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新冠病毒BA.5高免疫原性RBD抗原制备及抗体开发
1
作者
吴凡
覃鸿妮
+2 位作者
谢钰珍
任保永
戴东升
《实用医学杂志》
北大核心
2025年第17期2653-2660,共8页
目的 开发针对新冠病毒BA.5变异株的高免疫原性抗原,并筛选出具有高效中和阻断活性的单克隆抗体,为疫苗和诊断试剂的开发提供新策略。方法 将斑马鱼卵黄蛋白中的ZP蛋白基因片段和HIS蛋白标签插入p CDNA3.4质粒,构建pCDNA3.4-RBD(BA.5)-Z...
目的 开发针对新冠病毒BA.5变异株的高免疫原性抗原,并筛选出具有高效中和阻断活性的单克隆抗体,为疫苗和诊断试剂的开发提供新策略。方法 将斑马鱼卵黄蛋白中的ZP蛋白基因片段和HIS蛋白标签插入p CDNA3.4质粒,构建pCDNA3.4-RBD(BA.5)-ZP-HIS重组载体,并转入293F细胞表达RBD-ZP蛋白。通过SDS-PAGE等方法验证蛋白表达,并检测其与ACE2受体分子和铝佐剂的结合能力。利用BALB/c小鼠模型评估融合蛋白的免疫原性,并通过杂交瘤技术制备单克隆抗体。筛选出具有强中和阻断活性的单克隆抗体,并通过阻断ELISA方法检测抗体的中和活性。结果 ZP基因和HIS蛋白标签序列插入到pCDNA3.4载体中,并成功表达出50 kDa的RBD-ZP蛋白。免疫原性检测结果表明,ZP蛋白有效增强了RBD蛋白的免疫原性,并提高了其与ACE2受体的结合能力。进一步用RBD-ZP蛋白对小鼠进行免疫,通过杂交瘤技术克隆、筛选得到了8种能够与突变株和野生株特异性结合的单克隆抗体,其中3种能够有效阻断新冠病毒RBD蛋白与人体ACE2受体的结合。结论 本研究成功表达了RBD-ZP融合蛋白,显著增强了RBD蛋白的免疫原性和受体结合能力,并筛选出3种具有高效中和阻断活性的单克隆抗体,为新冠疫苗和诊断试剂的开发提供了有力支持。
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关键词
新冠病毒
RBD-ZP蛋白
抗原制备
单克隆抗体筛选
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职称材料
题名
新冠病毒BA.5高免疫原性RBD抗原制备及抗体开发
1
作者
吴凡
覃鸿妮
谢钰珍
任保永
戴东升
机构
苏州工业园区服务外包职业学院
思格(苏州)生物科技有限公司
优环(苏州)生物医药科技有限公司
江苏省精准诊疗药物创制工程研究中心
出处
《实用医学杂志》
北大核心
2025年第17期2653-2660,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:22077092)
江苏省高等学校优秀科技创新团队
+1 种基金
江苏省高校“青蓝工程”项目
江苏省精准诊疗药物创制工程研究中心开放课题(编号:SDGC2239)。
文摘
目的 开发针对新冠病毒BA.5变异株的高免疫原性抗原,并筛选出具有高效中和阻断活性的单克隆抗体,为疫苗和诊断试剂的开发提供新策略。方法 将斑马鱼卵黄蛋白中的ZP蛋白基因片段和HIS蛋白标签插入p CDNA3.4质粒,构建pCDNA3.4-RBD(BA.5)-ZP-HIS重组载体,并转入293F细胞表达RBD-ZP蛋白。通过SDS-PAGE等方法验证蛋白表达,并检测其与ACE2受体分子和铝佐剂的结合能力。利用BALB/c小鼠模型评估融合蛋白的免疫原性,并通过杂交瘤技术制备单克隆抗体。筛选出具有强中和阻断活性的单克隆抗体,并通过阻断ELISA方法检测抗体的中和活性。结果 ZP基因和HIS蛋白标签序列插入到pCDNA3.4载体中,并成功表达出50 kDa的RBD-ZP蛋白。免疫原性检测结果表明,ZP蛋白有效增强了RBD蛋白的免疫原性,并提高了其与ACE2受体的结合能力。进一步用RBD-ZP蛋白对小鼠进行免疫,通过杂交瘤技术克隆、筛选得到了8种能够与突变株和野生株特异性结合的单克隆抗体,其中3种能够有效阻断新冠病毒RBD蛋白与人体ACE2受体的结合。结论 本研究成功表达了RBD-ZP融合蛋白,显著增强了RBD蛋白的免疫原性和受体结合能力,并筛选出3种具有高效中和阻断活性的单克隆抗体,为新冠疫苗和诊断试剂的开发提供了有力支持。
关键词
新冠病毒
RBD-ZP蛋白
抗原制备
单克隆抗体筛选
Keywords
SARS-CoV-2
RBD-ZP protein
antigen preparation
monoclonal antibody screening
分类号
Q812 [生物学—生物工程]
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题名
作者
出处
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被引量
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1
新冠病毒BA.5高免疫原性RBD抗原制备及抗体开发
吴凡
覃鸿妮
谢钰珍
任保永
戴东升
《实用医学杂志》
北大核心
2025
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