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抗AFB_1单域重链抗体文库淘选方法的研究
被引量：
9
1
作者
刘夏
许杨
+1 位作者
涂追
何庆华
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期950-955,共6页
比较两种从噬菌体展示文库中淘选抗黄曲霉毒素B1单域重链抗体的方法,并为淘选针对小分子物质的单域重链抗体提供参考。采用固相淘选技术,以黄曲霉毒素B1人工抗原为靶分子,淘选天然单域重链抗体库,分别采用Gly-HCl法和AFB1竞争法洗脱结...
比较两种从噬菌体展示文库中淘选抗黄曲霉毒素B1单域重链抗体的方法,并为淘选针对小分子物质的单域重链抗体提供参考。采用固相淘选技术,以黄曲霉毒素B1人工抗原为靶分子,淘选天然单域重链抗体库,分别采用Gly-HCl法和AFB1竞争法洗脱结合噬菌体,对洗脱物进行滴度测定,以回收率和富集度为指标,对两种洗脱方法进行比较。采用phage-ELISA法鉴定噬菌体克隆,并对阳性克隆进行交叉反应分析以及序列测定。滴度测定结果显示,Gly-HCl法回收率比竞争法高5～10倍。分别随机挑取20个单克隆进行phage-ELISA鉴定,其中,Gly-HCl洗脱法未获得阳性克隆,AFB1竞争洗脱法得到8个阳性克隆。序列测定结果显示,这8个克隆均编码单域重链抗体。
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关键词
黄曲霉毒素B1
单域重链抗体
噬菌体展示
天然文库
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职称材料
半巢式PCR法构建天然噬菌体单域重链抗体文库
被引量：
3
2
作者
涂追
许杨
+1 位作者
何庆华
陶勇
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第19期299-303,共5页
目的:构建天然噬菌体单域重链抗体文库,淘选可应用于食品安全检测的单域重链抗体。方法:以未经免疫的健康羊驼(Lama pacos)外周血为起始材料,提取RNA反转录为cDNA,根据重链抗体保守序列设计引物,通过半巢式PCR法扩增获得全套重链抗体可...
目的:构建天然噬菌体单域重链抗体文库,淘选可应用于食品安全检测的单域重链抗体。方法:以未经免疫的健康羊驼(Lama pacos)外周血为起始材料,提取RNA反转录为cDNA,根据重链抗体保守序列设计引物,通过半巢式PCR法扩增获得全套重链抗体可变区编码基因,将其克隆至噬菌粒pHEN1,电转化大肠杆菌TG1得到初级抗体库,辅助噬菌体KM13感染后得到噬菌体展示库。采用固相淘选法分别对3种人工抗原进行淘选。结果:单域重链抗体编码基因得到有效扩增,经10次电转化获得初级文库,命名为SNAL,实际库容量达到1.6×107个独立克隆,菌落PCR鉴定结果表明,克隆效率约为87%,辅助噬菌体救援后得到的展示文库命名为SNA-PDL,滴度达1013CFU/mL。对3种不同人工抗原DON-MBSA、NOR-BSA和AFB1-OVA的淘选均有富集现象。结论:构建了天然噬菌体单域重链抗体文库,文库的多样性较好,可以用于后续淘选。
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关键词
单域重链抗体
VHH
抗体
噬菌体文库
羊驼
半抗原
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职称材料
结核分枝杆菌Rv0733-6His抗原羊驼单域重链抗体的筛选与鉴定
3
作者
潘欣
蔡家麟
+8 位作者
王颖
陈建霞
曾思良
方伟
陈敏
廖万清
余秀珍
张俊
宋维
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2013年第5期18-24,共7页
单域重链抗体是目前中和胞内病原体抗原的重要分子之一,研究以结核分枝杆菌Rv0733-6His融合抗原为靶标,对羊驼非免疫单域重链抗体库进行了3轮淘洗,通过ELISA和测序方法,从1 024个克隆中筛选出10个独立单域重链抗体序列,继而用原核表达...
单域重链抗体是目前中和胞内病原体抗原的重要分子之一,研究以结核分枝杆菌Rv0733-6His融合抗原为靶标,对羊驼非免疫单域重链抗体库进行了3轮淘洗,通过ELISA和测序方法,从1 024个克隆中筛选出10个独立单域重链抗体序列,继而用原核表达并鉴定了1株Rv0733-VHH-Fc-6His抗体。免疫印迹和免疫荧光结果均显示Rv0733-VHH-Fc-6His抗体可以特异性地结合Rv0733抗原。提示Rv0733-VHH抗体可能具备结合胞内菌相关抗原的潜力。
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关键词
结核分枝杆菌
表达纯化
单域重链抗体
噬菌体
抗体
库
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职称材料
题名
抗AFB_1单域重链抗体文库淘选方法的研究
被引量：
9
1
作者
刘夏
许杨
涂追
何庆华
机构
食品科学与技术国家重点实验室
南昌大学中德联合研究院
出处
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期950-955,共6页
基金
食品科学与技术国家重点实验室目标导向资助项目(SKLF-MB-201002)
国家中小企业创新基金项目(09C26213604449)
文摘
比较两种从噬菌体展示文库中淘选抗黄曲霉毒素B1单域重链抗体的方法,并为淘选针对小分子物质的单域重链抗体提供参考。采用固相淘选技术,以黄曲霉毒素B1人工抗原为靶分子,淘选天然单域重链抗体库,分别采用Gly-HCl法和AFB1竞争法洗脱结合噬菌体,对洗脱物进行滴度测定,以回收率和富集度为指标,对两种洗脱方法进行比较。采用phage-ELISA法鉴定噬菌体克隆,并对阳性克隆进行交叉反应分析以及序列测定。滴度测定结果显示,Gly-HCl法回收率比竞争法高5～10倍。分别随机挑取20个单克隆进行phage-ELISA鉴定,其中,Gly-HCl洗脱法未获得阳性克隆,AFB1竞争洗脱法得到8个阳性克隆。序列测定结果显示,这8个克隆均编码单域重链抗体。
关键词
黄曲霉毒素B1
单域重链抗体
噬菌体展示
天然文库
Keywords
Aflatoxin B1
single-domain heavy-chain antibody fragments（HCAbs）
phage display
non-immune library
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
Q511 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
半巢式PCR法构建天然噬菌体单域重链抗体文库
被引量：
3
2
作者
涂追
许杨
何庆华
陶勇
机构
南昌大学食品科学与技术国家重点实验室
南昌大学中德联合研究院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第19期299-303,共5页
基金
国家中小企业创新基金项目(09C26213604449)
江西省教育厅青年科学基金项目(GJJ09442)
江西省自然科学基金项目
文摘
目的:构建天然噬菌体单域重链抗体文库,淘选可应用于食品安全检测的单域重链抗体。方法:以未经免疫的健康羊驼(Lama pacos)外周血为起始材料,提取RNA反转录为cDNA,根据重链抗体保守序列设计引物,通过半巢式PCR法扩增获得全套重链抗体可变区编码基因,将其克隆至噬菌粒pHEN1,电转化大肠杆菌TG1得到初级抗体库,辅助噬菌体KM13感染后得到噬菌体展示库。采用固相淘选法分别对3种人工抗原进行淘选。结果:单域重链抗体编码基因得到有效扩增,经10次电转化获得初级文库,命名为SNAL,实际库容量达到1.6×107个独立克隆,菌落PCR鉴定结果表明,克隆效率约为87%,辅助噬菌体救援后得到的展示文库命名为SNA-PDL,滴度达1013CFU/mL。对3种不同人工抗原DON-MBSA、NOR-BSA和AFB1-OVA的淘选均有富集现象。结论:构建了天然噬菌体单域重链抗体文库,文库的多样性较好,可以用于后续淘选。
关键词
单域重链抗体
VHH
抗体
噬菌体文库
羊驼
半抗原
Keywords
single-domain heavy chain antibody
VHHs
phage display library
alpaca
hapten
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
在线阅读
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职称材料
题名
结核分枝杆菌Rv0733-6His抗原羊驼单域重链抗体的筛选与鉴定
3
作者
潘欣
蔡家麟
王颖
陈建霞
曾思良
方伟
陈敏
廖万清
余秀珍
张俊
宋维
机构
上海俊维寓医馆
第二军医大学
上海交通大学基础医学院
上海市肺科医院
出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2013年第5期18-24,共7页
基金
国家重点基础研究发展计划(973)资助项目(2013CB531601)
国家自然科学基金(30972633)
文摘
单域重链抗体是目前中和胞内病原体抗原的重要分子之一,研究以结核分枝杆菌Rv0733-6His融合抗原为靶标,对羊驼非免疫单域重链抗体库进行了3轮淘洗,通过ELISA和测序方法,从1 024个克隆中筛选出10个独立单域重链抗体序列,继而用原核表达并鉴定了1株Rv0733-VHH-Fc-6His抗体。免疫印迹和免疫荧光结果均显示Rv0733-VHH-Fc-6His抗体可以特异性地结合Rv0733抗原。提示Rv0733-VHH抗体可能具备结合胞内菌相关抗原的潜力。
关键词
结核分枝杆菌
表达纯化
单域重链抗体
噬菌体
抗体
库
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
expression purification
single domain of heavy-chain antibody
phage display antibody library
分类号
R378.911 [医药卫生—病原生物学]
在线阅读
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗AFB_1单域重链抗体文库淘选方法的研究
刘夏
许杨
涂追
何庆华
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
9
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
半巢式PCR法构建天然噬菌体单域重链抗体文库
涂追
许杨
何庆华
陶勇
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
结核分枝杆菌Rv0733-6His抗原羊驼单域重链抗体的筛选与鉴定
潘欣
蔡家麟
王颖
陈建霞
曾思良
方伟
陈敏
廖万清
余秀珍
张俊
宋维
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2013
0
在线阅读
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职称材料
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