信号通路的下游靶点基因和蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD14的表达和细胞早期凋亡,筛选最佳抑制浓度和激活浓度。然后用10μmol/L NSC67657分别对已经抑制及激活了的Wnt通路的HL-60细胞作用3 d。分析比较空白对照组、NSC67657单独处理组和激活/抑制剂作用后NSC67657处理组的细胞表面抗原CD14和Wnt下游靶点蛋白的表达水平。结果:20μmol/L XAV-939和20 mmol/L Li Cl能分别有效抑制和激活HL-60细胞Wnt信号通路,分别显著下调和上调cyclin D1,TCF1,c-Jun基因(P<0.05)和蛋白(P<0.05)的表达,且在该条件下CD14^+HL-60细胞不超过1%,没有早期凋亡发生;NSC67657单独作用HL-60细胞能下调Wnt通路下游靶点cyclin D1、TCF1和c-Jun的蛋白表达(P<0.05),CD14^+细胞占(62.13±9.44)%;NSC67657作用于经XAV-939预处理的细胞,可使CD14^+细胞达到(84.17±5.39)%,cyclin D1,TCF1和c-Jun蛋白表达比单独NSC67657处理组降低更显著(P<0.01);而NSC67657作用经Li Cl预处理的细胞,可使CD14^+细胞减少至(33.99±8.37)%,cyclin D1,TCF1和c-Jun蛋白表达较非处理组下降明显较低(P<0.05),但高于单独使用NSC67657处理组(P<0.05)。结论:20μmol/L XAV-939和20 mmol/L Li Cl作为HL-60细胞Wnt信号通路的有效抑制剂和激活剂能够分别显著下调和上调Wnt下游通路靶点基因和蛋白表达,其干预后对NSC67657诱导细胞分化的影响提示Wnt信号通路可能在NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化中起到关键作用。
关键词
信号通路激活
信号通路抑制
NSC67657
单核系分化
Keywords
activate signalling pathway
inhabit signalling pathway
NSC67657
differentiation monocytic
分类号
R96 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
甾醇类新药NSC67657诱导的HL60细胞单核系分化中β-catenin/ICAT蛋白差异表达及相互作用研究
2
作者
王伟佳
张秀明
胡红霞
机构
中山大学附属中山医院检验医学中心广东省重点实验室
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第11期1547-1552,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No 81301492)
文摘
目的分析甾醇类新药NSC67657诱导HL60细胞单核系分化中,β-catenin/ICAT蛋白的差异表达及相互作用,探讨NSC67657诱导细胞分化的作用机制。方法应用10μmol·L^(-1)NSC67657诱导HL60细胞分化,采用细胞化学染色和流式细胞技术评估细胞的分化方向和分化程度;通过RT-PCR和Western blot方法验证药物作用细胞前后β-catenin和ICAT基因和蛋白的表达差异;采用免疫共沉淀技术分析β-catenin与ICAT蛋白的相互作用情况;采用激光共聚焦技术协同分析目的蛋白的差异表达及细胞内定位。结果NSC67657可诱导HL60细胞向单核系分化。在10μmol·L^(-1)NSC67657作用5d后,CD14的表达可达到90%以上,细胞化学染色支持细胞单核系分化结论。分化后ICAT基因和蛋白表达明显升高(P<0.01),而β-catenin基因和蛋白表达明显下降(P<0.05)。免疫共沉淀结果显示,ICAT与β-catenin蛋白在细胞分化前后都存在相互作用,药物诱导细胞分化后两者蛋白相互作用条带吸光度明显增加。激光共聚焦结果显示,ICAT蛋白和β-catenin蛋白在胞质和胞核均有荧光,药物诱导HL60细胞分化后,ICAT蛋白胞质和胞核荧光均明显增加,β-catenin蛋白在核内荧光明显减弱,但胞质荧光强度增加,有蛋白胞质转位现象。结论 NSC67657能够诱导HL60细胞向单核系分化,且引起ICAT蛋白和β-catenin蛋白的表达差异;ICAT蛋白与β-catenin蛋白的相互作用增强及β-catenin蛋白从胞核向胞质的转位现象,提示NSC67657可能通过下调并阻止β-catenin蛋白入核,从而导致HL60细胞单核系分化。
关键词
NSC67657
分化
单核
系
β-catenin/ICAT蛋白
表达差异
相互作用
HL60细胞
Keywords
NSC67657
monocytic differentiation
β-catenin/ICAT proteins
differential expression
interaction
HL60 cells
分类号
R329.2 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R329.24 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抑制和激活Wnt信号通路对甾醇类新药NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化的影响
王伟佳
张秀明
张彦
王晋蜀
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
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职称材料
2
甾醇类新药NSC67657诱导的HL60细胞单核系分化中β-catenin/ICAT蛋白差异表达及相互作用研究
王伟佳
张秀明
胡红霞
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
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